CN102633784B - 两个黄酮碳苷化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

两个黄酮碳苷化合物及其制备方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN102633784B
CN102633784B CN201210104979.8A CN201210104979A CN102633784B CN 102633784 B CN102633784 B CN 102633784B CN 201210104979 A CN201210104979 A CN 201210104979A CN 102633784 B CN102633784 B CN 102633784B
Authority
CN
China
Prior art keywords
medicinal extract
layer
aralino
aglycon
celery
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201210104979.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102633784A (zh
Inventor
谢集照
焦杨
邱莉
谢云峰
邱少玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangxi Medical University
Original Assignee
Guangxi Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangxi Medical University filed Critical Guangxi Medical University
Priority to CN201210104979.8A priority Critical patent/CN102633784B/zh
Publication of CN102633784A publication Critical patent/CN102633784A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102633784B publication Critical patent/CN102633784B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了两个新的黄酮碳苷化合物及其制备方法和用途。两个新的黄酮碳苷化合物，其中：第一个黄酮碳苷化合物的化学名称是：芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷；命名为：nervilifordin J；第二个黄酮碳苷化合物的化学名称是：芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷；命名为：nervilifordin K；它们的制备方法是以干燥的青天葵全草为原料，通过1)浸膏的制备、2)环己烷层浸膏、乙酸乙酯层浸膏正丁醇层浸膏和水层浸膏的制备和3)芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷和芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的制备的制备步骤完成。这两种黄酮碳苷化合物用于制备抗炎药物。

Description

两个黄酮碳苷化合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体是两个黄酮碳苷化合物及其制备方法和用途。
背景技术
炎症在医学上占有重要的地位，它是许多疾病的基本病理过程。炎症在疾病中所起的作用被认为是令机体陷入了过分活跃的免疫系统，比如哮喘、过敏和风湿性关节炎。抗炎药物分为甾体抗炎药和非甾体抗炎药两种，其中人类对非甾体抗炎药的使用从水杨酸的发现开始已经有100多年的历史。非甾体抗炎药具有确定的抗炎、镇痛的效果。此外，近年来人们正逐渐认识到炎症和慢性感染是人类不同肿瘤发生的重要因素之一。据研究估计，至少有15%的癌症是由慢性炎症发展而成的，流行病学研究已经发现，定期服用非甾体抗炎药的人比没有服用此类药物的人患癌症的风险降低。在我国，非甾体抗炎药已经成为临床上仅次于抗感染药的第二大类用药。但是，非甾体抗炎药所致不良反应的发生率之高，同样不容忽视。据现有文献和国家权威机构监测结果显示，在使用非甾体抗炎药的人群中，约有20％―25％出现不同程度的不良反应，主要表现为胃肠道反应、神经系统反应、肝肾功能反应以及心血管系统反应等。
炎性细胞能产生众多有助肿瘤形成、生长和存活的物质，其中之一是一氧化氮（NO）。NO是具有生物活性的气体分子，是细胞间信息传递的重要调节因子，并有介导细胞免疫和炎症毒性的功能。NO的过量生成与炎症密切相关，在急性炎症部位，致炎物质和炎症介质可诱导或增加NO的合成和释放，NO本身具有细胞毒性，还能与游离基团反应生成如ONOO-等分子，导致毒性增加，从而促进炎症部位渗出和水肿。
我国传统中药中“清热解毒”、“祛风除湿”、“扶正固本”等作用与现代医学的抗炎、免疫的观念密切相关，并且毒副作用小、资源丰富。因此通过采用现代的生物活性筛选模型，从中草药中寻找到高效、毒副作用低的抗炎活性成分或先导化合物，尤其是有效抑制NO释放的黄酮碳苷化合物，进而开发为对炎症与癌症有预防与治疗的药物。
发明内容
本发明的目的是提供两个黄酮碳苷化合物及其制备方法和用途。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
