CN102680627A

CN102680627A - 一种烟叶中关键致香物质的分析与鉴别方法

Info

Publication number: CN102680627A
Application number: CN2012101535936A
Authority: CN
Inventors: 谢雯燕; 高建宏; 张士成; 刘百战
Original assignee: Fudan University; Shanghai Tobacco Group Co Ltd
Current assignee: Fudan University; Shanghai Tobacco Group Co Ltd
Priority date: 2012-05-15
Filing date: 2012-05-15
Publication date: 2012-09-19

Abstract

本发明属于烟草技术领域，涉及一种烟叶中关键致香物质的分析与鉴别方法。本发明烟叶中关键致香物质的分析与鉴别方法将仪器检测技术和嗅闻法相结合，其GC可定性分析获知各香味化合物，其MS可定量分析各香味化合物在烟叶中的含量，其ODP与感官嗅辨可获知各香味化合物的气味强度和气味类型，为烟叶中关键致香物质的鉴定提供了一种快速、简洁的分析方法，能快速、准确的找到烟叶中对烟叶香气贡献较大的化合物、并判断出烟叶的关键致香物质的香气类型、气味强度；并为卷烟的加香调香提供了良好的技术指导和数据支持。

Description

一种烟叶中关键致香物质的分析与鉴别方法

技术领域

本发明属于烟草技术领域，具体涉及一种烟叶中关键致香物质的分析与鉴别方法。

背景技术

不同物质的气味域值存在很大差异，往往含量很低的物质由于阈值低反而对香气有着更大的贡献。目前烟叶中致香物质的测定方法主要是仪器检测技术或感官评吸。仪器检测技术主要是基于GC-MS、LC-MS等，主要对物质进行定性和定量分析，但是，对烟叶香味起重要作用的并非是含量大的物质；感官评吸是烟叶中香味成分对评吸员鼻腔和口腔的整体刺激，而仪器检测技术对香味化合物的香气贡献度无法判别。

发明内容

本发明的目的在于提供一种烟叶中关键致香物质的分析与鉴别方法，为烟叶中关键致香物质的鉴定提供了一种快速、简洁的分析方法，将仪器检测技术和感官嗅闻法结合起来，该方法不仅可以用来确定烟叶的种类、香型风格，为烟叶风格特色评价提供基础数据支持；同时，该方法也可以为卷烟加香调香提供技术指导。

为了解决上述现有技术问题，本发明采用如下的技术方案：

一种烟叶中关键致香物质的GCMS/O分析鉴别方法，其技术路线参见图1；上述O为ODP的简写，ODP为Olfactometry Detection Port，其中文名称为嗅觉检测端口或嗅觉检测器；上述GC-MS/O代表GC-MS和GC-O。本发明的GC气相色谱仪器、MS质谱仪器和ODP仪器均可直接从市场上购买得到；其中ODP仪器优选为厂家为德国Gerstel公司、仪器型号为ODP2。

本发明的烟叶中关键致香物质的GCMS/O分析鉴别方法，具体包括如下步骤：

（1）烟叶中关键致香物质的提取：以无水乙醚为溶剂，经溶剂萃取法提取烟叶中的香味物质，并加酒石酸溶液去除烟碱，离心分离后取上层清液浓缩得到关键致香物质的浓缩液。

（2）采用GC-MS/O分析鉴别烟叶中的关键致香物质：将步骤（1）获得的关键致香物质的浓缩液注入GC-MS/O中，浓缩液进入气相色谱仪后经Y管一半进入质谱仪，同时另一半进入ODP仪器，分别获得GC图谱、MS总离子流图、香气强度图和FD因子图。

（3）对步骤（2）获得的各谱图进行综合分析，结合各致香物质的气味强度和FD因子可获知，致香物质的气味强度越大对烟叶的整体香气贡献越大，FD因子越高的致香物质在烟叶整体香型中的贡献越大。

