CN105440017A

CN105440017A - 达比加群酯香草酸盐及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN105440017A
Application number: CN201410408466.5A
Authority: CN
Inventors: 刘长鹰; 张海枝; 任晓文; 刘巍; 李川; 徐为人; 高航; 汤立达; 魏群超
Original assignee: Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Co Ltd
Current assignee: Tianjin Tiancheng new drug evaluation Co.,Ltd.
Priority date: 2014-08-19
Filing date: 2014-08-19
Publication date: 2016-03-30
Anticipated expiration: 2034-08-19
Also published as: CN105440017B

Abstract

本发明提供了一种通式(I)的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，其中，n为1、2或3。本发明还提供了达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物的制备方法，以及在制备用于治疗或预防心血管疾病的药物中的应用。

Description

达比加群酯香草酸盐及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种达比加群酯的酸加成盐，具体涉及一种达比加群酯香草酸盐及其制备方法和应用。

背景技术

达比加群(Dabigatran)是一种创新的抗凝血剂，即新一代薄血药，在药物分类学上，属于“直接凝血酶抑制剂”(DirectThrombinInhibitors,DTI)。目前医学界已研究证实“达比加群”在多项临床适应症中所发挥的作用，它有可能取代属旧式薄血药的“华法林”(warfarin)，成为大多数病例中用于抗凝血的首选药物。

“达比加群”以其前驱药“达比加群酯”(dabigatranetexilate)的形态经口服进入人体。“达比加群酯”由德国BoehringerIngelheim研发，于2008年在欧洲上市，商品名为“Pradaxa”，加拿大的商品名为“Pradax”。“Pradaxa”的香港中文商品则名为“百达生”，而中国大陆及台湾的中文商品名称正于申请审核中。目前，已有75个国家和地区批准其以“Pradaxa”为商品名上市销售。美国食品药品管理局(FDA)于2010年9月20日批准将达比加群酯(一种口服直接凝血酶抑制剂)用于非瓣膜性心房纤颤患者(AF)，以降低其发生卒中和全身性血管栓塞的风险。

达比加群酯(DABIGATRANETEXILATE)是一种取代的苯并咪唑类化合物，化学名3-[[[2-[[[4-[[[(己氧基)羰基]氨基]亚氨甲基]苯基]氨基]甲基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基]羰基](吡啶-2-基)氨基]丙酸乙酯，其分子结构式如下：

分子式：C₃₄H₄₁N₇O₅，分子量：627.74。

达比加群酯在水中的溶解度较小，在药用辅料的影响和阻抑下，其在药物制剂中不易于溶出，使药物制剂的制备受到诸多限制。另外，已经上市的达比加群酯甲磺酸盐(请参见中国专利CN1675193A)具有稳定性较差、生物利用度低等缺陷。因此需要寻找更适合药用的达比加群酯的化合物，以满足市场和相关疾病防治工作的需求。

发明内容

因此，本发明的目的在于克服达比加群酯及其现有化合物的稳定性差、生物利用度低、毒副作用大等缺陷，提供一种稳定性更好、水溶性更大、生物利用度更高、低毒副作用的达比加群酯香草酸盐及其水合物和/或溶剂化物，以及它们的制备方法和应用。

本文所使用的术语“溶剂化物”，指的是在周期性三维排列中包含一个或多个有机溶剂分子的结晶形式。

本文所使用的短语“药学上可接受的”，指的是在合理医学判断的范围内适用于与人类或动物的组织接触同时没有过度的毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症并具有合理的效益/风险比的化合物、材料、组合物和/或剂型。

本发明提供了一种通式如下的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物：

其中，n为1、2或3。

根据本发明的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，其中，每分子所述达比加群酯香草酸盐的水合物中可以含有0.5～10分子的水，可以优选为含有0.5～2分子的水。每分子所述达比加群酯香草酸盐的溶剂化物中可以含有0.5～10分子的溶剂，可以优选为含有0.5～2分子的溶剂。

例如，本发明的达比加群酯香草酸盐的水合物可以是半水合物、一水合物、一倍半水合物、二水合物、二倍半水合物、三水合物、三倍半水合物、四水合物、四倍半水合物、五水合物、五倍半水合物、六水合物、六倍半水合物、七水合物、七倍半水合物、八水合物、八倍半水合物、九水合物、九倍半水合物或十水合物。又例如，每分子的达比加群酯香草酸盐的溶剂化物可以含有半分子、1分子、1.5分子、2分子、2.5分子、3分子、3.5分子、4分子、4.5分子、5分子、5.5分子、6分子、6.5分子、7分子、7.5分子、8分子、8.5分子、9分子、9.5分子或10分子的溶剂。

