CN102688240A - 一种治疗结直肠癌的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗结直肠癌的药物组合物，含有槐定碱、苦参碱、氧化苦参碱、苦豆碱、槐果碱等组分。本发明的药物组合物抑制肿瘤细胞的作用明显，成分清楚、质量可控；且毒性低、代谢快，用于治疗肠道恶性肿瘤尤其是结直肠癌效果显著。

Description

一种治疗结直肠癌的药物组合物

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种治疗结直肠癌的药物组合物。

背景技术

结直肠癌(Colorectal Carcinoma, CRC)是现今世界上最常见的恶性肿瘤之一。据WHO报道，2002年全世界新诊断CRC为102万例，占恶性肿瘤发病率第3位，死亡率第4位。随着人民生活方式、膳食结构的改变及寿命的延长，CRC的发病率及死亡率在我国也不断上升。如何有效的预防和治疗CRC，是医学界关注的重要课题之一。该病的治疗随着手术技术、以氟尿嘧啶类药物为基础的联合化疗以及放疗等治疗手段的不断完善而不断更新，为患者带来新的希望。但是西医治疗过程中使用的化学合成抗肿瘤的药物普遍存在价格昂贵、毒副作用大的缺点。因此，寻找高效、低毒的药物仍是目前CRC治疗中迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种治疗结直肠癌的药物组合物。

本发明的另一个目的在于提供一种治疗结直肠癌的药物组合物片剂的制备方法。

本发明的另一个目的在于提供一种治疗结直肠癌的药物组合物软胶囊的制备方法。

本发明所采用的技术方案是：

一种治疗结直肠癌的药物组合物，含有：槐定碱40～60质量份，苦参碱10～15质量份，氧化苦参碱10～15质量份，苦豆碱10～15质量份，槐果碱10～15质量份。

所述药物组合物还含有药学上可接受的载体。

所述药学上可接受的载体包括粘合剂、赋形剂和抗粘剂。

所述治疗结直肠癌的药物组合物，其剂型包括口服制剂。

所述口服制剂包括片剂或胶囊。

一种治疗结直肠癌的药物组合物片剂的制备方法，包括如下步骤：

1）将权利要求1治疗结直肠癌的药物组合物加入粘合剂中，搅拌均匀；

2）将赋形剂过80～100目筛，混合均匀；

3）将步骤2）制得的赋形剂加入步骤1）制得的混合溶液中，搅拌均匀制得软材，快速过20～40目筛，烘干；

4）加入抗粘剂，9～11mm浅凹冲压片芯，再用9～11mm浅凹冲压赋形剂，即得片剂。

所述粘合剂为可溶性淀粉溶液、乙醇、水中的至少一种。

所述赋形剂为瓜尔胶和/或羟丙基甲基纤维素（HPMC）。

所述抗粘剂为硬脂酸镁。

一种治疗结直肠癌的药物组合物软胶囊的制备方法，具体步骤如下：

1）取权利要求1所述的治疗结直肠癌的药物组合物与分散介质搅拌均匀，得胶囊内容物；

2）取明胶、甘油、水混匀，过滤后加入尼泊金乙酯，混匀，制备软胶囊囊材；

3)采用压制法压制软胶囊，定型、洗丸，干燥后即得。

所述分散介质为甘油。

本发明的有益效果在于：

本发明的药物组合物抑制肿瘤细胞的作用明显，成分清楚、质量可控；且毒性低、代谢快，用于治疗肠道恶性肿瘤尤其是结直肠癌效果显著。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。如无特殊说明。

