CN102633762A - 杨梅素磺酸及其盐类化合物以及用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及杨梅素磺酸化物、其盐类化合物，以及这些化合物在制药方面的用途。本发明所述的杨梅素磺酸及其盐类化合物，其结构式为：其中，X为H⁺，Li⁺，Na⁺，K⁺，NH₄ ⁺，Ca²⁺，NH₂[C_mH_2m+1]₂ ⁺，NH₃C_mH_2m+1 ⁺，NH₂ ⁺C_nH_2n或碱性氨基酸；m=1-6，n=3-7。本发明涉及杨梅素磺酸及其盐类化合物在制备治疗和预防心脑血管疾病的药物中的应用。

Description

杨梅素磺酸及其盐类化合物以及用途

技术领域

本发明涉及杨梅素磺酸化物、其盐类化合物，以及这些化合物在制药方面的用途。

背景技术

中国专利申请201010529319.5公开了一种“檵木叶中提取的黄酮醇苷类化合物及其医药用途”， 包括：杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷、杨梅素-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷。该发明还公开了上述黄酮醇苷类化合物的医药用途为治疗糖尿病视网膜病变。经药效学试验证明，从檵木叶中提取的黄酮醇苷类化合物：杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷、杨梅素-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷均能显著降低血糖值，显著改善链脲佐菌素所致的大鼠糖尿病视网膜病变。

杨梅素（myricetin）属黄酮类化合物，近年研究发现具有改善微循环，抗氧化，清除自由基，抗血栓等功效。但由于杨梅素在水中溶解度很差，只能作口服制剂，不能作注射剂。文献上记载，天然黄酮化合物有60余种以磺酸酯形式存在，另外还有少量的以磺酸盐形式存在。

发明内容

本发明的目的旨在克服现有技术的缺陷，提供一种新的化合物——杨梅素磺酸及其盐类化合物，能够增加水溶性，使得其成药性增强，生物利用度提高，药效增强，用途得到拓广。

本发明的另一目的在于提供这种杨梅素磺酸及其盐类化合物在制药中的用途。

本发明所述的杨梅素磺酸及其盐类化合物，其结构式为：

                                                           

其中，X为H⁺，Li⁺，Na⁺，K⁺，NH₄ ⁺，Ca²⁺， NH₂[C_mH_2m+1]₂ ⁺，NH₃C_mH_2m+1 ⁺，NH₂ ⁺C_nH_2n或碱性氨基酸；m =1-6，n=3-7。

本发明人从实验中发现杨梅素对心脑血管具有明显的生理活性。因杨梅素的水溶性差，很难使其生理活性得到有效的应用，在若干次实验后，我们发现对其化学结构进行磺酸化的修饰后，能够增加其水溶性，使之不仅可作口服制剂，还可作成注射剂使用。

本发明涉及杨梅素磺酸及其盐类化合物在制备治疗和预防心脑血管疾病的药物中的应用。

本发明所述的杨梅素磺酸及其盐类化合物可以通过以下方法制备：

制备方法：将杨梅素加入适当比例的浓硫酸中，在-20℃~80℃下搅拌反应20~50h，得浆状液，倾入适宜溶剂中，静置后析出固体，抽滤至干，得桔红色固体。用适宜溶剂洗涤，抽滤至干，所得化合物用醇、水或醇/水的混合溶剂溶解，加入相应的无机碱或氨基酸或胺类化合物的溶液，反应完毕，减压蒸干，得固体。用醇、水或醇/水的混合溶剂重结晶，得目标化合物。

所述的制备方法中，优选适当比例的硫酸为浓硫酸。

所述的制备方法中，优选磺化反应温度为0℃~80℃，更优选0℃~25℃。

所述的制备方法中，所述的醇包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、异丙醇、异丁醇、叔丁醇。

所述的制备方法中，醇/水的混合溶剂的比例为任意比例。

本发明的杨梅素磺酸及其盐类化合物进行了如下的药效学的试验：

（1）体外试验：探讨受试药杨梅素磺酸钠902SS对离体大鼠冠脉(CA)及脑基底动脉(BA)血管的影响。试验方法：以1μM血管收缩剂U46619预收缩血管，然后累积加入药物(0.3,1,3,10,30,100,300,1000μM)，观察SD大鼠心脑血管环的舒张反应；得到药物对收缩剂的舒张曲线，计算EC50。试验结果：在离体大鼠脑基底动脉环上，样品902SS的EC₅₀为0.34 ± 0.05 mM，对U46619所介导的SD大鼠脑基底动脉的收缩有舒张作用。