较佳的，步骤（1）中，萃取时，每500mg烟叶加入15ml无水乙醚；每500mg烟叶加入3ml酒石酸水溶液。

优选的，步骤（1）中，所述酒石酸水溶液中酒石酸的质量百分比浓度为10%。

优选的，步骤（1）中，萃取时，烟叶的状态为烟叶末。

较佳的，步骤（1）中，每500mg烟叶所对应的关键致香物质的浓缩液为500μL。

较佳的，步骤（2）中，GC-MS条件为：

GC分析检测条件：GC进样口温度为250℃；进样量为3.0μL；采用不分流进样；载气为氦气，载气恒流量为2.0mL/min；

MS分析检测条件：MS电离源能量为70eV；离子源温度为230℃；四级杆温度为150℃；检测器温度为280℃；扫描方式为scan；扫描范围为35~300m/z。

较佳的，步骤（2）中，GC-O中的ODP分析检测条件：ODP端口与传输线之间的温度为280℃；补充气为氮气，且补充气恒流量为20mL/min；嗅闻端口处补充潮湿空气对色谱流出气体加湿，防止嗅辨员鼻粘膜干燥而引起嗅觉疲劳。

较佳的，步骤（2）中，采用GCMS/O分析鉴别烟叶中的关键致香物质时，每次进样后，嗅辨员在ODP仪器端口进行嗅闻，嗅辨员采用GC-O五级气味强度法对ODP端口流出的各化合物进行嗅闻评价，并记录各化合物的香气类型、气味强度来判断烟叶中的每一致香物质。一般地，化合物的气味强度越大，表明其对烟叶的整体香气贡献越大；烟叶香味物质的GC-MS/O图谱可参见图2。

优选的，步骤（2）中，嗅辨员采用GC-O五级气味强度法对各化合物的气味强度进行评价时，样品按一定比例逐级稀释，直到嗅辨员感知不到气味为止；在最稀浓度下仍能够闻到的成分即为关键致香物质，其稀释倍数为稀释因子（即FD因子）。

本发明的GC-O五级气味强度法为将中国的6级臭气强度表示法中的0级和1级合并为1级，再加上其2、3、4、5级共为5级气味级别和气味强度，该中国的6级臭气强度表示法参照《恶臭污染物排放标准》（GB 14554-93）中我国采用的6级臭气强度表示法，如表4所示。

优选的，样品按一定比例逐级稀释，如可以按照2ⁿ递增的的比例逐级稀释或者按照1:2、1:3、1:4、……的比例进行逐级稀释。进样GC-O分析时，直到在ODP嗅闻端口感觉不到气味为止，在最稀浓度下仍能够闻到的成分即为关键致香物质，其稀释倍数为稀释因子（即FD因子）。一般地，FD因子越高该物质在整体香型中的贡献越大。

本发明的烟叶中关键致香物质的GC-MS/O分析鉴别方法，结合各致香物质的气味强度和FD因子可知，烤烟烟叶中的关键致香物质为β-大马酮、β-二氢大马酮；白肋烟烟叶中的关键致香物质为β-大马酮，β-二氢大马酮和巨豆三烯酮4；香料烟烟叶中的关键致香物质为β-大马酮、β-二氢大马酮和甲基丁香酚。

本发明的将仪器检测技术和感官嗅闻法结合起来，其GC可定性分析获知各香味化合物，其MS可定量分析各香味化合物在烟叶中的含量，其ODP与感官嗅辨可获知各香味化合物的气味强度和气味类型，为烟叶中关键致香物质的鉴定提供了一种快速、简洁的分析方法，能快速、准确的找到烟叶中对烟叶香气贡献较大的化合物、并判断出烟叶的关键致香物质的香气类型、气味强度；并为卷烟的加香调香提供了良好的技术指导和数据支持。

附图说明

图1烟叶中关键致香物质的GC-MS/O分析与鉴别方法技术路线；

图2烟叶香味物质GC-MS/O图谱；

图3烤烟烟叶中香气区域GC-MS/O分析结果图谱：

(a)MS总离子流图；(b)香气强度图；(c)FD因子图；

图4白肋烟烟叶中香气区域GC-MS/O分析结果图谱：

(a)MS总离子流图；(b)香气强度图；(c)FD因子图；

图5香料烟烟叶中香气区域GC-MS/O分析结果图谱：

(a)MS总离子流图；(b)香气强度图；(c)FD因子图；

图6混合标样的GC-MS/O结果图谱：

(a)MS总离子流图；(b)香气强度图；(c)FD因子图。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。

实施例1

采用下述实验方法来分析烤烟烟叶中的致香物质：

（1）以无水乙醚15ml为溶剂，萃取提取500mg烟末中的致香物质，并加入3ml酒石酸溶液去除烟碱，其中酒石酸水溶液中酒石酸的质量百分比浓度为10%，离心分离，取上层清液浓缩至500μL；