应当说明，上述罗列的本发明的达比加群酯香草酸盐的水合物或溶剂化物，主要是本发明的达比加群酯香草酸盐在结晶或纯化过程中产生的一种存在形式，其所含有的结晶水或结晶有机溶剂通常是可以控制或去除的，例如可以通过加热灼烧或煅烧等方式使结晶水或结晶有机溶剂脱除。因此，本发明的达比加群酯香草酸盐的水合物和溶剂化物仍然属于本发明的技术方案内容和专利保护范围的内容。

根据本发明的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，其中，所述溶剂化物可以为乙醇溶剂化物、甲醇溶剂化物、丙酮溶剂化物、乙腈溶剂化物、乙酸乙酯溶剂化物、四氢呋喃溶剂化物和乙醚溶剂化物中的一种或多种。

根据本发明的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，其中，在所述水合物中，达比加群酯香草酸盐可以占95wt％以上，可以优选为98wt％以上，可以更优选为99wt％以上。在所述溶剂化物中，达比加群酯香草酸盐可以占95wt％以上，可以优选为98wt％以上，可以更优选为99wt％以上。

本发明还提供了制备本发明的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物的方法，该方法可以包括：将达比加群酯和香草酸在水或第一有机溶剂中混合成盐并析晶，经过滤、洗涤、干燥后，使用水或第二有机溶剂进行重结晶，制得所述达比加群酯香草酸盐、其水合物或溶剂化物。本领域技术人员可以根据需要，通过常用手段，如降低结晶温度或蒸除部分溶剂等，以加速结晶的形成。

根据本发明的方法，其中，所述混合成盐的步骤可以在0℃至水或第一有机溶剂的回流温度下进行，可以优选为在0～30℃下进行。作为优选，所述析晶的步骤可以在室温或低于室温的条件下进行，可以优选为在0～20℃下进行。所述第一有机溶剂和第二有机溶剂相同或不同，可以选自乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、丁醇、甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙醚、异丙醚、正丁醚、乙二醇二甲醚、甲基叔丁醚、四氢呋喃、石油醚、乙腈、二氯甲烷、三氯甲烷、正己烷、环己烷、丙酮、丁酮、戊酮、甲苯、二甲基乙酰胺或二甲苯。

根据本发明的方法，其中，所述达比加群酯与所述香草酸的摩尔比可以为10:1～1:10。该摩尔比可以优选为3:1～1:3。

本发明还提供了一种药物组合物，该药物组合物包含本发明的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，或包含按照本发明的方法制得的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，以及药学上可接受的辅料。

所述药物组合物可以包含本发明的达比加群酯香草酸盐作为其中的活性物质，还可以同时包含其它具有药学活性的物质，以形成一种复方的药物组合物用于联合治疗。

本发明的达比加群酯香草酸盐作为活性成分用于治疗时，一般不直接给予患者单纯的化学品，通常都是以含有药学上可接受的辅料的药物组合物的形式出现。本发明的达比加群酯香草酸盐也可以通过任意合适的途径给药，通常可以是口服或非肠道途径，所以，本领域技术人员也可以根据所需的给药形式选择药物组合物所包含的药学上可接受的辅料。

应当理解，按照本领域熟知的方法，药学上可接受的辅料可以是保持药物剂型的基质或辅料，通常根据不同的药剂来选用或组合使用，可选择性的包括赋形剂，例如微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、淀粉、糊精、磷酸钙、蔗糖、右旋糖酐、甘露醇、山梨醇、葡萄糖、果糖、水、聚乙二醇、丙二醇、甘油、环糊精、环糊精衍生物中的一种或几种等等；还可以包括粘合剂，例如聚维酮(聚乙烯吡咯烷酮)、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、明胶、瓜耳胶、黄原胶中的一种或几种等等；还包括润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉、硬脂基富马酸钠、月桂基硫酸钠中的一种或几种等等；还可以包括崩解剂，例如羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、交联羧甲基淀粉钠、预胶化淀粉中的一种或几种，等等；还包括表面活性剂，例如十二烷基硫酸钠、聚山梨酯-80的一种或几种，等等；还可以包括pH值调节剂或缓冲剂，例如磷酸盐缓冲液、柠檬酸、柠檬酸钠、醋酸盐缓冲液、稀盐酸、碳酸钠、氢氧化钠的一种或几种，等等；还可以包括防腐剂，例如苯甲酸钠、山梨酸钾、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯中的一种或几种，等等；还可以包括稳定剂和抗氧剂，例如依地酸钙钠、亚硫酸钠、维生素C中的一种或几种，等等；还可以包括口味调节剂，例如麦芽糖醇、果糖、蔗糖、糖精钠、橘子香精、草莓香精中的一种或几种，等等；另外还可以包括其他常规的、恰当的添加剂。

此外，当药物剂型是片剂或胶囊剂时，药学上可接受的辅料还可以包含膜包衣。用于膜包衣的材料，包括适合的包衣剂，例如羟丙甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素邻苯二甲酸酯，等等；还可以包含增塑剂，例如聚乙二醇、柠檬酸三乙酯，等等；还包括适宜增溶剂，如聚山梨酯-80；还可以包括适宜的色素，如二氧化钛、各种氧化铁、桃红色色素，等等。