实施例1

本发明的治疗结直肠癌的药物组合物的配方1：

槐定碱            1.0g

苦参碱            0.375g

氧化苦参碱        0.375g

苦豆碱            0.375g

槐果碱            0.375g

往上述药物组合物中加入药学载体，制成片剂，具体步骤如下：

1）将上述药物组合物加入10ml 20%（w/v）的可溶性淀粉溶液中，搅拌均匀；

2）将12g的瓜尔胶，5.5g的HPMC过80目筛，混合均匀；

3）将步骤2）制得的赋形剂加入步骤1）制得的混合溶液中，搅拌均匀制得软材，快速过22目筛，60℃烘干；

4）加入0.1g硬脂酸镁，9mm浅凹冲压片芯（片重0.2g），再用11mm浅凹冲压瓜尔胶衣0. 1g，即得片剂100片，外观侧泽均匀、无麻面。

实施例2

本发明的治疗结直肠癌的药物组合物的配方2：

槐定碱            1.5g

苦参碱            0.25g

氧化苦参碱        0.25g

苦豆碱            0.25g

槐果碱            0.25g

往上述药物组合物中加入药学载体，制成片剂，具体步骤如下：

1）将上述药物组合物加入10ml 10%（w/v）的可溶性淀粉溶液中，搅拌均匀；

2）将8g的瓜尔胶，9.5g的HPMC过100目筛，混合均匀；

3）将步骤2）制得的赋形剂加入步骤1）制得的混合溶液中，搅拌均匀制得软材，快速过20目筛，60℃烘干；

4）加入0.1g硬脂酸镁，10mm浅凹冲压片芯（片重0.2g），再用11mm浅凹冲压瓜尔胶衣0. 08g，即得片剂100片，外观色泽均匀、无麻面。

实施例3

本发明的治疗结直肠癌的药物组合物的配方3：

槐定碱            1.25g

苦参碱            0.3g

氧化苦参碱        0.3g

苦豆碱            0.3g

槐果碱            0.35g

往上述药物组合物中加入药学载体，制成软胶囊，具体步骤如下：

1）取上述药物与分散介质甘油2.5ml搅拌均匀，得胶囊内容物；

2）取明胶、甘油、水（比例0.8：0.5：1）混匀，过滤后加入0.3%的尼泊金乙酯，混匀，制备软胶囊囊材；

3)采用压制法压制软胶囊，定型、洗丸，干燥后可得。

实施例1～3所得药物用法用量：

成人（以70kg为例）每次2-3片/粒，每天一次，连续给药10天，停药休息5天后重复疗程。根据患者耐受情况，也可在第二阶段将剂量调整为4-5片/粒。至少使用2个疗程，病情稳定者可继续使用。

以上实施例仅为介绍本发明的优选案例，对于本领域技术人员来说，在不背离本发明精神的范围内所进行的任何显而易见的变化和改进，都应被视为本发明的一部分。

疗效实验

一、体外抗癌细胞株实验

1.实验方法

选用的细胞为人结肠腺癌细胞株SW480、SW620、Lovo细胞、HT－29四种细胞株。对细胞传代、细胞冻存和复苏条件进行优化。使用含有体积分数为10%的胎牛血清的RPMI 1640培养液，细胞在37℃和5%CO₂实验条件下常规培养，细胞呈单层贴壁生长，细胞平铺于培养瓶底面积超过瓶底80%时，即可以按比例传代；按5×10⁶细胞加入冻存液1ml的密度冻存。复苏时，液氮罐中取出细胞，于37℃快速解冻，离心去除冻存液，加入培养液培养，细胞接种次日贴壁良好。接种后2～3日生长旺盛，此时，细胞处于对数生长期，适合各项实验。

细胞增殖活力检测：

采用实施例1配方1的药物组合物进行本实验。药物采用生理盐水配制，设置生理盐水对照组。取指数生长期的细胞加入96孔板中，每孔按4×104个/ml细胞接种180μl。药物终浓度设置为0.5、1.0、1.25、1.5 mg/ml，分为不同组作用于细胞，每组设3个复孔；置37℃培养12h、24h、48h、72h，实验终止前4h加入20μl 5mg/ml  MTT液，再培养4h，弃去培养液加入0.15ml DMSO震荡10min，待结晶溶解后在酶标仪上检测570nm波长下每孔的光密度(optical density, OD)值；按以下公式求出生长抑制率：