（2）采用GC-MS/O分析鉴别烟叶中的关键致香物质：将步骤（1）获得的关键致香物质的浓缩液注入GC-MS/O中，浓缩液进入气相色谱仪后经Y管一半进入质谱仪，同时另一半进入ODP仪器，分别获得GC图谱、MS总离子流图、香气强度图和FD因子图；如图3所示。

GC-MS条件：GC分析检测条件：GC进样口温度250℃；进样量：3.0μL；不分流进样；载气为氦气，且流速：2.0mL/min(恒流)；升温程序：初始温度40℃，保持1min，以3℃/min升到180℃，然后再以20℃/min到280℃，保持15min。

MS分析检测条件：MS电离源能量70eV；离子源温度230℃；四级杆温度150℃；检测器温度280℃；扫描方式：scan；扫描范围：35~300m/z；

GC-O分析检测条件：ODP端口与传输线之间的温度为280℃；补充气为氮气，且流速：20mL/min(恒流)；嗅闻端口处补充潮湿空气对色谱流出气体加湿，防止嗅辨员鼻粘膜干燥而引起嗅觉疲劳。

（3）每次进样后，嗅辨员在ODP端口进行嗅闻，并记录各化合物的香气类型、气味强度及持续时间，以判断烟叶中的每一致香物质。嗅辨员采用GC-O五级气味强度法对ODP端口流出的各化合物进行嗅闻，对各香味物质的气味强度进行评价，且样品按2ⁿ递增的比例逐级稀释（即为AEDA稀释法），直到嗅辨员感知不到气味为止。在最稀浓度下仍能够闻到的成分即为关键致香物质，其稀释倍数为稀释因子（即FD因子）。一般地，化合物的气味强度越大，表明其对烟叶的整体香气贡献越大；FD因子越高该物质在整体香型中的贡献越大。

上述GC-O五级气味强度法为将中国的6级臭气强度表示法中的0级和1级合并为1级，再加上其2、3、4、5级共为5级气味级别和气味强度，该中国的6级臭气强度表示法参照《恶臭污染物排放标准》（GB 14554-93）中我国采用的6级臭气强度表示法，如表4所示。

（4）烤烟烟叶的GC-MS/O分析结果（如图3和表1所示）如下：

在烤烟烟叶中嗅辨员感知到的16种香气活性化合物中，香气强度为4的化合物为β-大马酮，呈现出蜜甜、玫瑰花甜、令人愉悦的气味，香气强度为3的化合物有甲基丁香酚、二氢猕猴桃内酯以及6种未知物质，甲基丁香酚呈现出果香、乳香、奶香、微甜的气味，二氢猕猴桃内酯呈现出清凉气息，6种未知化合物分别呈现出青香、刺激（序号5），清新的青香、果香、舒服（序号8）和果香、微甜、花香、清新气息（序号26和30）、咸菜、混杂的怪味（序号11）、沉闷的青香（序号7）。剩下的7种物质香气强度均为2，它们分别为茄酮、β-二氢大马酮、香叶基丙酮、巨豆三烯酮2、香兰素酸、巨豆三烯酮4以及1种未知物质（序号34），这些化合物均有令人愉悦舒服的气味，对烟叶香气的贡献均为正面的，如图3和表1所示。由图3和表1还可知：烤烟烟叶中16种香气活性化合物的保留时间和匹配度以及各香味物质在烤烟烟叶中的含量（可定量）；其中，各化合物的定性通过Wiley谱库检索定性，根据匹配度大小来确定，各化合物的定量采用内标法定量或半定量法定量。各化合物香气定性根据标准化合物的香气匹配，各化合物的香气定量采用五级气味强度法。

由图3(c)可知，随着化合物稀释倍数的增大，嗅辨员可以感知到的化合物越来越少。其中，气味最后消失的化合物为β-大马酮，FD因子为4096，往后依次是β-二氢大马酮，FD因子为256，甲基丁香酚，FD因子为64，二氢猕猴桃内酯以及2种未知化合物，FD因子为32，其他化合物的FD因子均小于16。这些化合物的含量虽然很低，但是其香气贡献较大。而含量较高的茄酮、香叶基丙酮、巨豆三烯酮等的气味则消失得较快，FD因子很小，这可能是由于这些物质的阈值较高或者留香时间较短。

