CN102628068B - b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法，它包括以下步骤：Hib菌种一至四代传代培养，种子罐培养，发酵罐发酵培养，杀菌、取上清液和纯化。本发明的有益效果是：（1）培养Hib细菌达到较高的浓度，使Hib荚膜多糖的产量在传统方式的基础上提高了50%～100%，且生产出的荚膜多糖符合国家质量标准；（2）将发酵液中的核酸和蛋白等杂质含量控制在低水平，较低的蛋白含量减少了苯酚抽提去除杂质蛋白的次数，从而降低了后续纯化过程中的苯酚用量，减少了对环境的污染，也降低了生产成本；（3）多糖产量稳定，纯化后的精糖蛋白和内毒素等杂质含量都大大低于国家控制的标准。
Description
技术领域
本发明涉及一种b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法。
背景技术
如今，流感嗜血杆菌(Haemophilus Influenzae，Hi)仍是导致人类侵袭性疾病的主要致病菌，其中绝大部分由b型流感嗜血杆菌(Haemophi lus Influenzae type b，Hib)引起。Hib脑膜炎的危害居细菌性脑膜炎的首位，具有发病率高、病死率高和致残率高的特点；其另一个特点是发病年龄小，婴幼儿感染率高，发病年龄主要集中在5岁以下，尤其是2岁以下。据2006年世界卫生组织(WHO)报道，每年全世界Hib脑膜炎至少造成300万例严重疾病，其中约38.6万人死亡，已成为全球性的一大公共卫生问题。在发展中国家，Hib肺炎在儿童感染性疾病中占有很大比例，约占所有儿童肺炎的20％，是发展中国家儿童肺炎的重要死亡原因。在亚洲22个国家的48项研究中，有2/3表明Hib是儿童非结核性脑膜炎的首要致病原。
我国3～5岁儿童中Hib自然感染抗体水平低，为Hib感染高危人群。因此，我国有使用Hib疫苗的必要。
接种疫苗是预防绝大多数Hib严重病例的唯一公共卫生措施。第一种Hib多糖疫苗于1985年4月在美国上市，这种疫苗适用于2～5岁的儿童。流行病学调查表明：6月龄前儿童就需要保护，然而，对于小于18月龄的儿童，这种采用PRP的疫苗的有效率为零，这成为该疫苗使用上的最大障碍和不足。
结合疫苗的研制成功解决了疫苗在婴幼儿中无效的问题，结合疫苗比以往的疫苗具有更强的免疫原性和更好的免疫效果。结合疫苗于1987年投放市场，针对18月龄以上儿童。在随后几年间，三种新的疫苗很快面市，采用了不同的蛋白作为结合蛋白。这些新疫苗在婴幼儿中非常有效。即使在小年龄婴儿中使用Hib疫苗，也是安全有效的。
上世纪90年代初，西欧、美洲等国家将Hib结合疫苗纳入常规儿童免疫规划，Hib侵袭性疾病的发病率迅速降低，甚至消失。目前，世界卫生组织(WHO)正致力于推动将其纳入其它国家的计划免疫程序中。至2004年，全球已有包括美洲、欧洲大部分地区和澳洲在内的94个国家将Hib疫苗纳入儿童免疫计划，另有15个国家在全球疫苗与免疫联盟(GAVI)的资助下使用这种疫苗，占全球所有国家和地区使用量的一半。至2007年，已经有112个国家纳入Hib疫苗计划免疫，3个国家部分纳入Hib疫苗。但在人口占世界1/2的亚洲，只有少数几个国家，如马来西亚和蒙古(GAVI资助)等将Hib疫苗纳入了计划免疫中。我国由于缺乏系统的Hib疾病流行病学资料，Hib疫苗尚未纳入中国计划免疫的范围。仅有部分城市开始推广使用Hib疫苗并获得了较好的效果。在农村和城市中低收入家庭，由于疫苗价格较高，限制了疫苗的普及。
制备Hib结合疫苗首先要获得Hib荚膜多糖，目前大规模生产Hib荚膜多糖的方法主要是通过发酵罐搅拌及深层通气的方式培养，当Hib细菌至对数生长期后期或静止期前期时，使用甲醛杀菌后去除菌体，收集发酵液上清液，再经后续一系列纯化工序后获得高纯度的Hib荚膜多糖。传统生产方式的Hib荚膜多糖产率较低，疫苗生产过程中的成本较高，这也是使Hib疫苗价格居高的其中一个原因。同时，由于Hib发酵液中含有较多的核酸及蛋白等杂质成分，增加了后续纯化的难度，为了获得高纯度的Hib荚膜多糖，只能增加纯化的工序，更进一步降低了Hib荚膜多糖的收率，使产量进一步下降。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种有效降低发酵液中核酸和蛋白等杂质含量、降低去除杂质蛋白所需的苯酚用量的、Hib荚膜多糖产量高的b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法，它包括以下步骤：
(1)Hib菌种一至四代传代培养，它包括以下传代培养步骤：
A、第一代培养：开启Hib菌种传代至5～10mlHib液体培养基，放入恒温摇床振荡培养16～20h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35～37℃、回旋频率为250～330rpm；
B、第二代培养：将第一代培养所得的Hib菌种接种到10～20mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养6～8h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35～37℃、回旋频率为250～330rpm；
