CN102590426A

CN102590426A - 药物组合物二十五味鬼臼丸及其制剂的质量检测方法

Info

Publication number: CN102590426A
Application number: CN2012100879062A
Authority: CN
Inventors: 张义智; 王振; 郑亭亭; 李怀平; 邵成雷
Original assignee: Shandong Arura Pharmaceutical Research & Development Co Ltd
Current assignee: Shandong Arura Pharmaceutical Research & Development Co Ltd
Priority date: 2012-03-29
Filing date: 2012-03-29
Publication date: 2012-07-18

Abstract

本发明涉及一种药物组合物二十五味鬼臼丸及其制剂的质量检测方法，属于医药技术领域。本发明第一次对药物组合物二十五味鬼臼丸的鬼臼和朱砂2种毒性药材进行了检测。使用了专属性较强的高效液相色谱法(HPLC法)对鬼臼中的鬼臼毒素进行了检测，使用了操作简便、准确的滴定法对朱砂中硫化汞进行了含量检测，既保证了药效又保证不至于食用过多造成的汞中毒。同时检测药物组合物二十五味鬼臼丸中鬼臼和朱砂2味有毒药材的含量，使该制剂的安全性得到了较大的提升，进一步确保了产品质量安全、有效、质量可控。

Description

药物组合物二十五味鬼臼丸及其制剂的质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物制剂的质量检测方法，特别涉及一种药物组合物二十五味鬼臼丸及其制剂的质量检测方法，属于医药技术领域。

背景技术

痛经是妇女常见病，尤其以青年妇女多见。目前治疗痛经仍以激素治疗为主，但有一定副作用。二十五味鬼臼丸收载于部颁标准，标准编号：WS3-BC-0154-95。二十五味鬼臼丸由鬼臼、藏茜草、石榴子、藏紫草、肉桂、矮紫堇、朱砂等27味药组成的。具有祛风镇痛，调经血的作用。用于妇女血症，风症，子宫虫病，下肢关节疼痛，小腹、肝、胆、上肢疼痛在临床上有较满意的疗效。

二十五味鬼臼丸中鬼臼为主要药味，但鬼臼中鬼臼毒素如服用过量可能引起中毒，甚至死亡等各种不良反应。同时处方中朱砂主要成分为硫化汞，大量服用或少量久服，均可能造成汞中毒，危害人体健康。二十五味鬼臼丸原标准(WS3-BC-0154-95)均未对上述两种药味进行控制，也未见有关二十五味鬼臼丸专利文献，造成二十五味鬼臼丸产品存在安全隐患。因此，质量标准有待提高。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种药物组合物二十五味鬼臼丸及其制剂的质量检测方法。

发明概述

本发明提供了一种检测药物组合物二十五味鬼臼丸及其制剂中鬼臼毒素及汞含量的方法，保证了制剂中鬼臼毒素及汞含量均在安全范围之内，使该制剂在治疗疾病的同时，保证了用药的安全性。

术语说明：

二十五味鬼臼丸是部颁标准记载的药品名称。

二十五味鬼臼丸及其制剂包括二十五味鬼臼丸及用二十五味鬼臼丸原料药配方制备的其他制剂。

本发明的技术方案如下：

一种原料药组成为鬼臼50-150重量份、藏茜草25-75重量份、石榴子35-100重量份、藏紫草40-120重量份、肉桂20-60重量份、矮紫堇35-100重量份、巴夏嘎30-90重量份、光明盐10-30重量份、硇砂10-30重量份、榜嘎25-75重量份、藏木香50-150重量份、诃子50-150重量份、熊胆1-3重量份、胡椒15-45重量份、喜马拉雅紫茉莉40-120重量份、余甘子40-120重量份、花蛇肉(去毒)20-60重量份、山柰25-75重量份、火硝20-45重量份、降香40-100重量份、沙棘膏50-150重量份、沉香25-75重量份、朱砂10-30重量份、肉豆蔻10-30重量份、枸杞25-75重量份、紫草茸25-75重量份、芫荽果25-75重量份的二十五味鬼臼丸及其制剂的质量检测方法，该方法包括如下含量测定方法中的一种或几种：

