CN102599335A - 复合微生物发酵牧草饲料的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种复合微生物发酵牧草饲料的制备方法。首先制备康宁木霉CICC13037、胶红酵母CICC 31192、枯草芽孢杆菌CICC 10063、枯草芽孢杆菌CICC 10089四株菌的复合微生物发酵剂冻干粉，经2％的葡萄糖溶液活化后接种于鲜牧草段中，再经保温发酵、通风干燥后，包装即为成品。
Description
(一)技术领域
本发明涉及一种复合微生物发酵牧草饲料的制备方法。
(二)背景技术
牧草饲料发酵的发展历史悠久，世界各国均十分重视发酵发酵牧草饲料的研究与生产。中国对发酵牧草饲料的研究和应用尚处于起步阶段，多数以自然发酵的作坊式青贮饲料为主，尚未形成规模化生产，产品质量参差不齐，产品饲用安全性难以保证。
所谓生物饲料，是在微生态理论指导下采用已知有益的微生物与营养载体混合经发酵、干燥等特殊工艺制成的含活性益生菌的安全、无污染的菌体饲料。微生物一般都能在常温、常压下利用简单的营养物质生长繁殖，并在生长中增加营养丰富的菌体蛋白和积累有用的中间代谢产物，利用微生物发酵原理，生产、调制饲料一般具有设备投资少、每类催化效能较高的特点。
本发明是以牧草粉为发酵基质，采用多株细菌、霉菌、酵母菌共同发酵，制备复合微生物发酵牧草饲料，用于畜禽养殖。采用本方法制备的发酵牧草饲料富含多种畜禽肠道益生菌、多种酶类、维生素及较高的菌体蛋白，是一种营养丰富、消化吸收率很高的优良饲料。
(三)发明内容
本发明目的在于提供一种复合微生物发酵牧草饲料的制备方法。
本发明的目的是这样实现的：本发明中所涉及的百分比除另有注明之外为质量比，本发明的产品采用这样的方法来制备的：
1.发酵菌株的选择及培养基的制备
本发明选择的发酵菌株均购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，菌株编号及使用的培养基配方如下：
A菌——康宁木霉Trichoderma koningii，菌株编号：CICC 13037，培养基为：麸皮～马铃薯滤液100毫升蔗糖2克，PH 6，麸皮～马铃薯滤液的制备方法：5克麸皮和20克马铃薯加100毫升水煮沸过滤，蒸馏水补足至100毫升。
B菌——胶红酵母Rhodotorula mucilaginosa，菌株编号：CICC 31192，培养基为：5°Bé麦芽汁琼脂。
C菌——枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，菌株编号：CICC 10063，培养基为：氯化钠0.5克琼脂2克，牛肉膏1克蛋白胨1克，水100毫升PH 7.2。
D菌——枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，菌株编号：CICC 10089，培养基为：氯化钠0.5克琼脂2克，牛肉膏1克蛋白胨1克，水100毫升PH 7.2。
2.复合微生物发酵剂冻干粉的制备过程
2.1原菌种活化
分别量取0.9％的生理盐水10ml于4只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将4株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。
2.2发酵菌扩大培养
2.2.1母发酵剂的制备
分别量取4株菌培养基各200ml于4只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种2.1步骤中已经活化的菌种，在30℃、摇床转速110转/分钟条件下摇床培养24小时，作为母发酵剂。
2.2.2生产发酵剂的制备
首先配制质量百分比浓度为10％的脱脂奶乳浊液，分装于4只500mL三角瓶内，每瓶200mL，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃、摇床转速110转/分钟条件下摇床培养40-42小时，检测4株菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数≥109个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜109个/ml，继续培养，直至达到109个/ml。
2.3粉末冻干菌种的制备
将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。
2.4复合微生物发酵剂冻干粉的制备
按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末2-3份，B菌粉末3-5份，C菌粉末2-4份，D菌粉末2-3份，充分混匀后制成复合微生物发酵剂冻干粉，用于发酵牧草。
需要进一步说明的是：本发明中选用的发酵菌株购于中国工业微生物菌种保藏中心，这些菌种的活化、冻干方法不仅仅限于本发明所述的具体方法，培养基的成分也不限于此，其它常规技术和方法都是可以的，只要可以提高菌种的活力、并将其制备成冻干粉状而方便使用即可。