C、第三代培养：将第二代培养所得的Hib菌种接种到20～50mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养6～8h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35～37℃、回旋频率为250～330rpm；
D、第四代培养：将第三代培养所得的Hib菌种接种到500～1000mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养，直到培养基中菌浓度达到100～200亿/ml，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35～37℃、回旋频率为250～330rpm；
(2)种子罐培养：将第四代培养所得的Hib菌种接种到种子罐中，恒温搅拌通气培养，直到菌浓度达到200～300亿/ml，其中，恒温搅拌通气培养的温度为35～37℃、搅拌频率为100～200rpm；
(3)发酵罐培养：将在种子罐中培养所得的Hib菌种接种到发酵罐中，恒温搅拌通气培养，在此过程中向发酵罐中补加浓度为10％的葡萄糖溶液，至Hib细菌至对数生长期后期或静止期前期，菌浓度达到300～400亿/ml时停止搅拌培养，其中，恒温搅拌通气培养的温度为35～37℃、搅拌频率为200～300rpm；
(4)杀菌、取上清液：向发酵罐中加入甲醛溶液至甲醛终浓度为1～2％进行杀菌，待杀菌完成后，取发酵液上清液；
(5)纯化：对上清液进行纯化处理，获得b型流感嗜血杆菌荚膜多糖成品。
本发明所述的Hib液体培养基包括以下重量比的组分：胰蛋白胨10～20，酸水解酪蛋白5～15，酵母提取物5～30，氯化钠2～8.5，葡萄糖5～20，氯化血红素0.01～0.03，辅酶I 0.01～0.03。
本发明的有益效果是：
(1)培养Hib细菌达到较高的浓度，使Hib荚膜多糖的产量在传统方式的基础上提高了50％～100％，且生产出的荚膜多糖符合国家质量标准；
(2)将发酵液中的核酸和蛋白等杂质含量控制在低水平，较低的蛋白含量减少了苯酚抽提去除杂质蛋白的次数，从而降低了后续纯化过程中的苯酚用量，减少了对环境的污染，也降低了生产成本；
(3)多糖产量稳定，纯化后的精糖蛋白和内毒素等杂质含量都大大低于国家控制的标准，并且得到的多批多糖原液各项检定结果稳定，重复性很高，可操作性强，有利于大规模生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步描述本发明的技术方案：
【实施例1】b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法，它包括以下步骤：
(1)Hib菌种一至四代传代培养，它包括以下传代培养步骤：
A、第一代培养：开启Hib菌种传代至5mlHib液体培养基，放入恒温摇床振荡培养16h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35℃、回旋频率为250rpm；
B、第二代培养：将第一代培养所得的Hib菌种接种到10mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养6h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35℃、回旋频率为250rpm；
C、第三代培养：将第二代培养所得的Hib菌种接种到20mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养6h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35℃、回旋频率为250rpm；
D、第四代培养：将第三代培养所得的Hib菌种接种到500mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养，直到培养基中菌浓度达到100亿/ml，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35℃、回旋频率为250rpm；
其中，所述的Hib液体培养基包括以下重量比的组分：胰蛋白胨10，酸水解酪蛋白5，酵母提取物5，氯化钠2，葡萄糖5，氯化血红素0.01，辅酶I0.01。
(2)种子罐培养：将第四代培养所得的Hib菌种接种到种子罐中，恒温搅拌通气培养，直到菌浓度达到200亿/ml，其中，恒温搅拌通气培养的温度为35℃、搅拌频率为100rpm；
(3)发酵罐培养：将在种子罐中培养所得的Hib菌种接种到发酵罐中，恒温搅拌通气培养，在此过程中向发酵罐中补加浓度为10％的葡萄糖溶液，至Hib细菌至对数生长期后期或静止期前期，菌浓度达到300亿/ml时停止搅拌培养，其中，恒温搅拌通气培养的温度为35℃、搅拌频率为200rpm；
(4)杀菌、取上清液：向发酵罐中加入甲醛溶液至甲醛终浓度为1％进行杀菌，待杀菌完成后，取发酵液上清液；
(5)纯化：对上清液进行纯化处理，获得b型流感嗜血杆菌荚膜多糖成品。
【实施例2】b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法，它包括以下步骤：
(1)Hib菌种一至四代传代培养，它包括以下传代培养步骤：
A、第一代培养：开启Hib菌种传代至10mlHib液体培养基，放入恒温摇床振荡培养20h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为37℃、回旋频率为330rpm；