A.鬼臼的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VID)测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比35～45∶65～55的甲醇-水为流动相；检测波长为280-300nm；理论板数按鬼臼毒素计算应不低于2000；

对照品溶液的制备：取鬼臼毒素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取药物组合物二十五味鬼臼丸或制剂，研碎后取粉末1g，精密称定，加入甲醇25ml，称定重量，功率250W，频率33kHz的超声处理1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品鬼臼含量以鬼臼毒素计不得过0.5mg/g。

B.朱砂的含量测定：

取药物组合物二十五味鬼臼丸或制剂，研碎后取粉末2g，精密称定，置250ml凯式烧瓶中，加98％浓硫酸30ml与硝酸钾3g，使凯式烧瓶成45°角，瓶口放置一玻璃漏斗，加热2-6小时，使成近无色，内有白色不溶物时，放冷，加水50ml，并加质量体积份数比为1％高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加质量体积份数比为2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用0.01mol/L硫氰酸铵滴定液滴定；每1ml的0.01mol/L硫氰酸铵滴定液相当于0.631mg的硫化汞。

本品朱砂含量以硫化汞计应为12.86mg/g～16.08mg/g。

所述的制剂是指取药物组合物二十五味鬼臼丸原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括微丸、滴丸、片剂、胶囊、颗粒、饮片或分散片。

优选的，一种原料药组成为鬼臼100重量份、藏茜草50重量份、石榴子70重量份、藏紫草80重量份、肉桂40重量份、矮紫堇70重量份、巴夏嘎60重量份、光明盐20重量份、硇砂20重量份、榜嘎50重量份、藏木香100重量份、诃子100重量份、熊胆2重量份、胡椒30重量份、喜马拉雅紫茉莉80重量份、余甘子80重量份、花蛇肉(去毒)40重量份、山柰50重量份、火硝35重量份、降香75重量份、沙棘膏100重量份、沉香50重量份、朱砂20重量份、肉豆蔻20重量份、枸杞50重量份、紫草茸50重量份、芫荽果50重量份的药物组合物二十五味鬼臼丸及其制剂的质量检测方法，该方法包括如下含量测定方法中的一种或几种：

A.鬼臼的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VID)测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比40∶60的甲醇-水为流动相；检测波长为290nm；理论板数按鬼臼毒素计算应不低于2000；

供试品溶液的制备：取药物组合物二十五味鬼臼丸，研碎后取粉末1g，精密称定，加入甲醇25ml，称定重量，功率250W，频率33kHz的超声处理1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品鬼臼含量以鬼臼毒素计不得过0.5mg/g。

B.朱砂的含量测定：

取药物组合物二十五味鬼臼丸粉末2g，置250ml凯式烧瓶中，加98％浓硫酸30ml与硝酸钾3g，使凯式烧瓶成45°角，瓶口放置一玻璃漏斗，加热4小时，使成近无色，内有白色不溶物时，放冷，加水50ml，并加质量体积份数比为1％高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加质量体积份数比为2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用0.01mol/L硫氰酸铵滴定液滴定；每1ml的0.01mol/L硫氰酸铵滴定液相当于0.631mg的硫化汞。

本品朱砂含量以硫化汞计应为12.86mg/g～16.08mg/g。

本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/l。

本发明第一次对药物组合物二十五味鬼臼丸的毒性进行了检测并进行了控制。使用了专属性较强的高效液相色谱法(HPLC法)对鬼臼毒素进行了检测，使用操作简便、准确的滴定法对朱砂中硫化汞进行了含量检测，既保证了药效又保证不至于食用过多造成的汞中毒。同时检测药物组合物二十五味鬼臼丸中鬼臼和朱砂2味有毒药材的含量，使该制剂的安全性得到了较大的提升，进一步确保了产品质量安全、均一、稳定、质量可控。同时本法还可用于二十五味鬼臼的其他制剂，如二十五味鬼臼胶囊、二十五味鬼臼散等。

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1：鬼臼的含量测定实验

1.仪器、试药和供试样品

仪器：高效液相色谱仪：日立L-2100泵，日立检测器L-2400检测器；岛津AuW220D电子天平。

对照品：鬼臼毒素对照品(中国药品生物制品检定所)，批号：111645-200301。

样品：二十五味鬼臼丸(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)，1g/丸，批号：20090501、20090502、20090503。