1.一种黄酮碳苷化合物：
1）该黄酮碳苷化合物的化学名称是：芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷；命名为：nervilifordin J；
2）结构式                                分子式：C37H38O18
                                         分子量：770.69
Figure GDA0000448624360000021
3）理化性质：黄色粉末，无臭，在甲醇中结晶的熔点：207℃-208℃。溶解性：易溶于二甲基亚砜，可溶于甲醇，难溶于石油醚、氯仿。
2.一种黄酮碳苷化合物：
1）该黄酮碳苷化合物的化学名称是：芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷；命名为：nervilifordin K；
2）结构式                                分子式：C36H36O17
                                         分子量：740.66
Figure GDA0000448624360000031
3）理化性质：黄色粉末，无臭，在甲醇中结晶的熔点：205℃-207℃。溶解性：易溶于二甲基亚砜，可溶于甲醇，难溶于石油醚、氯仿
3.芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷和芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的制备方法，操作步骤如下：
1）浸膏的制备
取干燥的青天葵全草，加7-10倍干燥的青天葵全草量体积百分浓度为60%-80%的乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，合并提取液，用旋转蒸发仪在低于45℃的条件下减压回收乙醇后得浸膏；
2）环己烷层浸膏、乙酸乙酯层浸膏正丁醇层浸膏和水层浸膏的制备
将步骤1）浸膏混悬于水中，得到浸膏水混悬液，用环己烷对浸膏水混悬液萃取三次，分别合并萃取后的环己烷层和水层；再用乙酸乙酯对用环己烷萃取浸膏水混悬液后的浸膏水混悬液萃取三次，分别合并萃取后乙酸乙酯层和水层；再用正丁醇对用乙酸乙酯萃取浸膏水混悬液后的浸膏水混悬液萃取三次，分别合并萃取后正丁醇层和水层；用旋转蒸发仪分别在低于45℃的条件下减压回收环己烷层的溶剂环己烷、乙酸乙酯层的溶剂乙酸乙酯、正丁醇层的溶剂正丁醇后，分别得到环己烷层浸膏、乙酸乙酯层浸膏、正丁醇层浸膏；将以上萃取后的水层合并后浓缩得到水层浸膏；
3）芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷和芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的制备
将正丁醇层浸膏用5-8倍蒸馏水溶解，过滤，滤液用D101大孔树脂分离，分别用水和体积百分浓度为10%、30%、50%、70%、无水乙醇梯度洗脱，得到6个流分B1、B2、B3、B4、B5、B6；
将体积百分浓度为50%乙醇洗脱流分B4减压浓缩，过滤后用一根硅胶常压柱层析，分别用氯仿∶甲醇∶水=8∶2∶0.2、7∶3∶0.5、6∶4∶0.8三种混合液梯度洗脱，得到6个流分B41、B42、B43、B44、B45、B46；
将流分B44再次用硅胶常压柱层析，分别用氯仿∶甲醇∶水=8：1：0.1、7：3：0.5两种混合液梯度洗脱，得到3个流分B441、B442、B443；将流分B443溶于水，用MCI柱层析，分别用水和体积百分浓度为10%、30%、50%、70%、无水甲醇洗脱，得到9个流分B4431、B4432、B4433、B4434、B4435、B4436、B4437、B4438、B4439，得到的第9个流分B4439用制备液相色谱仪分离，得到化合物芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷和芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷。
上述的芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷或其衍生物用于制备抗炎药物。
上述的芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷或其衍生物用于制备抗炎药物。
本发明的益效是：
1.提供了芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷和芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的结构鉴定方法及其制备方法。
2.本发明得到的芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷和芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷与现有的临床合成药物相比较，不但具有抗炎活性好、毒副作用低的优点，而且来自传统中药，安全可靠，具有非常良好的药用前景，可做成包括但不限于颗粒剂、片剂、注射剂等各种剂型。
附图说明
图1为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷的1H-NMR。
图2为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷的13C-NMR。