B、第二代培养：将第一代培养所得的Hib菌种接种到20mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养8h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为37℃、回旋频率为330rpm；
C、第三代培养：将第二代培养所得的Hib菌种接种到50mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养8h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为37℃、回旋频率为330rpm；
D、第四代培养：将第三代培养所得的Hib菌种接种到1000mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养，直到培养基中菌浓度达到200亿/ml，其中，恒温摇床振荡培养的温度为37℃、回旋频率为330rpm；
其中，所述的Hib液体培养基包括以下重量比的组分：胰蛋白胨20，酸水解酪蛋白15，酵母提取物30，氯化钠8.5，葡萄糖20，氯化血红素0.03，辅酶I 0.03。
(2)种子罐培养：将第四代培养所得的Hib菌种接种到种子罐中，恒温搅拌通气培养，直到菌浓度达到300亿/ml，其中，恒温搅拌通气培养的温度为37℃、搅拌频率为200rpm；
(3)发酵罐培养：将在种子罐中培养所得的Hib菌种接种到发酵罐中，恒温搅拌通气培养，在此过程中向发酵罐中补加浓度为10％的葡萄糖溶液，至Hib细菌至对数生长期后期或静止期前期，菌浓度达到400亿/ml时停止搅拌培养，其中，恒温搅拌通气培养的温度为37℃、搅拌频率为300rpm；
(4)杀菌、取上清液：向发酵罐中加入甲醛溶液至甲醛终浓度为2％进行杀菌，待杀菌完成后，取发酵液上清液；
(5)纯化：对上清液进行纯化处理，获得b型流感嗜血杆菌荚膜多糖成品。
【实施例3】b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法，它包括以下步骤：
(1)Hib菌种一至四代传代培养，它包括以下传代培养步骤：
A、第一代培养：开启Hib菌种传代至8mlHib液体培养基，放入恒温摇床振荡培养18h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为36℃、回旋频率为290rpm；
B、第二代培养：将第一代培养所得的Hib菌种接种到15mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养7h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为36℃、回旋频率为290rpm；
C、第三代培养：将第二代培养所得的Hib菌种接种到35mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养7h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为36℃、回旋频率为290rpm；
D、第四代培养：将第三代培养所得的Hib菌种接种到750mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养，直到培养基中菌浓度达到150亿/ml，其中，恒温摇床振荡培养的温度为36℃、回旋频率为290rpm；
其中，所述的Hib液体培养基包括以下重量比的组分：胰蛋白胨15，酸水解酪蛋白10，酵母提取物18，氯化钠5，葡萄糖12，氯化血红素0.02，辅酶I 0.02。
(2)种子罐培养：将第四代培养所得的Hib菌种接种到种子罐中，恒温搅拌通气培养，直到菌浓度达到250亿/ml，其中，恒温搅拌通气培养的温度为36℃、搅拌频率为150rpm；
(3)发酵罐培养：将在种子罐中培养所得的Hib菌种接种到发酵罐中，恒温搅拌通气培养，在此过程中向发酵罐中补加浓度为10％的葡萄糖溶液，至Hib细菌至对数生长期后期或静止期前期，菌浓度达到350亿/ml时停止搅拌培养，其中，恒温搅拌通气培养的温度为36℃、搅拌频率为250rpm；
(4)杀菌、取上清液：向发酵罐中加入甲醛溶液至甲醛终浓度为1.5％进行杀菌，待杀菌完成后，取发酵液上清液；
(5)纯化：对上清液进行纯化处理，获得b型流感嗜血杆菌荚膜多糖成品。
【实施例4】b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法，它包括以下步骤：
(1)Hib菌种一至四代传代培养，它包括以下传代培养步骤：
A、第一代培养：开启Hib菌种传代至5mlHib液体培养基，放入恒温摇床振荡培养20h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为37℃、回旋频率为300rpm；
B、第二代培养：将第一代培养所得的Hib菌种接种到10mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养7h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为37℃、回旋频率为300rpm；
C、第三代培养：将第二代培养所得的Hib菌种接种到20mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养7h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为37℃、回旋频率为300rpm；
