CN102612653A - 检测淀粉样蛋白β肽的新测定 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种检测Aβ肽，特别是血浆中的Aβ肽的新方法，并且涉及Aβ肽在诊断阿尔茨海默病中的用途。
Description
本发明大体涉及使用Aβ(1-40)作为生物标记(biomarker)来检测和诊断阿尔茨海默病，并且还涉及检测生物学样品中的Aβ(1-40)的新方法。
背景技术
阿尔茨海默病是痴呆的最常见形式，并且具有在所有痴呆病症中约65-70%的流行程度。由增加的预期寿命所致，这种疾病在诸如日本和中国的高度发达的工业化国家以及美国和欧洲已成为特别的问题。阿尔茨海默病患者的数量估计从2001年的2.4×107增加至2040年的8.1×107(Ferri et al.,2005)。目前，全世界用于AD患者的治疗和护理的费用总计每年约2.5×1011美元。
该疾病的发展相对缓慢，并且在首发症状发生后阿尔茨海默病通常会持续10-12年。目前，进行AD的可靠和早期诊断并将其与痴呆的其他形式区分是非常困难的。具有超过90%可靠性的良好诊断仅在该疾病的较晚阶段是可能的。在此之前，仅可能作出阿尔茨海默病是可能或很可能的预测；这里诊断依赖于使用Knopman et al.,2001;Waldemar et al.,2007或Dubois et al.,2007的某些标准。但是神经变性在注意到首发临床症状之前20-30年开始(Blennow et al.,2006;Jellinger KA,2007)。临床期的发生通常特征在于所谓的“轻度认知障碍”(MCI)，其中患者会表现出可测量的认知缺陷，所述认知缺陷不足以使得能够以明确的方式诊断痴呆疾病(Petersen etal.,1999;Chetkow et al.,2008)。许多患有MCI的患者会具有神经病理变化，所述神经病理变化对于AD是典型的，并且意味着AD的较早阶段是可能的，但不确定(Scheff et al.,2006;Markesbery et al.,2006;Bouwman et al.,2007)。但是有许多MCI病例不会发展为阿尔茨海默病；在这些病例中，其他因素导致认知缺陷(Saito et al.,2007;Jicha et al.,2006和Petersen et al.,2006)。虽然一些MCI患者不会表现出他们的疾病状况的任何恶化或者甚至一些改善，但是对于大多数MCI病例，认知缺陷会持续至临床痴呆。这种转化的年增长率为约10-19%(Gauthier et al.,2006;Fischer et al.,2007)。目前有临床方法、神经心理学方法和成像方法的组合，其能够区分轻度认知障碍的各种亚型(Devanand et al.,2007;Rossi et al.,2007;Whitwell et al.,2007;Panza et al.,2007)。但是，关于痴呆的进一步发展，这些亚型之间没有显著差异(Fischer et al.,2007)。因此，开发方法以使能够在早期，优选在阿尔茨海默病发作或MCI期间明确和可靠地诊断阿尔茨海默病是至关重要的。
现有技术生物标记
阿尔茨海默病的生物标记已在现有技术中描述。除了公知的心理测试，例如ADAS-cog、MMSE、DemTect、SKT或Clock Drawing测试，据认为生物标记提高首次诊断以及监控疾病发展的诊断灵敏度和特异性。关于开发AD/MCI的生物标记的目前状态，据建议使未来的疾病与其他诊断标准关联(Whitwell et al.,2007;Panza et al.,2007;Hyman SE,2007)。据认为生物标记在未来支持或代替传统的神经心理测试。普遍相信作为开发抗阿尔茨海默病剂的替代标记，它们会非常重要(Blennow K,2004;Blennow K,2005;Hampel et al.,2006;Lewczuk et al.,2006;Irizarry MC,2004)。
结构生物标记
“磁共振成像”(MRI)是允许检测脑中的变性萎缩的成像方法(Barnes Jet al.,2007;Vemuri et al.,2008)。因此，内侧颞叶萎缩(MTA)对老年患者脑中海马区的变性敏感；通过MRI可以使其非常清楚可见，但并不是阿尔茨海默病特异性的。轻度MTA在其他痴呆中没有更频繁地遇到(Barkhof et al.,2007)，但是其的确与MCI相关(Mevel et al.,2007)。因为这个原因，不可能仅从MRI数据确定神经变性是否为阿尔茨海默病或阿尔茨海默病早期。另一成像方法为正电子成像术(PET)，其使得淀粉样蛋白沉积上的检测分子(PIB)的积累可视。已检测到硫黄素T-类似物(11C)PIB在分别患有MCI或轻度阿尔茨海默病的患者的脑的某些区域中积累(Kemppainen et al.,2007;Klunk et al.,2004;Rowe et al.,2007)。但是，其在未表现出痴呆的症状的个体中也可检测(Pike et al.,2007)。反过来，这可能表明通过PET检测淀粉样蛋白沉积允许检测阿尔茨海默病的临床前阶段；如果这种现象在进一步研究中被证实。除了最常用的方法MRI和PET，已知有阿尔茨海默病的其他结构生物标记：CBF-SPECT、CMRg1-PET(葡萄糖代谢质子能谱学(H-1MRS)、高场强功能MRI、基于体素的形态计量法、内侧基底颞叶的增强活化(通过fMRI检测)、用于检测小胶质细胞的(R)-[(11)C]PK11195PET(Huanget al.,2007;Kantarci et al.,2007;Petrella et al.,2007;Hamalainen et al.,2007;Kircher et al.,2007;Kropholler et al.,2007)。
CSF生物标记
老年斑是阿尔茨海默病的病理特征之一。这些斑块大部分由Aβ(1-42)肽组成(Attems J,2005)。在一些研究中可以显示MCI患者的CSF中低水平的Aβ(1-42)特异性地与阿尔茨海默病的发展相关(Blennow and Hampel,2003;Hansson et al.,2006and 2007)。在CSF中的减少可能是由于脑中增加的Aβ(1-42)聚集(Fagan et al.,2006;Prince et al.,2004;Strozyk et al.,2003)。另一可能的解释是半可溶性Aβ(1-42)寡聚体的出现(Walsh et al.,2005)，其会导致CSF中较低水平的检测。特别是在阿尔茨海默病的早期，会检测到降低的Aβ(1-42)浓度，同时可以分别检测到CSF中增加的Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白的量(Ewers et al.,2007;Lewczuk et al.,2004)。为了提供更好的生物标记的可预测性，通常试图使用Tau/Aβ(1-42)比例，并且使其与没有痴呆的老年人(Fagan et al.,2007;Gustafson et al.,2007;Hansson et al.,2007;Liet al.,2007;Stomrud et al.,2007)以及MCI患者(Hampel et al.,2004;Maccioniet al.,2006;
et al.,2007)的认知缺陷的预测相关。在AD患者中检测到脑的Aβ(1-42)的死前CSF水平、Tau、磷酸化Tau-Thr231与死后组织病理学变化之间的进一步相关性(Clark et al.,2003;Buerger et al.,2006)。然而，在其他研究中，没有检测到CSF生物标记与Aβ(1-42)之间、伴APOEε4-等位基因的总Tau与磷酸化Tau之间、尸体解剖后斑块与缠结负荷之间的相关性(Engelborghs et al.,2007;Buerger et al.,2007)。在多中心研究中检测到有趣的方面。看来升高的总Tau和磷酸化Tau(181)的水平与降低的Aβ(1-42)/Aβ(1-40)比例相关，但是不与单独的Aβ(1-42)水平相关(Wiltfang etal.,2007)。但是在其他CNS疾病，如克雅病、脑梗死和脑血管性痴呆中也检测到升高的CSF水平，所述疾病全部与神经元丢失有关(Buerger et al.,2006(2);Bibl et al.,2008)。另一可能的生物标记是作为MCI的指示的CSF中BACE1活性的增加(Zhong et al.,2007)。还讨论增加的BACE1活性会导致增加的Aβ产生以及因此增加的该肽的聚集。据认为阿尔茨海默病伴随着神经炎症过程。因此CSF中的抗小胶质细胞抗体是AD中这些炎症过程的可能的生物标记(McRea et al.,2007)。
尽管有许多生物标记，据认为它们使得能够明确诊断阿尔茨海默病，但是目前没有可用的确保可靠和明确诊断这种疾病的单一生物标记。因此，阿尔茨海默病领域中的大部分研究使用测定各种生物标记与临床诊断的结果的比较来确定阿尔茨海默病的阶段和严重程度。相比之下，生物标记与阿尔茨海默病的病理原因之间的相关性会提供明显更可靠的该疾病的诊断。
这样的可能的方法可以是重复分析明确鉴定和定义的神经病理性痴呆疾病的免疫沉淀的CSF样品，以明确Aβ(1-40)和Aβ(1-42)实际上是否是合适的神经化学痴呆标记(Jellinger et al.,2008)。为了发现新的目前未知的阿尔茨海默病生物标记，通常通过比较蛋白质组学分析来分析CSF样品来获得AD诊断的灵敏度增加，并且还使得能够与其他变性痴呆病症区分(Finehout et al.,2007;Castano et al.,2006;Zhang et al.,2005;Simonsen et al.,2007;Lescuyer et al.,2004;Abdi et al.,2006)。蛋白质组学分析后，必须详细分析潜在的新生物标记的适用性和与病理原因的相关性。通过蛋白质组学分析发现的生物标记典型实例是作为多发性硬化的生物标记的截短的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C。后来证实这种生物标记为存储人工产物(Irani et al.,2006;Hansson et al.,2007(2))。
血浆生物标记
除了常用的血浆生物标记，即Aβ肽，其他炎症性血浆标记用于痴呆(Ravaglia et al.,2007;Engelhart et al.,2004)，特别是阿尔茨海默病(Motta etal.,2007)的早期诊断。这些炎症性标记对于阿尔茨海默病诊断的适用性和特异性仍在讨论。通过来自AD患者和健康对照的血浆的比较蛋白质组学分析还发现其他可能的生物标记(German et al.,2007;Ray et al.,2007)。对于任何上述生物标记，目前为止没有令人信服的或合适的数据是可用的。
与CSF中淀粉样蛋白β的分析相反，到目前为止获得的关于血浆中合适的Aβ生物标记的结果并不可靠或明确。在一些研究中发现血浆中降低的Aβ(1-42)/Aβ(1-40)比例与增加的认知正常者分别转化为MCI或阿尔茨海默病患者之间的相关性(Graff-Radford et al.,2007;van Oijen et al.,2006;Sundelof et al.,2008)。但是其他研究检测到Aβ(1-42)血浆水平的降低更可能是MCI转化为AD的标记(Song et al.,2007)，而且不适合作为神经变性目的的标记，这是阿尔茨海默病所遇到的(Pesaresi et al.,2006)。然而大部分研究未显示健康对照与患有散发性阿尔茨海默病的患者之间Aβ血浆水平的差异(Fukumoto et al.,2003;Kosaka et al.,1997;Scheuner et al.,1996;Sobow etal.,2005;Tamaoka et al.,1996;Vanderstichele et al.,2000)。一些研究还显示血浆中Aβ的水平与脑中的水平无关(Fagan et al.,2006;Freeman et al.,2007)，其也与CSF中的水平无关(Mehta et al.,2001;Vanderstichele et al.,2000)。在最近的研究中，检测到Aβ(1-40)和Aβ(1-42)在CSF与血浆之间的相关性，但是仅在健康对照中。这种相关性在MCI和AD中没有检测到，这通过由于脑中Aβ沉积破坏CSF与血浆Aβ之间的平衡来解释(Giedraitis et al.,2007)。通常，假设血浆Aβ(1-42)水平不是MCI或AD的可靠生物标记(Blaskoet al.,2008;Mehta et al.,2000;Brettschneider et al.,2005)，而认为血浆Aβ(1-38)/Aβ(1-40)比例的降低是血管性痴呆的生物标记，并且接近CSF标记的可预测性(Bibl et al.,2007)。
EP2020602和US20020182660公开检测血浆样品中特定全长Aβ肽如Aβ(1-40)和Aβ(1-42)的方法。该方法采用两种不同的捕获抗体，但是不包括免疫沉淀步骤。
EP1944314公开检测抗Aβ肽的自身抗体的方法，例如抗Aβ(21-37)或Aβ(4-10)的自身抗体。在所述方法中，为了结合并检测各自的自身抗体，将包含Aβ肽的氨基酸序列的多肽固定化在载体上。
因此，显然需要生物标记，其可靠并且实现阿尔茨海默病阶段的早期发生的明确可预测性以及区分阿尔茨海默病与其他痴呆疾病。还需要从血浆提供所述生物标记，与CSF相比血浆可容易地从患者获得。此外，需要提供检测所述生物标记的方法，其使得可靠和明确地测定所述生物标记。
然而，这样的方法，特别是用血浆Aβ作为生物标记，是极难建立的，因为Aβ肽是非常疏水的。所有目前已知和描述的测定系统和方法仅达到令人非常不满意的分析灵敏度，并且遇到关于分析物与基质(即血浆)之间非常复杂的相关作用的大问题。这解释了上文所述多个研究中非常矛盾的结果。这还导致科学界相信血浆中特定Aβ肽的水平不适合作为AD的生物标记。
ELISA或ELISA类型系统(Muliplex)通常用于血浆中的Aβ的定量。这类研究的验证参数通常仅被不令人满意地分析或者完全被无视。例如，像回收率的关键项目未分析或未在各出版物中提及。然而回收率是正确测定存在于血浆中的那些Aβ肽的水平的决定性参数。因此存在于不同研究中的血浆中的Aβ肽水平的差异可能是由回收率的不正确测定所导致的。ELISA或多重系统的另一重要参数是其线性度。例如，在Hansson et al.,2008中，计算的1∶20稀释的血浆Aβ(1-42)浓度的水平比相同样品的1∶2稀释中的高3倍(Hansson et al.,2008)。单独这个实例表明目前已知的几个研究中的相同血浆样品的不同稀释是不可比的。此外，这类方法完全不适合建立可靠的诊断测定。在一个研究中使用不同稀释会导致假象并最终导致完全错误的结果。只要没有血浆Aβ分析的标准化方案和方法，这类研究在未来还会矛盾并且不适合用作诊断方法。
因此，本发明的目的是提供新方法，其允许高可靠性地特别是在血浆中检测Aβ。
此外，本发明提供诊断标记，其可以用可靠的方法来测定，并且可以用于可靠和明确地预测阿尔茨海默病。
本发明还提供可靠的方法，其特别适合用于多患者研究，其中生物学样品在不同测量周期中分析。
发明概述
本发明的目的是通过提供检测生物学样品中的淀粉样蛋白β肽(Abeta或Aβ)的方法来解决的。所述方法的特征在于在免疫沉淀步骤中使生物学样品与至少两种不同的捕获抗体接触。分离、破坏所得的复合物，随后在Aβ特异性ELISA中分析捕获的Aβ肽。优选地，这种Aβ特异性ELISA为夹心ELISA。
酶β-和γ-分泌酶顺序切割后，Aβ肽从淀粉样蛋白前体蛋白(APP)释放。γ-分泌酶切割导致产生上述Aβ(1-40)和Aβ(1-42)肽，其不同之处在于它们的C端，以及表现出不同的聚集、纤维形成和神经毒性潜能。
因此本发明提供测定Aβ(1-40)和Aβ(1-42)肽水平的方法。同样设想检测Aβ(1-40)或Aβ(1-42)的功能性等同物。本发明的方法特别适合测定Aβ(1-40)和/或其功能性等同物的水平。
因此，根据上述方法的优选实施方案，待测定的Aβ肽选自Aβ(1-40)(SEQ ID No:1)、Aβ(1-42)(SEQ ID No:2)及它们的功能性等同物。