2.检测波长的选择

取鬼臼毒素对照品，于190-400nm波长范围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定290nm为检测波长。

3.流动相选择

选择毒性较小且简便的甲醇-水体系为流动相。分别考察了甲醇-水不同体积比例为流动相时的分离效果，体积份数比35～45∶65～55甲醇-水为流动相时可达到较好分离效果，且甲醇-水体积份数比为40∶60时，鬼臼毒素主峰保留时间为43min，分离效果最好。

4.系统适用性试验

在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中鬼臼毒素与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。见附图1、图2。

5.对照品制备

取鬼臼毒素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得。

6.供试品制备

6.1提取方法选择

取本品，研细，取约1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，分别超声、回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见表1.

表1提取方法考察试验结果

结果表明，超声提取和回流提取所测定的鬼臼毒素含量基本一致，考虑到超声提取操作简便、避免高热，故确定提取方法为超声提取。

6.2提取溶剂选择

取本品，研细，取约1g，精密称定，分别精密加入甲醇、乙醇、乙酸乙酯25ml，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见表2.

表2提取溶剂考察试验结果

结果表明，甲醇所测的鬼臼毒素含量最高，故选用甲醇作为供试品的提取溶剂。

6.3提取时间选择

取本品，研细，取约1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，分别超声处理40、50、60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见表3.

表3提取时间考察试验结果

结果表明，鬼臼毒素在提取时间为50min时已经基本提取完全，为了保证供试品提取完全选择60min为提取时间。

7.定量限

取鬼臼毒素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4μg的溶液，精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果信噪比约为10∶1，则鬼臼毒素定量限为4ng。见附图3。

8.标准曲线的制备和线性关系的考察

精密量取鬼臼毒素对照品贮备液溶液(9.68μg/ml)1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归，得鬼臼毒素回归方程：A＝1133.2C+5.7773，相关系数：R＝0.9998。结果表明：鬼臼毒素在0.968μg/ml～9.68μg/ml范围内，鬼臼毒素的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。结果见表4和图4。

表4鬼臼毒素线性关系考察结果

回归方程：A＝1133.2C+5.7773

相关系数：R＝0.9998

9.精密度试验

精密吸取鬼臼毒素对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，相对标准偏差RSD＝0.79％。结果表明，仪器精密度良好。结果见表5。

表5精密度试验结果

10.稳定性试验

供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD＝0.88％。结果表明：供试品中鬼臼毒素在6小时内测定结果稳定。结果见表6。

表6样品稳定性试验结果

11.重复性试验

取本品，重复测定6次，计算样品中鬼臼毒素的含量。表明分析方法重复性良好。结果见表7。

表7重复性试验结果

12.回收率试验

精密称取同一批样品6份，精密加入鬼臼毒素对照品，测定其含量，计算回收率，鬼臼毒素平均回收率为98.73％，相对标准偏差RSD＝1.87％。表明该测定方法测定结果准确。结果见表8。

表8回收率实验结果

13.鬼臼毒素检查

取药物组合物二十五味鬼臼丸三批，测定并计算鬼臼毒素含量。结果见表9。

表9鬼臼毒素检查结果

实验例2：朱砂的含量测定实验

1.仪器、试药和供试样品

仪器：岛津AuW220D电子天平；KDM型可控调温电热套。

2.消化方式的选择

本方法采用凯式烧瓶，瓶口成45°角放置一个玻璃漏斗的方式加热，较传统的锥形瓶加热更加安全，消化更加彻底，而且更容易判断消化终点。加热时瓶中液体为黑色，同时有大量黑烟冒出，随加热时间延长，液体由黑色变为棕色，渐变为红色，再渐变为黄色，最后渐变为近无色，同时出现白色不溶物且无烟产生，消化完成。

3.样品中朱砂的硫化汞测定

取本品粉末约2g，精密称定，置250ml凯式烧瓶中，加浓硫酸30ml与硝酸钾3g，瓶口成45°角放置一玻璃漏斗，加热溶液近无色，内有白色不溶物。放冷，加水50ml，并加质量体积份数比1％高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加质量体积份数比2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液(0.01mol/L)滴定。每1ml硫氰酸铵滴定液(0.01mol/L)相当于0.631mg的硫化汞(HgS)。结果见表10。