图3为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷的13C-NMR局部放大(50-85ppm)。
图4为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷的13C-NMR局部放大(110-180ppm)。
图5为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷的HMBC。
图6为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷的HMBC局部放大。
图7为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷的HSQC。
图8为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷的HSQC局部放大。
图9为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷的HHCOSY。
图10为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷的ESI-MS阴离子图。
图11为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷的ESI-MS阳离子图。
图12为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的1H-NMR。
图13为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的13C-NMR。
图14为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的HMBC
图15为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的HMBC局部放大。
图16为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的HSQC。
图17为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的HSQC局部放大。
图18为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的HHCOSY。
图19为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的ESI-MS阴离子图。
图20为芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2''-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的ESI-MS阳离子图。
图21为分离流程图
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述。
实施例1
取干燥的青天葵(Nervilia fordii(Hance)Schltr.)全草5kg，加10倍量60%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，用旋转蒸发仪在低于45℃的条件下减压回收乙醇后得浸膏600g；将浸膏混悬于水中，得到浸膏水混悬液，用环己烷对浸膏水混悬液萃取三次，合并环己烷层；再用乙酸乙酯对用环己烷萃取浸膏水混悬液后的浸膏水混悬液萃取三次，合并乙酸乙酯层；再用正丁醇对用乙酸乙酯萃取浸膏水混悬液后的浸膏水混悬液萃取三次，合并正丁醇层；用旋转蒸发仪分别在低于45℃的条件下减压回收环己烷层溶剂环己烷、乙酸乙酯层溶剂乙酸乙酯、正丁醇层溶剂正丁醇后，各得环己烷层浸膏60g、乙酸乙酯层浸膏130g、正丁醇层浸膏165g；萃取后的水溶液浓缩后得到320g水层浸膏；
将正丁醇层浸膏用5倍蒸馏水溶解，过滤，滤液用D101大孔树脂分离，分别用水、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、乙醇梯度洗脱，得到6个流分（B1、B2、B3、B4、B5、B6）；其中50%乙醇洗脱流分（B4）减压浓缩，过滤后用一根硅胶常压柱层析，氯仿：甲醇：水=8：2：0.2，7：3：0.5，6：4：0.8三种混合液梯度洗脱，得到6个流分（B41、B42、B43、B44、B45、B46）；
将流分B44再次用硅胶常压柱层析，分别用氯仿∶甲醇∶水=8：1：0.1、7：3：0.5两种混合液梯度洗脱，得到3个流分B441、B442、B443；将流分B443溶于水，用MCI柱层析，分别用水和体积百分浓度为10%、30%、50%、70%、无水甲醇洗脱，得到9个流分B4431、B4432、B4433、B4434、B4435、B4436、B4437、B4438、B4439，得到的第9个流分B4439用制备液相色谱仪分离，得到nervilifordin J(26.3mg)和nervilifordin K(34.3mg)。
实施例2
取干燥的青天葵(Nervilia fordii(Hance)Schltr.)全草10kg，加7倍量80%乙醇回流提取2次，每次3小时，合并提取液，用旋转蒸发仪在低于45℃的条件下减压回收乙醇后得浸膏1200g。将浸膏混悬于水中，得到浸膏水混悬液，用环己烷对浸膏水混悬液萃取三次，合并环己烷层；再用乙酸乙酯对用环己烷萃取浸膏水混悬液后的浸膏水混悬液萃取三次，合并乙酸乙酯层；再用正丁醇对用乙酸乙酯萃取浸膏水混悬液后的浸膏水混悬液萃取三次，合并正丁醇层；用旋转蒸发仪分别在低于45℃的条件下减压回收环己烷层溶剂环己烷、乙酸乙酯层溶剂乙酸乙酯、正丁醇层溶剂正丁醇后，各得环己烷层浸膏120g、乙酸乙酯层浸膏260g、正丁醇层浸膏330g；萃取后的水溶液浓缩后得到640g水层浸膏。