根据本发明的药物组合物，所述药物组合物可以为片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、微丸剂或口服液体剂。

本发明的药物组合物可以根据需要制备为药剂学上可接受的任何药物剂型，如口服制剂、注射制剂、非口服的液体制剂，等等；如口服的片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服溶液剂、粉末剂、丸剂、舌下含服剂，等等；又如注射剂，包括注射用粉针剂和注射液，等等，再如非口服的滴眼液、滴鼻液、滴耳液、透皮吸收的乳液，等等。也可以是以上各种剂型的速释、缓释、控释等剂型，例如口服的分散片、缓释片、咀嚼片、缓释胶囊、肠溶片、泡腾片、口腔崩解片、异形片、泡腾颗粒，等等。特别地，按本领域已知方法制备，优选用于制备药剂学上食用的片剂(包括分散片、缓释片、咀嚼片、肠溶片、口腔崩解片、异形片)、胶囊剂(包括胃溶、肠溶、缓释胶囊)、颗粒剂、口服溶液剂、注射剂(包括注射用粉针剂和注射液)等，以满足临床使用上的各种需要。

根据本发明的药物组合物，其中，在所述药物组合物中，所述达比加群酯香草酸盐与所述药学上可接受的辅料的重量比可以为1:1～5，可以优选为1:1～2。达比加群酯香草酸盐在药物组合物中的含量可以为0.1～100mg，例如可以为0.1mg、0.5mg、1mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg、1.8mg、1.9mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、4.5mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg或150mg，等等。

本发明还提供了本发明的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，或按照本发明的方法制得的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，在制备用于治疗或预防心血管疾病的药物中的应用。可以优选为在制备用于治疗或预防静脉血栓或急性冠状动脉综合症的药物中的应用。

本发明所提供的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物具有较高的解离度，使其水溶性获得极大改善。这一方面可以使溶解过程更加迅速，另一方面也可以减少所需溶剂水的量。另外，本发明的达比加群酯香草酸盐及其水合物和溶剂化物还具有更高的稳定性和生物利用度。

在制备为药学活性物质或制备、储存和应用盖仑制剂时，以上生物化学性质的改善是十分重要的，这可以保证盖仑制剂的品质更高，其高稳定性还使得后期处理的加工步骤更加简单，降低了生产成本。并且，其高结晶性可以使用诸如X射线衍射等分析方法对其水合物或溶剂化物的释放进行简单明了的分析，以便进行适当的选择。这些因素对于活性物质的品质以及对于制备、储存和给药时的盖仑制剂而言，都是很重要的。此外，由于盖仑制剂中的活性成分更加稳定，因而可以避免复杂的准备工作。

使用物理-化学操作，如干燥、筛分、研磨和药剂赋形等盖仑处理，包括混合处理、制粒、喷雾-干燥、压片等，会使活性物质吸收或损失水分。这也受到其所处环境中的温度和相对湿度的影响。在制备一些制剂的情形下，游离水和结合水会与赋形剂一起被引入或因配制处理的相关操作而向所处理的物质中加入水。因此，在不同温度和相对湿度下，药学活性物质会与游离水在相当长的时期内进行接触。在此情况下，本发明的达比加群酯香草酸盐并没有表现出可测量的水分吸收或损失，因此这种稳定性有利于其化学制备的最后阶段，也有利于不同剂型的盖仑处理阶段，并且其稳定的持久有效性同样有益于患者。

同时，本发明的达比加群酯香草酸盐还具有更好的溶解性或可压性，因而更适于直接压缩成相应的片剂制剂或胶囊。

此外，本发明的达比加群酯香草酸盐还具有更佳的化学稳定性，由于达比加群酯分子结构中含有脂肪胺结构，容易被氧化，成盐后可增加达比加群酯的稳定性。该盐还可能具有避免或降低另外的活性成分降解的优点。

与现有技术中已知的化合物相比，所述盐还具有更有效、毒性更低、作用时间更长、活性范围更广、效力更高、副作用更少、更易吸收的优点或其它有用的药理学性质。

更具体的，本发明的达比加群酯香草酸盐及其水合物和/或溶剂化物还具有但不限于以下有益效果：

1)相对于达比加群酯甲磺酸盐，本发明所提供的达比加群酯香草酸盐具有良好的稳定性。例如，达比加群酯甲磺酸盐在10天高湿条件下降解为50％左右，而达比加群酯香草酸盐几乎无含量变化。

2)本发明的达比加群酯香草酸盐具有较好的水溶性，经试验证实，其在水中的溶解度可达2.1mg/mlH₂O(温度25℃)，而达比加群酯在pH值大于4时几乎不溶，达比加群酯甲磺酸盐为1.8mg/ml。因而本发明的达比加群酯香草酸盐具有较达比加群酯甲磺酸盐更佳或至少相当的生物利用度。

