CN103251869B

CN103251869B - 治疗胃癌的含补骨脂素的中药组合物及其制备方法和应用

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Publication number: CN103251869B
Application number: CN201310079474.5A
Authority: CN
Inventors: 刘沈林; 吴坚; 邹玺; 刘志辉
Original assignee: Affiliated Hospital Of Nanjing University Of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Affiliated Hospital Of Nanjing University Of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2013-03-13
Filing date: 2013-03-13
Publication date: 2014-11-26
Anticipated expiration: 2033-03-13
Also published as: CN103251869A

Abstract

本发明公开了一种治疗胃癌的含补骨脂素的中药组合物及其制备方法和应用，所述中药组合物含有以下重量百分比的组分：50%-96.77%的白蔻仁挥发油，3.23%-50%补骨脂素。本发明还公开了含补骨脂素的中药组合物的制备方法，本发明还公开了含补骨脂素的中药组合物在制备抗胃癌药物中的应用和抑制肿瘤细胞药物中的应用。补骨脂素与白蔻仁挥发油联用有协同抑瘤作用，当补骨脂素与白蔻仁挥发油质量为1:30配成的含补骨脂素的中药组合物可显著抑制小鼠肿瘤的生长。从中医理论分析，考虑白蔻仁为芳香化湿药物，香气走窜，可助温药补骨脂之药效。两药配伍，共收肿瘤治疗之良效。

Description

治疗胃癌的含补骨脂素的中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种治疗胃癌的中药组合物以及该中药组合物的制备方法和应用。

背景技术

胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。据2000年资料统计，全球每年新发胃癌87万例，占所有新发癌症病例的9％，仅次于肺癌、乳腺癌和肠癌之后，居第4位。每年约有64万人因胃癌死亡，居癌症病因的第2位，亚洲、南美等国家及前苏联地区是胃癌高发区（徐飚，王建明。胃癌流行病学研究[J]。中华肿瘤防治杂志，2006，13(1)：1-7。）。单纯手术难以根治，化疗虽在综合治疗中发挥很大的作用，但其效果仍不理想，而且副作用较多，年老体弱者难以坚持。

而我国传统医学，博大精深，在肿瘤的治疗方面已不仅是西医的补充治疗而已。实践证明，中医药在肿瘤的治疗的全过程都可发挥积极作用。中国抗癌协会临床肿瘤学协作中心(csco)也非常强调中西医结合和祖国医学的发展在肿瘤学方面的地位（储大同。肿瘤中医药治疗评价标准的新共识及其启迪[J]。中国处方药，2004，8(29)：42—4）。

现代药理学证实，补骨脂的有效成分补骨脂素，有良好的体外抑瘤作用。补骨脂素对多种小鼠肉瘤、长氏腹水瘤、肝癌等有抑制作用（吴少华。补骨脂素体内外抗癌活性的实验研究[J]。中国中药杂志，1998，23(5):303-305）。我们前期体外实验也证实：补骨脂素对胃癌SGC-7901细胞增殖有明显的抑制作用。白蔻仁是临床常用的芳香化湿药，有良好的行气散结，引药直达病所的功效。而白豆蔻果实含有大量挥发油，挥发油的主要成分为桉油精(相对含量75.16％)（张耀华，郭国宁，蔡冰。白豆蔻挥发油的Gc／Ms分析及在卷烟中的应用[J]。中国烟草科学，2009，30(3)：24-27）。