表10二十五味鬼臼丸中硫化汞含量测定结果

4.重现性试验

取20090501批号样品按测定法，重复测定6次。结果表明：该方法重复性良好。结果见表11。

表11二十五味鬼臼丸中硫化汞含量的重复性试验

5.朱砂空白样品的硫化汞测定

按药物组合物二十五味鬼臼丸处方用量的比例配制不含朱砂的样品，取此空白样品约2g，精密称定，精密加入已知含量的朱砂细粉约0.1g，置250ml凯式烧瓶中，按上述方法测定含量，并计算回收率。结果见表12。

表12朱砂空白样品硫化汞测定结果

下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。

附图说明：

图1是鬼臼毒素的含量测定鬼臼毒素对照品高效液相色谱图；

图2是鬼臼毒素的含量测定供试品高效液相色谱图；

图3是鬼臼毒素定量限高效液相色谱图；

图4是鬼臼毒素测定标准曲线图；

其中，图1、图2、图3的横坐标是时间，单位：min；纵坐标是电压，单位：μV；图4的横坐标是浓度C，单位：μg/ml；纵坐标是峰面积A，单位：μV·s。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作详细的阐述，但不限于这些具体记载的实施例。所检测的药物组合物二十五味鬼臼丸为青海金诃藏药药业股份有限公司产售。

实施例1：质量检测方法

A.鬼臼的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VID)测定；

供试品溶液的制备：取药物组合物二十五味鬼臼丸1g，研细，加入甲醇25ml，称定重量，功率250W，频率33kHz的超声处理1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

本品含鬼臼以鬼臼毒素计为0.105mg/g。

B.朱砂的含量测定：

取药物组合物二十五味鬼臼丸粉末2g，置250ml凯式烧瓶中，加98％浓硫酸30ml与硝酸钾3g，使凯式烧瓶成45°角，瓶口放置一玻璃漏斗，加热2小时，使成近无色，内有白色不溶物时，放冷，加水50ml，并加质量体积份数比为1％高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加质量体积份数比为2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用0.01mol/L硫氰酸铵滴定液滴定；每1ml的0.01mol/L硫氰酸铵滴定液相当于0.631mg的硫化汞。

本品含朱砂以硫化汞计为13.78mg/g。

实施例2：鬼臼的含量测定

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VID)测定；

供试品溶液的制备：取药物组合物二十五味鬼臼胶囊内容物1g，研细，加入甲醇25ml，称定重量，功率250W，频率33kHz的超声处理1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

本品含鬼臼以鬼臼毒素计为0.103mg/g。

所述的药物组合物二十五味鬼臼胶囊是指用二十五味鬼臼丸原料药配方，鬼臼100g、藏茜草50g、石榴子70g、藏紫草80g、肉桂40g、矮紫堇70g、巴夏嘎60g、光明盐20g、硇砂20g、榜嘎50g、藏木香100g、诃子100g、熊胆2g、胡椒30g、喜马拉雅紫茉莉80g、余甘子80g、花蛇肉(去毒)40g、山柰50g、火硝35g、降香75g、沙棘膏100g、沉香50g、朱砂20g、肉豆蔻20g、枸杞50g、紫草茸50g、芫荽果50g，加入常规辅料，按照常规工艺制备的胶囊剂。

实施例3：朱砂的含量测定：

取药物组合物二十五味鬼臼颗粒粉末2g，置250ml凯式烧瓶中，加98％浓硫酸30ml与硝酸钾3g，使凯式烧瓶成45°角，瓶口放置一玻璃漏斗，加热6小时，使成近无色，内有白色不溶物时，放冷，加水50ml，并加质量体积分数比为1％高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加质量体积分数比为2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用0.01mol/L硫氰酸铵滴定液滴定；每1ml的0.01mol/L硫氰酸铵滴定液相当于0.631mg的硫化汞。