将正丁醇层浸膏用8倍蒸馏水溶解，过滤，滤液用D101大孔树脂分离，分别用水、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、乙醇梯度洗脱，得到6个流分（B1、B2、B3、B4、B5、B6）。其中50%乙醇洗脱流分（B4）减压浓缩，过滤后用一根硅胶常压柱层析，氯仿：甲醇：水=8：2：0.2，7：3：0.5，6：4：0.8三种混合液梯度洗脱，得到6个流分（B41、B42、B43、B44、B45、B46）。
将流分B44再次用硅胶常压柱层析，分别用氯仿∶甲醇∶水=8：1：0.1、7：3：0.5两种混合液梯度洗脱，得到3个流分B441、B442、B443；将流分B443溶于水，用MCI柱层析，分别用水和体积百分浓度为10%、30%、50%、70%、无水甲醇洗脱，得到9个流分B4431、B4432、B4433、B4434、B4435、B4436、B4437、B4438、B4439，得到的第9个流分B4439用制备液相色谱仪分离，得到nervilifordin J(54.0mg)和nervilifordin K(72.3mg)。
本发明所述的青天葵中两个黄酮碳苷化合物的结构解析。
实验例1
nervilifordin J，黄色粉末，无臭，在甲醇中结晶的熔点：207℃-208℃。溶解性：易溶于二甲基亚砜，可溶于甲醇，难溶于石油醚、氯仿。高分辨ESI-MS给出分子量为：[M+H]+m/z771.3141；分子式：C37H38O18。IR光谱在3299cm-1有强宽峰，提示分子中存在羟基，1650cm-1处的强吸收峰提示结构中有羰基。UV光谱(甲醇做溶剂)的最大吸收波长λmax(logε)分别为331(4.25)，278(4.04)，219(4.37)，为典型黄酮的吸收光谱。
该化合物的1HNMR(600MHz，DMSO-d6)中，δ12.82(1H，s)为黄酮5位羟基质子特征信号；δ6.87(1H，s)为黄酮3位质子信号；δ8.38(2H，d，J=8.9Hz)，6.91(2H，d，J=8.9Hz)构成B环的AA'BB'偶合系统；δ7.29(1H，d，J=15.7)，6.26(1H，d，J=15.8Hz)为反式双键上的质子信号；δ6.89(2H，s)为苯环上化学等同的质子；δ4.97(1H，d，J=10.1)，4.65(1H，d，J=9.6)为两个糖端基质子信号。δ3.77(6H，s)为一组甲氧基质子信号。
13CNMR(150MHz，DMSO-d6)谱中，给出37组碳信号：δ80.8，74.1，73.9，73.3，72.4，71.4，70.7，70.06，70.01，69.4，68.3，61.1，为一组半乳糖和一组阿拉伯糖葡萄糖的信号；δ182.3为黄酮4位羰基信号，δ165.9，164.5，161.4，160.1，158.5，155.6，147.8，145.0，138.0为连氧的sp2碳信号，δ129.8，124.5，121.1，116.0，114.9，108.0，106.1，103.8，103.2，102.1为sp2碳信号；δ56.0为一组甲氧基信号。
在HMBC谱中，δ4.97(71.4)的质子与δ160.1，155.6，103.2有远程相关，δ4.64(74.1)与δ160.1，158.5，108.0有远程相关，δ13.82的质子与δ158.5，108.0，103.8有远程相关，由此可得结构片段A；δ8.38(129.8)的质子与δ164.5，161.4，129.8有远程相关，δ6.91(116.0)的质子与161.4，129.8，121.1有远程相关，δ10.48的质子与δ161.4，116.0有远程相关，可得结构片段B；δ7.29(145.0)的质子与δ124.5，165.9有远程相关，δ6.26(114.9)的质子与δ124.5，165.9有远程相关，δ6.89(106.1)的质子δ106.1，124.5，138.0有远程相关，由此可推断106.1为重叠的2组碳信号，而δ3.77(56.0)的质子与δ147.8有远程相关，由此推断可得出结构片段C；
Figure GDA0000448624360000101
Figure GDA0000448624360000111
结合HMBC和COSY，可以确定糖的链接位置及信号归属：δ4.98(71.4)的质子与δ160.1，155.6，103.2，80.7，73.3，70.7有远程相关，可以确定此糖端基连在黄酮8位；1H-1H COSY谱中，从δ4.98两重峰氢信号出发，可依次找到δ5.88，3.79氢相关；而δ3.64(80.7)的质子与δ68.3有远程相关，且δ5.88(70.7)的质子与165.9有远程相关，由此可确定片段C连在糖的2位，且为β-半乳糖，从而得到片段D；δ4.65(74.1)的质子与δ160.1，158.5，108.0有远程相关；1H-1H COSY谱中，从δ4.64的两重峰信号出发，可找到δ3.68氢相关，由此可确定另一个糖连在黄酮6位，为α-阿拉伯糖。
综合以上数据，nervilifordin J的核磁数据归属如表1：
表1  nervilifordin J的核磁数据归属(DMSO-d6)
Figure GDA0000448624360000112
Figure GDA0000448624360000121
aRecorded at600M Hz.bRecorded at150M Hz.