因此，结合气味强度法和AEDA稀释法（即芳香物萃取稀释法）可知，烤烟烟叶中的关键致香物质为β-大马酮、β-二氢大马酮。

表1烤烟烟叶香味成分

上述表1中的含量一栏内的“Tr”代表相应物质的含量为痕量；空格代表MS未检测到相应物质的含量；强度一栏内的空格代表没有嗅到相应物质的气味。上述表1中匹配度是指该化合物的MS图谱与纯物质的标准图谱的相似度。上述FD因子的数据代表相应物质的气味在稀释到该数据的倍数之下可以嗅辨到，而稀释到该数据的倍数或更大倍数就嗅辨不到了。

实施例2

采用与烤烟烟叶样品同样的实验方法来分析白肋烟烟叶中的致香物质。白肋烟烟叶的GC-MS/O分析结果（如图4和表2所示）如下：

在白肋烟烟叶的15种香气活性化合物中，强度最大，对烟叶香气贡献最大的化合物为β-大马酮和具有清新的青香的未知物质（序号为6），其强度大小均为4，β-大马酮为甜香、蜜香、玫瑰花香、愉悦。强度较之微小的物质有甲基丁香酚、二氢猕猴桃内酯以及2种未知物质（序号为24和30），甲基丁香酚具有果香、乳香、奶香，二氢猕猴桃内酯具有青香、清凉气息，他们的强度均为3。香气强度为2的化合物较多，共有7种，分别为茄酮、β-二氢大马酮、香叶基丙酮、巨豆三烯酮4以及3种未知物质（序号为8、10、12），茄酮香气为清甜花香、水果味，β-二氢大马酮为清甜、花香、果香，香叶基丙酮为青香、果香，巨豆三烯酮4为烤香、坚果味，3种未知物质中有2种对白肋烟烟叶整体香气起着负面的影响，具有刺激、霉味、混杂的气味。降茄二酮的香气强度为1.5，具有果香、甜味。香兰素酸的香气强度为1.33，具有清香、微甜气味。如图4和表2所示。由图4和表2还可知：白肋烟烟叶中15种香气活性化合物的保留时间和匹配度以及各香味物质在烤烟烟叶中的含量（可定量）；其中，各化合物的定性通过Wiley谱库检索定性，根据匹配度大小来确定，各化合物的定量采用内标法定量或半定量法定量。各化合物香气定性根据标准化合物的香气匹配，各化合物的香气定量采用五级气味强度法。

由图4(c)可以看出，随着样品稀释倍数的增大，化合物强度在逐渐减小，只是减小的幅度不同而已。在白肋烟烟叶的所有香味物质中，FD因子最大的化合物为β-大马酮，其FD因子为1024，同烤烟中其香气强度变化趋势类似，白肋烟中β-大马酮的强度变化幅度很小，稀释3个梯度之后才有微小的变化。其后是β-二氢大马酮，FD因子为512，稀释32倍以后，其强度才变为1，又持续稀释3个梯度后其气味才消失。在白肋烟烟叶中，在巨豆三烯酮4出峰处闻到的烤香香味的持续时间很久，其FD因子高达256，对白肋烟烟叶香味贡献甚大。甲基丁香酚、二氢猕猴桃内酯和2种未知物质的FD因子为32，他们在白肋烟烟叶香气中也有着一定贡献，但是其中一种未知物质的影响为负面的。剩下的8种物质的FD因子均小于16，其中茄酮、香叶基丙酮、降茄二酮为烟叶中公认的关键致香物质，但是其FD因子却偏小。这可能是与其香气留香值有关。

综合考虑香气强度和FD因子，白肋烟烟叶中的关键致香物质为β-大马酮，β-二氢大马酮和巨豆三烯酮4。甲基丁香酚、二氢猕猴桃内酯对白肋烟烟叶香气也具有一定贡献。而向来被公认的茄酮、香叶基丙酮、降茄二酮则在香气强度和FD因子方面没有任何优势，这可能是与化合物结构有关，以及这些物质的香气阈值、留香值等也有密切关系。

表2白肋烟烟叶中香味成分

上述表2中的含量一栏内的“Tr”代表相应物质的含量为痕量；空格代表MS未检测到相应物质的含量；强度一栏内的空格代表没有嗅到相应物质的气味。上述表2中匹配度是指该化合物的MS图谱与纯物质的标准图谱的相似度。上述FD因子的数据代表相应物质的气味在稀释到该数据的倍数之下可以嗅辨到，而稀释到该数据的倍数或更大倍数就嗅辨不到了。