D、第四代培养：将第三代培养所得的Hib菌种接种到500mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养，直到培养基中菌浓度达到150亿/ml，其中，恒温摇床振荡培养的温度为37℃、回旋频率为300rpm；
其中，所述的Hib液体培养基包括以下重量比的组分：胰蛋白胨10，酸水解酪蛋白10，酵母提取物15，氯化钠6，葡萄糖10，氯化血红素0.02，辅酶I 0.02。
(2)种子罐培养：将第四代培养所得的Hib菌种接种到种子罐中，恒温搅拌通气培养，直到菌浓度达到200亿/ml，其中，恒温搅拌通气培养的温度为37℃、搅拌频率为200rpm；
(3)发酵罐培养：将在种子罐中培养所得的Hib菌种接种到发酵罐中，恒温搅拌通气培养，在此过程中向发酵罐中补加浓度为10％的葡萄糖溶液，至Hib细菌至对数生长期后期或静止期前期，菌浓度达到400亿/ml时停止搅拌培养，其中，恒温搅拌通气培养的温度为37℃、搅拌频率为300rpm；
(4)杀菌、取上清液：向发酵罐中加入甲醛溶液至甲醛终浓度为1.5％进行杀菌，待杀菌完成后，取发酵液上清液；
(5)纯化：对上清液进行纯化处理，获得b型流感嗜血杆菌荚膜多糖成品。
【实施例5】b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法，它包括以下步骤：
(1)Hib菌种一至四代传代培养，它包括以下传代培养步骤：
A、第一代培养：开启Hib菌种传代至10mlHib液体培养基，放入恒温摇床振荡培养18h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为37℃、回旋频率为280rpm；
B、第二代培养：将第一代培养所得的Hib菌种接种到20mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养8h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为37℃、回旋频率为280rpm；
C、第三代培养：将第二代培养所得的Hib菌种接种到50mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养8h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为37℃、回旋频率为280rpm；
D、第四代培养：将第三代培养所得的Hib菌种接种到1000mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养，直到培养基中菌浓度达到200亿/ml，其中，恒温摇床振荡培养的温度为37℃、回旋频率为280rpm；
其中，所述的Hib液体培养基包括以下重量比的组分：胰蛋白胨20，酸水解酪蛋白15，酵母提取物5，氯化钠2，葡萄糖5，氯化血红素0.03，辅酶I 0.03。
(2)种子罐培养：将第四代培养所得的Hib菌种接种到种子罐中，恒温搅拌通气培养，直到菌浓度达到250亿/ml，其中，恒温搅拌通气培养的温度为37℃、搅拌频率为180rpm；
(3)发酵罐培养：将在种子罐中培养所得的Hib菌种接种到发酵罐中，恒温搅拌通气培养，在此过程中向发酵罐中补加浓度为10％的葡萄糖溶液，至Hib细菌至对数生长期后期或静止期前期，菌浓度达到400亿/ml时停止搅拌培养，其中，恒温搅拌通气培养的温度为36.5℃、搅拌频率为300rpm；
(4)杀菌、取上清液：向发酵罐中加入甲醛溶液至甲醛终浓度为2％进行杀菌，待杀菌完成后，取发酵液上清液；
(5)纯化：对上清液进行纯化处理，获得b型流感嗜血杆菌荚膜多糖成品。
制备三批，按药典方法检测其中蛋白、核酸、核糖、磷及内毒素含量，所得结果如下表所示：
经过各项检定表面，蛋白、核酸、核糖、磷和内霉素的含量均符合国家标准，得到的三批Hib荚膜多糖均符合药典要求。计算多糖产量发现，通过本方法得到的荚膜多糖产量在0.4g/L左右，与传统生产方法0.2g/L的产量相比，有了较大的提高。
Claims (1)
1.b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法，其特征在于：它包括以下步骤：
（1）Hib菌种一至四代传代培养，它包括以下传代培养步骤：
A、第一代培养：开启Hib菌种传代至5～10mlHib液体培养基，放入恒温摇床振荡培养16～20h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35～37℃、回旋频率为250～330rpm；
B、第二代培养：将第一代培养所得的Hib菌种接种到10～20mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养6～8h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35～37℃、回旋频率为250～330rpm；
C、第三代培养：将第二代培养所得的Hib菌种接种到20～50mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养6～8h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35～37℃、回旋频率为250～330rpm；