补骨脂为豆科植物补骨脂的果实。性温，味辛、苦。有补肾助阳，纳气止泻之功能，是临床常用温阳药之一。现代医学研究证实，补骨脂有良好的抗肿瘤作用，谭敏等（谭敏，孙静，宾晓农等。补骨脂素对乳腺癌MCF-7细胞的体外抗肿瘤作用[J]。广东医学，2008，29（11）:1817-1819[5]）证实补骨脂素对人乳腺癌MCF-7细胞有明显体外抑制作用,其抑制机制与影响细胞周期及诱导细胞凋亡有关。Whelan LC等（Whelan LC,RyanMF.Ethanolic extracts of Euphorbia and other ethnobotanical species as inhibitors of humantumour cell growth[J].Phytomedicine,2003,10(1)：53-58.）研究发现，补骨脂对HEp-2、A549细胞株有较强的细胞毒性作用。补骨脂素加UVA（长波紫外线）可抑制多种白血病细胞株的生长,并诱导其凋亡（陈楠楠，黄世林，张德杰。补骨脂素加长波紫外线对人白血病细胞株NB4、HL-60、K562作用的研究[J]。中国中医急症，2007，16(4)：444-446）。白豆蔻为姜科植物白豆蔻或爪哇白豆蔻的干燥成熟果实。该药是临床常用的芳香化湿药，其味辛，性微温。有化湿行气，温中止呕的功效。扬州大学的陈平教授对此进行了一系列研究，认为豆蔻提取物对胃癌有一定的抑制作用（赵伟，苗毅，陈平。豆蔻提取物对人胃癌细胞裸鼠移植瘤的影响的实验研究[J]。实用临床医药杂志，2009，13（6）：26-29；石磊，陈平，赵伟。豆蔻提取物对人胃癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响[J]。肿瘤学杂志，2010，(10):776-778）。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明所要解决的目的是提供一种含有补骨脂素的中药组合物及其制备方法和应用。

技术方案：为了解决上述目的，本发明所采用的技术方案为：一种含补骨脂素的中药组合物，所述中药组合物含有以下重量百分比的组分：96.77%的白蔻仁挥发油，3.23%补骨脂素。

所述的含补骨脂素的中药组合物的制备方法包括以下步骤：

（1）制备补骨脂素：

a、取补骨脂饮片打粗粉，将95％乙醇溶液多次浸渍12-24小时，滤过，合并各次浸渍液，并去除浸渍液中乙醇得到回收液，将回收液放置过夜，倾去上清液，得棕黄色粘稠物；

b、将粘稠物加4倍甲醇回流使其溶解，趁热抽滤，滤液静置，放冷析晶，得补骨脂素粗品，

c、取粗品加甲醇溶解，加活性炭，于水浴煮沸5min左右，趁热抽滤，放冷析晶，滤出结晶。

d、将上述步骤b-c过程进行纯化2至3次，即得补骨脂素；

（2）制备白蔻仁挥发油：取白蔻仁饮片打粗粉，加水浸泡1～2小时，其中加水量为白蔻仁粗粉重量的5至20倍量；再加热蒸馏，收集挥发液，挥发液二次蒸馏，得到含少量水分的白蔻仁挥发油，加入无水硫酸钠振摇，静置，滤去硫酸钠，即得白蔻仁挥发油；

（3）取通过步骤（1）得到的补骨脂素溶解于生理盐水中得到补骨脂素溶液0.5%；

（4）取通过步骤（2）得到的白蔻仁挥发油15%加入补骨脂素溶液中即得到所述中药组合物。

所述步骤（2）中的加水量为白蔻仁粗粉重量的20倍。

所述步骤（3）中的补骨脂素溶液中的补骨脂素质量浓度为0.5%。

所述步骤（4）中的补骨脂素溶液中的白蔻仁挥发油质量浓度为15%。

所述的含补骨脂素的中药组合物在制备抗胃癌药物中的应用。

所述的药物包括治疗胃癌的含补骨脂素的中药组合物与药学上可接受的载体结合制成的各种剂型。上述剂型包括合剂，或者糖浆剂，或者片剂，或者胶囊剂，或者颗粒剂。

所述的含补骨脂素的中药组合物在抑制肿瘤细胞药物中的应用。

有益效果：与现有技术相比，本发明的优点在于：补骨脂素有较好的抑制小鼠实体瘤生长的作用，白蔻仁挥发油对抑制肿瘤生长无明显作用。补骨脂素与白蔻仁挥发油联用有协同抑瘤作用，当补骨脂素与白蔻仁油质量为1:30配成的含补骨脂素中药组合物可显著抑制小鼠肿瘤的生长。从中医理论分析，考虑白蔻仁为芳香化湿药物，香气走窜，可助温药补骨脂之药效。两药配伍，共收肿瘤治疗之良效。