实施例3

采用与烤烟烟叶样品同样的实验方法来分析香料烟烟叶中的致香物质。香料烟烟叶GC-MS/O分析结果（如图5和表3所示）如下：

在香料烟烟叶中嗅辨员感知到14种香气活性化合物。其中，香气强度最大的化合物为β-大马酮，强度为4，具有甜香、蜜香、玫瑰花香、愉悦气息。强度为3的香气化合物有6种，分别为甲基丁香酚、二氢猕猴桃内酯以及4种未知化合物（序号为6、8、9、27）。甲基丁香酚具有乳香、果香、奶香、舒服气味，二氢猕猴桃内酯具有青香、清凉气息。4种未知化合物气味分别为青香、刺激、清新，青香、刺激、难闻，弱刺激性青香、酸味，木香、辛香、粉香香气。强度为2.5的香气化合物为巨豆三烯酮4，具有烤香香气。香气强度为2的香气化合物有茄酮、β-二氢大马酮、香叶基丙酮、巨豆三烯酮2以及2种未知化合物（序号为12、32）。茄酮具有清甜花香、水果味，香叶基丙酮为青香、果香，巨豆三烯酮2为烟味、干木气味，2种未知化合物具有青香、发酸、怪味和温和的塑胶味。如图5和表3所示。由图5和表3还可知：香料烟烟叶中14种香气活性化合物的保留时间和匹配度以及各香味物质在烤烟烟叶中的含量（可定量）；其中，各化合物的定性通过Wiley谱库检索定性，根据匹配度大小来确定，各化合物的定量采用内标法定量或半定量法定量。各化合物香气定性根据标准化合物的香气匹配，各化合物的香气定量采用五级气味强度法。

由图5(c)可知，随着样品逐级稀释，嗅辨员可以感知到的香气化合物越来越少。在香料烟的14种香气活性化合物中，FD因子最大的化合物为β-大马酮和β-二氢大马酮，均为1024。甲基丁香酚的FD因子为256。香气强度为3呈现出青香、刺激、难闻的未知化合物FD因子为64。二氢猕猴桃内酯和香气强度为3呈现出弱刺激性青香、酸味的未知化合物的FD因子为32。而茄酮、香叶基丙酮、巨豆三烯酮2和巨豆三烯酮4等化合物的FD因子则非常小。这可能与化合物香气阈值和留香值有关。

综合各化合物香气强度和FD因子可知，对香料烟烟叶的香气贡献较大的化合物有β-大马酮、β-二氢大马酮和甲基丁香酚。它们都具有较大的香气强度和FD因子，因此可以判断为香料烟烟叶关键致香物质。

表3香料烟烟叶中香味成分

上述表3中的含量一栏内的“Tr”代表相应物质的含量为痕量；空格代表MS未检测到相应物质的含量；强度一栏内的空格代表没有嗅到相应物质的气味；上述表3中的匹配度是指该化合物的MS图谱与纯物质的标准图谱的相似度。上述FD因子的数据代表相应物质的气味在稀释到该数据的倍数之下可以嗅辨到，而稀释到该数据的倍数或更大倍数就嗅辨不到了。

上述各实施例中所涉及到的五级气味强度判断标准、嗅闻方法标准化以及嗅辨员嗅觉训练方法如下：

（一）气味强度判断标准：

上述各实施例中GC-O五级气味强度法为将中国的6级臭气强度表示法中的0级和1级合并为1级，再加上其2、3、4、5级共为5级气味级别和气味强度，该中国的6级臭气强度表示法参照《恶臭污染物排放标准》（GB 14554-93）中我国采用的6级臭气强度表示法。

其中《恶臭污染物排放标准》（GB 14554-93）中我国采用的6级臭气强度表示法是日本中央公害对策审议会议1973年5月审定通过的规定恶臭物质及设定恶臭标准范围方法中的6级臭气强度表示法，如表4所示。