在一特别优选的实施方案中，待检测的Aβ肽为Aβ(1-40)(SEQ ID No:2)。
根据另一优选实施方案，所述生物学样品选自血液、血清、尿、脑脊液(CSF)、血浆、淋巴、唾液、汗液、胸膜液、滑液、泪液、胆汁和胰分泌物。在一特别优选的实施方案中，所述生物学样品为血浆。
所述生物学样品可以本领域技术人员公知的方式获得自患者。特别地，血液样品可以从对象获得，并且所述血液样品可以通过常规方法分离为血清和血浆。从其获得所述生物学样品的对象疑似患有阿尔茨海默病，有发展阿尔茨海默病的风险和/或有任何其他种类的痴呆的风险或患有任何其他种类的痴呆。
特别地，是疑似患有轻度认知障碍(MCI)和/或处于阿尔茨海默病早期的对象。
本发明的方法相对于本领域已知的方法具有几个优势，即本发明的方法可以用来在早期检测阿尔茨海默病，以及在疾病发生和发展的早期区分阿尔茨海默病和其他类型的痴呆。一种可能的早期是轻度认知障碍(MCI)。不可能用本领域目前已知的方法进行早期阿尔茨海默病的明确和可靠的诊断，特别地，不可能在所述早期区分阿尔茨海默病的发生和其他形式的痴呆。这特别应用于患有MCI的患者。
相比之下，本发明提供的方法适合阿尔茨海默病的鉴别诊断。特别地，本发明提供一种方法，其中可以在获得自任何上述对象的生物学样品中以高度重复的方式检测Aβ肽。本发明的方法的高重复性是通过在初始免疫沉淀步骤中使用至少两种不同的捕获抗体来实现的。优选地，所述至少两种不同的捕获抗体针对Aβ靶肽的不同表位。
在本发明的方法中特别优选使用Aβ(1-40)。
在另一优选实施方案中，所述生物学样品为血浆。
上述“Aβ靶肽”涵盖Aβ(1-40)和Aβ(1-42)，包括它们的所有功能性等同物。
本发明必须克服的具体问题是待使用的生物标记在阿尔茨海默病早期，例如轻度认知障碍期间改变。本发明的发明者已显示可以可靠的方式测定Aβ肽，特别是Aβ(1-40)，并且还首次明确实际上Aβ(1-40)特别适合早发性阿尔茨海默病的诊断。
此外，本发明明确Aβ(1-40)水平是早期阿尔茨海默病发生的初始和早期标记，因为其血浆水平在阿尔茨海默病早期升高，并且在归类于轻度认知障碍的人中特别高。只有用本发明才可能显示Aβ(1-40)的高血浆浓度与阿尔茨海默病的阳性临床诊断相关。这与现有技术中较早的观点相反，所述观点认为Aβ(1-40)不是合适的AD标记，因为显示关联性的尝试被统计上不显著的数据终结，并且未建立任何统计上显著的相关性。
本发明的这些令人惊讶的结果是通过使用本发明的方法来获得的，所述方法将新的二价捕获系统用于初始免疫沉淀步骤。这种二价捕获系统定义为两种抗体分子或两种以上抗体分子，识别所述Aβ肽的至少两个不同表位。因此，已证实Aβ(1-40)的显著增加是阿尔茨海默病发展中的早期事件。根据一优选实施方案，所述至少两种不同捕获抗体各自对所述Aβ肽，特别是所述Aβ(1-40)肽的不同表位具有特异性。
所述免疫沉淀步骤因为几个原因是有利的：其减少基质影响，即其消除杂质(每个生物学样品中通常包含杂质)从而使得本发明的方法更灵敏。此外，所述免疫沉淀步骤引起所述Aβ肽的预富集，这导致随后使用的检测抗体的提高的亲和性。
定义
在本申请的意义上，“捕获抗体”旨在涵盖结合靶Aβ肽的那些抗体。
优选地，所述捕获抗体高亲和性地结合所述Aβ肽。在本发明的上下文中，高亲和性表示这样的亲和性，其具有10-7M或更好的KD值，优选10-8M或更好的KD值，或者甚至更优选10-9M-10-12M的KD值。
术语“抗体”以其最广泛的含义使用，并且具体涵盖完整的单克隆抗体、多克隆抗体、从至少两个完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)以及抗体片段(只要它们表现出期望的生物学活性)。抗体可以是例如IgM、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)、IgD、IgA或IgE。然而，优选所述抗体不是IgM抗体。所述“期望的生物学活性”是结合Aβ肽。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分，通常是所述完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段：双抗体；单链抗体分子；以及从抗体片段形成的多特异性抗体。
如本文所用，术语“单克隆抗体”指获得自一群基本上均质的抗体的抗体，即该群包含的各个抗体除了少量可能天然存在的突变之外是相同的。单克隆抗体针对单一抗原位点是高度特异性的。此外，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的“多克隆抗体”制品相反，每种单克隆抗体只针对抗原上的单一决定簇。除了它们的特异性之外，单克隆抗体通常的有利之处是它们通过杂交瘤培养合成，未被其它免疫球蛋白污染。“单克隆”表示抗体的特征，其获得自基本上均质的抗体群体，并且不应理解为需要通过任何特定方法来产生抗体。例如，本发明中使用的单克隆抗体可以通过由et al.,Nature,256:495(1975)首先描述的杂交瘤方法制备，或者可以通过一般公知的重组DNA方法制备。“单克隆抗体”还可以分离自噬菌体抗体文库，使用例如Clackson et al.,Nature,352:624-628(1991)和Markset al.,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)所述的技术。
本文中的单克隆抗体具体包括嵌合抗体(免疫球蛋白)，其中一部分重链和/或轻链与来源于特定物种的抗体或者属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或者同源，而链的剩余部分与来源于另一物种的抗体或者属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或者同源；以及这类抗体的片段，只要它们表现出期望的生物学活性。
“人源化”形式的非人(例如，小鼠)抗体是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或它们的片段(如Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2或者抗体的其它抗原结合子序列)，其含有来源于非人免疫球蛋白的最小序列。人源化抗体的大部分是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的互补决定区(CDR)的残基由具有期望的特异性、亲和性和能力(capacity)的非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠或兔的CDR的残基代替。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv构架区(FR)残基由相应的非人残基代替。此外，人源化抗体可以包含这样的残基，其在受体抗体或者引入的CDR或构架序列中均未发现。
进行这些修饰以进一步精制和优化抗体的性能。通常，人源化抗体包含基本上所有的至少一个、通常两个可变结构域，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区，并且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白序列的FR区。人源化抗体最优选还包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常为人免疫球蛋白的恒定区。进一步的细节参见Jones et al.,Nature,321:522-525(1986),Reichmann et al,Nature.332:323-329(1988):和Presta,Curr.Op.Struct.Biel.,2:593-596(1992)。人源化抗体包括PrimatizedTM抗体，其中所述抗体的抗原结合区来源于通过用所关注的抗原免疫恒河猴所产生的抗体或“骆驼化”抗体。
“单链Fv”或“sFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。通常地，Fv多肽还包含VH与VL结构域之间的多肽接头，所述多肽接头使得sFv形成抗原结合所期望的结构。关于sFv的综述参见Pluckthun in The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg and Moore eds.,Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994)。
术语“双抗体”指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，该片段包含在相同多肽链中与轻链可变结构域(VD)连接的重链可变结构域(VH)(VH–VD)。通过使用过短而不允许相同链上两个结构域之间配对的接头，迫使所述结构域与另一链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。双抗体更全面地描述于Hollinger et al.,Proc.Natl.Acad.Sol.USA,90:6444-6448(1993)。
“分离的”抗体是已经鉴定并从其天然环境的组分中分离和/或回收的抗体。其天然环境的污染组分是会干扰抗体的诊断或治疗用途的物质，并且可以包括酶、激素以及其他蛋白质或非蛋白质溶质。在优选的实施方案中，将抗体纯化至：(1)如通过劳里(Lowry)方法所测定的，以重量计大于95%，并且最优选以重量计大于99%；(2)通过使用旋杯测序仪足以获得N端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或者(3)通过还原或非还原条件SDS-PAGE使用考马斯蓝或优选银染的均一性。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为不存在抗体天然环境的至少一种成分。然而，通常分离的抗体通过至少一个纯化步骤来制备。
如本文所用，表述“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用，并且所有这些名称均包括后代。因此，词语“转化子”和“转化的细胞”包括初始的对象细胞以及从其衍生的培养物而不论转移的数目。还应当理解，由于有意或无意的突变，所有后代的DNA含量可以不完全相同。本发明包括经筛选与原始转化的细胞具有相同功能或生物学活性的突变体后代。在使用不同名称的情况下，从上下文可明了。
如本文所用，术语“多肽”、“肽”和“蛋白”可互换使用，并且定义为表示由通过肽键连接的氨基酸组成的生物分子。
如本文所用，术语“一(a)”、“一(an)”和“所述(the)”定义为表示“一或多”，并且包括复数形式，除非在上下文中是不适合的。
“淀粉样蛋白β、Aβ或/β-淀粉样蛋白”是本领域公认的术语，并且指淀粉样蛋白β蛋白和肽、淀粉样蛋白β前体蛋白(APP)以及其修饰、片段和任何功能性等同物。特别地，如本文所用，淀粉样蛋白β表示通过APP的蛋白酶剪切所产生的任何片段，但特别是涉及或与淀粉样蛋白病理学相关的那些片段，包括但不限于Aβ1-38、Aβ1-40、Aβ1-42。
“功能性等同物”涵盖Aβ(1-40)和/或Aβ(1-42)的所有这些突变体或变体，其可以天然存在于已选择接受如本发明所述的检测方法或诊断方法的患者组中。更特别地，在本文的上下文中“功能性等同物”表示Aβ(1-40)或Aβ(1-42)的功能性等同物是其突变体或变体，并且已证实在阿尔茨海默病中积累。与Aβ(1-40)和/或Aβ(1-42)相比，所述功能性等同物具有不超过30个突变，优选不超过20个突变，更优选不超过10个突变，特别优选不超过5个突变，并且最优选2个或仅1个突变。功能性等同物还涵盖突变的变体，例如其包括以氨基酸Asp-Ala-Glu开始并分别以Gly-Val-Val和Val-Ile Ala结束的所有Aβ肽。
在本文的上下文中特别有用的Aβ(1-40)和Aβ(1-42)等同物是由Irie etal.,2005所述的那些等同物，即Aβ的鸟取、佛兰德、荷兰、意大利、北极和爱荷华突变。功能性等同物还涵盖来源于在β-或γ-分泌酶切割位点旁边含有突变的淀粉样蛋白前体蛋白的Aβ肽，如瑞典、奥地利、法国、德国、佛罗里达、伦敦、印第安纳和澳大利亚变异(Irie et al.,2005)。
“夹心ELISA”通常包括使用两种抗体，每种能够结合至待检测的蛋白的不同免疫原性部分或表位。在夹心测定中，通过固定化在固体支持物上的第一抗体结合测试样品分析物，然后第二抗体结合至分析物，因此形成不溶的由三部分组成的复合物。所述第二抗体本身可以用可检测的部分标记(直接夹心测定)，或者可以利用用可检测的部分标记的抗免疫球蛋白抗体来测量(间接夹心测定)。例如，夹心测定的一种优选类型是ELISA测定，在这种情况下所述可检测的部分是酶。
附图说明
图1：
二价免疫沉淀系统提高捕获效率
(A)通过使用不同抗体组合从Cyp18溶液和人血浆回收Aβ1-40
(B)二价捕获系统的示意图(阴影：4G8抗体，灰色：x-40抗体，黑色：缀合至磁珠的抗小鼠抗体)。
图2：
DemTect测试，DemTect量表的AD患者和健康对象中的分类差异结果的平均值(平均值±SD)。
图3：
简易精神状态测试，简易精神状态测试的AD患者和健康对象中的分类差异结果的平均值(平均值±SD)。
图4：
画钟测试，画钟测试的AD患者和健康对象中的分类差异结果的平均值(平均值±SD)。
图5：
Aβ(1-40)浓度分别对DemTect(A)和MMSE(B)的分数的图。
图6：
相对血浆Aβ(1-40)水平，标准化至内部血浆标准品(ITS)，平均值和SEM。
序列
Aβ1-42(SEQ ID NO.1)：
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala
Aβ1-40(SEQ ID NO.2)：
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val
发明详述
本发明提供检测和测定生物学样品中的Aβ肽的方法。所述方法的特征在于在免疫沉淀步骤中使生物学样品与至少两种不同的捕获抗体接触。将所得的复合物分离，破坏，随后将捕获的Aβ肽在Aβ特异性ELISA中分析。优选地，这种Aβ特异性ELISA为夹心ELISA。
如上文所提到的，用于初始捕获步骤的至少两种抗体应当选择对所述Aβ肽的不同表位具有不同特异性的抗体。
本发明的方法包括以下步骤：
i)在免疫沉淀步骤中使生物学样品与至少两种不同捕获抗体接触。
使所述生物学样品与上述至少两种不同的捕获抗体接触之后，所述至少两种不同的捕获抗体与所述Aβ肽之间会形成免疫复合物。这个步骤的作用不是特异性分离全长Aβ(1-40)和/或Aβ(1-42)，而是捕获和分离所有Aβ种类，特别是在位置40和/或位置42结束的Aβ种类。
ii)然后通过二抗检测该复合物。适合地，所述二抗固定化在磁珠上。利用磁性分离器可以容易地将所述免疫复合物与磁珠一起从体液(血浆/血清CSF等)分离。
iii)将所述免疫复合物从珠洗脱。适合地，通过将携带所述免疫复合物的珠在包含50%甲醇/0.5%甲酸的溶液中于室温下温育1h来进行洗脱步骤。由此，所有分子间的相互作用被破坏，并且分离自所述生物学样品的所有Aβ肽分子从所述溶液中的珠释放。
iv)将释放的分离的Aβ肽在随后的步骤中定量，例如通过特异性检测全长Aβ(1-40)和/或Aβ(1-42)的夹心ELISA。
在多患者诊断研究中，例如当必须分析超过100个生物学样品时，必须在几周或几个月的时间中进行几个测量周期。由于这段延长的时间和在不同时间点进行的不同测量周期，不同测量周期之间的批间变化可能高概率地发生。批间变化可以在某些步骤发生，例如在免疫沉淀步骤期间(例如因为沉淀抗体的不同批次)，或者Aβ(1-40)ELISA(由于ELISA试剂盒的不同批次)。由于这些批间变化，生物学样品中测定Aβ靶肽的量在不同测量周期之间可能不可比，而且包括在所述多患者研究中获得的所有生物学样品的Aβ靶肽量的统计分析以及区分AD患者和健康个体变得不可能。