生长抑制率(%) = (1－用药组平均OD值/对照组平均OD值)×100%

2．实验结果

本发明的药物组合物对4种结直肠癌细胞株增殖的影响：

该组合物对于结肠癌四种细胞增殖均有不同程度的抑制作用。同样的质量浓度(1.5g/ml)作用48h，药物对SW480、SW620、Lovo、HT-29细胞株的抑制率达到71.16±0.95%；60.45±2.04%，69.57±1.87%和69.57±1.87%。

二、移植瘤动物模型实验

1.实验动物

SPF级BALB/c裸鼠，体重18±2克，雌雄不限。严格饲养在恒温(20℃～26℃)、恒湿(50％～56%)、无特定病原体(Specific pathogen-free, SPF)的空气洁净层流架内；裸鼠盒、空气过滤罩、垫料、饲料和饮水等均经高压蒸汽灭菌，并在无菌条件下适时更换。

2.实验方法

2.1人结肠癌移植瘤裸鼠模型的制作 

裸鼠皮下接种：生长状态良好的SW480培养细胞，用D-Hanks液洗3次，0.25%胰酶消化，1000rpm离心5分钟，收集细胞，无血清培养液洗涤细胞两次，重悬细胞，细胞的浓度调整为2×10⁷个/ml。裸鼠左侧或右侧腋下皮下接种，每只裸鼠接种每个部位约2×10⁶个细胞。注射时可见局部出现皮丘，7天后接种裸鼠出现直径大于5mm的皮下结节，移植瘤模型建立。

2.2分组及给药 

将裸鼠随机分为阴性对照组(生理盐水)，氟尿嘧啶注射液组(5-Fu)，实施例2配方2的药物组合物高、中、低剂量组（25mg/kg、15mg/kg，10mg/kg），每组6只。采用生理盐水溶解组合物，过滤除菌，每日一次腹腔注射。5-Fu采用剂量为30mg/kg，隔日一次腹腔注射。阴性对照组腹腔注射生理盐水。

给药期间密切观察裸鼠的一般状况，包括精神状态、活动、饮食及大小便，并每日测量裸鼠体重，调整用药剂量，每周使用游标卡尺测量肿瘤结节的长径和短径，并在荧光显微镜下观察瘤块生长和转移情况；计算肿瘤体积，绘制各组体重增长曲线及肿瘤生长曲线。

2.3取材及测量

（1）4周后称重，颈椎脱臼处死裸鼠，解剖观察裸鼠肿瘤的转移情况。

（2）游标卡尺测量肿瘤长径(a)和短径(b)，按公式计算肿瘤体积、相对肿瘤体积、相对肿瘤抑制率；连同包膜完整剥出肿瘤组织，电子天平称重，按公式计算抑瘤率。

肿瘤体积(Tumor Volume, TV)=a×b²/2

(a为肿瘤长径；b为肿瘤短径)

相对肿瘤体积(Relative Tumor Volume, RTV)=Vt/V₀

(V₀为开始给药时测量所得肿瘤体积；Vt为每一次测量时的肿瘤体积)

相对肿瘤增殖率T/C%=TRTV/CRTV×100%

(TRTV：治疗组RTV；CRTV：阴性对照组RTV)

抑瘤率(inhibition rate, IR)=(对照组肿瘤重量-实验组肿瘤重量)/对照组肿瘤重量×100%

3.实验结果

3.1裸鼠一般情况与移植瘤生长

本品各组裸鼠给药后出现短暂自主活动减少，半小时后状态均恢复如常，活动自如，进食、饮水基本正常，皮肤颜色如常，大小便正常；各组体重随时间推移增长，后期变化不大。5-Fu组裸鼠用药一周后开始出现精神萎靡，进食量减少，用药2周后有部分裸鼠出现血性腹泻，并有迅速消瘦等恶病质表现，体重不断减轻。阴性对照组裸鼠后期体重亦减少。

裸鼠皮下接种SW480细胞3～4天后，接种部位开始出现粟粒大小结节，至第7天所有被接种裸鼠均出现直径5mm左右的结节，动物移植瘤模型建立。移植瘤早期为圆形或椭圆形，表面光滑，后期为不规则形，有些肿瘤表面凹凸不平，呈多个结节融合状，对照组有肿瘤表面破溃结痂现象。