实验例2
nervilifordin K，黄色粉末，无臭，在甲醇中结晶的熔点：205℃-207℃。溶解性：易溶于二甲基亚砜，可溶于甲醇，难溶于石油醚、氯仿。高分辨ESI-MS给出分子量为：[M+H]+m/z741.2881；分子式：C36H36O17。IR光谱在3259cm-1有强宽峰，提示分子中存在羟基，1681cm-1处的强吸收峰提示结构中有羰基。UV光谱(甲醇做溶剂)的最大吸收波长λmax(logε)分别为330(4.04)，284(3.97)，218(4.18)，为典型黄酮的吸收光谱。
该化合物的1HNMR(600MHz，DMSO-d6)中，δ12.82(1H，s)为黄酮5位羟基质子特征信号；δ6.87(1H，s)为黄酮3位质子信号；δ8.38(2H，d，J=8.8Hz)，6.91(2H，d，J=8.9Hz)构成B环的AA'BB'偶合系统；δ7.28(1H，d，J=15.8Hz)，6.21(1H，d，J=15.9Hz)为反式双键上的质子信号；δ7.19(1H，d，J=1.9Hz)，6.99(1H，dd，J=8.3，1.9Hz)，6.58(1H，d，J=8.1)根据其偶合常数及化学位移推断可能构成芳环上的ABX偶合系统；δ4.98(1H，d，J=10.2)，4.65(1H，d，J=9.6)为两个糖端基质子信号。δ3.59(3H，s)为一组甲氧基质子信号。
13CNMR(150MHz，DMSO-d6)谱中，给出37组碳信号，δ80.7，74.1，73.9，73.3，71.4，70.7，70.04，70.02，69.3，68.3，61.1，为一组半乳糖和一组阿拉伯糖葡萄糖的信号；δ182.3为黄酮4位羰基信号，δ166.0，164.5，161.2，160.5，158.5，155.5，147.2，149.2为连氧的sp2碳信号，δ129.8，125.7，123.0，121.1，115.9，115.4，114.5，111.0，108.0，103.8，103.3，102.0，为sp2碳信号；δ56.0为一组甲氧基信号。
在HMBC谱中，δ4.98(71.4)的质子与δ160.5，155.5，103.3有远程相关，δ9.24的质子与δ160.5有远程相关，δ4.64(74.1)与δ160.5，158.5，108.0有远程相关，δ13.82的质子与δ158.5，108.0，103.8有远程相关，由此可得结构片段A；δ8.38(129.8)的质子与δ164.5，161.2，129.8有远程相关，δ6.91(115.9)的质子与161.2，129.8，121.1有远程相关，δ10.24的质子与δ161.2，115.9有远程相关，可得结构片段B；δ7.19(111.0)的质子与δ149.2，144.7，123.0有远程相关，δ6.99(123.0)的质子δ149.2，144.7，111.0有远程相关，δ6.58(115.4)的质子与δ147.8，125.7有远程相关，另外δ9.50的质子与δ147.8有远程相关，δ7.28(144.7)的质子与δ123.0，166.0有远程相关，而δ6.21(114.5)的质子与δ166.0有远程相关，由此推断可得出结构片段C；
Figure GDA0000448624360000141
结合HMBC和COSY，可以确定糖的链接位置及信号归属：δ4.98(71.4)的质子与δ160.5，155.5，103.3，80.7，73.3，70.7有远程相关，可以确定此糖端基连在黄酮8位；1H-1H COSY谱中，从δ4.98两重峰氢信号出发，可依次找到δ5.87，3.76氢相关；而δ3.63(80.7)的质子与δ68.3有远程相关，且δ5.88(70.7)的质子与166.0有远程相关，由此可确定片段C连在糖的2位，且为β-半乳糖，从而得到片段D；δ4.64(74.1)的质子与δ160.5，158.5，108.0有远程相关；1H-1H COSY谱中，δ4.64的两重峰信号出发，可找到δ3.68氢相关，可确定另一个糖连在黄酮6位，为α-阿拉伯糖。
综合以上数据，nervilifordin K的核磁数据归属如表2：
表2  nervilifordin K的核磁数据归属(DMSO-d6)
Figure GDA0000448624360000151
aRecorded at600MHz.bRecorded at150MHz.
药理学实验：
MTT法评价细胞毒性，选取无细胞毒性的药物浓度进行研究。取RAW264.7小鼠巨噬细胞，按2×105/ml的密度接种于96孔细胞培养板（100μl/孔）。贴壁24h后，每孔加入50μl终浓度为1μg/ml的LPS（空白对照组加入等体积的磷酸盐缓冲液PBS），在37℃、5%CO2孵育2h后，实验组加入不同浓度的样品溶液（空白对照组和模型组加入等体积的无血清培养基），每个浓度设4个复孔，培养箱内孵育24h后吸取培养上清液50μl至酶标板中，加入等体积的Griess试剂A和Griess试剂B（Griess试剂A为0.1%N-萘乙二胺盐酸盐，Griess试剂B为5%H3PO4含1%对氨基苯磺酰胺，用前1：1混合），室温反应10min后测定540nm处的吸光值。地塞米松为阳性对照药品。