（2）体内试验：试验方法：90只大鼠随机分为9组，即IR模型组，阳性对照组（丹参川芎嗪注射液，STMP，22.5mg/kg,iv），灯盏花乙素（SCU，45mg/kg,iv）对照组，杨梅素磺酸钠盐902SS的低（11.25mg/kg,iv）、中（22.5mg/kg,iv）、高（45mg/kg,iv）剂量组。利用栓线阻塞大鼠大脑中动脉（MCA）1h，再灌注24h，以制备脑IR损伤模型，分别给予一定剂量的受试品，再灌注24小时处死动物。以红四氮唑（TTC）染色脑片，应用IPP图像处理软件测定大鼠脑校正缺血体积及缺血面积的变化，并观察检测脑肿胀百分比、神经体征缺失评分及死亡率。

试验结果：与模型组相比，杨梅素磺酸钠902SS低剂量组的大鼠脑校正缺血体积百分比和缺血面积百分比显著降低（P<0.01）。与2个阳性对照组相比，杨梅素磺酸钠902SS各剂量的大鼠脑校正缺血体积百分比无统计学差异。各组间的脑肿胀百分比、神经体征缺失评分、死亡率无统计学差异，受试样品组及阳性对照药各组的上述指标虽有一定的改善趋势，但无统计学上的明显差异。 杨梅素磺酸钠902SS对大鼠脑缺血再灌注的损伤都有明显的保护作用。 

（3）测定杨梅素磺酸钠902SS对酪氨酸激酶抑制活性..

实验及测定方法简述：使用有机溶剂DMSO(二甲亚砜)将杨梅素磺酸钠(902SS)配制成10 毫摩尔(10 mM)储液 (约3 毫克/毫升)。在体外酪氨酸激酶抑制试验中，20 uM 902SS对酪氨酸激酶JAK1，JAK2，JAK3及TYK2的抑制情况如图1所示。杨梅素磺酸钠对酪氨酸激酶JAK1，JAK2，JAK3及TYK2的抑制率分别是65.6%、103.3%、102.5%和97.6%。酪氨酸激酶(JAK1、JAK2、JAK3及TYK2)是心脑血管药物的分子作用靶点。现代医学研究发现，心脑血管药物通过抑制酪氨酸激酶的活性而发挥药效作用。本试验说明杨梅素磺酸钠对酪氨酸激酶JAK1，JAK2，JAK3及TYK2具有较强抑制作用。而902SS的活性的大小通过IC50（半数抑制浓度）来表示。图2表示902SS的IC 50 (JAK2) 和IC50(JAK3) 测定标准曲线图。

试验结果：IC 50 (JAK2)： 2.0 μM ，IC50(JAK3)： 0.21μM。

试验结果902SS对JAK2和JAK3的IC50很小，是微摩尔级的，说明对JAK2和JAK3的抑制活性强。

本发明所涉及其它杨梅素磺酸盐的药效学试验方法同上述的杨梅素磺酸钠药效学试验方法，其试验结果见下表：

表1    杨梅素磺酸盐的药效学试验结果表

本发明的杨梅素磺酸及其盐类化合物通过上述药效学试验，效果显著，具有扩张心脑血管，改善微循环，增加血流量，防治缺血再灌注损伤，抑制酪氨酸激酶活性等效果。在增加水溶性的同时，增强其成药性，生物利用度提高。

本发明所述的杨梅素磺酸及其盐类化合物在制备治疗和预防心脑血管疾病的药物中的应用时，可以是唯一活性成分，也可以与其它具有一定功效的活性成分配合使用，达到治疗和预防心脑血管疾病的目的。

本发明所述的化合物在制备药物领域中的应用，其剂型包括片剂、胶囊、滴丸、丸剂、粉剂、溶液剂、注射用冻干粉剂、注射剂和颗粒剂。

附图说明

图1为902SS对JAK1，JAK2，JAK3及TYK2抑制试验结果图。

图2为902SS的IC 50 (JAK2) 和IC50(JAK3) 测定标准曲线图。

图中：902SS为杨梅素磺酸钠盐JAK1为络氨酸蛋白激酶1，JAK2为络氨酸蛋白激酶2，JAK3为络氨酸蛋白激酶3，TYK2为酪氨酸蛋白激酶2抗体。

具体实施方式

实施例1：

2-(3,4,5-三羟基苯基)-3,5,7-三羟基-苯并-γ-吡喃酮-8-磺酸钠（杨梅素-8-磺酸钠）的合成：

           