3.2移植瘤体积变化

从皮下接种第7天开始给药，每周用游标卡尺测量并记录各组荷瘤裸鼠瘤体的长径和短径，计算各组平均瘤体体积，对所有数据进行重复测量的方差分析，结果见表2：阴性对照组在不同时间的移植瘤体积有显著性差异，说明随时间的延长，移植瘤体积不断增大；给药一周后各组移植瘤体积即开始有显著性差异；阴性对照组荷瘤小鼠在接种后第四周瘤体平均体积长至1.139±0.098cm³，本品高剂量组瘤体平均体积0.415±0.053cm³，与阴性对照组比较有显著性差异(P＜0.01)。

3.3抑瘤作用考察

表3显示：采用单因素方差分析比较，用药后各组肿瘤重量有显著性差异(P＜0.01)，各组肿瘤体积比较有显著性差异(P＜0.01)，相对肿瘤体积比较有显著性差异(P＜0.01)。阴性对照组的肿瘤重量达到1.31±0.08g，体积为1.13±0.08cm³，本品高、中剂量组和5-Fu组肿瘤生长速度减慢，移植瘤的重量和体积均显著低于阴性对照组(P＜0.01或P＜0.05)，本品各剂量组和5-Fu组相对瘤体积与阴性对照组比较显著减小(P＜0.01)。

计算各给药组抑瘤率和相对肿瘤增殖率，结果如表4示：采用单因素方差分析比较结果显示，用药后各给药组抑瘤率比较有显著性差异(P＜0.01)，相对肿瘤增殖率比较有显著性差异(P＜0.01)。本品高、中、低剂量组和5-Fu组抑瘤率分别为0.61±0.03%，0.49±0.05%，0.31±0.02%及0.69±0.03%，其相对肿瘤体积与阴性对照组相比较差异亦有统计学意义(P＜0.01)，高剂量组与5-Fu组相对肿瘤增殖率分别为0.53±0.02%及0.45±0.10%，且没有显著性差异(P＞0.05)。低剂量组相对肿瘤体积与阴性对照组相比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。

上述实验证明，本发明的药物组合物能够显著抑制结直肠癌四种细胞株的体外增殖，其抑制增殖作用呈现一定的时间-剂量-效应关系；能够抑制裸鼠接种人结肠癌移植瘤模型的肿瘤生长，具有明确的治疗结直肠癌的作用。

Claims (10)

1.一种治疗结直肠癌的药物组合物，含有：槐定碱40～60质量份，苦参碱10～15质量份，氧化苦参碱10～15质量份，苦豆碱10～15质量份，槐果碱10～15质量份。

2.根据权利要求1所述的治疗结直肠癌的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还含有药学上可接受的载体。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体包括粘合剂、赋形剂和抗粘剂。

4.权利要求1或2所述的治疗结直肠癌的药物组合物，其剂型包括口服制剂。

5.一种治疗结直肠癌的药物组合物片剂的制备方法，包括如下步骤：

1）将权利要求1治疗结直肠癌的药物组合物加入粘合剂中，搅拌均匀；

2）将赋形剂过80～100目筛，混合均匀；

3）将步骤2）制得的赋形剂加入步骤1）制得的混合溶液中，搅拌均匀制得软材，快速过20～40目筛，烘干；

4）加入抗粘剂，9～11mm浅凹冲压片芯，再用9～11mm浅凹冲压赋形剂，即得片剂。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述粘合剂为可溶性淀粉溶液、乙醇、水中的至少一种。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述赋形剂为瓜尔胶和/或羟丙基甲基纤维素（HPMC）。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述抗粘剂为硬脂酸镁。

9.一种治疗结直肠癌的药物组合物软胶囊的制备方法，具体步骤如下：

1）取权利要求1所述的治疗结直肠癌的药物组合物与分散介质搅拌均匀，得胶囊内容物；

2）取明胶、甘油、水混匀，过滤后加入尼泊金乙酯，混匀，制备软胶囊囊材；

3)采用压制法压制软胶囊，定型、洗丸，干燥后即得。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述分散介质为甘油。