用浓度分别为0，1，5，10，20，50μmol/l的NaNO2绘制标准曲线，根据NaNO2标准曲线计算细胞培养上清液中NO2 -的浓度以及对NO释放的抑制率，抑制率计算公式为：
Figure GDA0000448624360000161
表3  2个黄酮碳苷化合物对RAW264.7细胞释放NO的影响（
Figure GDA0000448624360000162
）
结论：采用MTT法测定2个化合物对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的毒性，并测定对RAW264.7细胞生成NO的影响，结果发现，在对细胞正常增殖无明显影响的浓度范围内，2个化合物对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的NO释放表现出不同程度的抑制活性。在医药领域的应用有较好的前景。

Claims (5)

1.一种黄酮碳苷化合物，其特征在于：
1）该黄酮碳苷化合物的化学名称是：芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷；命名为：nervilifordin J；
2）结构式                                                 分子式：C37H38O18
Figure FDA0000458930900000011
2.一种黄酮碳苷化合物，其特征在于：
1）该黄酮碳苷化合物的化学名称是：芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷；命名为：nervilifordin K；
2）结构式                                                 分子式：C36H36O17
Figure FDA0000458930900000012
3.芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷和芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的制备方法，其特征在于，操作步骤如下：
1）浸膏的制备
取干燥的青天葵全草，加7-10倍干燥的青天葵全草量、体积百分浓度为60%-80%的乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，合并提取液，用旋转蒸发仪在低于45℃的条件下减压回收乙醇后得浸膏；
2）环己烷层浸膏、乙酸乙酯层浸膏、正丁醇层浸膏和水层浸膏的制备
将步骤1）浸膏混悬于水中，得到浸膏水混悬液，用环己烷对浸膏水混悬液萃取三次，分别合并萃取后的环己烷层和水层；再用乙酸乙酯对用环己烷萃取浸膏水混悬液后的浸膏水混悬液萃取三次，分别合并萃取后乙酸乙酯层和水层；再用正丁醇对用乙酸乙酯萃取浸膏水混悬液后的浸膏水混悬液萃取三次，分别合并萃取后正丁醇层和水层；用旋转蒸发仪分别在低于45℃的条件下减压回收环己烷层的溶剂环己烷、乙酸乙酯层的溶剂乙酸乙酯、正丁醇层的溶剂正丁醇后，分别得到环己烷层浸膏、乙酸乙酯层浸膏、正丁醇层浸膏；将以上萃取后的水层合并后浓缩得到水层浸膏；
3）芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷和芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷的制备
将正丁醇层浸膏用5-8倍蒸馏水溶解，过滤，滤液用D101大孔树脂分离，分别用水和体积百分浓度为10%、30%、50%、70%、无水乙醇梯度洗脱，得到6个流分B1、B2、B3、B4、B5、B6；
将体积百分浓度为50%乙醇洗脱流分B4减压浓缩，过滤后用一根硅胶常压柱层析，分别用氯仿∶甲醇∶水=8∶2∶0.2、7∶3∶0.5、6∶4∶0.8三种混合液梯度洗脱，得到6个流分B41、B42、B43、B44、B45、B46；
将流分B44再次用硅胶常压柱层析，分别用氯仿∶甲醇∶水=8∶1∶0.1、7∶3∶0.5两种混合液梯度洗脱，得到3个流分B441、B442、B443；将流分B443溶于水，用MCI柱层析，分别用水和体积百分浓度为10%、30%、50%、70%、无水甲醇洗脱，得到9个流分B4431、B4432、B4433、B4434、B4435、B4436、B4437、B4438、B4439，得到的第9个流分B4439用制备液相色谱仪分离，得到化合物芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷和芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷。