D、第四代培养：将第三代培养所得的Hib菌种接种到500～1000mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养，直到培养基中菌浓度达到100～200亿/ml，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35～37℃、回旋频率为250～330rpm；
（2）种子罐培养：将第四代培养所得的Hib菌种接种到种子罐中，恒温搅拌通气培养，直到菌浓度达到200～300亿/ml，其中，恒温搅拌通气培养的温度为35～37℃、搅拌频率为100～200rpm；
（3）发酵罐培养：将在种子罐中培养所得的Hib菌种接种到发酵罐中，恒温搅拌通气培养，在此过程中向发酵罐中补加浓度为10%的葡萄糖溶液，至Hib细菌至对数生长期后期或静止期前期，菌浓度达到300～400亿/ml时停止搅拌培养，其中，恒温搅拌通气培养的温度为35～37℃、搅拌频率为200～300rpm；
（4）杀菌、取上清液：向发酵罐中加入甲醛溶液至甲醛终浓度为1～2%进行杀菌，待杀菌完成后，取发酵液上清液；
（5）纯化：对上清液进行纯化处理，获得b型流感嗜血杆菌荚膜多糖成品；
其中，所述的Hib液体培养基包括以下重量比的组分：胰蛋白胨10～20，酸水解酪蛋白5～15，酵母提取物5～30，氯化钠2～8.5，葡萄糖5～20，氯化血红素0.01～0.03，辅酶I 0.01～0.03。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2624014C1 (ru) * | 2016-04-08 | 2017-06-30 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Штамм haemophilus influenzae spb тип в - высокоактивный продуцент капсульного полисахарида полирибозилрибитолфосфата |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106191164A (zh) * | 2016-08-02 | 2016-12-07 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | 一种c群脑膜炎球菌高密度产糖的方法 |
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Family Cites Families (3)
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| CN101724085B (zh) * | 2008-10-22 | 2011-09-21 | 上海生物制品研究所 | 一种荚膜多糖纯化方法 |
-
2012
- 2012-04-23 CN CN 201210121314 patent/CN102628068B/zh active Active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2624014C1 (ru) * | 2016-04-08 | 2017-06-30 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Штамм haemophilus influenzae spb тип в - высокоактивный продуцент капсульного полисахарида полирибозилрибитолфосфата |
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Legal Events
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
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| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Li Jing Inventor after: Guan Xiaofeng Inventor after: Zhu Chong Inventor after: Wei Xin Inventor after: Li Xiaobing Inventor after: Yang Yonghua Inventor after: Ma Hengjun Inventor after: Zhang Liying Inventor before: Li Jing Inventor before: Guan Xiaofeng Inventor before: Zhu Chong Inventor before: Wei Xin Inventor before: Li Xiaobing Inventor before: Yang Yonghua |
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| CB03 | Change of inventor or designer information |