3.复合微生物发酵牧草饲料的制备
3.1牧草预处理
将收割后的新鲜牧草切割成0.5cm-1cm的牧草段。
3.2复合微生物发酵剂冻干粉活化
首先配制质量百分比浓度为2％的葡萄糖溶液1千克，取1克复合微生物发酵剂冻干粉，25℃-30℃条件下完全溶解于1千克葡萄糖溶液中，制成复合微生物菌悬液，静止状态下活化30分钟。
3.3发酵
将经过3.2步骤活化后的复合微生物菌悬液1千克，均匀喷洒在20千克经过3.1步骤预处理的牧草段上，然后将牧草段堆放于发酵池中，堆放厚度40cm-50cm，25℃-30℃条件下静止发酵48小时。
3.4干燥
将经过3.3步骤发酵处理的牧草在40℃-45℃条件下通风干燥，直至牧草中水分含量低于15％，即可停止干燥，然后包装即为成品。
(四)具体实施方式
下面举例对本发明作更详细的描述：
实施例一
本发明采用的4株菌均采购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，分别为：康宁木霉CICC13037、胶红酵母CICC 31192、枯草芽孢杆菌CICC 10063、枯草芽孢杆菌CICC 10089。
1.复合微生物发酵剂冻干粉的制备过程
1.1原菌种活化
分别量取0.9％的生理盐水10ml于4只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将4株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。
1.2发酵菌扩大培养
1.2.1母发酵剂的制备
分别量取4株菌培养基各200ml于4只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种1.1步骤中已经活化的菌种，在30℃、摇床转速110转/分钟条件下摇床培养24小时，作为母发酵剂。
1.2.2生产发酵剂的制备
首先配制质量百分比浓度为10％的脱脂奶乳浊液，分装于4只500mL三角瓶内，每瓶200mL，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃、摇床转速110转/分钟条件下摇床培养40-42小时，检测4株菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数≥109个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜109个/ml，继续培养，直至达到109个/ml。
1.3粉末冻干菌种的制备
将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。
1.4复合微生物发酵剂冻干粉的制备
按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末2份，B菌粉末3份，C菌粉末2份，D菌粉末2份，充分混匀后制成复合微生物发酵剂冻干粉，用于发酵牧草。
2.复合微生物发酵牧草饲料的制备
2.1牧草预处理
将收割后的新鲜牧草切割成0.5cm-1cm的牧草段。
2.2复合微生物发酵剂冻干粉活化
首先配制质量百分比浓度为2％的葡萄糖溶液1千克，取1克复合微生物发酵剂冻干粉，25℃-30℃条件下完全溶解于1千克葡萄糖溶液中，制成复合微生物菌悬液，静止状态下活化30分钟。
2.3发酵
将经过2.2步骤活化后的复合微生物菌悬液1千克，均匀喷洒在20千克经过2.1步骤预处理的牧草段上，然后将牧草段堆放于发酵池中，堆放厚度40cm-50cm，25℃-30℃条件下静止发酵48小时。
2.4干燥
将经过2.3步骤发酵处理的牧草在40℃-45℃条件下通风干燥，直至牧草中水分含量低于15％，即可停止干燥，然后包装即为成品。
实施例二
1.复合微生物发酵剂冻干粉的制备过程
1.1原菌种活化
分别量取0.9％的生理盐水10ml于4只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将4株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。
1.2发酵菌扩大培养
1.2.1母发酵剂的制备
分别量取4株菌培养基各200ml于4只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种1.1步骤中已经活化的菌种，在30℃、摇床转速110转/分钟条件下摇床培养24小时，作为母发酵剂。
1.2.2生产发酵剂的制备
首先配制质量百分比浓度为10％的脱脂奶乳浊液，分装于4只500mL三角瓶内，每瓶200mL，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃、摇床转速110转/分钟条件下摇床培养40-42小时，检测4株菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数≥109个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜109个/ml，继续培养，直至达到109个/ml。