将杨梅素（1.6g , 5.0mmol）加入10ml浓硫酸中，室温下搅拌反应20h，得黄色浆状物，倾入100mL饱和氯化钠中，静置后析出固体，抽滤至干，得黄色固体。用饱和氯化钠溶液洗涤二次，抽滤至干，得黄色固体。将所得固体溶于40ml水/乙醇混合溶液中，加入2%氢氧化钠溶液至pH为6~7，溶液变为淡绿色，有沉淀析出，过滤，得淡绿色固体。再用5%氯化钠溶液重结晶两次，得标题化合物，黄绿色固体1.57g，收率：75%，ESI-MS： m/z 399.11 [M+H]+。

1H NMR (DMSO) δ：6.13 (S,1H), 7.55 (S,2H), 8.83 (S,1H), 9.01(S, 2H), 9.40 (S,1H), 12.50 (S,1H), 12.85 (S,1H). 13C NMR (DMSO)  δ：175.58, 160.71, 160.38, 152.82, 147.90, 145.45, 136.23, 135.96, 121.03, 109.75, 108.52, 103.14, 98.05。

杨梅素磺酸钠，分子量420，黄绿色粉末固体，熔点大于300度，溶于水、甲醇、乙醇，难溶于氯仿、乙酸乙酯。

实施例2：

2-(3,4,5-三羟基苯基)-3,5,7-三羟基-苯并-γ-吡喃酮-8-磺酸钾（杨梅素-8-磺酸钾）的合成：

操作步骤同实施例1，所用试剂为饱和氯化钾溶液，2%氢氧化钾溶液，5%氯化钾溶液，得标题化合物，黄绿色固体1.7g。收率：78%。ESI-MS： m/z 397.08 [M-H]^- 。

¹H NMR (DMSO)δ：6.15 (s, 1H), 7.57 (s, 2H), 8.83 (s, 1H), 9.02 (s, 2H), 9.41 (s, 1H), 12.53 (s, 1H), 12.86 (s, 1H)。

杨梅素磺酸钾，分子量：436，黄绿色粉末固体，熔点大于300度,溶于水、甲醇、乙醇，难溶于氯仿、乙酸乙酯。

实施例3：

2-(3,4,5-三羟基苯基)-3,5,7-三羟基-苯并-γ-吡喃酮-8-磺酸精氨酸盐（杨梅素-8-磺酸精氨酸盐）的合成：

将杨梅素（1.6g , 5.0mmol）加入10ml浓硫酸中，室温下搅拌反应20h，得黄色浆状物，倾入100mL饱和氯化钠中，静置后析出固体，抽滤至干，得黄色固体。用饱和氯化钠溶液洗涤二次，抽滤至干，得黄色固体。将所得固体溶于40ml水/乙醇混合溶液中，将精氨酸（636mg，3.7mmol）的水溶液滴入上述溶液中，室温搅拌，减压蒸除溶剂，得黄绿色粉末。用水重结晶，得标题化合物，黄绿色固体2.1g。收率：75%。ESI-MS： m/z 397.12 [M-H]^- 。

¹H NMR (DMSO)δ：1.57 (m, 2H), 1.72 (m, 2H), 3.55 (m, 3H), 6.14 (s, 1H), 7.24 (brs, 2H), 7.55 (s, 2H), 8.13 (brs, 1H), 9.03 (brs, 1H), 12.50 (s, 1H), 12.88 (s, 1H)。

实施例4：

2-(3,4,5-三羟基苯基)-3,5,7-三羟基-苯并-γ-吡喃酮-8-磺酸赖氨酸盐（杨梅素-8-磺酸赖氨酸盐）的合成：

操作步骤同实施例3，所有试剂为：赖氨酸（540mg，3.7mmol）的水溶液，得标题化合物，黄绿色固体2.0g。收率：75%。ESI-MS： m/z 399.11 [M+H]⁺。

实施例5：

2-(3,4,5-三羟基苯基)-3,5,7-三羟基-苯并-γ-吡喃酮-8-磺酸氨丁三醇盐（杨梅素-8-磺酸氨丁三醇盐）的合成：

操作步骤同实施例3，所有试剂为：氨丁三醇（447mg，3.7mmol）的水溶液，得标题化合物，黄绿色固体1.9g。收率：75%。ESI-MS： m/z 399.04 [M+H]⁺ 。