4.如权利要求1所述的一种黄酮类化合物的用途，其特征在于，芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-芥子酸胆碱基)-β-半乳糖苷用于制备抗炎药物。
5.如权利要求2所述的一种黄酮类化合物的用途，其特征在于，芹菜苷元-6-C-β-阿拉伯糖基-8-C-(2″-O-(E)-阿魏酸基)-β-半乳糖苷用于制备抗炎药物。
CN201210104979.8A 2012-04-11 2012-04-11 两个黄酮碳苷化合物及其制备方法和用途 Expired - Fee Related CN102633784B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210104979.8A CN102633784B (zh) 2012-04-11 2012-04-11 两个黄酮碳苷化合物及其制备方法和用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210104979.8A CN102633784B (zh) 2012-04-11 2012-04-11 两个黄酮碳苷化合物及其制备方法和用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102633784A CN102633784A (zh) 2012-08-15
CN102633784B true CN102633784B (zh) 2014-04-02

Family

ID=46618377

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210104979.8A Expired - Fee Related CN102633784B (zh) 2012-04-11 2012-04-11 两个黄酮碳苷化合物及其制备方法和用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102633784B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105168305A (zh) * 2015-09-07 2015-12-23 李�杰 一种用于治疗痛风性关节炎的土瓜提取物
CN107200761A (zh) * 2016-03-16 2017-09-26 广西医科大学 两个黄酮及其制备方法和用途
CN110156859B (zh) * 2019-06-21 2022-07-05 中国科学院新疆理化技术研究所 芥子酸类化合物及其制备方法和用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007073583A1 (en) * 2005-12-29 2007-07-05 The University Of Sydney A method of treatment and agents useful for same
CN101161668A (zh) * 2007-11-02 2008-04-16 中国药科大学 黄酮碳苷类化合物在制备治疗和预防肝炎药物中的应用
CN101250207A (zh) * 2008-04-15 2008-08-27 中国药科大学 鸡骨草总黄酮碳苷有效部位、其制备方法和用途

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5068736B2 (ja) * 2008-12-24 2012-11-07 國立陽明大學 網膜色素上皮細胞疾患の治療及び／又は予防用医薬物質及び医薬組成物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007073583A1 (en) * 2005-12-29 2007-07-05 The University Of Sydney A method of treatment and agents useful for same
CN101161668A (zh) * 2007-11-02 2008-04-16 中国药科大学 黄酮碳苷类化合物在制备治疗和预防肝炎药物中的应用
CN101250207A (zh) * 2008-04-15 2008-08-27 中国药科大学 鸡骨草总黄酮碳苷有效部位、其制备方法和用途

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Alain B. Dongmo.Flavonoids from acacia pennata and their cyclooxygenase (COX-1 and COX-2) inhibitory activities.《Planta medica》.2007,第73卷(第11期),1202-1207.