为了避免所述批间变化并使来自不同测量周期的结果可比和对于统计分析可行，本发明的方法优选在存在内部标准样品的条件下进行。这样的内部标准品例如内部血浆标准-样品(ITS)，其应当获得自良好定义的对照对象，优选健康对象。诸如Aβ(1-40)或Aβ(1-42)的Aβ靶肽的浓度在每个ITS样品中是恒定的。因此，在不同测量周期中发现的ITS样品中Aβ靶肽浓度的变化反映批间变化性。
根据本发明的优选实施方案，每个测量周期中包括一个或多个ITS样品。测定诸如血浆样品的生物学样品中的Aβ肽水平之后，将所述生物学样品的Aβ靶肽浓度如Aβ(1-40)或Aβ(1-42)浓度标准化至ITS样品中测定的相应Aβ靶肽的浓度，获得每个测试样品的相对Aβ靶肽水平。
在另一优选实施方案中，本发明的方法包括另一步骤，将所述生物学样品的Aβ靶肽浓度如Aβ(1-40)或Aβ(1-42)浓度标准化至ITS样品中测定的相应Aβ靶肽的浓度，导致每个生物学样品的相对Aβ靶肽水平。
结果，在不同测量周期(时间点、抗体批次、ELISA批次)中测定的生物学样品中的相对Aβ靶肽水平的比较比未标准化的Aβ靶肽水平的比较更可靠。
在本发明的方法中，ITS的使用特别优选用于测定Aβ(1-40)和/或Aβ(1-42)的浓度，最优选用于Aβ(1-40)的浓度。
本发明的方法不限于血浆样品。如果在本发明的方法中应当使用其他体液(脑脊液、尿、淋巴,、唾液、汗液、胸膜液、滑液、房水、泪液、胆汁、胰分泌物)，这些液体必须取自良好定义的对照对象，优选健康对象，如本文中对血浆样品所证实的。然后这些液体用作内部标准品。
因此，本发明的内部标准样品优选选自血浆样品、脑脊液样品、尿样品、淋巴样品、唾液样品、汗液样品、胸膜液样品、滑液样品、房水样品、泪液样品、胆汁样品、胰分泌物样品。最优选地，所述内部标准样品为血浆样品。
适合地，验证了本发明的方法，其中作为生物学样品供体的对象关于神经变性疾病的状态已被良好表征。所述表征可以利用常规心理测试来进行，例如DemTect、简易精神状态测试、画钟测试、ADAS-Cog(阿尔茨海默病评价量表-认知)、Blessed测试、CANTAB(剑桥神经心理自动化成套测试)、Cognistat(精神行为认知状态检查)、神经精神症状问卷(NPI)、阿尔茨海默病病理行为评分表(BEHAVE-AD)、CERAD(美国阿尔茨海默病联合登记协作组织)临床和神经心理学测试、康奈尔痴呆抑郁量表(CSDD)、老年抑郁量表(GDS)以及7分钟筛选量表。
在本文的上下文中合适的用于免疫沉淀的可能的抗体如下，虽然本发明并不限于这些具体的工作实例：
3D6，表位：1-5(Elan Pharmaceuticals,Innogenetics)
pAb-EL16，表位：1-7
2H4，表位：1-8(Covance)
1E11，表位：1-8(Covance)
20.1，表位：1-10(Covance,Santa Cruz Biotechnology)
兔抗Aβ多克隆抗体，表位：1-14(Abcam)
AB 10，表位：1-16(Chemicon/Upstate-part of Millipore)
82E1，表位：1-16(IBL)
pAb1-42，表位：1-11
NAB228，表位：1-11(Covance,Sigma-Aldrich,Cell Signaling,Santa CruzBiotechnology，Zymed/Invitrogen)
DE2，表位：1-16(Chemicon/Upstate-part of Millipore)
DE2B4，表位：1-17(Novus Biologicals,Abcam,Accurate,AbD Serotec)
6E10，表位：1-17(Signet Covance,Sigma-Aldrich)
10D5，表位：3-7(Elan Pharmaceuticals)
WO-2，表位：4-10(The Genetics Company)
1A3，表位5-9(Abbiotec)
pAb-EL21，表位5-11
310-03，表位5-16(Abcam,Santa Cruz Biotechnology)
鸡抗人Aβ多克隆抗体，表位12-28(Abcam)
鸡抗人Aβ多克隆抗体，表位25-35(Abcam)
兔抗人Aβ多克隆抗体，表位：N端(ABR)
兔抗人Aβ多克隆抗体(Anaspec)
12C3，表位10-16(Abbiotec,Santa Cruz Biotechnology)
16C9，表位10-16(Abbiotec,Santa Cruz Biotechnology)
19B8，表位9-10(Abbiotec,Santa Cruz Biotechnology)
pAb-EL26，表位：11-26
BAM90.1，表位：13-28(Sigma-Aldrich)
兔抗β-淀粉样蛋白(pan)多克隆抗体，表位：15-30(MBL)
22D 12，表位：18-21(Santa Cruz Biotechnology)
266，表位：16-24(Elan Pharmaceuticals)
pAb-EL17；表位：15-24
4G8，表位：17-24(Covance)
兔抗Aβ多克隆抗体，表位：22-35(Abcam)
G2-10；表位：31-40(The Genetics Company)
兔抗Aβ,aa 32-40多克隆抗体(GenScript Corporation)
EP 1876Y，表位：x-40(Novus Biologicals)
G2-11，表位：33-42(The Genetics Company)
16C 11，表位：33-42(Santa Cruz Biotechnology)
21F 12，表位：34-42(Elan Pharmaceuticals,Innogenetics)
1A10，表位：35-40(IBL)
D-17山羊抗Aβ抗体，表位：C端(Santa Cruz Biotechnology)
用于免疫沉淀的特别优选的抗体是：3D6(Elan)、BAN50(Takeda)、82E1(IBL)、6E 10(Covance)、WO-2(The Genectics Company)、266(Elan)、BAM90.1(Sigma)、4G8(Covance)、G2-10(The Genetics Company)、1A 10(IBL)、BA27(Takeda)、11A5-B10(Millipore)、12F4(Millipore)、21F12(Elan)。
用于免疫沉淀的特别优选的抗体对是：
4G8和11A5-B10、3D6和4G8、6E10和4G8、82E1和4G8、4G8和12F4、4G8和21F12、3D6和21F12、6E10和21F12、BAN50和4G8、3D6和11A5-B10、3D6和1A10、3D6和BA27、6E10和11A5-B10、6E10和1A10、6E10和BA27、4G8和11A5-B10、4G8和1A10、4G8和BA27、4G8和12F4、4G8和21F12。
除了上文指明的抗体，适合免疫沉淀的所有其他淀粉样蛋白β特异性抗体(单克隆和多克隆)均可以用于本发明的方法(其他合适的抗体可以例如来自www.alzforum.org)。对于良好的捕获效率决定性的并且因此构成本发明的关键元素的是使用具有不同表位的两种、三种或更多种不同抗体。使用超过一种抗体类型用于Aβ肽的免疫沉淀提供合作的和令人惊讶的协同结合效应(亲和力)，这最终允许实现极高的捕获效率(参见图1)。
步骤ii)中的二抗是特异性针对捕获抗体的宿主抗体类型的。优选的二抗为抗小鼠抗体和抗兔抗体。
步骤iii)中将复合物与磁珠温育之后，可以将珠用洗涤缓冲液洗涤(参见本发明的实施例)。含有防止非特异性结合的去污剂或其他添加剂的洗涤缓冲液可以用于这个步骤。洗涤缓冲液的非限制性实例是：
-含有10mg/ml亲环蛋白18(Cyp 18)和0.05%吐温-20的D-PBS，
-PBS+0.05%吐温-20，
-TBS+0.05%吐温-20，
-PBS+1%(w/v)BSA+0.05%吐温-20，
-TBS+1%(w/v)BSA+0.05%吐温-20，以及
-Pierce ELISA阻断剂(含有吐温-20)。
步骤iv)中将免疫复合物从珠洗脱之后，将溶液在稀释缓冲液中稀释。可以防止与表面和固定化的第一ELISA抗体的非特异性相互作用的任何稀释缓冲液可以用于这个步骤。稀释缓冲液的非限制性实例是：
-EIA缓冲液(IBL 1-40(N)ELISA试剂盒的稀释缓冲液)，
-PBS+1%(w/v)BSA+0.05%吐温-20，
-TBS+1%(w/v)BSA+0.05%吐温-20，以及
-Pierce ELISA阻断剂(含有吐温-20)。
能够定量全长Aβ(1-40)的ELISA试剂盒可商购。本发明的方法中用于定量Aβ(1-40)的合适的ELISA试剂盒例如：淀粉样蛋白-β(1-40)(N)ELISA(IBL,JP27714)；Aβ[1-40]人ELISA试剂盒(Invitrogen)；人淀粉样蛋白β(淀粉样蛋白-β),aa 1-40ELISA试剂盒(Wako Chemicals USA,Inc.)；淀粉样蛋白β1-40ELISA试剂盒(The Genetics Company)。
能够定量全长Aβ(1-42)的ELISA试剂盒也可商购。本发明的方法中用于定量Aβ(1-42)的合适的ELISA试剂盒例如：淀粉样蛋白-β(1-42)(N)ELISA(IBL,JP27712)；Aβ[1-42]人ELISA试剂盒(Invitrogen)、人淀粉样蛋白β(淀粉样蛋白-β),aa 1-42ELISA试剂盒(Wako Chemicals USA,Inc.)、淀粉样蛋白β1-40ELISA试剂盒(The Genetics Company)、
β-淀粉样蛋白(1-42)(Innogenetics)。
本发明的方法不限于上述示例性的可商购的Aβ(1-40)或Aβ(1-42)的ELISA试剂盒。用于全长Aβ(1-40)或Aβ(1-42)的许多其他夹心ELISA在现有技术中可以获得或者可以由技术人员开发。所有这些全长Aβ1-40或Aβ1-42夹心ELISA应当也包括在本发明的方法中，并且通常应当包含合适的捕获和检测抗体对，所述抗体对分别对Aβ(1-40)和/或Aβ(1-42)的完整N端具有特异性以及对在氨基酸40或42结束的C端具有特异性。
这样的全长Aβ(1-40)夹心ELISA可以包含特异性识别Aβ(1-40)的C端的第一固定化抗体，以及特异性识别Aβ(1-40)的完整N端的第二标记检测抗体。
全长Aβ(1-42)夹心ELISA可以包含特异性识别Aβ(1-42)的C端的第一固定化抗体，以及特异性识别Aβ(1-42)的完整N端的第二标记检测抗体。
全长Aβ(1-40)夹心ELISA还可以包含特异性识别Aβ(1-40)的完整N端的第一固定化抗体，以及特异性识别Aβ(1-40)的C端的第二标记检测抗体。
全长Aβ(1-42)夹心ELISA还可以包含特异性识别Aβ(1-42)的完整N端的第一固定化抗体，以及特异性识别Aβ(1-42)的C端的第二标记检测抗体。
用于本发明的方法的合适的Aβ(1-40/42)N端特异性抗体例如3D6(Elan)、WO-2(The Genetics Company)、82E 1(IBL)、BAN-50(Takeda)。许多其他Aβ(1-40/42)N端特异性抗体在现有技术中可以获得或者可以由技术人员开发。所有这些Aβ(1-40/42)N端特异性抗体也包括在本发明的方法中。
合适的Aβ(1-40)C端特异性抗体例如G2-10(The Genetics Company)；11A5-B10(Millipore)；1A10(IBL)；BA27(Takeda)；EP1876Y(NovusBiologicals)。许多其他Aβ(1-40)C端特异性抗体在现有技术中可以获得或者可以由技术人员开发。所有这些Aβ(1-40)C端特异性抗体也包括在本发明的方法中。
合适的Aβ(1-42)C端特异性抗体例如G2-11(The Genetics Company)；12F4(Millipore)；抗人Aβ(38-42)兔IgG(IBL)；21F12(Elan)；BC05(Takeda)；16C11(Santa Cruz Biotechnology)。许多其他Aβ(1-42)C端特异性抗体在现有技术中可以获得或者可以由技术人员开发。所有这些Aβ(1-42)C端特异性抗体也包括在本发明的方法中。
根据优选的实施方案，所述检测抗体是标记的。
为了诊断应用，所述检测抗体通常用可检测的部分标记。许多标记可用，其一般可以分为以下类别：
(a)放射性同位素，如35S、14C、125I、3H和131I。所述抗体可以利用如Current Protocols in Immunology，Volumes 1and 2,Gütigen et al.,Ed.,Wiley-Interscience.New York,New York.Pubs.,(1991)所述的技术，用放射性同位素标记，放射性可以利用闪烁计数来测量。
(b)可以利用荧光标记，如稀土金属螯合物(铕螯合物)或者荧光素及其衍生物、若丹明及其衍生物、丹磺酰、丽丝胺(Lissamine)、藻红素和德克萨斯红(Texas Red)。可以利用例如上文的Current Protocols in Immunology所公开的技术将荧光标记缀合至抗体。荧光可以使用荧光计定量。
(c)各种酶-底物标记可用。酶一般催化生色底物的化学改变，这可以利用各种技术测量。例如，酶可催化底物的颜色改变，这可以通过分光光度计测量。或者，酶可改变底物的荧光或化学发光。定量荧光变化的技术如上文所述。化学发光底物通过化学反应变成电子激发的，然后可以发出可测量的光(例如利用化学发光计测量)或者将能量供给荧光接受体。酶标记的实例包括萤光素酶(例如，萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶；美国专利第4,737,456号)、萤光素、2,3-二氢2,3-二氮杂萘二酮(2,3-dihydrophthalazinedione)、苹果酸脱氢酶、尿素酶、过氧化物酶如辣根过氧化物酶(HRPO)、碱性磷酸酶、0-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)、杂环氧化酶(如尿酸氧化酶和黄嘌呤氧化酶)、乳过氧化物酶、微过氧化物酶等。将酶缀合至抗体的技术描述于O′Sullivan et al.,Methods for thePreparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay，in Methods in Enzym.(ed Langone & H.Van Vunakis),Academic Press,NewYork,73:147-166(1981)。
酶-底物组合的实例包括例如：
(i)辣根过氧化物酶(HRPO)与作为底物的过氧化氢酶，其中过氧化氢酶氧化染料前体(例如邻苯二胺(OPD)或3,3′,5,5′-四甲基盐酸联苯胺(TMB))；
(ii)碱性磷酸酶(AP)与作为生色底物的磷酸对硝基苯酯；以及
(iii)β-D-半乳糖苷酶(β-D-Gal)与生色底物(例如对硝基苯基-β-D-半乳糖苷酶)或荧光底物4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷酶(4-methylumbellifery1-β-D-galactosidase)。
许多其它酶-底物组合对于本领域技术人员是可用的。
(d)用于检测抗体的另一可能的标记是短核苷酸序列。然后通过RT-PCR系统(ImperacerTM,Chimera Biotech)来测定浓度。
有时，将标记与抗体间接缀合。技术人员应当知道实现这个目的的各种技术。例如，可以将抗体与生物素缀合，并且可以将任何上述三大类的标记与抗生物素蛋白缀合，或者反之亦然。生物素选择性地结合至抗生物素蛋白，并且因此可以将该标记以这种间接方式与抗体缀合。或者，为了实现标记与抗体的间接缀合，将抗体与小的半抗原(例如地高辛)缀合，并且将上述不同类型标记中的一种与抗半抗原抗体(例如抗地高辛抗体)缀合。因此，可以实现标记与抗体的间接缀合。
本发明的抗体可用于任何已知的测定方法，如竞争性结合测定、直接和间接夹心测定以及免疫沉淀测定。Zola,Monoclonal Antibodies A Manualof Techniques,pp.147-158(CRC Press.Inc.,1987).