本品朱砂含量以硫化汞计应为13.59mg/g。

所述的药物组合物二十五味鬼臼颗粒是指用二十五味鬼臼丸原料药配方鬼臼100g、藏茜草50g、石榴子70g、藏紫草80g、肉桂40g、矮紫堇70g、巴夏嘎60g、光明盐20g、硇砂20g、榜嘎50g、藏木香100g、诃子100g、熊胆2g、胡椒30g、喜马拉雅紫茉莉80g、余甘子80g、花蛇肉(去毒)40g、山柰50g、火硝35g、降香75g、沙棘膏100g、沉香50g、朱砂20g、肉豆蔻20g、枸杞50g、紫草茸50g、芫荽果50g，加入常规辅料，按照常规工艺制备的颗粒剂。

Claims

1.一种原料药组成为鬼臼50-150重量份、藏茜草25-75重量份、石榴子35-100重量份、藏紫草40-120重量份、肉桂20-60重量份、矮紫堇35-100重量份、巴夏嘎30-90重量份、光明盐10-30重量份、硇砂10-30重量份、榜嘎25-75重量份、藏木香50-150重量份、诃子50-150重量份、熊胆1-3重量份、胡椒15-45重量份、喜马拉雅紫茉莉40-120重量份、余甘子40-120重量份、花蛇肉(去毒)20-60重量份、山柰25-75重量份、火硝20-45重量份、降香40-100重量份、沙棘膏50-150重量份、沉香25-75重量份、朱砂10-30重量份、肉豆蔻10-30重量份、枸杞25-75重量份、紫草茸25-75重量份、芫荽果25-75重量份的二十五味鬼臼丸及其制剂的质量检测方法，该方法包括如下含量测定方法中的一种或几种：

A.鬼臼的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VID)测定；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品含鬼臼以鬼臼毒素计不得过0.5mg/g；

B.朱砂的含量测定：

取药物组合物二十五味鬼臼丸或制剂，研碎后取粉末2g，精密称定，置250ml凯式烧瓶中，加98％浓硫酸30ml与硝酸钾3g，使凯式烧瓶成45°角，瓶口放置一玻璃漏斗，加热2-6小时，使成近无色，内有白色不溶物时，放冷，加水50ml，并加质量体积份数比为1％高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加质量体积份数比为2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用0.01mol/L硫氰酸铵滴定液滴定；每1ml的0.01mol/L硫氰酸铵滴定液相当于0.631mg的硫化汞；

本品含朱砂以硫化汞计应为12.86mg/g～16.08mg/g。

2.如权利要求1所述的一种药物组合物二十五味鬼臼丸及其制剂的质量检测方法，其特征在于所述的制剂是指取药物组合物二十五味鬼臼丸原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括微丸、滴丸、丸剂、散剂、片剂、胶囊、颗粒。

3.如权利要求1或2所述的一种原料药组成为鬼臼100重量份、藏茜草50重量份、石榴子70重量份、藏紫草80重量份、肉桂40重量份、矮紫堇70重量份、巴夏嘎60重量份、光明盐20重量份、硇砂20重量份、榜嘎50重量份、藏木香100重量份、诃子100重量份、熊胆2重量份、胡椒30重量份、喜马拉雅紫茉莉80重量份、余甘子80重量份、花蛇肉(去毒)40重量份、山柰50重量份、火硝35重量份、降香75重量份、沙棘膏100重量份、沉香50重量份、朱砂20重量份、肉豆蔻20重量份、枸杞50重量份、紫草茸50重量份、芫荽果50重量份的药物组合物二十五味鬼臼丸及其制剂的质量检测方法，其特征在于，该方法包括如下含量测定方法中的一种或几种：

A.鬼臼的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VID)测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比40∶60的甲醇-水为流动相；检测波长为290nm；理论板数按胡鬼臼毒素计算应不低于2000；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品鬼臼含量以鬼臼毒素计不得过0.5mg/g；

B.朱砂的含量测定：

取药物组合物二十五味鬼臼丸粉末2g，置250ml凯式烧瓶中，加98％浓硫酸30ml与硝酸钾3g，使凯式烧瓶成45°角，瓶口放置一玻璃漏斗，加热4小时，使成近无色，内有白色不溶物时，放冷，加水50ml，并加质量体积分数比为1％高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加质量体积份数比为2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用0.01mol/L硫氰酸铵滴定液滴定；每1ml的0.01mol/L硫氰酸铵滴定液相当于0.631mg的硫化汞；

本品朱砂含量以硫化汞计应为12.86mg/g～16.08mg/g。