3)本申请的达比加群酯香草酸盐具有较低的毒性，经试验证实，本申请的达比加群酯香草酸盐在急性毒性试验和长期毒性试验中都体现出较低的毒性，最大无毒剂量可达160mg/kg，因此，在临床用药中具有更佳的安全性。

4)本申请的达比加群酯香草酸盐还具有较好的流动性和可压性。发明人分别对本发明的达比加群酯香草酸盐和达比加群酯甲磺酸盐进行流动性和可压性测定，其结果见下表1。

表1达比加群酯香草酸盐和达比加群酯甲磺酸盐的流动性和可压性测定

考察指标	休止角	松密度	固密度	压缩比
					达比加群酯香草酸盐	37°	0.84g/ml	0.82g/ml	0.106
达比加群酯甲磺酸盐	46°	0.48g/ml	0.60g/ml	0.20

其中，粉体的流动性一般主要以休止角来衡量，休止角越小，流动性较好。常规θ≤30°流动性好，θ≤40°可以满足生产需要。松密度指粉体质量除以该粉体所占容器的体积，求得的密度。其所用的体积包括粒子本身的孔隙以及粒子之间空隙在内的总体积。松密度大的为重质，松密度小的为轻质，松密度大用较小的压力便可以成型，表明可压性好。固密度是经一定速度和时间敲击震动后粉体质量除以该粉体所占容器的体积，求得的密度。固密度值大表明流动性好。压缩比越小可压性越好，一般小于0.2可满足生产需要。以上数据表明，本发明的达比加群酯香草酸盐相对于达比加群酯甲磺酸盐在各项指标上均表现出更好的流动性和可压性，因而更适合药品的大规模生产。

具体实施方式

下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

本部分对本发明试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在上下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。

如无特别说明，以下实施例中的所使用的质谱仪为Agientl100型四级杆液质联用仪，所使用的核磁共振仪为BrukerARX-400NMR型核磁共振仪。

实施例1

本实施例用于说明本发明的达比加群酯香草酸盐的制备。

将1.6mmol的达比加群酯和1.6mmol的香草酸在20℃下加入到25ml的无水乙醇中，混合搅拌6小时成盐，然后在20℃下析晶，过滤，使用乙酸乙酯洗涤，经干燥后，加入乙醚进行重结晶，得到0.318g的达比加群酯香草酸盐的乙醚溶剂化物。测得ESI-MS(电喷雾电离-质谱)(m/z):833[M+H]⁺。

对上述乙醚溶剂化物进行干燥，得到白色固体的达比加群酯香草酸盐0.304g，经计算，在上述乙醚溶剂化物中，达比加群酯香草酸盐的含量为95.6wt％。每分子该丙酮溶剂化物中含有0.5分子的乙醚。

对上述达比加群酯香草酸盐进行测定：

ESI-MS(m/z):796[M+H]⁺

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.85(t,J＝9.0Hz,3H,CH₃),1.10(t,J＝8.4Hz,3H,CH₃),1.26-1.33(dd,6H,CH₂CH₂CH₂),1.55-1.60(m,2H，CH₂),2.65-2.68(m,2H，CH₂),3.73(s,3H,CH₃)，3.76(s,3H,CH₃),3.94-4.03(m,4H，2CH₂),4.21(t,J＝14.4Hz,2H,CH₂),4.57(d,J＝5.6Hz,2H,CH₂),6.78(d,J＝8.8Hz,2H,ArH),6.83(d,J＝7.4Hz,1H,ArH),6.93(d,J＝7.6Hz,1H,ArH),7.10-7.12(m,1H,ArH),7.19-7.22(m,2H,ArH),7.31-7.32(m,1H,ArH),7.37-7.41(m,1H,ArH),7.46-7.54(m,2H,ArH),7.77-7.79(m,2H,ArH),8.37(d,J＝4.0Hz,1H,ArH),9.24(m,2Hbr,2H,NH₂).

熔点：157-159℃

元素分析：

C₃₄H₄₁N₇O₅(627.74)·1/nC₈H₈O₄

发现值：C63.44N12.07H6.21O18.10

计算得：n＝1

因此所制得的达比加群酯香草酸盐的分子结构式为：

实施例2

本实施例用于说明本发明的达比加群酯香草酸盐的制备。

将3.2mmol的达比加群酯和1.6mmol的香草酸在30℃下加入到20ml水中，混合搅拌6小时成盐，然后在30℃下析晶，过滤，使用乙酸乙酯洗涤，经干燥后，加入水进行重结晶，得到0.474g的达比加群酯香草酸盐的水合物。测得ESI-MS(m/z):730[M+H]⁺。

对上述水合物进行干燥，得到白色固体的达比加群酯香草酸盐0.462g，经计算，上述水合物中，达比加群酯香草酸盐的含量为97.5wt％。每分子该水合物中含有1分子的水，即一水合物。

对上述达比加群酯香草酸盐进行测定：

ESI-MS(m/z):712[M+H]⁺

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.85(t,J＝9.0Hz,3H,CH₃),1.08(t,J＝8.4Hz,3H,CH₃),1.26-1.33(dd,6H,CH₂CH₂CH₂),1.54-1.59(m,2H，CH₂),2.635-2.67(m,2H，CH₂),3.74(s,1.5H,CH₃)，3.77(s,3H,CH₃),3.93-4.02(m,4H，2CH₂),4.23(t,J＝14.4Hz,2H,CH₂),4.56(d,J＝5.6Hz,2H,CH₂),6.76(d,J＝8.8Hz,2H,ArH),6.84(d,J＝7.4Hz,0.5H,ArH),6.94(d,J＝7.6Hz,1H,ArH),7.11-7.13(m,1H,ArH),7.18-7.22(m,2H,ArH),7.32-7.33(m,1H,ArH),7.36-7.40(m,1H,ArH),7.47-7.53(m,1.5H,ArH),7.76-7.79(m,2H,ArH),8.35(d,J＝4.0Hz,1H,ArH),9.23(m,2Hbr,2H,NH₂).

熔点：149-151℃

元素分析：

C₃₄H₄₁N₇O₅(627.74)·1/nC₈H₈O₄

发现值：C64.14N13.76H6.38O15.72

计算得：n＝2

因此所制得的达比加群酯香草酸盐的分子结构式为：

实施例3

本实施例用于说明本发明的达比加群酯香草酸盐的制备。

将4.8mmol的达比加群酯和1.6mmol的香草酸在0℃下加入到20ml无水乙醇中，混合搅拌6小时成盐，然后在0℃下析晶，过滤，使用乙酸乙酯洗涤，经干燥后，加入乙二醇二甲醚进行重结晶，得到白色固体的达比加群酯香草酸盐0.447g。

对上述达比加群酯香草酸盐进行测定：

ESI-MS(m/z):684[M+H]⁺

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.86(t,J＝9.0Hz,3H,CH₃),1.09(t,J＝8.4Hz,3H,CH₃),1.27-1.34(dd,6H,CH₂CH₂CH₂),1.54-1.58(m,2H，CH₂),2.64-2.66(m,2H，CH₂),3.76(s,1H,CH₃)，3.78(s,3H,CH₃),3.93-4.03(m,4H，2CH₂),4.24(t,J＝14.4Hz,2H,CH₂),4.55(d,J＝5.6Hz,2H,CH₂),6.77(d,J＝8.8Hz,2H,ArH),6.85(d,J＝7.4Hz,1/3H,ArH),6.95(d,J＝7.6Hz,1H,ArH),7.11-7.14(m,1H,ArH),7.18-7.21(m,2H,ArH),7.33-7.34(m,1H,ArH),7.37-7.41(m,1H,ArH),7.47-7.54(m,1.5H,ArH),7.77-7.80(m,2H,ArH),8.36(d,J＝4.0Hz,1H,ArH),9.24(m,2Hbr,2H,NH₂).

熔点：141-143℃

元素分析：

C₃₄H₄₁N₇O₅(627.74)·1/nC₈H₈O₄

发现值：C64.43N14.34H6.42O14.81

计算得：n＝3

因此所制得的达比加群酯香草酸盐的分子结构式为：

实施例4

本实施例用于说明本发明的达比加群酯香草酸盐的制备。

将1.6mmol的达比加群酯和4.8mmol的香草酸在30℃下加入到20ml无水甲醇中，混合搅拌6小时成盐，然后在10℃下析晶，过滤，使用乙醚洗涤，经干燥后，加入四氢呋喃进行重结晶，得到0.360g的达比加群酯香草酸盐的四氢呋喃溶剂化物。测得其ESI-MS(m/z):832[M+H]⁺。

对上述四氢呋喃溶剂化物进行干燥，得到白色固体的达比加群酯香草酸盐0.344g，经计算，上述溶剂化物中达比加群酯香草酸盐的含量为95.7wt％。每分子该四氢呋喃溶剂化物中含有0.5分子的四氢呋喃。

对上述达比加群酯香草酸盐进行测定：

ESI-MS(m/z):796[M+H]⁺。

熔点：158-160℃

元素分析：

C₃₄H₄₁N₇O₅(627.74)·1/nC₈H₈O₄

发现值：C63.44N12.07H6.21O18.10

计算得：n＝1

因此所制得的达比加群酯香草酸盐的分子结构式为：

实施例5

本实施例用于说明本发明的达比加群酯香草酸盐的制备。

将1.6mmol的达比加群酯和3.2mmol的香草酸在10℃下加入到20ml丙酮，混合搅拌6小时成盐，然后在10℃下析晶，过滤，使用乙醚洗涤，经干燥后，加入丙酮进行重结晶，得到0.473g的达比加群酯香草酸盐的丙酮溶剂化物。测得其ESI-MS(m/z):825[M+H]⁺。