具体实施方式

以下通过实验例来进一步阐述本发明所述中药的有益效果。

1、实验材料

1.1细胞及实验动物

BALB/c裸鼠（由上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证号：SCXK（沪），2007-0005）30只，雌雄各半，4周龄，体重18-22g；SPF级环境下饲养，室内定期进行紫外线照射，鼠笼、垫料、饮水均严格消毒。

1.2实验药物及配制：

1.2.1实验药物：

5-Fu（5-氟尿嘧啶）注射液：25mg/ml，由天津金耀氨基酸有限公司提供，批号：1011092；

补骨脂素溶液：5mg/ml，江苏省中医院制剂部提供，批号：110726；

白蔻仁挥发油：10g/ml，江苏省中医院制剂部提供，批号：101109；

1.2.2药物配制：

补骨脂素溶液：取40mg补骨脂素溶解于8ml生理盐水中，配成5mg/ml溶液，现配现用。

白蔻仁挥发油溶液：取120ul白蔻仁挥发油加入8ml生理盐水中，配成150mg/ml溶液，现配现用。

含补骨脂素中药组合物（补骨脂素复方组）：将120ul浓度为10g/ml浓度为的白蔻仁挥发油加入8ml浓度为5mg/ml补骨脂素溶液中，配成155mg/ml的补骨脂素复方溶液，现配现用。

5-FU溶液：取1ml5-Fu注射液加入9ml生理盐水中，配成25mg/ml溶液，现配现用。

1.3试剂及设备

1640培养液购自Gibco公司；小牛血清购自杭州四季青公司；胰蛋白酶购自Biosharp公司；SPF动物房：南京中医药大学实验中心SPF动物房。

2、建立模型

人胃癌SGC7901细胞用含10%小牛血清的1640培养液常规培养，消化并重悬细胞，每只裸鼠接种0.2ml细胞悬液，5×106个细胞。约3周后裸鼠移植瘤增长约2cm³大小，在无菌条件下，自裸鼠腋部皮下剥取肿瘤组织,剔除纤维包膜，选取生长良好的淡红色、鱼肉状瘤组织，置于生理盐水中切成1mm³大小的组织块备用。裸鼠术前常规消毒，用带有2个组织块的穿刺针刺入裸鼠左侧腋下，将组织块推入。18天后，裸鼠左侧腋下出现直径为5mm-7mm的硬结，造模成功。

3.动物分组、给药

将30只裸鼠随机分为：阴性对照组（NS组）、阳性对照组（5-FU组）、补骨脂素组、白蔻仁挥发油组、补骨脂素复方组，每组6只。阴性对照组（NS组），每天灌服生理盐水0.2ml/10g；阳性对照组（5-FU组），按照25mg/kg剂量给药，隔日一次，灌胃0.2ml/10g；补骨脂素组：100mg/kg，0.2ml/10g，1/日；白蔻仁挥发油组：3g/kg，0.2ml/10g，1/日；补骨脂素复方组：155mg/ml，1/日。连续用药10d，次日处死荷瘤裸鼠，眼眶取血，剖瘤称重。

4、抗肿瘤效果观察

4.1观察项目：每日观察裸鼠的饮食、排便、排尿、活动状态，移植瘤生长情况；出瘤后以游标卡尺测量瘤体的最长径和最短径，每周测量2次，根据Steel公式（Boehm T,Folkman J,Browder T,et al.Antiangiogenic therapy of experimental cancer does not induceacquired drug resistance.Nature,1997,390(6658):404-407.）计算瘤体体积（V）=（长径×短径²)/2（cm³），计算出肿瘤体积，同时绘制肿瘤生长曲线。于实验的第11日处死全部动物，解剖剥离瘤体，称瘤质量和体积。