表46级臭气强度表示法的分级

臭气强度级别	嗅觉感觉
		0	无任何气味感觉
1	能稍微感觉到极弱的气味（检知阈值浓度）
		2	能感觉和分辨出何种气味（确认阈值浓度）

3	能明显感觉到有臭味
		4	能感觉到强烈的臭味
5	能感觉到极强烈的恶臭气味

（二）嗅闻方法标准化：

1、中国标准臭液的组成和气味特征，如表5所示：

表5

我国国家标准推荐的三点比较式臭袋法是在日本恶臭测试法的基础上，进行了一些修改形成的，其中日本标准臭液的组成及气味性质如表6所示：

表6

2、嗅辨员标准嗅液的配制：

以液体石蜡为溶剂，分别配制不同浓度的标准臭液。上述液体石蜡为C16-C20的正构烷烃，无色透明油状液体，在日光下观察不显荧光，室温下无嗅无味，加热后略有石油臭；密度比重为0.860-0.905（25℃）。

3、嗅辨员的标准和嗅辨室的要求：

嗅辨室室内通风条件良好并保持17~25℃。

嗅辨员应为18~45岁，不吸烟，嗅觉器官无疾病的男性或者女性。经嗅觉检测合格者，如无特殊情况，可连续3年担任嗅辨员。

嗅辨员当天不能携带或使用有气味的香料和化妆品，不能食用有刺激气味的食品。

4嗅觉校正：

嗅辨员每天在正式嗅闻样品之前，盲取不同浓度的标准臭液，用闻香纸蘸取直接嗅闻，感知该浓度下气味的强度、类型，对嗅觉进行校正。

上述可参考文献：[1]《GBT14675-93空气质量恶臭的测定三点比较式臭袋法》，国家环境保护部，1993；[2]刘咏，刘博，李昌建等.嗅辨员筛选方法的研究.第三届全国恶臭污染测试与控制技术暨恶臭污染物排放标准修订研讨会2009。

（三）嗅辨员的嗅觉训练方法：

1、嗅辨员单体标样训练：

参照上一个项目建立的嗅辨员训练校正方法，对嗅辨员进行嗅觉训练。配制烟叶中常见香味物质的溶液进样分析训练。

分别配制不同浓度的单体标准样品溶液进行GC-MS/O分析，每个样品重复分析3次，取平均值。其结果见表7。

由表7可知，不同单体表现不同的香气特征及强度，而且每种化合物的香气都有一定的时间延迟。其中茄酮具有花香、清甜、水蜜桃味的气味，其香气强度为2，香气持续时间大约为20s，香气延迟时间大约为4s。β-大马酮具有玫瑰花甜香，香气持续时间大约为30s，香气延迟时间大约为2s。香叶基丙酮具有青香、果香以及木香香韵，其香气强度为2，香气延迟时间大约为24s，香气延迟时间大约为30s。β-紫罗兰酮具有特有的紫罗兰花香以及木香香韵，其香气强度为2，香气持续时间为30s，香气并没有延迟，而是提前大约10s，这可能是由于β-紫罗兰酮的头香香气足，传递速率快。二氢猕猴桃内酯具有乳香、果香香气，香气强度为2，香气持续时间约为12s，香气延迟时间大约为20s左右。巨豆三烯酮具有4个同分异构体，但是，具有香气的只有出峰为第二、第三个的异构体，这两个异构体呈现出的气味也不同，巨豆三烯酮2具有清甜的水果香气，香气强度为2，持续时间较短，大约为9s，香气延迟时间较长，大约为30s；而巨豆三烯酮3则具有明显的花香、木香气息，香气强度为3，持续时间较2长一些，大约为15s，延迟时间也较短，大约为20s左右。

表7单体标样嗅闻结果

2、嗅辨员混合标样训练：

配制不同浓度下烟草常见中性致香成分的混合标准样品溶液，进行GC-MS/O分析，每个样品重复分析3次，取平均值。经过GC-MS/O分析，结合强度法和稀释法进行了嗅觉训练。

混合标样中各种香气化合物所呈现的香气是不同的，主要表现为花香、甜香、果香等，GC-O检测到的7种香气化合物，参见图6和表8。

从香气强度角度来看，β-大马酮强度最大（强度为4），其次为巨豆三烯酮3和β-紫罗兰酮（强度均为3），茄酮、香叶基丙酮、二氢猕猴桃内酯和巨豆三烯酮2则香气强度为2，巨豆三烯酮1和4则没有香味。从稀释法的角度来看，嗅辨员可以嗅闻到的化合物随着其浓度的变化而发生变化。