竞争性结合测定依赖于标记的标准品与测试样品分析物竞争结合有限量的抗体的能力。测试样品中的Aβ肽的量与结合至抗体的标准品的量成反比。为了便于测定结合的标准品的量，抗体在竞争之前或之后一般是不溶的，从而结合至抗体的标准品和分析物可以方便地与保持未结合的标准品和分析物分离。
为了分析人中的Aβ(1-40)浓度，可以使用所有以下体液：血液、脑脊液(CSF)、尿、淋巴、唾液、汗液、胸膜液、滑液、房水、泪液、胆汁、胰分泌物。
新方法由本发明者利用血液样品建立(参见本发明的实施例)。然而本发明不应当理解为仅限于血液样品。利用CSF、脑提取物和尿样品，以及所有其他人体液，例如上文所提到的，也可以相同方式采用所述方法。特别优选血浆样品。
为了进行免疫组织化学分析，组织样品可以是新鲜或冷冻的，或者可以包埋在石蜡中并用诸如福尔马林的防腐剂固定。
在步骤iv)中，本发明的方法并不限于夹心ELISA作为定量方法。本发明的方法还涵盖免疫沉淀步骤后用于定量Aβ靶肽，特别是Aβ(1-40)的任何其他方法。用于定量例如Aβ(1-40)的合适的方法是：
1.淀粉样蛋白β1-40测定(CisBio Bioassays)：
该测定原理是基于TR-FRET，这是时间分辨荧光与福斯特共振能量转移的组合。与通常的夹心ELISA相似，Aβ(1-40)由两种抗体结合；但是，这里所述抗体未结合在表面上，相互作用发生在溶液中。两种抗体均用荧光团标记。当这两种荧光团通过生物分子相互作用而在一起时，激发期间供体荧光团捕获的一部分能量通过FRET转移至受体荧光团，结果受体荧光团被激发。测量受体荧光团的荧光。测量信号与FRET的量相关，并且因此与溶液中的Aβ(1-40)的量相关。
相似地，基于可比的原理，可以使用来自Lilly的AlphascreenTM测定。
2.多重测定系统
多重测定系统可获得自几个制造商，并且在本领域中是公知和广泛使用的。用于本发明的方法的合适的实例是INNO-BIA血浆Aβ形式测定(Innogenetics)。这个测定是良好标准化的多参数的基于珠的免疫测定，用于同时定量血浆中的人β淀粉样蛋白形式Aβ(1-42)和Aβ(1-40)或者Aβ(X-42)和Aβ(X-40)，利用
技术(xMAP是Luminex Corp.的注册商标)。
这个测定系统能够平行定量多达100个不同分析物。这种方法的基础是称为微球或珠的小球形聚苯乙烯颗粒。与ELISA和蛋白印迹类似，这些珠用作生物化学检测的固相。这些珠是颜色编码的，从而可以区分100种不同珠类别。每种珠类别具有固定化在微球表面上的一种特异性抗体(例如抗Aβ(1-40))。如果Aβ(1-40)浓度升高，这类珠会结合更多肽分子。分析物的结合的检测是通过第二抗Aβ(1-40)抗体来进行的，所述抗体用发射绿光的另一荧光染料标记。将样品处理成与FACS分析可比。将微球通过流体聚集来成单数并通过基于激光的检测系统分析，这可以在绿色荧光的基础上定量并通过珠的特定着色来鉴定结合的分析物。因此，可以测定一个样品中的多种分析物的浓度。
3.通过质谱分析法定量
-为了定量Aβ(1-40)，还使用SELDI-TOF质谱分析法(Simonsen et al.,2007(2))。
-利用免疫沉淀和MALDI-TOF质谱分析法定量分析Aβ肽。15N标记的标准Aβ肽用于校准。(Gelfanova et al.,2007)。
4.蛋白印迹分析
2D-凝胶电泳加上蛋白印迹分析可以是定量Aβ肽的合适方法(Sergeantet al.,2003;Casas et al.,2004)。
诊断试剂盒
便利地，本发明的抗体可以在试剂盒中提供，所述试剂盒即预定量的试剂与进行诊断测定的说明书的包装组合。当抗体用酶标记时，试剂盒包含酶所需的底物和辅因子(例如提供可检测的生色团或荧光团的底物前体)。此外，可以包含其它添加剂，如稳定剂、缓冲液(例如封闭缓冲液或裂解缓冲液)等。各种试剂的相对量可以广泛变化以提供充分优化测定灵敏度的试剂溶液的浓度。特别地，试剂可以干粉，通常是冻干粉末的形式提供，其包含溶解时提供具有合适浓度的试剂溶液的赋形剂。
本发明的诊断试剂盒特别有利于检测和诊断淀粉样蛋白相关疾病和疾病状况，优选阿尔茨海默病。
用途
本发明的方法首次使得可以可靠的方式检测和定量Aβ肽，特别是Aβ(1-40)，或者其功能性等同物。特别地，本发明提供Aβ(1-40)作为血浆生物标记，其适合阿尔茨海默病的鉴别诊断，特别是在该疾病的早期。
因此，在一实施方案中，本发明涉及使用检测Aβ靶肽的方法诊断阿尔茨海默病，特别是阿尔茨海默病的鉴别诊断，特别是在该疾病的早期。优选地，阿尔茨海默病的早期是轻度认知障碍。
在另一实施方案中，本发明涉及使用Aβ靶肽诊断阿尔茨海默病，特别是阿尔茨海默病的鉴别诊断，特别是在该疾病的早期。优选地，阿尔茨海默病的早期是轻度认知障碍。
特别地，优选用本发明的方法检测和定量应当用于诊断阿尔茨海默病的Aβ靶肽。
在一优选实施方案中，所述Aβ靶肽为Aβ(1-40)或其功能性等同物。
本发明通过以下实施例来进一步描述，然而这不应当理解为以任何方式限制本发明；本发明仅通过随本文附上的权利要求界定其范围。
实施例
1.材料和方法
1.1患者和健康对照
招募患有临床诊断的AD的患者和健康对照。在研究前检查中，通过几个心理测试(DemTect、简易精神状态测试、画钟测试)来测试本研究的所有参与者的神经心理功能。
DemTect测试
DemTect量表是对痴呆的简短筛选测试，其包含五个短的分测试(10个单词列表重复、数字变换编码、语义词语流畅性任务、倒背数字广度、延迟的单词列表回忆)(Kessler et al.,2000)。将原始分数转化以给出不依赖于年龄和教育的分数，分类为“疑似痴呆”(分数≤8)、“轻度认知障碍”(分数9-12)和“适合年龄”(分数13-18)。
MMSE
简易精神状态检查(MMSE)或Folstein测试是用来评价认知的简短的30分问卷测试。其通常用于医学以筛选痴呆。在约10分钟的时间跨度中，其对各种功能采样，包括算术、记忆和方向。其由Folstein et al.,1975引入，并且广泛使用，具有小的修改。
MMSE包括许多领域的简单问题和难题：测试的时间和地点、重复单词的列表、算术、语言使用和理解、以及基本运动技能。例如，一个问题是要求复制两个五边形的图(参见表1)。27分(30分中)以上的任何分数是有效正常的。低于该分数，20-26分表示轻度痴呆；10-19分中度痴呆，而低于10分严重痴呆。正常值还针对教育程度和年龄进行修正。低至非常低的分数与痴呆的存在密切相关，尽管其他精神病症也可以导致MMST测试上的异常发现。
画钟测试
时钟评分是基于Shulmann et al.,1986所用的量表的修改。所有圆是预先绘制的，并且给对象的指令是“设置时间11点10分”。评分系统(参见表2)范围为1分-6分，较高的分数反映更大量的错误和更多障碍。这个评分系统源于经验并且在临床实践的基础上进行修改。必要地，其留给单独的判断相当大的空间，但是其足够简单以具有高水平的评分者间可信度。我们的研究适合分析三个主要组分。这些包括画钟测试与认知功能的其他度量的横向比较；画钟测试随时间的纵向描述，以及画钟测试的恶化与制度化的决定之间的关系。
表1：典型的简易精神状态检查
表2：典型的画钟测试
1.2血液样品
1.2.1测试样品
研究前检查后，本研究2周后开始，从所有参与者抽血。
将用于测定AD生物标记的所有血液样品分别收集入三个聚丙烯管：
1.含有钾-EDTA(Sarstedt Monovette,02.1066.001)，用于EDTA血浆
2.含有Li-肝素(Sartstedt Monovette,02.1065.001)，用于肝素血浆
3.空白(Sarstedt Monovette,02.1063.001)，用于血清
所有样品通过静脉穿刺或者通过从插入前臂静脉的留置导管反复抽血来收集。根据所选的时间方案收集血液(如上文的1.1章所述)。将血液在4°C下以1550g(3000rpm)离心10min以提供血浆。将每个独立样品的血浆或血清吸出，装入一个5ml聚丙烯冷冻管(Carl-Roth,E295.1)中，并且在-80°C下冷冻储存。将样品在抽血后一小时内离心。
1.2.2建立内部EDTA血浆标准-对照(ITS)的样品
通过静脉穿刺或者通过从插入前臂静脉的留置导管反复抽血来从良好定义的对照者采集血液样品(45ml)，将其装入含有钾-EDTA(SarstedtMonovette,02.1066.001)的5个聚丙烯管，用于EDTA血浆。将所有5个管在4°C下以1550g(3000rpm)离心10min以提供血浆。将血浆转移至2ml聚丙烯管(Eppendorf，0030120.094)，1ml等分。将这个内部血浆标准品的等分试样储存在-80°C下。将样品在抽血后一小时内离心。将对照血浆标记为“内部EDTA血浆标准-对照”(ITS)。如果在本发明的方法中应当使用其他体液(脑脊液、尿、淋巴、唾液、汗液、胸膜液、滑液、房水、泪液、胆汁、胰分泌物)，这些液体必须取自良好定义的对照者，如本文中对血浆样品所证实的。
1.3实验室方法
1.3.1测试样品
免疫沉淀
将EDTA血浆样品(含有4ml血浆)(其中本发明不限于EDTA血浆；还可以使用例如肝素血浆或血清)解冻并在2ml聚丙烯管(Eppendorf，0030120.094)中等分为1ml。将一片蛋白酶抑制剂(Roche,Complete miniProtease inhibitor cocktail,11836153001)溶于1ml D-PBS(Invitrogen,14190-094)。将25μl蛋白酶抑制剂溶液加入1ml EDTA血浆。每个样品除了一管，将所有等分试样再次冷冻并储存在-80°C下。向这些剩余的血浆样品管加入10μl的10%吐温-20。向每管加入2.5μg抗淀粉样蛋白β(17-24)抗体4G8(Millipore,MAB1561)、2.5μg抗淀粉样蛋白β(x-42)抗体12F4(Millipore,05-831)和2.5μg抗淀粉样蛋白β(x-40)抗体11A5-B10(Millipore,05-799)。
将所有血浆管在4°C下于架空摇床中温育过夜。为了固定淀粉样蛋白β-抗体复合物，100μl抗小鼠磁珠(Invitrogen,112-02D)用于每个1ml血浆样品。除了缀合在磁珠上的这些特别的抗小鼠抗体，可以使用所有其他抗小鼠抗体或抗宿主抗体(宿主：上文所列的一抗的来源)。这些抗体可以通过不同的缀合方法固定化在几种基质(柱基质或珠基质)上，非限制性实例为生物素-链霉亲和素相互作用、甲苯磺酰基-活化表面、环氧-活化表面、胺-表面或羧酸表面。使用之前，将100μl珠从原瓶转移入2ml管，并且用1mlPBS洗涤3次。洗涤之后，将珠重悬于200μl PBS中。将血浆管以2000xg短暂(30sec)离心。将上清转移入含有抗小鼠磁珠的管。将管在4°C下于架空摇床中温育过夜。
-第二天将管放入磁性分离器以允许将珠吸引至管壁。约1分钟后小心地去除上清，并且将珠用含有10mg/ml亲环蛋白18和0.05%吐温-20的500μl D-PBS洗涤两次。
洗脱捕获的淀粉样蛋白β
最后的洗涤步骤后，将溶液吸出，将管从磁性分离器取出，将100μl的50%(v/v)甲醇/0,5%(v/v)甲酸加入每个管，并且通过轻微震动将珠重悬。将所有管在室温下温育1小时。然后将管再次放入磁性分离器，并且将来自每个管的40μl与440μl EIA缓冲液(IBL 1-40(N)ELISA试剂盒的稀释缓冲液)混合。将稀释的样品的pH用16μl的400mM Na2HPO4、400mMKH2PO4pH8.0调整至EIA缓冲液的pH。
洗脱的淀粉样蛋白β肽的定量
利用IBL 1-40(N)ELISA试剂盒IBL,JP27714)进行肽浓度的测定。
除了上文所述的Aβ(1-40)ELISA，可以使用能够检测全长Aβ1-40的所有其他可商购的ELISA试剂盒。
将稀释的样品施用于ELISA板(100μl/空，重复测定)。ELISA标准品取自试剂盒，根据制造商的说明书方案溶解和稀释。施用所有样品和浓度标准品后，将ELISA板在4°C下温育18h。第二天根据制造商的说明书方案进行ELISA。
终止比色反应后，利用酶标仪(TECAN Sunrise)在450nm下测定每个孔中的吸光度，通过550nm下的吸光度修正。
通过绘制修正的450nm下的吸光度对相应的标准肽浓度来进行标准曲线的测定。利用Origin 7.0(Microcal)将曲线与四参数方程(方程1)拟合。
方程1：
y表示测量的吸光度，而x表示相应的浓度，A1-下渐近线，A2-上渐近线。
基于相应的吸光值利用方程2计算每个样品的ELISA的Aβ(1-40)浓度。
方程2：
为了测定血浆样品中的浓度，将计算的浓度通过EIA缓冲液稀释(包括pH调整)系数12.4以及免疫沉淀的浓缩效应(1ml至100μl)的系数0.1来修正。测定的血浆Aβ(1-40)浓度表示为pg/ml。
统计分析
利用学生t-测试检测Aβ(1-40)的血浆浓度与阿尔茨海默病阳性临床诊断的存在的相关性。
1.3.2内部EDTA血浆标准-对照(ITS)样品
免疫沉淀
ITS的免疫沉淀一般按照与上文所述用于测试样品相同的方法进行。
将ITS样品(含有1ml EDTA血浆)(肝素血浆、血清也是可能的)和测试样品同时解冻。将一片蛋白酶抑制剂(Roche,Complete mini Protease inhibitorcocktail,11836153001)溶于1ml D-PBS(Invitrogen,14190-094)。将25μl蛋白酶抑制剂溶液加入1ml ITS样品。根据测试样品的方法和操作，向ITS血浆样品加入10μl的10%吐温-20、2.5μg抗淀粉样蛋白β(17-24)抗体4G8(Millipore,MAB1561)、2.5μg抗淀粉样蛋白β(x-42)抗体12F4(Millipore,05-831)和2.5μg抗淀粉样蛋白β(x-40)抗体11A5-B10(Millipore,05-799)。
所有随后的步骤按照与上文所述用于测试样品相同的方法进行。洗脱捕获的淀粉样蛋白β
将ITS样品按照与上文所述用于测试样品相同的方法处理。
洗脱的淀粉样蛋白β肽的定量
ITS样品中洗脱的淀粉样蛋白β肽的定量按照与上文所述用于测试样品相同的方法进行。
统计分析