杨梅素的磺酸盐制剂的制备：

1：注射用杨梅素磺酸钠的制备  10 mg/支

处方： 杨梅素磺酸钠 10 g

           甘露醇       20g

    按处方量称取样品，用注射用水配制成10000 ml 溶液，无菌过滤，按每支1ml灌装，冷冻干燥，压塞，轧盖即得成品。

2： 注射用杨梅素磺酸钾的制备  10 mg/支

处方:  杨梅素磺酸钾 20 g

          甘露醇       40g

    按处方量称取样品，用注射用水配制成20000 ml 溶液，无菌过滤，按每支1ml灌装，冷冻干燥，压塞，轧盖即得成品。

3：注射用杨梅素磺酸精氨酸盐的制备 20 mg/支

处方： 杨梅素磺酸精氨酸盐 20 g

           甘露醇       40g

    按处方量称取样品，用注射用水配制成10000 ml 溶液，无菌过滤，按每支1ml灌装，冷冻干燥，压塞，轧盖即得成品。

    4： 杨梅素磺酸钠注射液的制备  10 mg/支

处方： 杨梅素磺酸钠 10 g

    按处方量称取样品，用注射用水配制成10000 ml 溶液，无菌过滤，按每支1ml灌封，灭菌即得成品。

    5：杨梅素磺酸赖氨酸盐注射液的制备  20 mg/支

处方： 杨梅素磺酸赖氨酸盐20 g

按处方量称取样品，用注射用水配制成10000 ml 溶液，无菌过滤，按每支1ml灌封，灭菌即得成品。

6：杨梅素磺酸钠肠溶片的制备  

处方：杨梅素磺酸钠 50g

          淀粉         42g

          10%淀粉浆    5g

          干淀粉        2.5g

          硬质酸镁      0.5g

                     制成1000片。

    丙烯酸树脂肠溶型I号包衣。

制法  将杨梅素磺酸钠过80目筛，与淀粉混匀，加淀粉浆制成软材，以14目筛制粒后，置70-80℃干燥后于12目筛整粒，加入干淀粉及硬质酸镁混匀后，压片，用丙烯酸树脂肠溶型I号包衣即得。

7：杨梅素磺酸钠灯盏花素复方片的制备  

处方：杨梅素磺酸钠 25g

      灯盏花素     25g

          淀粉         42g

          10%淀粉浆    5g

          干淀粉        2.5g

          硬质酸镁      0.5g

                     制成1000片。

制法  将杨梅素磺酸钠过80目筛，灯盏花素过80目筛，一起与淀粉混匀，加淀粉浆制成软材，以14目筛制粒后，置70-80℃干燥后于12目筛整粒，加入干淀粉及硬质酸镁混匀后，压片即得。

8：杨梅素磺酸精氨酸盐肠溶片的制备  

处方：杨梅素磺酸精氨酸盐 100 g

          淀粉               84 g

          10%淀粉浆         10 g

          干淀粉             5 g 

          硬质酸镁           1 g

                     制成2000片  50mg/片。

丙烯酸树脂肠溶型II号 包衣。  

制法： 将杨梅素磺酸钠过80目筛，与淀粉混匀，加淀粉浆制成软材，以14目筛制粒后，置70-80℃干燥后于12目筛整粒，加入干淀粉及硬质酸镁混匀后，压片，用丙烯酸树脂肠溶型II号包衣即得。

9： 杨梅素磺酸钠肠溶胶囊的制备

处方：  杨梅素磺酸钠 50g

            淀粉         50g

用肠溶胶囊制成1000粒胶囊  50mg/粒。

制法：将杨梅素磺酸钠粉碎过80目筛，与淀粉混匀，装入肠溶胶囊壳即得。

10： 杨梅素磺酸钠肠溶胶囊的制备

处方： 杨梅素磺酸氨丁三醇盐  10 g

           淀粉                  10 g

用肠溶胶囊制成200粒胶囊  50mg/粒。

制法：将杨梅素磺酸钠粉碎过80目筛，与淀粉混匀，装入肠溶胶囊壳即得。

Claims (2)

1.一种杨梅素磺酸及其盐类化合物，其特征在于结构式为：

其中，X为H⁺，Li⁺，Na⁺，K⁺，NH₄ ⁺，Ca²⁺， NH₂[C_mH_2m+1]₂ ⁺，NH₃C_mH_2m+1 ⁺，NH₂ ⁺C_nH_2n或碱性氨基酸；m =1-6，n=3-7。

2.如权利要求1所述的杨梅素磺酸及其盐类化合物在制备治疗和预防心脑血管疾病的药物中的应用。

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