4.2根据肿瘤体积及瘤体重量计算肿瘤抑制率：

测量瘤体体积计算肿瘤抑制率：抑制率（%）=（1-V实验组/V阴性对照组）×100%

测量瘤体重量计算肿瘤抑制率：抑制率（%）=（1-给药组平均瘤重/对照组平均瘤重）×100%。

4.3判断标准：肿瘤抑制率>30%，经统计学处理有明显差异者为有抗肿瘤作用（中华人民共和国卫生部药政局中药新药研究指南，1994，104-105）。

5、统计处理

实验数据均以表示，采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，方差齐性检验后，组间比较用t检验。

6、实验结果

6.1裸鼠生长状况

各组裸鼠皮下移植瘤成功率均为100%，瘤块种植后约1周，皮下明显可见肿瘤，直径约2～4mm，15天左右瘤体直径为5mm-7mm，进入实验。以后瘤体继续增大，各组移植瘤生长不一，大小不等，至处死前，各组均未见死亡，裸鼠进食、排尿、排便均正常，活动敏捷，各组裸鼠均未出现明显消瘦。

6.2中药对SGC7901细胞裸鼠皮下移植瘤体积的影响

对造模成功的裸鼠进行分组，比较各组的肿瘤体积大小无差异(P＞0．05)。治疗后补骨脂素复方组可抑制肿瘤体积（P<0.05）（见表1、表2）。通过肿瘤生长曲线，当阴性对照组裸鼠肿瘤进入快速生长期的时候，补骨脂复方荷瘤鼠肿瘤体积的增大的速度明显较阴性对照组慢。其中表格中n是指小鼠的只数。

表1补骨脂素复方对裸鼠皮下移植瘤体积的影响（mm³

*：与阴性对照组比，（P<0.05）

表2补骨脂素复方对裸鼠皮下移植瘤体积的抑制率（%）

6.3补骨脂素复方对SGC7901细胞裸鼠皮下移植瘤瘤体重量的影响

处死所有裸鼠后，剥瘤称重。中药组小鼠瘤体平均重量小于阴性对照组，补骨脂素复方组肿瘤生长抑制率为62.24%（P<0.05）（结果见表3）。

表3补骨脂素复方对裸鼠皮下移植瘤瘤重的影响

*：与阴性对照组比，（P<0.05）

7、结论

实验结果提示：白蔻仁挥发油能明显提高补骨脂素的体内抗肿瘤活性，对胃癌细胞皮下移植瘤的抑制有明显的增效作用。

以下通过实施例来进一步阐述本发明。

实施例1：

（1）制备补骨脂素：

a、取补骨脂饮片打粗粉，第1次加6倍量50%乙醇浸渍6小时，第2，3，4次分别加入5倍量50%乙醇，各浸渍2h，滤过，合并各次浸渍液，并去除浸渍液中乙醇得到回收液，将回收液放置过夜，倾去上清液，得棕黄色粘稠物；

b、将粘稠物加1倍甲醇回流使其溶解，趁热抽滤，滤液静置，放冷析晶，得补骨脂素粗品，

d、将上述步骤b-c过程进行纯化2至3次，即得补骨脂素。100克补骨脂生药可提取约0.5克补骨脂素。

（2）制备白蔻仁挥发油：取白蔻仁饮片打粗粉，加水浸泡1～2小时，其中加水量为白蔻仁粗粉重量的5至20倍量；再加热蒸馏，收集挥发液，挥发液二次蒸馏，得到含少量水分的白蔻仁挥发油，加入无水硫酸钠振摇，静置，滤去硫酸钠，即得白蔻仁挥发油；100克白蔻仁生药可提取约5克白蔻仁挥发油。

实施例2：

（1）制备补骨脂素：

a、取补骨脂饮片打粗粉，第1次加6倍量50%乙醇浸渍12小时，第2，3，4次分别加入5倍量50%乙醇，各浸渍2h，滤过，合并各次浸渍液，并去除浸渍液中乙醇得到回收液，将回收液放置过夜，倾去上清液，得棕黄色粘稠物；