在一个测量内，ITS样品和测试血浆样品的Aβ(1-40)浓度一起在一个ELISA板上测定。此后，根据方程3将测定的测试样品的血浆Aβ(1-40)浓度标准化至测定的ITS样品的浓度：
方程3：
2.结果
2.1人口学特征
总的来说，45个人参与本研究，30个健康对照和15个AD患者(AD患者在下文中称为“患者”)。为了观察可能的年龄对血浆Aβ的影响，在广泛的年龄范围中选择对照者，并且将他们亚分类为三组。I组包含18-30岁的个体，II组是31-45岁的个体，而III组个体为46-65岁。人口学特征如表3所示。
表3人口学特征
2.2心理测试
如上文所述，为了评价神经心理功能，所有参与者已进行DemTect、简易精神状态测试和画钟测试。这些测试在研究前以及研究开始后3个月、6个月、9个月和12个月进行。
DemTect测试
将原始分数转化以给出年龄和教育独立的分数，分类为“怀疑痴呆”(分数≤8)、“轻度认知障碍”(分数9-12)和“适合年龄”(分数13-18)。所有访问的测试结果如表2所示。
三组健康个体与患者相比有明显差异。特别地，可以看到AD患者的平均得分低于健康对照的平均得分的一半。患者的平均值未随时间变化，因此在图2中仅给出一次。
简易精神状态测试
在MMS测试中，27分(30分中)以上的任何分数是有效正常的。低于该分数，20-26分表示轻度痴呆；10-19分中度痴呆，而低于10分严重痴呆。正常值还针对教育程度和年龄进行修正。低至非常低的分数与痴呆的存在紧密相关，尽管其他精神病症也可以导致MMST测试上的异常发现。测试结果如图3所示。相同的健康对照和AD患者参与这个测试。
在图3中以与图2相似的方式显示，三组健康个体与患者相比有明显差异。
画钟测试
画钟测试的评分系统范围为1分-6分，较高的分数反映更大量的错误和更多障碍。这个评分系统源于经验并且在临床实践的基础上进行修改。必要地，其留给单独的判断相当大的余地，但是其足够简单以具有高水平的评分者间信度。再次地，与上文两个测试中相同的健康对照组和AD患者参与。
本研究适合分析以下三个主要组分。这些包括画钟测试与认知功能的其他度量的横向比较；画钟测试随时间的纵向描述，以及画钟测试的恶化与制度化的决定之间的关系。
测试结果如图4所示。
三组健康个体与患者相比有明显差异。结果以与图2和3相似的方式显示于图4。
2.3血浆Aβ(1-40)浓度，未标准化的
如上文所述，在T0+9个月系列的EDTA血浆中测定Aβ(1-40)浓度。T0+9系列的其他样品用来优化和建立新的免疫沉淀方法。总的来说，用10个AD样品和26个对照样品测试最终优化的方法。测定的血浆Aβ(1-40)浓度如表4所示。
表4所有分析的样品(T0+9个月系列)的血浆Aβ(1-40)浓度
计算所有四组的平均浓度值和平均值的标准误差。学生t-测试已比较AD组与每个单一的对照组。
对于所有对照组，均获得健康志愿者与AD组之间的显著差异。当仔细检查一组内的个别浓度时，两个个体是引人注目的。AD个体Nr.22表现出健康对照典型的Aβ(1-40)浓度。其不适合进入AD组。如果比较研究前心理测试的个人结果(参见下文的图2-4和表4)，显然个体No.22具有目前为止归类为AD组的所有分析的参与者的最高得分。DemTect得分在‘适合年龄’的范围中，并且MMSE得分在MCI个体范围的上限。相比之下，对照个体No.23表现出AD组典型的Aβ(1-40)浓度。研究前心理测试(参见下文的图2-4和表5)提供No.23具有目前为止归类为对照组的所有分析的参与者的最低得分。显然升高的血浆Aβ(1-40)水平是阿尔茨海默病发生的第一指征。
表5所有分析的个体的心理测试(研究前)
基于心理测试和血浆分析的发现，不可以认为AD个体No.22是正确分类的。在对照个体No.23的情况中，可能的早期阿尔茨海默病是可信的。因此，将数据统计分析，包括或排除这两个个体(下文的表6)。
表6：分析的AD个体vs.对照的统计分析(I-III组一起)
为了使得能够早期临床诊断，优选在尚未有进一步的症状的阶段，待使用的生物标记在阿尔茨海默病的早期，例如轻度认知障碍(MCI)期间已改变是重要的。如果发病早期治疗对于延长个体的生命和生活质量是必需的，这特别重要。
为了确定Aβ(1-40)水平是否适合作为AD的发病早期标记，在进一步的实验中评价Aβ(1-40)的血浆浓度与DemTect和MMSE得分的关联(图5)。
如从上文本发明者的研究的结果所预期的，分别在与高DemTect和MMSE得分对应的对照个体中观察到最低的Aβ(1-40)浓度。在归类为轻度认知障碍的人中观察到最高浓度。表明中度或严重痴呆的得分的进一步下降还表现出血浆Aβ(1-40)水平的降低，其位于有效正常和MCI之间。这个发现表明显著升高的血浆Aβ(1-40)水平是早期阿尔茨海默病发生的初始和早期标记，在这个时间点没有或仅轻微的认知功能下降是可观察到的。
2.4血浆Aβ(1-40)浓度，包括ITS样品后标准化的
相对Aβ(1-40)浓度的比较在EDTA血浆样品的第二系列的测量(T0+6个月)中进行。在第一步中，将来自对照个体和AD患者的测试样品一起在一个ELISA板上分析。将测定的血浆Aβ(1-40)水平标准化至在这个测量周期内分析的来自对照个体的所有样品的平均值。Aβ水平的标准化根据方程4进行：
方程4：
在两个不同测量周期中分析总计10个对照和10个AD样品。相对Aβ(1-40)浓度如表7所示。
表7：20个分析样品(T0+6个月系列)的相对血浆Aβ(1-40)浓度
如表7所示，在每个测量周期内使用内部标准品提高可靠性，并且使得在不同测量周期中测定的Aβ肽水平的值之间能够更好地比较。然而，在双盲研究中，不可能区分AD和对照样品。因此，使用在每个测量周期中共分析的内部血浆标准品(ITS)是比较来自不同测量周期的Aβ肽值的唯一方法。
因此，在ITS的存在下分析T0+6个月样品的血浆Aβ(1-40)水平。所有值均标准化至ITS的Aβ(1-40)浓度。结果如图6所示。如图6所示，所有分析的AD样品的相对Aβ(1-40)水平的平均值为1.31，而所有分析的来自健康对照个体的样品的相对Aβ(1-40)水平的平均值为0.94。这些值与表7中的平均值的比较表现出很好的一致性，与健康个体相比，在AD患者中血浆Aβ(1-40)水平升高约32%。这些数据表明，在每个测量周期内使用与未知血浆样品一起分析的内部血浆标准品提高在不同测量周期中测定的Aβ(1-40)水平的可靠性和可比性。
3.讨论
本发明者可以证实Aβ(1-40)的高血浆浓度与阿尔茨海默病的阳性临床诊断相关。虽然较早的研究(van Oijen et al.,2006;Mayeux etal.,2003;Mehtaet al.,2000,)试图证实这种相关性。但是统计显著性并不令人信服，这导致认为Aβ(1-40)不适合作为AD的标记，因为不可以建立统计上的显著相关性，并且由于缺少合适的测定方法。在本研究中，通过双抗体测定方法直接测定Aβ(1-40)浓度。在Rotterdam研究(van Oijen et al.,2006)中，所有样品的平均浓度值为192.0pg/ml。Mayeux和同事发现在基线AD中153.6pg/ml，而非痴呆老年人中133.3pg/ml，Mehta和同事在患有散发性AD的患者和健康对照中分别获得272pg/ml和219pg/ml。在本研究中，发明者分别获得385pg/ml(AD患者)和304pg/ml(健康对照)的平均血浆Aβ(1-40)浓度。检测的血浆Aβ(1-40)的升高是使用新的二价捕获系统的结果。如上文所详细解释的，在这个系统中，一个Aβ肽分子由识别两个不同表位的两个抗体分子结合。第一(捕获)抗体与Aβ(1-40)的氨基酸17-24相互作用。第二捕获抗原结合至Aβ(1-40)的C端。在一优选实施方案中，两种抗体均由磁珠上的一种抗小鼠抗体固定。不希望被这种假设束缚，认为可以实现两种捕获抗体与人血浆中的Aβ肽之间的协同结合。已证实特别强和特异性的这种结合提供从诸如血浆的给定样品中捕获所有Aβ(1-40)肽分子，并且还确保去除会干扰通过ELISA定量的其他血浆蛋白。在本研究中AD患者和对照之间的显著差异变得明显，其中给定样品的Aβ(1-40)肽分子可以定量方式检测。
在预测阿尔茨海默病的常规方法中，优选在CSF或血浆中测定Aβ(1-42)水平。这个水平在AD患者中降低，因为脑中Aβ肽的聚集升高。令人惊讶的是Aβ(1-40)浓度反而升高。Kim和同事已发现体内Aβ(1-40)的强抗淀粉样病变效果(Kim et al.,2007)。他们可以证实提高Tg2576或BRI-Aβ42A小鼠脑中的Aβ(1-40)水平保护免受淀粉样蛋白病理。此外，这种影响的程度相当意外：BRI-Aβ40/Tg2576小鼠的前脑中Aβ(1-40)水平的约2倍升高对Aβ沉积具有终身抑制作用，与同窝Tg2576中的Aβ沉积相比，范围从在11个月的约80%的降低至在20个月的约50%。几个其他研究已支持这个发现(Deng et al.,2006;Mucke et al.,2000,McGowan et el.,2005)。可以想象AD患者的血浆或CSF中Aβ(1-40)水平的升高是由脑中增加的生产所引起的，这是升高的Aβ肽聚集倾向的结果以抑制这种意外反应。
仅通过应用本发明的新方法变为可能的血浆Aβ(1-40)浓度与神经心理学测试的相关性已证实：Aβ(1-40)水平的显著升高是阿尔茨海默病发展的早期事件。从而，血浆Aβ(1-40)的水平现在可以用作诊断阿尔茨海默病的发生的标记。
如本文所证实的，在每个测量周期内使用与未知血浆样品一起分析的内部血浆标准品进一步提高在不同测量周期中测定的Aβ(1-40)水平的可靠性和可比性。
参考文献
Blennow K,de Leon MJ,Zetterberg H.Alzheimer′s disease.Lancet.2006Jul 29;368(9533):387-403
Ferri CP,Prince M,Brayne C,Brodaty H,Fratiglioni L,Ganguli M,Hall K,Hasegawa K,HendrieH,Huang Y,Jorm A,Mathers C,Menezes PR,Rimmer E,Scazufca MGlobal prevalence of dementia:a Delphi consensus study.Lancet.2005 Dec 17;366(9503):2112-7
Knopman DS,DeKosky ST,Cummings JL,Chui H,Corey-Bloom J,Relkin N,Small GW，Miller B,Stevens JC.Practice parameter:diagnosis of dementia(an evidence-based review).Report of the QualityStandards Subcommittee of the American Academy ofNeurology.Neurology.2001 May 8;56(9):1143-53
Waldemar G,Dubois B,Emre M,Georges J,McKeith IG,Rossor M,Scheltens P,Tariska P,Winblad B;EFNS.Recommendations for the diagnosis and management of Alzheimer′s disease and otherdisorders associated with dementia:EFNS guideline.EurJNeurol.2007Jan;14(1):26.
Dubois B,Feldman HH,Jacova C,DekoskyS T,Barberger-Gateau P,Cummings J,Delacourte A,Galasko D,Gauthier S,Jicha G，Meguro K,O′brien J,Pasquier F,Robert P,Rossor M,Salloway S,Stern Y，Visser PJ,Scheltens P.Research criteria for the diagnosis of Alzheimer′s disease:revising theNINCDS-ADRDA criteria.Lancet Neurol.2007Aug;6(8):734-46.
Jellinger KA.Alzheimer’s disease.In:Gilman S,editor.Neurobiology of Disease.Amsterdam:ElsevierAcademic Press;2007.p.69-82
Petersen RC,Smith GE,Waring SC,Ivnik RJ,Tangalos EG，Kokmen E.Mild cognitive impairment:clinical characterization and outcome.Arch Neurol.1999 Mar；56(3):303-8
Chertkow H,Massoud F,Nasreddine Z,Belleville S,Joanette Y，Bocti C,Drolet V，Kirk J,FreedmanM,Bergman H.Diagnosis and treatment of dementia:3.Mild cognitive impairment and cognitiveimpairment without dementia.CMAJ.2008 May6；178(10):1273-85
Scheff SW，Price DA,Schmitt FA,Mufson EJ.Hippocampal synaptic loss in early Alzheimer′s diseaseand mild cognitive impairment.Neurobiol Aging.2006Oct;27(10):1372-84
Markesbery WR,Schmitt FA,Kryscio RJ,Davis DG，Smith CD,Wekstein DR.Neuropathologicsubstrate ofmild cognitive impairment.Arch Neurol.2006Jan;63(1):38-46.
Bouwman FH,Schoonenboom SN,van der Flier WM,van Elk EJ,Kok A,Barkhof F,BlankensteinMA,Scheltens P.CSF biomarkers and medial temporal lobe atrophy predict dementia in mild cognitiveimpairment.NeurobiolAging.2007 Jul；28(7):1070-4
Saito Y，Murayama S.Neuropathology of mild cognitive impairment.Neuropathology.2007Dec;27(6):578-84
Jicha GA,Parisi JE,Dickson DW，Johnson K,Cha R,Ivnik RJ,Tangalos EG，Boeve BF,KnopmanDS,Braak H,Petersen RC.Neuropathologic outcome of mild cognitive impairment followingprogression to clinical dementia.Arch Neurol.2006 May;63(5):674-81
Petersen RC,Parisi JE,Dickson DW，Johnson KA,Knopman DS,Boeve BF,Jicha GA,Ivnik RJ,Smith GE,Tangalos EG，Braak H,Kokmen E.Neuropathologic features of amnestic mild cognitiveimpairment.Arch Neurol.2006May;63(5):665-72
Gauthier S,Reisberg B,Zaudig M,Petersen RC,Ritchie K,Broich K,Belleville S,Brodaty H,Bennett D,Chertkow H,Cummings JL,de Leon M,Feldman H,Ganguli M,Hampel H,Scheltens P,Tierney MC,Whitehouse P，Winblad B;International Psychogeriatric Association Expert Conference onmild cognitive impairment.Mild cognitive impairment.Lancet.2006 Apr 15;367(9518):1262-70
Fischer P，Jungwirth S,Zehetmayer S,Weissgram S,Hoenigschnabl S,Gelpi E,Krampla W，TraglKH.Conversion from subtypes of mild cognitive impairment to Alzheimer dementia.Neurology.2007 Jan23;68(4):288-91
Devanand DP,Pradhaban G，Liu X,Khandji A,De Santi S,Segal S,Rusinek H,Pelton GH,HonigLS,Mayeux R,Stern Y，Tabert MH,de Leon MJ.Hippocampal and entorhinal atrophy in mild cognitiveimpairment:prediction ofAlzheimer disease.Neurology.2007Mar13;68(1l):828-36
Rossi R,Geroldi C,Bresciani L,Testa C,Binetti G，Zanetti O,Frisoni GB.Clinical andneuropsychological features associated with structural imaging patterns in patients with mild cognitiveimpairment.Dement GeriatrCogn Disord.2007；23(3):175-83
Whitwell JL,Petersen RC,Negash S,Weigand SD,Kantarci K,Ivnik RJ,Knopman DS,Boeve BF,Smith GE,Jack CR Jr.Patterns of atrophy differ among specific subtypes of mild cognitive impairment.Arch Neurol.2007 Aug；64(8):1130-8
Panza F,Capurso C,D′Introno A,Colacicco AM,Capurso A,Solfrizzi V.Heterogeneity of mildcognitive impairment and other predementia syndromes in progression to dementia.NeurobiolAging.2007Oct;28(10):1631-2;discussion 1633-4
Hyman SE.Can neuroscience be integrated into the DSM-V?NatRev Neurosci.2007Sep;8(9):725-32
Blennow K.Cerebrospinal fluid protein biomarkers for Alzheimer′s disease.NeuroRx.2004Apr;1(2):213-25
Blennow K.CSF biomarkers for Alzheimer′s disease:use in early diagnosis and evaluation of drugtreatment.Expert Rev Mol Diagn.2005Sep;5(5):661-72
Hampel H,Buerger K.Biomarkers in blood and cerebrospinal fluid.In:Herholz K,Morris C,Perani D,editors.The Dementias:Early Diagnosis and Evaluation.New York：Taylor & Francis;2006.p.73-107
Lewczuk P,Kornhuber J,Wiltfang J.The German Competence Net Dementias:standard operatingprocedures for the neurochemical dementia diagnostics.J Neural Transm.2006 Aug;113(8):1075-80Irizarry MC.Biomarkers ofAlzheimer disease in plasma.NeuroRx.2004 Apr；1(2):226-34
Barnes J,Foster J,Fox NC.Structural magnetic resonace imigaing-derived biomarkers for Alzheimer’sdisaese.Biomarkers Med.2007；1:79-92
Vemuri P,Gunter JL,Senjem ML,Whitwell JL,Kantarci K,Knopman DS,Boeve BF,Petersen RC,Jack CR Jr.Alzheimer′s disease diagnosis in individual subjects using structural MR images:validationstudies.Neuroimage.2008 Feb 1；39(3):1186-97
Barkhof F,Polvikoski TM,van Straaten EC,Kalaria RN,Sulkava R,Aronen HJ,
L,RastasS,Oinas M,Scheltens P,Erkinjuntti T.The significance of medial temporal lobe atrophy:a postmortemMRI study in the very old.Neurology.2007 Oct 9;69(15):1521-7
Mevel K,Desgranges B,Baron JC,Landeau B,De la Sayette V，Viader F,Eustache F,Chételat G.Detecting hippocampal hypometabolism in Mild Cognitive Impairment using automatic voxel-basedapproaches.Neuroimage.2007 Aug 1;37(1):18-25
Kemppainen NM,Aalto S,Wilson IA,
K,Helin S,Brück A,Oikonen V，
M,Scheinin M,Viitanen M,Parkkola R,Rinne JO.PET amyloid ligand[11C]PIB uptake is increased inmild cognitive impairment.Neurology.2007 May 8;68(19):1603-6
Klunk WE,Engler H,Nordberg A,Wang Y，Blomqvist G，Holt DP,
M,Savitcheva I,Huang GF,Estrada S,Ausén B,Debnath ML,Barletta J,Price JC,Sandell J,Lopresti BJ,Wall A,Koivisto P,Antoni G，Mathis CA,
B.Imaging brain amyloid in Alzheimer′s disease withPittsburgh Compound-B.Ann Neurol.2004 Mar;55(3):306-19
Rowe CC,Ng S,Ackermann U,Gong SJ,Pike K,Savage G，Cowie TF,Dickinson KL,Maruff P，Darby D,Smith C,Woodward M,Merory J,Tochon-Danguy H,O′Keefe G，Klunk WE,Mathis CA,Price JC,Masters CL,Villemagne VL.Imaging beta-amyloid burden in aging and dementia.Neurology.2007 May 15;68(20):1718-25
Pike KE,Savage G，Villemagne VL,Ng S,Moss SA,Maruff P,Mathis CA,Klunk WE,Masters CL,Rowe CC.Beta-amyloid imaging and memory in non-demented individuals:evidence for preclinicalAlzheimer′s disease.Brain.2007 Nov;130(Pt 11):2837-44
Huang C,Eidelberg D,Habeck C,Moeller J,Svensson L,Tarabula T,Julin P.Imaging markers ofmild cognitive impairment:multivariate analysis of CBF SPECT.Neurobiol Aging.2007 Jul;28(7):1062-9
Kantarci K,Weigand SD,Petersen RC,Boeve BF,Knopman DS,Gunter J,Reyes D,Shiung M,O′Brien PC,Smith GE,Ivnik RJ,Tangalos EG，Jack CR Jr.Longitudinal 1H MRS changes in mildcognitive impairment and Alzheimer′s disease.Neurobiol Aging.2007 Sep;28(9):1330-9
Petrella JR,Wang L,Krishnan S,Slavin MJ,Prince SE,Tran TT,Doraiswamy PM.Corticaldeactivation in mild cognitive impairment:high-field-strength functional MR imaging.Radiology.2007Oct;245(1):224-35
Kircher TT，Weis S,Freymann K,Erb M,Jessen F，Grodd W，Heun R,Leube DT.Hippocampalactivation in patients with mild cognitive impairment is necessary for successful memory encoding.JNeurol Neurosurg Psychiatry.2007 Aug;78(8):812-8
Kropholler MA,Boellaard R,van Berckel BN,Schuitemaker A,Kloet RW，Lubberink MJ,Jonker C,Scheltens P,Lammertsma AA.Evaluation of reference regions for(R)-[(11)C]PK11195 studies inAlzheimer′s disease and mild cognitive impairment.J Cereb Blood Flow Metab.2007 Dec;27(12):1965-74
Attems J.Sporadic cerebral amyloid angiopathy:pathology，clinical implications,and possiblepathomechanisms.Acta Neuropathol.2005 Oct;110(4):345-59
Blennow K,Hampel H.CSF markers for incipient Alzheimer′s disease.Lancet Neurol.2003Oct;2(10):605-13
Hansson O,Zetterberg H,BuchhaveP，Londos E,Blennow K,Minthon L.Association between CSFbiomarkers and incipient Alzheimer′s disease in patients with mild cognitive impairment:a follow-up study.Lancet Neurol.2006Mar;5(3):228-34
Hansson O,Zetterberg H,Buchhave P，Andreasson U,Londos E,Minthon L,Blennow K.Predictionof Alzheimer′s disease using the CSF Abeta42/Abeta40 ratio in patients with mild cognitive impairment.Dement Geriatr Cogn Disord.2007；23(5):316-20
Fagan AM,Mintun MA,Mach RH,Lee SY，Dence CS,Shah AR,LaRossa GN,Spinner ML,KlunkWE,Mathis CA,DeKosky ST，Morris JC,Holtzman DM.Inverse relation between in vivo amyloidimaging load and cerebrospinal fluid Abeta 42 in humans.Ann Neurol.2006 Mar；59(3):512-9
Prince JA,Zetterberg H,Andreasen N,Marcusson J,Blennow K.APOE epsilon 4 allele is associatedwith reduced cerebrospinal fluid levels of Abeta42.Neurology.2004Jun8;62(11):2116-8
Strozyk D,Blennow K，White LR,Launer LJ.CSF Abeta 42 levels correlate withamyloid-neuropathology in a population-based autopsy study.Neurology.2003 Feb 25;60(4):652-6
Walsh DM,Klyubin I,Shankar GM,Townsend M,Fadeeva JV，Betts V，Podlisny MB,Cleary JP,Ashe KH,Rowan MJ,Selkoe DJ.The role of cell-derived oligomers of Abeta in Alzheimer′s disease andavenues for therapeutic intervention.Biochem Soc Trans.2005Nov;33(Pt 5):1087-90
Ewers M,Buerger K,Teipel SJ,Scheltens P,
J,Zinkowski RP,Bouwman FH,
P,Schoonenboom NS,Andreasen N,Wallin A,DeBernardis JF,Kerkman DJ,Heindl B,Blennow K,Hampel H.Multicenter assessment of CSF-phosphorylated tau for the prediction of conversion of MCI.Neurology.2007Dec 11;69(24):2205-12
Fagan AM,Roe CM,Xiong C,Mintun MA,Morris JC,Holtzman DM.Cerebrospinal fluidtau/beta-amyloid(42)ratio as a prediction of cognitive decline in nondemented older adults.ArchNeurol.2007Ma r;64(3):343-9.
Gustafson DR,Skoog I,Rosengren L,Zetterberg H,Blennow K.Cerebrospinal fluid beta-amyloid 1-42
concentration may predict cognitive decline in older women.J Neurol Neurosurg Psychiatry.2007May;78(5):461-4
Li G，SokalI,Quinn JF，Leverenz JB,Brodey M,Schellenberg GD,Kaye JA,Raskind MA,Zhang J,Peskind ER,Montine TJ.CSF tau/Abeta 42 ratio for increased risk of mild cognitive impairment:afollow-up study.Neurology.2007Aug 14;69(7):631-9
Stomrud E,Hansson O,Blennow K,Minthon L,Londos E.Cerebrospinal fluid biomarkers predictdecline in subjective cognitive function over 3 years in healthy elderly.Dement GeriatrCogn Disord.2007;24(2):118-24
Hampel H,Teipel SJ,Fuchsberger T,Andreasen N,Wiltfang J,Otto M,Shen Y，Dodel R,Du Y，Farlow M,
HJ,Blennow K,Buerger K.Value of CSF beta-amyloid1-42and tau as predictors ofAlzheimer′s disease in patients with mild cognitive impairment.Mol Psychiatry.2004 Jul;9(7):705-10
Maccioni RB,Lavados M,Guillón M,Mujica C,Bosch R,Farías G，Fuentes P.Anomalouslyphosphorylated tau and Abeta fragments in the CSF correlates with cognitive impairment in MCI subjects.Neurobiol Aging．2006 Feb；27(2)：237-44
Clark CM，Xie S，Chittams J，Ewbank D，Peskind E，Galasko D，Morris JC，McKeel DW Jr，FnvlowM，Weitlauf SL，Quinn J，Kaye J，Knopman D，Arai H，Doody RS，DeCnvli C，Leight S，Lee VM，Trojanowski JQ.Cerebrospinal fluid tau and beta-amyloid：how well do these biomarkers reflectautopsy-confirmed dementia diagnoses?Arch Neurol.2003 Dec;60(12):1696-702
Buerger K，Ewets M，
T，Zinkowski R，Alaftuzoff I，Teipel SJ，DeBerbardis J，Kerkman D，McCulloch C，Soininen H，Hampel H．CSF phosphorylated tau protein correlates with neocorticalneurofibrillary pathology in Alzheimer′s disease.Brain.2006 Nov;129(Pt 11):3035-41
Engelborghs S，Sleegers K，Cras P，Brouwers N，Serneels S，De Leenheir E，Martin JJ，VanmechelenE，Van Broeckhoven C，De Deyn PP.No association of CSF biomarkers with APOEepsilon4，plaque andtangle burden in definite Alzheimer′s disease.Brain.2007 Sep；130(Pt 9)：2320-6
Wiltfang J，Esselmann H，Bibl M，Hüll M，Hampel H，Kessler H，
L，
J，Peters O，Jessen F，Luckhaus C，Perneczky R，Jahn H，Fiszer M，Maler JM，Zimmermann R，Bruckmoser R，Kornhuber J．LeWczuk P．Amyloid beta peptide ratio 42/40 but not A beta 42 correlates withphospho-Tau in patients with low-and high-CSF A beta 40 load.J Neurochem.2007 May；101(4):1055-9
Buerger K，Alafuzoff I，Ewers M，
T，Zinkowski R，Hampel H.No correlation between CSF tauprotein phosphorylated at threonine 181 with neocortical neurofibrillary pathology in Alzheimer′s disease.Brain.2007 Oct;130(Pt 10)：e82
Buerger K，Otto M，Teipel SJ，Zinkowski R，Blennow K，DeBernardis J，Kerkman D，J，
P，Cepek L，McCulloch C，
HJ，Wiltfang J，Kretzschmar H，Hampel H．Dissociation between CSF total tau and tau protein phosphorylated at threonine 231 in Creutzfe1dt-Jakobdisease.Neurobiol Aging.2006 Jan；27(1)：10-5
Bibl M，Mollenhauer B，Esselmann H，Schneider M，Lewczuk P，Welge V，Gross M，Falkai P，Kornhuber J，Willfang J．Cerebrospinal fluid neurochemical phenotypes in vascular dementias：originaldata and mini-review.Dement Geriatr Cogn Disord.2008；25(3)：256-65
Zhong Z,Ewers M,Teipel S,Bürger K,Wallin A,Blennow K,He P,McAllister C,Hampel H,Shen Y.Levels of beta-secretase(BACE 1)in cerebrospinal fluid as a predictor of risk in mild cognitive impairment.Arch Gen Psychiatry.2007 Jun;64(6):718-26