Flavonoids from acacia pennata and their cyclooxygenase (COX-1 and COX-2) inhibitory activities;Alain B. Dongmo;《Planta medica》;20070930;第73卷(第11期);第1202-1207页 *
JP特开2010-150153A 2010.07.08
Li Zhang，等.Three new flavonol glycosides from nervili fordii.《Phytochemistry Letters》.2011,第5卷(第1期),第105页FIG.1. *
Li-Wen Tian，等.7-O-Methylkaempferol and -quercetin Glycosides from the Whole Plant of Nervilia fordii.《Journal of natural products》.2009,第72卷(第6期),1057-1060.
Li-Wen Tian,等.7-O-Methylkaempferol and-quercetin Glycosides from the Whole Plant of Nervilia fordii.《Journal of natural products》.2009,第72卷(第6期),1057-1060. *
邱莉,等.青天葵植物化学成分和药理活性研究进展.《时珍国医国药》.2011,第22卷(第9期),2258-2260. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN102633784A (zh) 2012-08-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101862324B (zh) 红曲色素组份及其衍生物在抗癌中的应用
CN101891728A (zh) 灯盏乙素苷元衍生物及其制备方法和其应用
CN102302685B (zh) 一种淡竹叶提取物及其制备方法和用途
CN102633784B (zh) 两个黄酮碳苷化合物及其制备方法和用途
CN104151373A (zh) 一种木脂素苷类化合物及其制备方法
CN105503807A (zh) 一种名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物及其制备方法和应用
CN101463058B (zh) 羊毛脂烷型三萜化合物海莲酸、其衍生物及其制备方法和用途
CN102219686A (zh) 咖啡酰衍生物及其在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的用途
CN101648934B (zh) 一种异戊烯基黄酮及其应用
CN104292203B (zh) 一种异香豆素类化合物及其制备方法和应用
CN103113218A (zh) 一种对映贝壳杉型二萜化合物及其制备方法和应用
CN103040945B (zh) 岗松总黄酮的制备及其检测方法
CN102887928B (zh) 青天葵中的黄酮类化合物及其制备方法和用途
CN103555784A (zh) 一种从黄芩中同时分离汉黄芩素与黄芩素单体的方法
CN104382968A (zh) 穿心莲总内酯提取方法、穿心莲总内酯药物组合物及用途
CN104557505A (zh) 一种益智仁水提物的有效成分的分离方法
CN105198943A (zh) 一种名为茶山奈苷a的酰化黄酮糖苷及其制备方法和应用
CN104262316B (zh) 一种黄酮类化合物及其制备方法和应用
CN104761525A (zh) 一种黄酮类化合物及其制备方法与应用
CN101245089A (zh) 一对新的人参皂苷元和其混合体的制备方法及其制剂
CN103772366B (zh) 马尾连中两个含氯取代的抗肿瘤苄基异喹啉生物碱
CN100478003C (zh) 一种冬凌草提取方法
CN102702215B (zh) 化合物mangostenone F及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用
CN103113384B (zh) 一种名为茯砖素b的儿茶素类衍生物及其制备方法和应用
CN107200761A (zh) 两个黄酮及其制备方法和用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20140402

Termination date: 20210411

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee