CN102631352A

CN102631352A - 熊果酸的医学新用途

Info

Publication number: CN102631352A
Application number: CN2012101201757A
Authority: CN
Inventors: 谢俊明; 白岩; 易以木
Original assignee: WUHAN LIYUANHENG MEDICINE TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: WUHAN LIYUANHENG MEDICINE TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2012-04-23
Filing date: 2012-04-23
Publication date: 2012-08-15

Abstract

本发明公开了一种熊果酸的医学新用途，熊果酸在制备镇痛药物方面的应用。熊果酸的结构不同于吗啡生物碱，半合成和全合成生物药三大类镇痛药结构，是新类型的具有镇痛作用的化合物。熊果酸在治疗肿瘤过程显现出来的镇痛作用，可作为有效成分用于制备镇痛类药物。熊果酸的这种新用途将有可能使副作用大的治疗癌症痛药物用量适当减少，这可以减轻其他药物的副作用，为临床应用中癌症疼痛以及其他伴随疼痛症状的疾病的治疗提供了新途径，具有重要的医学价值和社会、经济效益。

Description

熊果酸的医学新用途

技术领域

本发明型涉及熊果酸的一种新用途，具体地指是一种熊果酸的医学新用途。

背景技术

一.镇痛药简介

疼痛是一种不愉快的知觉和情绪，是许多疾病的症状，它与实质的和潜在的组织损伤相联系，兼有生理和心理的因素。现常用于镇痛的药物有两大类：一类是抑制前列腺素生物合成的解热镇痛药，通常用于外周的钝痛：另一类是麻醉性镇痛药，它们与阿片受体作用，通常用于剧痛，也简称镇痛药。镇痛药按结构和来源可分作吗啡生物碱，半合成和全合成生物药三大类。其中合成镇痛药按结构又分为哌啶类，氨基酮类，苯吗喃类等。现在各类镇痛药物归结如下表1：

表1：镇痛药物按照结构的分类，结构，作用及不良反应

二.熊果酸

目前临床使用的镇痛药物多为上述吗啡类药物，由于上述镇痛药副作用明显，长期使用毒副作用较大，成瘾性、依赖性强，并受患者耐受性的限制。熊果酸的结构式为

现有熊果酸的药用用途是在抑制肿瘤上的使用，没有文献公开记载其在镇痛药物的使用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种熊果酸的医学新用途。

本发明提供的一种熊果酸的医学新用途，其特殊之处在于：熊果酸在制备镇痛药物方面的应用。

作为优选方案，所述制备镇痛药物是熊果酸在医学上的制剂。

进一步地，所述制备镇痛药物的原料是熊果酸纳米脂质体。

本发明的优点在于：熊果酸在治疗肿瘤过程显现出来镇痛作用，可作为有效成分用于制备镇痛类药物。熊果酸的这种新用途将可能替代副作用大的治疗癌症痛药物，这可以减少其他药物的副作用，为临床应用中癌症疼痛以及其他伴随疼痛症状的疾病的治疗提供了新途径，具有重要的医学价值和社会、经济效益。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述。

实施例1：熊果酸热板镇痛实验

材料和方法

试剂：熊果酸纳米脂质体(90.6％，由武汉利元亨药物技术有限公司提供)，复方氨林巴比妥注射液(天津金耀氨基酸有限公司，国药准字H12021217)，500mL生理盐水溶液(中国大冢制药有限公司，国药准字H1202006)，苦味酸，无水乙醇(分析纯，天津市滨海私迪化学试剂有限公司)。取熊果酸纳米脂质体冻干粉针剂，每瓶加入适量的注射用水，至完全溶解，备用。

仪器：秒表，501型超级恒温仪(上海市上海县第二五金厂)，热板仪，透明玻璃罩，1mL注射器(上海米沙瓦医科工业有限公司)，1μL注射器，LD电子天平(沈阳龙腾电子有限公司)，石英双重纯水蒸馏器(江苏省金坛市正基仪器有限公司)。

实验动物和分组：健康雌性昆明小鼠共100只(购自天津实验动物中心，合格证号：20050001)，18-22g，恒温饲养，光照良好，食物和水充足。随机分为5组，分别为熊果酸纳米脂质体低剂量9mg/kg，中剂量13.5mg/kg，中剂量13mg/kg，高剂量18mg/kg，安痛定对照组。

试药方法：配制方法：取熊果酸(纯度99.7％，批号20090906，由武汉利元亨药物技术有限公司提供)适量加入吐温-80，在80℃水浴中加热至完全溶解，加水稀释，配成含熊果酸3mg/ml的溶液(UA原料药)备用。

实验方法：用苦味酸将各组小鼠进行编号，十只一盒。将小鼠放在预先加热到(55±0.5)℃的热板上，用透明玻璃罩罩住，以小鼠出现舔后足所需时间作为该鼠的潜伏期也叫痛阈值，需先将舔后足时间小于5s或大于30s者筛除以避免实验受个体差异影响较大，将痛阈值符合要求的小鼠，重复测其正常痛阈值，作为该小鼠给药前的痛阈值。阳性对照组给安痛定注射液(复方氨林巴比妥注射液)，药物组给熊果酸溶液四个剂量组，给药方式均为腹腔注射，给药体积为0.1ml/10g，然后分别测定各组给药后10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、60分钟和90分钟时的小鼠的痛阈值。将实验室温度控制在20℃左右，记录数据。统计学处理采用spss11.0统计软件进行分析，计数资料以均数±标准差来表示，组间比较采用单因素方差分析，p＜0.05为差异有统计学意义。

结果：

熊果酸热板镇痛实验结果表1

注：*为组内给药后不同时间与给药前比较，P＜0.05

讨论：

热板法早在50年前就用于疼痛和镇痛的研究中，是筛选中枢性镇痛药物的常用方法，它是一种物理性致痛方法，该法装置简单，指标明确，对组织损伤性小，并且痛反应潜伏时间较长，便于观察及测出药物之间的较小差异，以利于比较药物镇痛作用的强弱、快慢及持续时间。多年的研究表明，凡在临床上对急性疼痛显示良好效果的镇痛剂，在热板法试验中都可明显延长动物的反应时间。热板法对镇痛药有很强的特异性，镇定剂或肌松剂等其他影响运动功能的药物对动物痛反应潜伏时间并无作用。因此，热板法是一个较理想的筛选镇痛药的疼痛模型。

本实验结果如表1，将给药前的舔足潜伏期作为对照，可以看到各剂量组的痛阈值相对于对照组而言都有所增加，显示该药有一定镇痛效果。从表1可以看出安通定镇痛作用在给药后10min最强，随后呈下降趋势。熊果酸高、中、低剂量组在给药10分钟后均出现不同程度的镇痛效应，舔足潜伏期延长，并随给药时间延长痛阈值亦提高，且高剂量组痛阈值提高最明显，在60min到达高峰，随后下降，镇痛效应较大。

结论：

高、中、低剂量的熊果酸均具有镇痛作用，高剂量组作用最强，且在给药后60分钟镇痛作用最强。

实施例2：熊果酸镇痛醋酸扭体实验

材料和方法

试剂：熊果酸纳米脂质体(90.6％)，复方氨林巴比妥注射液(天津金耀氨基酸有限公司，国药准字H12021217)，1％冰醋酸(自制，99％冰醋酸加重蒸水制得)，500mL生理盐水溶液(中国大冢制药有限公司，国药准字H1202006)，苦味酸，三蒸水(自制)，无水乙醇(分析纯，天津市滨海私迪化学试剂有限公司)。取熊果酸纳米脂质体冻干粉针剂，每瓶加入适量的注射用水，至完全溶解，备用。

仪器：秒表，501型超级恒温仪(上海市上海县第二五金厂)，透明玻璃罩，1mL注射器(上海米沙瓦医科工业有限公司)，1μL注射器，L D电子天平(沈阳龙腾电子有限公司)，石英双重纯水蒸馏器(江苏省金坛市正基仪器有限公司)。

动物：小鼠18-22g共100只，随机分为5组，分别为熊果酸纳米脂质体13.5mg/kg，18mg/kg剂量组，UA原料药组，安痛定的组，生理盐水组。

实验方法：取体重18-22g健康小鼠100只，随机分为5组(生理盐水组，熊果酸纳米脂质体13.5mg/kg组，熊果酸纳米脂质体18mg/kg组，，UA原料药组安痛定组)，每组20只。连续给药三天，给药方式为腹腔注射，第三天给药后40分钟即对小鼠腹腔注射1％醋酸溶液，并立即观察和记录20分钟内小鼠扭体的次数，计算扭体抑制率。抑制率＝(阴性对照平均扭体次数一实验组平均扭体次数)/阴性对照平均扭体次×100％。记录一次扭体的标准是小鼠身体拉长，腹部肌肉张力增高，前肢伸展，并伴有一侧或两侧后肢伸直保持，温度在20度左右。统计学处理采用spss11.0统计软件进行分析，计数资料以均数±标准差来表示，组间比较采用单因素方差分析，p＜0.05为差异有统计学意义。

实验结果：

表2：熊果酸镇痛实验醋酸扭体扭体次数和抑制率

注：*与阴性对照生理盐水组比较，P＜0.05

讨论：

扭体法为化学性刺激法，主要看外周性疼痛，其特点是镇痛作用较弱，但缺乏特异性。腹腔注射1％的醋酸后，醋酸中电离出的微量H+可引起腹腔深部大面积而较持久的炎性疼痛刺激，致使小鼠产生扭体反应，本法较敏感、简便且重复性好。本实验使用小鼠醋酸扭体法，旨在进一步证实熊果酸纳米脂质体的镇痛作用，由于小鼠在低温下对疼痛反应敏感度降低，为保持实验结果准确性，在进行此实验时也应保持实验室温度在20℃。醋酸扭体实验是一个很好的镇痛模型，它症状明显，易于观察，我们的实验数据显示UA原料药，熊果酸纳米脂质体13.5mg/kg，19mg/kg时效果明显，加入生理盐水对照组和安痛定对照组来看熊果酸是否具有镇痛效应。由表2可以看出UA原料药，熊果酸纳米脂质体低剂量，熊果酸纳米脂质体高剂量组均比生理盐水对照组抑制率高，说明熊果酸具有一定的镇痛效果，但与安痛定对照组相比抑制率低，扭体抑制率从低剂量到高剂量呈上升趋势，所以镇痛效应与试药浓度呈正相关。

结论：

低剂量和高剂量的熊果酸具有一定的镇痛效果，但较安痛定镇痛作用低。

实施例3：熊果酸福尔马林实验

材料方法

实验试剂：熊果酸纳米脂质体(90.6％)，复方氨林巴比妥注射液(天津金耀氨基酸有限公司，国药准字H12021217)，1500mL生理氯化钠溶液(中国大冢制药有限公司，国药准字H1202006)，苦味酸，三蒸水(自制)，无水乙醇(分析纯，天津市滨海私迪化学试剂有限公司)，福尔马林动物和分组：健康成年雌性小鼠60只，体重18-22g，光照良好，食物和水充足。随机分为6组，分别为生理盐水组，UA原料药，熊果酸纳米脂质体9mg/kg，13.5mg/kg，18mg/kg剂量组，安痛定对照组。取熊果酸纳米脂质体冻干粉针剂，每瓶加入适量的注射用水，至完全溶解，备用。

模型制备：按不同剂量对小鼠腹腔注射生理盐水、UA原料药、熊果酸纳米脂质体、安痛定溶液，四十分钟后小鼠右后足趾部皮下注射4％福尔马林溶液0.02m l放入一透明容器进行观察，分别记录小鼠抬腿，抖足的次数，前五分钟为第一时相，后三十五分钟为第二时相，共记录40分钟，统计学处理计量数据以均数士标准差(x±s)表示，用spss11.0进行组间t检验。

结果

表3：福尔马林实验结果(x±s)

注：*组内给药前后比较，P＜0.05，有统计学差异。

小鼠足底注射福尔马林溶液后抬腿抖足明显分为两个阶段，前5分钟为第一时相，此阶段小鼠反应强烈，注射后立即观察到抬腿抖足的现象，在接下来10分钟处于静息阶段，此阶段小鼠处于安静状态，活动减少，没有抬腿抖足现象，后25分钟小鼠重新开始抬腿抖足，此为第二时相。非注射足并没有抬腿抖足，行为正常，说明造模成功。各组行为学比较见表3，由表3可见第一时相内各组小鼠抬腿抖足次数的变化，给药组相对于生理盐水组，次数均减少，并且随着剂量增高，抬腿抖足次数也相应下降，呈剂量依赖。统计学分析安痛定组和生理盐水组有差异但其他各组于生理盐水组比较无统计学差异，说明熊果酸对于急性疼痛的作用不明显。第二时相表3中安痛定、UA原料药和熊果酸纳米脂质体中、高剂量组相对于生理盐水组具有统计学差异，说明熊果酸和安痛定显示出同样的镇痛作用。

讨论：

福尔马林实验最先由Dubuisson和Dennis报道，目前已广泛地应用于痛行为、痛生理及病理等研究。是目前国内外已公认的、较短期机械或热刺激更为可靠的动物疼痛模型。本实验发现小鼠注射福尔马林后，注射足表现出缩腿、颤抖等反应，福尔马林对照组对伤害性刺激的行为学反应的表现分为两个不同的阶段，其间的间歇期，与国内外试验相符，本实验中我们可以观察到UA原料药和熊果酸纳米脂质体中、高剂量组在第一时相中与对照组相比没有统计学差异，而在第二时相中抬腿抖足次数和对照组比较具有差异，并且可看出和安痛定相似，由此可以推断熊果酸对于急性疼痛作用较小，但在炎症等引起的炎性疼痛中可能会具有一定的抑制效果，对疼痛有一定程度的减缓，并且镇痛效果和剂量具有相关性，随着剂量的增高镇痛效果也相应增强。

结论：

中高剂量的熊果酸具有一定的镇痛效果，可对炎性疼痛有一定抑制。

实施例4：熊果酸纳米脂质体生存期实验-熊果酸对H₂₂肝癌腹水瘤小鼠生存期影响

材料与方法

材料：熊果酸纳米脂质体(90.6％)，复方氨林巴比妥注射液(天津金耀氨基酸有限公司，国药准字H12021217)，500mL生理氯化钠溶液(中国大冢制药有限公司，国药准字H1202006)，苦味酸，三蒸水(自制)，无水乙醇(分析纯，天津市滨海私迪化学试剂有限公司)，顺铂注射液，H₂₂肝癌细胞瘤株(天津市医药科学研究所提供)。取熊果酸纳米脂质体冻干粉针剂，每瓶加入适量的注射用水，至完全溶解，备用。

动物：健康昆明鼠60只，体重18-22g，雌雄各半，恒温饲养，光照良好，食物和水充足。

模型制备：小鼠腹水明显后，酒精消毒小鼠腹部，无菌条件下抽取腹水2ml后离心5分钟，以1000r/min，弃上清液后加入生理盐水冲洗再离心，细胞计数，用生理盐水调节细胞浓度到5×105个/ml，每只小鼠腹部消毒后，腹腔注射细胞悬液0.2ml，共接种60只。

给药：接种后将模型小鼠随机分6组，每组10只，雌雄各半，生理盐水组，UA原料药组，熊果酸纳米脂质体低剂量组(9mg/kg)，中剂量组(18mg/kg)，高剂量组(27mg/kg)，顺铂组(1.5mg/kg)于造模后第二天开始腹腔注射给药，连续给药10天，观察活动状态，给药结束后记录小鼠死亡时间。计算生存期延长率，延长率＝(对照组死亡天数-给药组死亡天数)/对照组死亡天数×100％。统计学处理计量数据以均数士标准差(x±s)表示，用spss11.0进行组间t检验。

结果

表4：熊果酸纳米脂质体生存期实验结果(x±s )

注：与生理盐水对照组比较，*P＜0.05

各组小鼠的生存期分别为13.1±8.376、24.1±8.644、22.6±8.356、23.7±9.542、23.2±13.766、25.0±12.566。用统计学软件统计得到各组与生理盐水组有统计学差异，可知熊果酸对H22肝癌腹水小鼠生存期的延长作用。

讨论：

临床上，癌性腹腔积液是晚期肝癌常见的并发症，它的产生直接影响癌症患者的生存期。生存期实验是一个综合性的评价指标，它对于患者的影响是各方面影响因素综合。本发明采用H₂₂细胞腹腔接种而建立H₂₂肝癌腹水模型，对照组在接种后活动能力下降，进食减少，其他各组接种后也出现活动减少现象，但在给药10天后活动能力有所恢复，进食增多，表中可以看到UA原料药，熊果酸纳米脂质体低、中、高剂量组对于生理盐水组生存天数都具有统计学差异，说明熊果酸可以延长腹水小鼠的生存期，UA原料药和果酸纳米脂质体中剂量组生存时间相对其余熊果酸纳米脂质体组较长，可以推断配制的UA原料药和熊果酸中剂量可以取得最大药效，高剂量组生存时间相对中剂量下降的原因可能是剂量过高，对小鼠产生了一定的毒性反应而导致的。顺铂对照组生存时间最长，熊果酸延长生存期的效果比顺铂弱。生存期的延长是由多种因素造成，疼痛的缓解是其中的一部分，熊果酸具有延长生存期的作用证实了其具有抗肿瘤活性的同时可能还具有其他对生存期延长的作用，例如镇痛效果，对于以后临床使用具有参考价值。

结论：

应用熊果酸可以显著提高实验小鼠的生存期，提高生存质量。

Claims

1.一种熊果酸的医学新用途，其特征在于：熊果酸在制备镇痛药物方面的应用。

2.根据权利要求1所述的熊果酸的医学新用途，其特征在于：所述制备镇痛药物是熊果酸在医学上的制剂。

3.根据权利要求1或2所述的熊果酸的医学新用途，其特征在于：所述制备镇痛药物的原料是熊果酸纳米脂质体。