McRae A,Martins RN,Fonte J,Kraftsik R,Hirt L,Miklossy J.Cerebrospinal fluid antimicroglialantibodies in Alzheimer disease:a putative marker of an ongoing inflammatory process.ExpGerontol.2007Ap r;42(4):355-63
Jellinger KA,Janetzky B,Attems J,Kienzl E.Biomarkers for early diagnosis of Alzheimer disease:′ALZheimer ASsociated gene′--a new blood biomarker?J Cell Mol Med 2008 Aug;12(4):1094-117
Finehout EJ,Franck Z,Choe LH,Relkin N,Lee KH.Cerebrospinal fluid proteomic biomarkers forAlzheimer′s disease.Ann Neurol.2007Feb;61(2):120-9
Zhang J,Goodlett DR,Quinn JF,Peskind E,Kaye JA,Zhou Y，Pan C,Yi E,Eng J,Wang Q,Aebersold RH,Montine TJ.Quantitative proteomics of cerebrospinal fluid from patients with Alzheimerdisease.J Alzheimers Dis.2005 Apr;7(2):125-33
Simonsen AH,McGuire J,Hansson O,Zetterberg H,Podust VN,Davies HA,Waldemar G，MinthonL,Blennow K.Novel panel of cerebrospinal fluid biomarkers for the prediction of progression toAlzheimer dementia in patients with mild cognitive impairment.Arch Neurol.2007 Mar；64(3):366-70
Lescuyer P,Allard L,Zimmermann-Ivol CG,Burgess JA,Hughes-Frutiger S,Burkhard PR,Sanchez JC,Hochstrasser DF.Identification of post-mortem cerebrospinal fluid proteins as potentialbiomarkers of ischemia and neurodegeneration.Proteomics.2004Aug；4(8):2234-41
Abdi F,Quinn JF,Jankovic J,McIntosh M,Leverenz JB,Peskind E,Nixon R,NuttJ,Chung K,Zabetian C,Samii A,Lin M,Hattan S,Pan C,Wang Y，Jin J,Zhu D,Li GJ,Liu Y，Waichunas D,Montine TJ,Zhang J.Detection of biomarkers with a multiplex quantitative proteomic platform incerebrospinal fluid of patients with neurodegenerative disorders.J Alzheimers Dis.2006 Aug；9(3):293-348
Irani DN,Anderson C,Gundry R,Cotter R,Moore S,Kerr DA,McArthurJC,Sacktor N,Pardo CA,Jones M,Calabresi PA,Nath A.Cleavage of cystatin C in the cerebrospinal fluid of patients withmultiple sclerosis.Ann Neurol.2006 Feb;59(2):237-47
Hansson SF,Simonsen AH,Zetterberg H,Andersen O,Haghighi S,Fagerberg I,Andréasson U,Westman-Brinkmalm A,Wallin A,Rüetschi U,Blennow K.Cystatin C in cerebrospinal fluid andmultiple sclerosis.Ann Neurol.2007 Aug；62(2):193-6
Ravaglia G，Forti P,Maioli F,Chiappelli M,Montesi F，Tumini E,Mariani E,Licastro F，Patterson C.Blood inflammatory markers and risk of dementia:The Conselice Study of Brain Aging.NeurobiolAging.2007Dec;28(12):1810-20
Engelhart MJ,Geerlings MI,Meij er J,Kiliaan A,Ruitenberg A,van Swieten JC,Stijnen T,HofmanA,Witteman JC,Breteler MM.Inflammatory proteins in plasma and the risk of dementia:the Rotterdamstudy.Arch Neurol.2004 May;61(5):668-72
Motta M,Imbesi R,Di Rosa M,Stivala F，Malaguarnera L.Altered plasma cytokine levels inAlzheimer′s disease:correlation with the disease progression.Immunol Lett.2007 Nov 30;114(1)：46-51
German DC,Gurnani P,Nandi A,Garner HR,Fisher W，Diaz-Arrastia R,O′Suilleabhain P,RosenblattKP.Serum biomarkers for Alzheimer′s disease:proteomic discovery.Biomed Pharmacother.2007Aug；61():383-9
Ray S,Britschgi M,Herbert C,Takeda-Uchimura Y，Boxer A,Blennow K,Friedman LF,GalaskoDR,Jutel M,Karydas A,Kaye JA,Leszek J,Miller BL,Minthon L,Quinn JF，Rabinovici GD,Robinson WH,Sabbagh MN,So Y T,Sparks DL,Tabaton M,Tinklenberg J,Yesavage JA,TibshiraniR,Wyss-Coray T.Classification and prediction of clinical Alzheimer′s diagnosis based on plasmasignalingproteins.Nat Med.2007 Nov;13(11):1359-62
Graff-Radford NR,Crook JE,Lucas J,Boeve BF，Knopman DS,Ivnik RJ,Smith GE,Younkin LH,Petersen RC,Youn kin SG.Association of low plasma Abeta42/Abeta40ratios with increased imminentrisk for mild cognitive impairment and Alzheimer disease.ArchNeurol.2007Mar；64(3):354-62
van Oijen M,Hofman A,Soares HD,Koudstaal PJ,Breteler MM.Plasma Abeta(1-40)and Abeta(1-42)and the risk of dementia:a prospective case-cohort study.Lancet Neurol.2006Aug;5(8):655-60
Song MS,Mook-Jung I,Lee HJ,Min JY，Park MH.Serum anti-amyloid-beta antibodies andAlzheimer′s disease in elderly Korean patients.J Int Med Res.2007May-Jun;35(3):301-6
Pesaresi M,Lovati C,Bertora P,Mailland E,Galimberti D,Scarpini E,QuadriP，Forloni G，Mariani C.Plasma levels of beta-amyloid(1-42)in Alzheimer′s disease and mild cognitive impairment.Neurobiol Aging.2006 Jun;27(6):904-5
Fukumoto H,Tennis M,Locascio JJ,Hyman BT,Growdon JH,Irizarry MC.Age but not diagnosis isthe main predictor of plasma amyloid beta-protein levels.Arch Neurol.2003Jul;60(7):958-64
Kosaka T,Imagawa M,Seki K,Arai H,Sasaki H,Tsuji S,Asami-Odaka A,Fukushima T,Imai K,Iwatsubo T.The beta APP717Alzheimer mutation increases the percentage of plasma amyloid-betaprotein ending at A beta42(43).Neurology.1997 Mar；48(3):741-5
Scheuner D,Eckman C,Jensen M,Song X,Citron M,Suzuki N,Bird TD,Hardy J,Hutton M,Kukull W，Larson E,Levy-Lahad E,Viitanen M,Peskind E,Poorkaj P,Schellenberg G，Tanzi R,Wasco W，Lannfelt L,Selkoe D,Younkin S.Secreted amyloid beta-protein similar to that in the senileplaques of Alzheimer′s disease is increased in vivo by the presenilin 1and 2and APP mutationslinked tofamilial Alzheimer′s disease.Nat Med.1996 Aug;2(8):864-70
Sobów T,Flirski M,Kloszewska I,Liberski PP.Plasma levels of alpha beta peptides are altered inamnestic mild cognitive impairment but not in sporadic Alzheimer′s disease.Acta NeurobiolExp (Wars).2005;65(2):117-24
Tamaoka A,Fukushima T,Sawamura N,Ishikawa K,Oguni E,Komatsuzaki Y，Shoji S.Amyloidbeta protein in plasma from patients with sporadic Alzheimer′s disease.J Neurol Sci.1996 Sep15;141(1-2):65-8
Vanderstichele H,Van Kerschaver E,Hesse C,Davidsson P,Buyse MA,Andreasen N,Minthon L,Wallin A,Blennow K,Vanmechelen E.Standardization of measurement of beta-amyloid(1-42)incerebrospinal fluid and plasma.Amyloid.2000Dec;7(4):245-58Abdullah L，Paris D，Luis C，Quadros A，Parrish J，Valdes L，Keegan AP，Mathura V，Crawford F，Mullan M.The influence of diagnosis，intra-and inter-person Variability on serum and plasma Abetalevels.Neurosci Lett.2007 Nov 27；428(2-3)：53-8
Freeman SH，Raju S，Hyman BT，Frosch MP，Irizarry MC.Plasma Abeta levels do not reflect brainAbeta levels.J Neuropathol Exp Neurol.2007 Apr；66(4)：264-71
Mehta PD，Pirttila T，Patrick BA，Barshatzky M，Mehta SP.Amyloid beta protein l-40 and 1-42 levelsin matched cerebrospinal fluid and plasma from patients with Alzheimer disease.Neurosci Lett.2001 May18；304(1-2)：102-6
Giedraitis V，J，Irizarry MC，
N，Hyman BT，Wahlund LO，Ingelsson M，LannfeltL．The normal equilibrium between CSF and plasma amyloid beta levels is disrupted in Alzheimer′sdisease.Neurosci Lett.2007Nov 12；427(3)：127-31
Blasko I，Jellinger K，Kemmler G，Krampla W，Jungwirth S，Wichart I，Tragl KH，Fischer P.Conversion from cognitive health to mild cognitive impairment and Alzheimer′s disease：prediction byplasma amyloid beta 42，medial temporal lobe atrophy and homocysteine.Neurobiol Aging. 2008Jan；29(1)：1-11
Mehta PD，
T，Mehta SP，Sersen EA，Aisen PS，Wisniewski HM．Plasma and cerebrospinal fluidlevels of amyloid beta proteins 1-40 and 1-42 in Alzheimer disease.Arch Neurol. 2000 Jan；57(1)：100-5
Brettschneider S，Morgenthaler NG，TG；Teipel SJ，Fischer-Schulz C，K，Dodel R，Du Y，
HJ，Bergmann A，Hampel H.Decreased serum amyloid beta(1-42)autoantibody levels in Alzheimer′sdisease，determined by a newly developed immuneprecipitation assay with radiolabeled amyloid beta(1-42)peptide.Biol Psychiatry. 2005 Apr l；57(7)：813-6
Bibl M，Esselmann H，Mollenhauer B，Weniger G，Welge V，Liess M，Lewczuk P，Otto M，Schulz JB，Trenkwalder C，Kornhuber J，Wiltfang J.Blood-based neurochemical diagnosis of vascular dementia：apilot study.JNeurochem.2007 Oct；103(2)：467-74
Hansson O，Zetterberg H，Vanmechelen E，Vanderstichele H，Andreasson U，Londos E，Wallin A，Minthon L，Blennow K.Evaluation of plasma Abeta(40)and Abeta(42)as predictors of conversion toAlzheimer′s disease in patients with mild cognitive impairment.Neurobiol Aging.2008 May 16.[Epubahead of print]
Kessler J,Calabrese P,Kalbe E,Berger F.Ein neues Screening-Verfahren zur Unterstützung derDemenzdiagnostik.Psycho 26 343-347(2000)
Folstein MF，Folstein SE,McHugh PR."Mini-mental state".A practical method for grading the cognitivestate of patients for the clinician.J Psychiatr Res.1975 Nov;12(3):189-98
Shulman KI,Shedletsky R,Silver IL.The challenge of time:Clock-drawing and cognitive function inthe elderly.Int J GeriatrPsychiatry 1,135-140(1986)
Irie K,Murakami K,Masuda Y，Morimoto A,Ohigashi H,Ohashi R,Takegoshi K,Nagao M,Shimizu T,Shirasawa T.Structure of beta-amyloid fibrils and its relevance to their neurotoxicity:implications for the pathogenesis of Alzheimer′s disease.J BiosciBioeng.2005 May;99(5):437-47
Simonsen AH,Hansson SF，Ruetschi U,McGuire J,Podust VN,Davies HA,MehtaP，Waldemar G，Zetterberg H,Andreasen N,Wallin A,Blennow K.Amyloid beta1-40quantification in CSF:comparisonbetween chromatographic and immunochemical methods.Dement Geriatr Cogn Disord.2007;23(4):246-50
Casas C,Sergeant N,Itier JM,Blanchard V，Wirths O,van der Kolk N,Vingtdeux V，van de Steeg E,Ret G,Canton T,Drobecq H,Clark A,Bonici B,Delacourte A,Benavides J,Schmitz C,Tremp G,Bayer TA,Benoit P,Pradier L.Massive CA1/2neuronal loss with intraneuronal and N-terminaltruncated Abeta 42 accumulation in a novel Alzheimer transgenic model.Am J Pathol.2004Oct;165(4):1289-300
Gelfanova V，Higgs RE,Dean RA,Holtzman DM,Farlow MR,Siemers ER,Boodhoo A,Qian YW，He X,Jin Z,Fisher DL,Cox KL,Hale JE.Quantitative analysis of amyloid-beta peptides incerebrospinal fluid using immuneprecipitation and MALDI-Tof mass spectrometry.Brief Funct GenomicProteomic.2007 Jun;6(2):149-58.
Sergeant N,Bombois S,Ghestem A,Drobecq H,Kostanjevecki V，Missiaen C,Wattez A,David JP,Vanmechelen E,Sergheraert C,Delacourte A.Truncated beta-amyloid peptide species in pre-clinicalAlzheimer′s disease as new targets for the vaccination approach.J Neurochem.2003Jun;85(6):1581-91
Deng Y，Tarassishin L,Kallhoff V，Peethumnongsin E,Wu L,Li YM,Zheng H.Deletion of presenilin l hydrophilic loop sequence leads to impaired gamma-secretase activity andexacerbated amyloid pathology.J Neurosci.2006 Apr 5；26(14)：3845-54.
Kim J，Onstead L，Randle S，Price R，Smithson L，Zwizinski C，Dickson DW，Golde T，McGowan E.Abeta 40 inhibits amyloid deposition in vivo.J Neurosci.2007 Jan 17；27(3)：627-33.
Mayeux R，Honig LS，Tang MX，Manly J，Stern Y，Schupf N，Mehta PD.Plasma A[beta]40 and A[beta]42 and Alzheimer′s disease：relation to age，mortality,and risk.Neurology 2003 Nov ll；6l(9)：1185-90
McGowan E，Pickford F，Kim J，Onstead L，Eriksen J，Yu C，Skipper L，Murphy MP’Bcard J，Das P，Jansen K，Delucia M，Lin WL，Dolios G， Wang R，Eckman CB，Dickson DW，Hutton M，Hardy J，Golde T.Abeta 42 is essential for parenchymal and vascular amyloid deposition in mice.Neuron.2005 Jul 2l；47(2)：19l-9.
Mehta PD.
T，Mehta SP’Sersen EA，Aisen PS，Wisniewski HM.Plasma and cerebrospinal fluid levels of amyloid beta proteins l-40 and l-42 in Alzheimer disease.ArchNeurol. 2000 Jan；57(1)：l00-5.
Mucke L，Masliah E，Yu GQ，Mallory M，Rockenstein EM，Tatsuno G，Hu K，Kholodenko D，Johnson-Wood K，McConlogua L.High-level neuronal expression of abeta l-42 in wild-type human amyloid protein precursor trarsgenicmice：synaptotoxicity without plaque formation.J Neurosci.2000 Jun l；20(11)：4050-8.
Simonsen AH，Hansson SF，Ruetschi U，McGuire J，Podust VN，Davies HA，Mehta P’Waldemar G，Zetterberg H，Andreasen N，Wallin A，Blennow K.Amyloid beta l-40 quantification in CSF：comparison between chromatographic and immunochemicalmethods.Dement Geriatt Cogn Disord.2007；23(4)：246-50.
van Oijen M，Hofman A，Soares HD，Koudstaal PJ，Breteler MM.
Plasma Abeta(1-40)and Abeta(1-42)and the risk of dementia：a prospective case-cohort study.LancetNeurol.2006 Aug；5(8)：655-60.