对上述丙酮溶剂化物进行干燥，得到白色固体的达比加群酯香草酸盐0.456g，经计算，上述溶剂化物中，达比加群酯香草酸盐的含量为96.5wt％。每分子该丙酮溶剂化物中含有0.5分子的丙酮。

对上述达比加群酯香草酸盐进行测定：

ESI-MS(m/z):796[M+H]⁺。

熔点：157-159℃

元素分析：

C₃₄H₄₁N₇O₅(627.74)·1/nC₈H₈O₄

发现值：C63.44N12.07H6.21O18.10

计算得：n＝1

因此所制得的达比加群酯香草酸盐的分子结构式为：

实施例6

本实施例用于说明本发明的达比加群酯香草酸盐的制备。

将1.6mmol的达比加群酯和8mmol的香草酸在30℃下加入到20ml三氯甲烷中，混合搅拌6小时成盐，然后在20℃下析晶，过滤，使用乙醚洗涤，经干燥后，加入水进行重结晶，得到0.463g的达比加群酯香草酸盐的水合物。测得其ESI-MS(m/z):805[M+H]⁺。

对上述水合物进行干燥，得到白色固体的达比加群酯香草酸盐0.458g，经计算，上述水合物中达比加群酯香草酸盐的含量为98.9wt％。每分子该水合物中含有0.5分子的水，即半水合物。

对上述达比加群酯香草酸盐进行测定：

ESI-MS(m/z):796[M+H]⁺。

熔点：158-160℃

元素分析：

C₃₄H₄₁N₇O₅(627.74)·1/nC₈H₈O₄

发现值：C63.44N12.07H6.21O18.10

计算得：n＝1

因此所制得的达比加群酯香草酸盐的分子结构式为：

稳定性试验：

发明人对实施例1的达比加群酯香草酸盐和达比加群酯甲磺酸盐在不同温度、湿度和光照条件下进行观察并作含量测定，数据见表2和表3。

液相条件：

色谱柱：AgelaVenusilMPC18柱(4.6mm×250mm，5μm)NO:VA952505-0

流动相：0.01mol·L^-1磷酸氢二铵缓冲液-甲醇(40:60)；

流速：1ml·min^-1；检测波长：250nm；柱温：25℃；进样量：20μl

表2达比加群酯香草酸盐及达比加群酯甲磺酸盐的含量变化

表2为达比加群酯香草酸盐及甲磺酸盐的含量经影响因素试验结果的对比。数据表明，在相同条件下(高温、高湿、光照)，前者的含量随时间变化很小，属于测定误差范围，而后者在高湿条件下很不稳定，尤其在10天高湿条件下会降解为50％左右，表现出明显的不稳定性。

表3达比加群酯香草酸盐及达比加群酯甲磺酸盐的外观变化

从表3可知，高温条件下，达比加群酯香草酸盐几乎无变化，而达比加群酯甲磺酸盐可以观察到颜色随时间产生明显变化。高湿条件下，前者的外观几乎不变，表现出更加稳定的性质，而后者则吸潮严重。

实施例7

本实施例用于说明达比加群酯甲磺酸盐与达比加群酯香草酸盐的抗凝血作用对比研究。

对3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香草酸盐(实施例1制备得到)与3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐抗凝血作用对比研究。试验方法如下：

取体重为(20±2)g健康的昆明种小鼠，随机分为3组，每组10只，雌雄各半，给药方式为：

空白组——给等体积生理盐水

对照组——给药达比加群酯甲磺酸盐(1.186mg/kg按活性物质计算)

治疗组——给药达比加群酯香草酸盐(1.186mg/kg按活性物质计算)

在实验室中喂养2天后进行试验，对小鼠的灌胃体积为0.25mL24h后用乙醚麻醉，在距小鼠尾尖3cm处剪断，血液自然流出。用滤纸在小鼠尾尖轻轻蘸血，每分钟一次，直至血液出现拉丝现象为止，这时血液出现有凝固状况，每次试验都以同样的拉丝现象为基准，记录时间。测得结果如表4所示。

表4抗凝血时间(均数±标准差，n＝10)

以上数据表明，本发明实施例1所示的3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香草酸盐的抗凝血对比评价数据优于3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐，具有统计学意义。

实施例8

本实施例用于说明达比加群酯甲磺酸盐与达比加群酯香草酸盐的药代动力学对比研究。

对3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香草酸盐(实施例1制备得到)与3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐药代动力学对比研究。试验方法如下：

取体重为(200±20)g健康的SD大鼠，随机分为3组，每组10只，雌雄各半，给药方式为：

对照组——给药达比加群酯甲磺酸盐(0.945mg/kg按活性物质计算，该剂量是根据徐叔云教授主编的《药理实验方法学》中人与动物体表面积比值剂量比计的，下同)