（3）取通过步骤（1）得到的补骨脂素溶解于生理盐水中得到补骨脂素溶液4%；

（4）取通过步骤（2）得到的白蔻仁挥发油10%加入补骨脂素溶液中即得到所述中药组合物。

将实施例1、实施例2中所制得的含补骨脂素的中药组合物与药学上可接受的载体结合制成各种剂型的抗胃癌药物。上述剂型包括合剂，或者糖浆剂，或者片剂，或者胶囊剂，或者颗粒剂。

实施例3：

（1）制备补骨脂素：

a、取补骨脂饮片打粗粉，第1次加6倍量95%乙醇浸渍18小时，第2，3，4次分别加入5倍量95%乙醇，各浸渍2h，滤过，合并各次浸渍液，并去除浸渍液中乙醇得到回收液，将回收液放置过夜，倾去上清液，得棕黄色粘稠物；

b、将粘稠物加6倍甲醇回流使其溶解，趁热抽滤，滤液静置，放冷析晶，得补骨脂素粗品，

（3）取通过步骤（1）得到的补骨脂素溶解于生理盐水中得到补骨脂素溶液8%；

（4）取通过步骤（2）得到的白蔻仁挥发油8%加入补骨脂素溶液中即得到所述中药组合物。

将步骤（4）得到的中药组合物加入淀粉，制粒，干燥、整粒、装胶囊，分装，即得胶囊剂。

其中，粗粉：药典指能全部通过24目筛，但混有能通过65目筛不超过40%的粉末。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种治疗胃癌的含补骨脂素的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物含有以下重量百分比的组分：96.77%的白蔻仁挥发油，3.23%补骨脂素。

2.权利要求1所述的治疗胃癌的含补骨脂素的中药组合物的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

（1）制备补骨脂素：

a、取补骨脂饮片打粗粉，将体积浓度为50%-95％乙醇溶液多次浸渍12-24小时，滤过，合并各次浸渍液，并去除浸渍液中乙醇得到回收液，将回收液放置过夜，倾去上清液，得棕黄色粘稠物；

b、将粘稠物加甲醇回流使其溶解，趁热抽滤，滤液静置，放冷析晶，得补骨脂素粗品，其中所述甲醇的加入量为粘稠物体积的1-6倍；

c、取粗品加甲醇溶解，加活性炭，于水浴煮沸5min，趁热抽滤，放冷析晶，滤出结晶；

d、将上述步骤b-c过程进行纯化2至3次，即得补骨脂素；

（2）制备白蔻仁挥发油：取白蔻仁饮片打粗粉，加水浸泡1~2小时，其中加水量为白蔻仁粗粉重量的5至20倍量；再加热蒸馏，收集挥发液，挥发液二次蒸馏，得到含少量水分的白蔻仁挥发油，加入无水硫酸钠振摇，静置，滤去硫酸钠，即得白蔻仁挥发油；

（3）取通过步骤（1）得到的补骨脂素溶解于生理盐水中得到质量浓度为0.5%-8%补骨脂素溶液；

（4）取通过步骤（2）得到的质量浓度为8%-15%白蔻仁挥发油加入补骨脂素溶液中即得到所述中药组合物。

3.权利要求2所述的治疗胃癌的含补骨脂素的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的加水量为白蔻仁粗粉重量的20倍。

4.权利要求2所述的含补骨脂素的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中的补骨脂素溶液中的补骨脂素质量浓度为0.5%。

5.权利要求2所述的含补骨脂素的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中的补骨脂素溶液中的白蔻仁挥发油质量浓度为15%。

6.权利要求1所述的含补骨脂素的中药组合物在制备抗胃癌药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的药物包括治疗胃癌的含补骨脂素的中药组合物与药学上可接受的载体结合制成的各种剂型。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述剂型包括合剂，或者糖浆剂，或者片剂，或者胶囊剂，或者颗粒剂。

9.权利要求1所述的含补骨脂素的中药组合物在制备抑制肿瘤细胞药物中的应用。