Claims (46)
1.一种检测生物学样品中的Aβ靶肽的方法，所述方法包括以下步骤：
i)使生物学样品与至少两种不同的捕获抗体接触，
ii)检测所得的免疫复合物，
iii)破坏所述免疫复合物，以及
iv)定量所捕获的Aβ肽。
2.权利要求1的方法，其中在存在内部标准样品的条件下进行所述方法。
3.权利要求1或2的方法，其中所述内部标准样品选自血浆样品、脑脊液样品、尿样品、淋巴样品、唾液样品、汗液样品、胸膜液样品、滑液样品、房水样品、泪液样品、胆汁样品、胰分泌物样品。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述内部标准样品为内部标准血浆样品(ITS)。
5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述方法包括将生物学样品的Aβ靶肽浓度以内部标准样品中测定的相应Aβ靶肽的浓度进行标准化的另一步骤，获得每个生物学样品的相对Aβ靶肽水平，所述Aβ靶肽浓度如Aβ(1-40)或Aβ(1-42)浓度。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述Aβ靶肽为Aβ(1-40)，包括其功能性等同物。
7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述Aβ靶肽为SEQ ID NO:1的Aβ(1-40)，包括其功能性等同物。
8.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述Aβ靶肽为Aβ(1-42)，包括其功能性等同物。
9.权利要求1-5或8中任一项的方法，其中所述Aβ靶肽为SEQ ID NO:2的Aβ(2-42)，包括其功能性等同物。
10.前述权利要求中任一项的方法，其中所述生物学样品选自血液、血清、尿、脑脊液(CSF)、血浆、淋巴、唾液、汗液、胸膜液、滑液、泪液、胆汁和胰分泌物。
11.前述权利要求中任一项的方法，其中所述生物学样品为血浆。
12.前述权利要求中任一项的方法，其中所述至少两种不同的捕获抗体各自对所述Aβ靶肽上的不同表位具有特异性。
13.前述权利要求中任一项的方法，其中所述捕获抗体选自
3D6，表位：1-5，
pAb-EL16，表位：1-7，
2H4，表位：1-8，
1E11，表位：1-8，
20.1，表位：1-10，
兔抗Aβ多克隆抗体，表位：1-14(Abcam)，
AB10，表位：1-16，
82E1，表位：1-16，
pAb1-42，表位：1-11，
NAB228，表位：1-11，
DE2，表位：1-16，
DE2B4，表位：1-17，
6E10，表位：1-17，
10D5，表位：3-7，
WO-2，表位：4-10，
1A3，表位5-9，
pAb-EL21，表位5-11，
310-03，表位5-16，
鸡抗人Aβ多克隆抗体，表位12-28(Abcam)，
鸡抗人Aβ多克隆抗体，表位25-35(Abcam)，
兔抗人Aβ多克隆抗体，表位：N端(ABR)，
兔抗人Aβ多克隆抗体(Anaspec)，
12C3，表位10-16，
16C9，表位10-16，
19B8，表位9-10，
pAb-EL26，表位：11-26，
BAM90.1，表位：13-28，
兔抗β-淀粉样蛋白(pan)多克隆抗体，表位：15-30(MBL)，
22D12，表位：18-21，
266，表位：16-24，
pAb-EL17；表位：15-24，
4G8，表位：17-24，
兔抗Aβ多克隆抗体，表位：22-35(Abcam)
G2-10；表位：31-40，
兔抗Aβ,aa 32-40多克隆抗体(GenScript Corporation)，
EP1876Y，表位：x-40，
G2-11，表位：33-42，
16C11，表位：33-42，
21F12，表位：34-42，
1A10，表位：35-40，以及
D-17山羊抗Aβ抗体，表位：C端。
14.前述权利要求中任一项的方法，其中所述捕获抗体选自3D6、BAN50、82E1、6E10、WO-2、266、BAM90.1、4G8、G2-10、1A10、BA27、11A5-B10、12F4以及21F12。
15.前述权利要求中任一项的方法，其中将以下抗体对用作捕获抗体：
4G8和11A5-B10，
3D6和4G8，
6E10和4G8，
82E1和4G8，
4G8和12F4，
4G8和21F12，
3D6和21F12，
6E10和21F12，
BAN50和4G8，
3D6和11A5-B10，
3D6和1A10，
3D6和BA27，
6E10和11A5-B10，
6E10和1A10，
6E10和BA27，
4G8和11A5-B10，
4G8和1A10，
4G8和BA27，
4G8和12F4，以及
4G8和21F12。
16.前述权利要求中任一项的方法，其中通过使用与各捕获抗体特异性反应的二抗来检测所述复合物。
17.前述权利要求中任一项的方法，其中所述二抗为抗小鼠抗体或抗兔抗体。
18.权利要求16或17的方法，其中所述二抗是标记的。
19.前述权利要求中任一项的方法，其中所述二抗固定化在磁珠上。
20.前述权利要求中任一项的方法，其中利用磁性分离器将携带所述免疫复合物的所述磁珠从所述生物学样品分离。
21.前述权利要求中任一项的方法，其中在存在50%(v/v)甲醇/0.5%(v/v)甲酸的条件下破坏所述免疫复合物。
22.前述权利要求中任一项的方法，其中定量所检测的免疫复合物。
23.前述权利要求中任一项的方法，其中通过选自夹心ELISA、淀粉样蛋白
测定、AlphascreenTM测定、多重测定系统、质谱分析法和蛋白印迹分析的定量方法定量所捕获的Aβ肽。
24.前述权利要求中任一项的方法，其中通过夹心ELISA的定量方法定量所捕获的Aβ肽。
25.权利要求24的方法，其中所述夹心ELISA包括对Aβ(1-40)的完整N端具有特异性的一抗；以及对Aβ(1-40)在氨基酸40结束的C端具有特异性的检测抗体。
26.权利要求24的方法，其中所述夹心ELISA包括对Aβ(1-42)的完整N端具有特异性的一抗；以及对Aβ(1-42)在氨基酸42结束的C端具有特异性的检测抗体。
27.权利要求24的方法，其中所述夹心ELISA包括对Aβ(1-40)的C端具有特异性的一抗；以及对Aβ(1-40)以Asp-Ala-Glu开始的完整N端具有特异性的检测抗体。
28.权利要求24的方法，其中所述夹心ELISA包括对Aβ(1-42)的C端具有特异性的一抗；以及对Aβ(1-42)以Asp-Ala-Glu开始的完整N端具有特异性的检测抗体。
29.权利要求25-28中任一项的方法，其中所述一抗是固定化的。
30.权利要求25-28中任一项的方法，其中所述检测抗体是标记的。
31.权利要求24的方法，其中使用用于定量Aβ(1-40)的ELISA试剂盒。
32.权利要求31的方法，其中所述ELISA试剂盒选自淀粉样蛋白-β(1-40)(N)ELISA(IBL,JP27714)；Aβ[1-40]人ELISA试剂盒(Invitrogen)；人淀粉样蛋白β(淀粉样蛋白-β),aa 1-40ELISA试剂盒(Wako ChemicalsUSA,Inc.)；以及淀粉样蛋白β1-40ELISA试剂盒(The Genetics Company)。
33.权利要求24的方法，其中使用用于定量Aβ(1-42)的ELISA试剂盒。
34.权利要求33的方法，其中所述ELISA试剂盒选自淀粉样蛋白-β(1-42)(N)ELISA(IBL,JP27712)；Aβ[1-42]人ELISA试剂盒(Invitrogen)、人淀粉样蛋白β(淀粉样蛋白-β),aa 1-42ELISA试剂盒(Wako ChemicalsUSA,Inc.)、淀粉样蛋白β1-40ELISA试剂盒(The Genetics Company)、
β-淀粉样蛋白(1-42)(Innogenetics)。
35.前述权利要求中任一项的方法，其中进行一个或多个心理测试以表征作为所述生物学样品的供体的个体的神经变性疾病状态。
36.前述权利要求中任一项的方法，其中所述心理测试选自DemTect测试、简易精神状态测试、画钟测试、ADAS-Cog、Blessed测试、CANTAB、Cognistat、NPI、BEHAVE-AD、CERAD、CSDD、GDS以及7分钟筛选量表。
37.前述权利要求中任一项的检测Aβ靶肽的方法用于诊断阿尔茨海默病的用途。
38.权利要求37的用途，用于阿尔茨海默病的鉴别诊断。
39.权利要求37或38的用途，用于阿尔茨海默病的早期诊断。
40.权利要求38或39的用途，用于轻度认知障碍的诊断。
41.一种用于诊断阿尔茨海默病的体外方法，其中使用权利要求1-36中任一项所述的用于检测Aβ靶肽的方法。
42.Aβ靶肽在诊断阿尔茨海默病中的用途。
43.权利要求42的用途，用于阿尔茨海默病的鉴别诊断。
44.权利要求40或41的用途，用于阿尔茨海默病的早期诊断。
45.权利要求43或44的用途，用于轻度认知障碍的诊断。
46.权利要求37-45中任一项的方法，其中所述Aβ靶肽为Aβ(1-40)，包括其功能性等同物。
Applications Claiming Priority (3)
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|---|---|---|---|
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107765015A (zh) * | 2017-09-08 | 2018-03-06 | 中国计量科学研究院 | 一种定量检测脑组织中Aβ40蛋白的方法 |
| CN108020673A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-05-11 | 首都医科大学宣武医院 | Aβ试剂盒、检测方法及应用 |
| CN108603880A (zh) * | 2016-02-08 | 2018-09-28 | 希森美康株式会社 | 受试物质的检测方法及受试物质的检测用试剂盒 |
| CN112219120A (zh) * | 2018-01-16 | 2021-01-12 | 大邱庆北科学技术院 | 通过使用鼻分泌物样本中的β淀粉样蛋白低聚物用于筛查阿尔茨海默病的进行性发展的组合物以及使用该组合物用于筛查阿尔茨海默病的进行性发展的方法 |
| CN115461474A (zh) * | 2020-05-14 | 2022-12-09 | 香港科技大学 | 用于评估阿尔茨海默病的蛋白标志物 |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITRM20120383A1 (it) * | 2012-03-20 | 2013-09-21 | Uni Degli Studi Di Milano B Icocca | Metodo e kit per la rivelazione di anticorpi. |
| JP2014232032A (ja) * | 2013-05-29 | 2014-12-11 | 独立行政法人国立長寿医療研究センター | 化学・物理現象検出方法及びその装置 |
| WO2015178249A1 (ja) | 2014-05-19 | 2015-11-26 | 国立大学法人名古屋大学 | サンプル中の成分の分析方法、サンプル中の成分の特異的分離方法及び質量分析用サンプル |
| BR112018002742B1 (pt) | 2015-08-13 | 2023-05-16 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Tubo de coleta de sangue evacuado, método para a avaliação do nível endógeno de ativação do sistema de contato em um sujeito, método para a avaliação do nível de um fármaco visando o sistema de contato em um sujeito e método para a avaliação da imunogenicidade de um fármaco visando o sistema de contato |
| KR20180094876A (ko) | 2015-11-09 | 2018-08-24 | 더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아 | 아밀로이드 베타 에피토프 및 이에 대한 항체 |
| JP7448174B2 (ja) | 2015-11-09 | 2024-03-12 | ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア | アミロイドベータ中間領域エピトープおよびそれに対する立体配座選択的抗体 |
| JP7065516B2 (ja) | 2015-11-09 | 2022-05-12 | ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア | アミロイドベータのｎ末端エピトープおよびそれに対する立体配座選択的抗体 |
| JP2019533426A (ja) | 2016-07-18 | 2019-11-21 | ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア | アミロイドベータに対する抗体 |
| US20180125920A1 (en) | 2016-11-09 | 2018-05-10 | The University Of British Columbia | Methods for preventing and treating A-beta oligomer-associated and/or -induced diseases and conditions |
| JP6891222B2 (ja) * | 2017-06-26 | 2021-06-18 | 株式会社島津製作所 | アフィニティ支持体及びそれを用いた物質の捕捉方法 |
| CN114072678A (zh) * | 2019-05-10 | 2022-02-18 | 奎斯特诊断投资有限责任公司 | 用于确定人血浆样本中的β-淀粉样蛋白42/40比率的多重测定 |
| JP7298855B2 (ja) * | 2019-06-13 | 2023-06-27 | 株式会社島津製作所 | アフィニティ支持体及びそれを用いた物質の捕捉方法 |
| JP2022007101A (ja) * | 2020-06-25 | 2022-01-13 | シスメックス株式会社 | Ａβペプチドを測定するための抗体セット、Ａβペプチドの測定方法及び試薬キット |
| JP2023551542A (ja) | 2020-11-30 | 2023-12-08 | エニグマ バイオインテリジェンス，インコーポレイテッド | アルツハイマー病の非侵襲的評価 |
| JP2024514049A (ja) * | 2021-03-16 | 2024-03-28 | ニューロビジョン イメージング， インコーポレイテッド | アルツハイマー病関連状態を診断するための生物流体ベースの方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0683234A1 (en) * | 1993-01-25 | 1995-11-22 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | ANTIBODY AGAINST $g(b)-AMYLOID OR DERIVATIVE THEREOF AND USE THEREOF |
| CN1784220A (zh) * | 2003-05-05 | 2006-06-07 | 前体生物药物股份公司 | 谷氨酰胺酰基和谷氨酸环化酶效应物的应用 |
| EP1717250A1 (en) * | 2004-02-20 | 2006-11-02 | Immuno-Biological Laboratories Co., Ltd. | Monoclonal antibody and use thereof |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4737456A (en) | 1985-05-09 | 1988-04-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Reducing interference in ligand-receptor binding assays |
| JP4374316B2 (ja) * | 1993-01-25 | 2009-12-02 | 武田薬品工業株式会社 | β−アミロイドまたはその誘導体に対する抗体およびその用途 |
| US20020182660A1 (en) | 2000-02-18 | 2002-12-05 | Fong Kei-Lai L. | N- and C-terminus specific immunoassays for full length beta-amyloid peptide-Abeta(1-40), Abeta(1-39), Abeta(1-40), Abeta(1-42) , and Abeta(1-43) |
| EP1480041A1 (en) * | 2003-05-22 | 2004-11-24 | Innogenetics N.V. | Method for the prediction, diagnosis and differential diagnosis of Alzheimer's disease |
| EP1944314A1 (en) | 2007-01-11 | 2008-07-16 | Philipps-Universität Marburg | Diagnosis of Alzheimer's disease and other neurodementing disorders |
| EP2020602A1 (en) | 2007-08-02 | 2009-02-04 | Araclon Biotech | High sensitivty immunoassays and kits for the determination of peptides and proteins of biological interest |
-
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0683234A1 (en) * | 1993-01-25 | 1995-11-22 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | ANTIBODY AGAINST $g(b)-AMYLOID OR DERIVATIVE THEREOF AND USE THEREOF |
| CN1784220A (zh) * | 2003-05-05 | 2006-06-07 | 前体生物药物股份公司 | 谷氨酰胺酰基和谷氨酸环化酶效应物的应用 |
| EP1717250A1 (en) * | 2004-02-20 | 2006-11-02 | Immuno-Biological Laboratories Co., Ltd. | Monoclonal antibody and use thereof |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| ERIK PORTELIUS ET AL.: "Determination of β-Amyloid Peptide Signatures in Cerebrospinal Fluid Using Immunoprecipitation-Mass Spectrometry", 《JOURNAL OF PROTEOME RESEARCH》 * |
| GELFANOVA VALENTINA ET AL.: "Quantitative analysis of amyloid-beta peptides in cerebrospinal fluid using immunoprecipitation and MALDI-Tof mass spectrometry", 《BRIEFINGS IN FUNCTIONAL GENOMICS AND PROTEOMICS》 * |
| JORGE GHISO ET AL.: "Alzheimer"s soluble amyloid ß is a normal component of human urine", 《FEBS LETTERS》 * |
| JORGE GHISO ET AL.: "Alzheimer"s soluble amyloid ß is a normal component of human urine", 《FEBS LETTERS》, vol. 408, no. 1, 12 May 1997 (1997-05-12) * |
| RONG WANG ET AL.: "The Profile of Soluble Amyloid b Protein in Cultured Cell Media.DETECTION AND QUANTIFICATION OF AMYLOID b PROTEIN AND VARIANTS BY IMMUNOPRECIPITATION-MASS SPECTROMETRY", 《THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108603880A (zh) * | 2016-02-08 | 2018-09-28 | 希森美康株式会社 | 受试物质的检测方法及受试物质的检测用试剂盒 |
| CN108603880B (zh) * | 2016-02-08 | 2021-01-05 | 希森美康株式会社 | 受试物质的检测方法及受试物质的检测用试剂盒 |
| US11169148B2 (en) | 2016-02-08 | 2021-11-09 | Sysmex Corporation | Method for detecting test substance and reagent kit for detecting test substance |
| CN107765015A (zh) * | 2017-09-08 | 2018-03-06 | 中国计量科学研究院 | 一种定量检测脑组织中Aβ40蛋白的方法 |
| CN108020673A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-05-11 | 首都医科大学宣武医院 | Aβ试剂盒、检测方法及应用 |
| CN112219120A (zh) * | 2018-01-16 | 2021-01-12 | 大邱庆北科学技术院 | 通过使用鼻分泌物样本中的β淀粉样蛋白低聚物用于筛查阿尔茨海默病的进行性发展的组合物以及使用该组合物用于筛查阿尔茨海默病的进行性发展的方法 |
| CN115461474A (zh) * | 2020-05-14 | 2022-12-09 | 香港科技大学 | 用于评估阿尔茨海默病的蛋白标志物 |
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