治疗组——给药达比加群酯香草酸盐(0.945mg/g按活性物质计算)

灌胃给药，给药后分别于10、15、25、35、45、60、120、180、240、360min尾静脉取血，放置于4℃冰箱中储存，样品通过有机溶剂萃取，真空干燥，后溶解于二次蒸馏水中，进行HPLC分析。测得结果如表5所示。

表5

表5结果表明：本发明实施例1所示的3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香草酸盐与3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐在体内的药代参数值相似，无显著性差异(P>0.05)。

实施例9

本实施例用于说明达比加群酯甲磺酸盐与达比加群酯香草酸盐的急性毒性对比结果。

对3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香草酸盐(实施例1制备得到)与3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐急性毒性对比研究。试验方法如下：

采用2000mg.kg^-1作为固定给药剂量，CD-1小鼠，10只，雌雄各半，达比加群酯甲磺酸盐给药组和达比加群酯香草酸盐给药组按2000mg.kg^-1的剂量口服给药，以0.5％CMCNa(羧甲基纤维素钠)为空白溶媒对照组。每日观察动物的生存率和给药后14日内的毒性反应。分别在第1、8、15日记录每只动物的体重(给药前平均体重为20.2±1.67g)。所有动物于濒死前或第15日处死，并进行尸体剖检。主要结果如表6所示：

表6急性毒性试验对比结果

与溶媒对照组相比，甲磺酸盐给药组在观察期内动物出现自主活动降低，俯卧、呼吸吃力、眼睑变小、竖毛等非特异性毒性反应，动物的尸检结果可见消化道，甲状腺，和胰腺出血，动物死亡可能与出血相关。香草酸盐组在给药当天及给药后的14天观察期内动物运动情况、眼睑指征、呼吸、皮毛、排泄物和分泌物等均未见明显异常。观察期结束，动物进行大体剖检，动物的头部、体表、皮下及颈部检查均未见明显异常，所有脏器未见明显出血现象，动物死因不明。

以上数据表明，本发明实施例1所示的3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香草酸盐的急性毒性对比评价数据明显优于3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐。

实施例10

本实施例用于说明达比加群酯甲磺酸盐与达比加群酯香草酸盐的3个月重复灌胃给药的长期毒性对比结果。

对3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香草酸盐(实施例1制备得到)与3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐3个月长期毒性对比研究。观察连续3个月重复灌胃给药对大鼠产生的毒性作用，判断毒性的性质、程度、剂量反应关系和可逆性，预测可能的毒性靶器官或靶组织。

试验方法如下：

达比加群酯甲磺酸盐及本发明的达比加群酯香草酸盐分别按0、10、40、160mg/kg的剂量设置给药组并口服给药，以0.5％CMCNa为空白溶媒对照组。每个给药组有大鼠24只，雌雄各半；各给药组大鼠经灌胃给药，每周给药6天，每日给药1次，每日观察动物给药后的异常反应，每周进行1次体重和进食量检查，给药前5周，每周中期增加一次体重测量；给药3个月和药后恢复30天后，每组分别随机选择1/2的实验动物，雌雄各半，进行血液、生化、电解质、凝血、大体剖检、脏器重量、组织病理学检查，各组检测结果分别与溶剂对照组进行比较，综合分析供试品对大鼠各项检查指标的影响。

主要结果：①给药期间达比加群酯甲磺酸盐高剂量组死亡率(5/24)高于达比加群酯香草酸盐组(1/24)；②达比加群酯甲磺酸盐高剂量组大鼠体重和进食量与达比加群酯香草酸盐组相比均明显降低(p<0.05,表7)；③达比加群酯甲磺酸盐高剂量组大鼠肝转氨酶(谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST))与达比加群酯香草酸盐组相比明显降低(p<0.05)；④各组凝血功能检查，与达比加群酯甲磺酸盐给药组相比较，达比加群酯香草酸盐给药组的中、高剂量组外源性凝血PT均明显延长，PT率(PTR)和国际标准化比率(INR)明显升高，PT活动度(PT％)明显减少；达比加群酯香草酸盐给药组的中、高剂量组的内源性凝血APTT明显延长(表8)，这些指标的改变是药效作用所致，并具有剂量依赖性，同时凝血功能的改变停药30天后能够恢复正常，均不会产生延迟毒性(表9)；⑤脏器重量和组织病理学检查发现，与溶剂对照组相比，达比加群酯甲磺酸盐高剂量给药组肝、肾、胸腺等脏器重量明显降低(表10)；并且，达比加群酯甲磺酸盐高剂量给药组的大鼠可见消化道，甲状腺和胰腺出血，达比加群酯甲磺酸盐的最大无毒剂量(NOAEL)为40mg/kg；而达比加群酯香草酸盐并无以上出血风险，最大无毒剂量(NOAEL)为160mg/kg。

表7各组灌胃给药前5周大鼠体重的变化(g)