表8混合标样GC-MS/O嗅闻结果

随着香味物质浓度的降低，嗅辨员可以感知的化合物种类逐渐减少。标准溶液稀释2倍后，仍然可以闻到7种香味物质；稀释4倍后，二氢猕猴桃内酯（FD因子为4）的气味未能感知到，稀释10倍以后，仅有4种气味可以闻到，二氢猕猴桃内酯、β-紫罗兰酮、巨豆三烯酮2（FD因子为10）均没有检测到；当标准溶液A稀释20倍以后，只有2种物质，茄酮和β-大马酮可以嗅闻到，二者气味类似，均为花香、甜香，但是β-大马酮的甜味明显浓于茄酮。稀释100倍之后，只有β-大马酮（FD因子为100）可以嗅闻到，且其强度也减弱。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims

1.一种烟叶中关键致香物质的GC-MS/O分析鉴别方法，具体包括如下步骤：

（1）烟叶中关键致香物质的提取：以无水乙醚为溶剂，经溶剂萃取法提取烟叶中的香味物质，并加酒石酸溶液去除烟碱，离心分离后取上层清液浓缩得到关键致香物质的浓缩液；

（2）采用GC-MS/O分析鉴别烟叶中的关键致香物质：将步骤（1）获得的关键致香物质的浓缩液注入GC-MS/O中，浓缩液进入气相色谱仪后经Y管一半进入质谱仪，同时另一半进入ODP仪器，分别获得GC图谱、MS总离子流图、香气强度图和FD因子图；

2.如权利要求1所述的烟叶中关键致香物质的GC-MS/O分析鉴别方法，其特征在于，

步骤（1）中，萃取时，每500mg烟叶加入15ml无水乙醚；

步骤（1）中，每500mg烟叶加入3ml酒石酸水溶液；

步骤（1）中，每500mg烟叶所对应的关键致香物质的浓缩液为500μL。

3.如权利要求1所述的烟叶中关键致香物质的GC-MS/O分析鉴别方法，其特征在于，

步骤（1）中，所述酒石酸水溶液中酒石酸的质量百分比浓度为10%；

步骤（1）中，萃取时，烟叶的状态为烟叶末。

4.如权利要求1所述的烟叶中关键致香物质的GC-MS/O分析鉴别方法，其特征在于，步骤2）中，GC-MS的条件为：

GC分析检测条件：GC进样口温度为250℃；进样量为3.0μL；采用不分流进样；

载气为氦气，载气恒流量为2.0mL/min；

5.如权利要求1所述的烟叶中关键致香物质的GC-MS/O分析鉴别方法，其特征在于，步骤（2）中，GC-O中的ODP分析检测条件：ODP端口与传输线之间的温度为280℃；补充气为氮气，且补充气恒流量为20mL/min；嗅闻端口处补充潮湿空气对色谱端口流出的气体进行加湿。

6.如权利要求1所述的烟叶中关键致香物质的GC-MS/O分析鉴别方法，其特征在于，步骤（2）中，采用GC-MS/O分析鉴别烟叶中的关键致香物质时，每次进样后，嗅辨员在ODP仪器端口进行嗅闻，嗅辨员采用GC-O五级气味强度法对ODP端口流出的各化合物进行嗅闻评价，并记录各化合物的香气类型、气味强度来判断烟叶中的每一致香物质。

7.如权利要求1所述的烟叶中关键致香物质的GC-MS/O分析鉴别方法，其特征在于，步骤（2）中，嗅辨员采用GC-O五级气味强度法对各化合物的气味强度进行评价时，样品按一定比例逐级稀释，直到嗅辨员感知不到气味为止。

8.如权利要求7所述的烟叶中关键致香物质的GC-MS/O分析鉴别方法，其特征在于，样品按一定比例逐级稀释为按照2ⁿ递增的的比例逐级稀释或者按照1:2、1:3、1:4、……的比例进行逐级稀释。

9.如权利要求1-8任一所述的烟叶中关键致香物质的GC-MS/O分析鉴别方法，其特征在于，所述烟叶为烤烟烟叶、白肋烟烟叶或香料烟烟叶；所述烤烟烟叶中的关键致香物质为β-大马酮、β-二氢大马酮；所述白肋烟烟叶中的关键致香物质为β-大马酮，β-二氢大马酮和巨豆三烯酮4；所述香料烟烟叶中的关键致香物质为β-大马酮、β-二氢大马酮和甲基丁香酚。

10.如权利要求1-9任一所述的烟叶中关键致香物质的GCMS/O分析鉴别方法在卷烟的加香调香方面的应用。