1.3粉末冻干菌种的制备
将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。
1.4复合微生物发酵剂冻干粉的制备
按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末3份，B菌粉末5份，C菌粉末4份，D菌粉末3份，充分混匀后制成复合微生物发酵剂冻干粉，用于发酵牧草。
2.复合微生物发酵牧草饲料的制备
2.1牧草预处理
将收割后的新鲜牧草切割成0.5cm-1cm的牧草段。
2.2复合微生物发酵剂冻干粉活化
首先配制质量百分比浓度为2％的葡萄糖溶液1千克，取1克复合微生物发酵剂冻干粉，25℃-30℃条件下完全溶解于1千克葡萄糖溶液中，制成复合微生物菌悬液，静止状态下活化30分钟。
2.3发酵
将经过2.2步骤活化后的复合微生物菌悬液1千克，均匀喷洒在20千克经过2.1步骤预处理的牧草段上，然后将牧草段堆放于发酵池中，堆放厚度40cm-50cm，25℃-30℃条件下静止发酵48小时。
2.4干燥
将经过2.3步骤发酵处理的牧草在40℃-45℃条件下通风干燥，直至牧草中水分含量低于15％，即可停止干燥，然后包装即为成品。
Claims (1)
1.复合微生物发酵牧草饲料的制备方法，其特征在于按以下方法制备：
1).发酵菌株的选择及培养基的制备
A菌——康宁木霉Trichoderma koningii，菌株编号：CICC 13037，培养基为：麸皮～马铃薯滤液100毫升蔗糖2克，PH 6，麸皮～马铃薯滤液的制备方法：5克麸皮和20克马铃薯加100毫升水煮沸过滤，蒸馏水补足至100毫升。
B菌——胶红酵母Rhodotorula mucilaginosa，菌株编号：CICC 31192，培养基为：5°Bé麦芽汁琼脂。
C菌——枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，菌株编号：CICC 10063，培养基为：氯化钠0.5克琼脂2克，牛肉膏1克蛋白胨1克，水100毫升PH 7.2。
D菌——枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，菌株编号：CICC 10089，培养基为：氯化钠0.5克琼脂2克，牛肉膏1克蛋白胨1克，水100毫升PH 7.2。
2).原菌种活化
分别量取0.9％的生理盐水10ml于4只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将4株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。
3).母发酵剂的制备
分别量取4株菌培养基各200ml于4只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种2)步骤中已经活化的菌种，在30℃、摇床转速110转/分钟条件下摇床培养24小时，作为母发酵剂。
4).生产发酵剂的制备
首先配制质量百分比浓度为10％的脱脂奶乳浊液，分装于4只500mL三角瓶内，每瓶200mL，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃、摇床转速110转/分钟条件下摇床培养40-42小时，检测4株菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数≥109个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜109个/ml，继续培养，直至达到109个/ml。
5).粉末冻干菌种的制备
将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。
6).复合微生物发酵剂冻干粉的制备
按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末2-3份，B菌粉末3-5份，C菌粉末2-4份，D菌粉末2-3份，充分混匀后制成复合微生物发酵剂冻干粉。
7).牧草预处理
将收割后的新鲜牧草切割成0.5cm-1cm的牧草段。
8).复合微生物发酵剂冻干粉活化
首先配制质量百分比浓度为2％的葡萄糖溶液1千克，取1克复合微生物发酵剂冻干粉，25℃-30℃条件下完全溶解于1千克葡萄糖溶液中，制成复合微生物菌悬液，静止状态下活化30分钟。
9).发酵
将经过8)步骤活化后的复合微生物菌悬液1千克，均匀喷洒在20千克经过7)步骤预处理的牧草段上，然后将牧草段堆放于发酵池中，堆放厚度40cm-50cm，25℃-30℃条件下静止发酵48小时。
10).干燥
将经过9)步骤发酵处理的牧草在40℃-45℃条件下通风干燥，直至牧草中水分含量低于15％，停止干燥，然后包装即为成品。
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