注：n表示动物只数，采用组间t检验，*与溶剂对照组比较P<0.05

表8各组灌胃给药90天对大鼠凝血功能的影响

注：n表示动物只数，采用组间t检验，与同剂量甲磺酸盐组比较，*P〈0.05，**P〈0.01

表9各组停药恢复30天对大鼠凝血功能的影响

注：n表示动物只数

表10各组灌胃给药90天对大鼠脏器重量的影响(g)

注：n表示动物只数，采用组间t检验，与溶剂对照组比较*P〈0.05

以上研究表明，本发明实施例1所示的3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香草酸盐的3个月重复给药的长期毒性对比评价数据优于3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐，出血风险明显降低。

实施例11

本实施例用于说明本发明的达比加群酯香草酸盐的药物组合物的制备。

将达比加群酯香草酸盐过80目筛，辅料过60目筛。按处方量称取达比加群酯香草酸、微晶纤维素和乳糖充分混合均匀，加入1％(重量/体积)羟丙甲纤维素水溶液混合，制软材，过筛，制湿颗粒，于55℃干燥。将交联聚维酮和硬脂酸镁加到上述的颗粒中，测定中间体含量，压片，包装。

实施例12

将达比加群酯香草酸盐过80目筛，辅料过60目筛。按处方量称取达比加群酯香草酸、微晶纤维素、预胶化淀粉和乳糖充分混合均匀，加入1％(重量/体积)羟丙甲纤维素水溶液混合，制软材，过筛，制湿颗粒，于55℃干燥。将硬脂酸镁加到上述的颗粒中，测定中间体含量，装胶囊，包装。

实施例13

将达比加群酯香草酸盐过80目筛，辅料过60目筛。按处方量称取达比加群酯香草酸盐、乳糖、甘露醇、阿司帕坦、香精充分混合，再加入2％(重量/体积)羟丙甲纤维素水溶液制软材，16目筛制粒，55℃干燥，14目筛整粒，测定中间体含量及水分，包装，共制得100袋颗粒剂。

实施例14

将达比加群酯香草酸盐过80目筛，辅料过60目筛。按处方量称取达比加群酯香草酸、聚维酮、阿司帕坦和香精先混合均匀，再依次与甘露醇、微晶纤维素和乳糖充分混合均匀，最后加入硬脂酸镁混合均匀，测定中间体含量，压片，包装。

尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。

Claims

1.一种具有通式(I)结构的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，

其中，n为1、2或3。

2.根据权利要求1所述的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，其特征在于，每分子所述达比加群酯香草酸盐的水合物中含有0.5～10分子的水，优选为含有0.5～2分子的水；每分子所述达比加群酯香草酸盐的溶剂化物中含有0.5～10分子的溶剂，优选为含有0.5～2分子的溶剂。

3.根据权利要求1或2所述的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，其特征在于，所述溶剂化物为乙醇溶剂化物、甲醇溶剂化物、丙酮溶剂化物、乙腈溶剂化物、乙酸乙酯溶剂化物、四氢呋喃溶剂化物和乙醚溶剂化物中的一种或多种。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，其特征在于，在所述水合物中，达比加群酯香草酸盐占95wt％以上，优选为98wt％以上，更优选为99wt％以上；在所述溶剂化物中，达比加群酯香草酸盐占95wt％以上，优选为98wt％以上，更优选为99wt％以上。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物的制备方法，其特征在于，该方法包括：将达比加群酯和香草酸在水或第一有机溶剂中混合成盐并析晶，经过滤、洗涤、干燥后，使用水或第二有机溶剂进行重结晶，制得所述达比加群酯香草酸盐、其水合物或溶剂化物。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述混合成盐在0℃至水或第一有机溶剂的回流温度下进行，所述第一有机溶剂和第二有机溶剂相同或不同，选自乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、丁醇、甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙醚、异丙醚、正丁醚、乙二醇二甲醚、甲基叔丁醚、四氢呋喃、石油醚、乙腈、二氯甲烷、三氯甲烷、正己烷、环己烷、丙酮、丁酮、戊酮、甲苯、二甲基乙酰胺或二甲苯中的一种或多种；优选地，所述达比加群酯与所述香草酸的摩尔比为10:1～1:10，优选为3:1～1:3。

7.一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含权利要求1至4中任一项所述的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，或按照权利要求5或6所述的方法制得的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，以及药学上可接受的辅料。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、微丸剂或口服液体剂。

9.根据权利要求7或8中所述的药物组合物，其特征在于，在所述药物组合物中，所述达比加群酯香草酸盐与所述药学上可接受的辅料的重量比为1:1～5，优选为1:1～2。

10.权利要求1至4中任一项所述的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物，或按照权利要求5或6所述的方法制得的达比加群酯香草酸盐、其水合物和/或溶剂化物在制备用于治疗或预防心血管疾病的药物中的应用，优选为在制备用于治疗或预防静脉血栓或急性冠状动脉综合症的药物中的应用。