CN102565271A

CN102565271A - 一种奥硝唑的质量控制方法

Info

Publication number: CN102565271A
Application number: CN2012100046858A
Authority: CN
Inventors: 顾林; 肖鑫; 王丽楠
Original assignee: NANJING HAILING PHARMACEUTICAL CO Ltd OF YANGTZE RIVER PHARMACEUTICAL GROUP
Current assignee: NANJING HAILING PHARMACEUTICAL CO Ltd OF YANGTZE RIVER PHARMACEUTICAL GROUP
Priority date: 2012-01-10
Filing date: 2012-01-10
Publication date: 2012-07-11

Abstract

本发明公开了一种奥硝唑的质量控制方法，该方法采用高效液相色谱法同时在线检测奥硝唑和杂质成分2-甲基-5-硝基咪唑。本发明通过大量实验优选出最佳的流动相组成，洗脱程序、流速，检测波长和色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的奥硝唑的质量控制方法，稳定性和重复性好、分析效率高、分离度好，可以灵敏准确的定性、定量检测各化合物，从而可以客观、全面、准确的评价奥硝唑注射剂的质量，对控制奥硝唑注射剂的质量和保证临床疗效具有重要意义。

Description

一种奥硝唑的质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种药物制剂的质量控制方法，具体涉及一种奥硝唑注射液的质量控制方法。

背景技术

奥硝唑是第三代硝基咪唑类衍生物，奥硝唑临床用途广泛，可用于治疗由脆弱拟杆菌、狄氏拟杆菌、卵园拟杆菌、多形拟杆菌、普通拟杆菌、梭状芽胞杆菌、真杆菌、消化球菌和消化链球菌、幽门螺杆菌、黑色素拟杆菌、梭杆菌、CO2噬织维菌、牙龈类杆菌等敏感厌氧菌所引起的多种感染性疾病。奥硝唑结构为1-(3-氯-2-羟丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑，奥硝唑在加热或强光照射条件下，化学结构会发生变化会生成其它杂质，其中2-甲基-5-硝基咪唑为奥硝唑注射液中的杂质成分之一，而奥硝唑注射液在灭菌的过程中必须对其进行高温灭菌，为了严格控制好奥硝唑的质量，必须制定奥硝唑的质量检测方法，但是现有的检测方法，分离效果不好，检测灵敏度不高，稳定性差，尤其是不能同时检测活性成分奥硝唑和杂质如2-甲基-5-硝基咪唑的含量。因此为了控制好奥硝唑制剂的临床安全性，维护患者的利益，很有必要在现有技术的基础之上研究设计出能同时检测奥硝唑制剂中有效成分奥硝唑和杂质2-甲基-5-硝基咪唑的检测方法。

发明内容

发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种能同时检测奥硝唑制剂中有效成分奥硝唑和杂质2-甲基-5-硝基咪唑的检测方法，该检测方法可以客观、全面、准确的评价奥硝唑的质量，对控制奥硝唑注射剂的质量和保证疗效具有重要意义。

技术方案：为了实现以上目的，本发明所提供的奥硝唑的质量控制方法，包括以下步骤：

(1)标准品的制备：取奥硝唑标准品50毫克，用体积比为30∶70∶0.2的甲醇-水-冰醋酸稀释成浓度为500μg/ml奥硝唑标准品的溶液，另取2-甲基-5-硝基咪唑标准品25毫克，用体积比为30∶70∶0.2的甲醇-水-冰醋酸稀释成浓度为250μg/ml的2-甲基-5-硝基咪唑标准品溶液，然后将奥硝唑标准品和2-甲基-5-硝基咪唑标准品按体积比为1∶1混合得到混合标准品，备用；

(2)奥硝唑样品的制备：精密取奥硝唑注射液在120℃条件下加热3小时至6小时，放冷，备用；

(3)标准曲线的制备：取步骤(1)得到的混合标准品注入高效液相色谱仪制备标准曲线，色谱条件为：色谱柱：反相C₁₈柱，流动相：体积比为30∶70∶0.2的甲醇-水-冰醋酸，流速为1.0ml/min，检测波长为310nm，柱温为30℃

(4)样品中奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量测定：精密吸取奥硝唑注射液样品20μl，注入高效液相色谱仪分析40分钟，色谱条件为：色谱柱：反相C₁₈柱，流动相：体积比为30∶70∶0.2的甲醇-水-冰醋酸，流速为1.0ml/min，检测波长为310nm，柱温为30℃，并按步骤(3)标准曲线检测奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量。

作为优选方案，本发明提供的奥硝唑的质量控制方法，步骤(3)以奥硝唑的峰面积为纵坐标，浓度(μg/ml)为横坐标绘制标准曲线为：Y＝6528X-42.71，r＝0.9997；，以2-甲基-5-硝基咪唑的峰面积为纵坐标，浓度(μg/ml)为横坐标绘制标准曲线为：Y＝8319X-155.8，r＝0.9999。

作为优选方案，本发明所述的奥硝唑的质量控制方法，步骤(2)奥硝唑样品制备过程中在120℃条件下加热4小时。

作为优选方案，本发明所述的奥硝唑的质量控制方法，步骤(3)和(4)所述的反相C₁₈柱为安捷伦Zorbax Extend反相C₁₈柱。

作为优选方案，本发明所述的奥硝唑的质量控制方法，步骤(3)和(4)所述的高效液相色谱仪为安捷伦1260分析仪或岛津高效液相色谱仪。

奥硝唑结构为1-(3-氯-2-羟丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑，奥硝唑在加热或强光照射条件下，化学结构会发生变化会生成其它杂质，其中2-甲基-5-硝基咪唑为奥硝唑注射液中的杂质成分之一，为了严格控制好奥硝唑的质量，能高效的同时检测奥硝唑注射液中奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量，本发明经过大量实验对流动相组成、流动相的洗脱程序、流速、检测波长及色谱柱进行筛选。

1、本发明针对以上2个成分，通过全波长扫描和3D等高线观察，确定蒽奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑在310nm处均有较大的吸收，因此本发明采用310nm作为检测波长，可以准确灵敏的检测到奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物。

2、由于以上1-(3-氯-2-羟丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物的极性存在较大的相似，因此在色谱柱上同时分离比较困难，本发明首先对流动相的组成进行了大量筛选，确定采用体积比为30∶70∶0.2的甲醇-水-冰醋酸作为流动相组成，由于二个化合物容易电离成离子状态，导致分离和洗脱效果差，因此本发明在流动相中添加一定量的冰醋酸调节pH值，但是流动相的酸性太强，又会导致化合物溶解性差，甚至会沉淀堵塞色谱柱，因此调整流动相到合适的pH值非常重要，本发明通过不同冰醋酸加入量的筛选，确定最佳的流动相，从而可以保证在色谱柱上达到很好的分离效果，不会出现峰重叠或拖尾现象，而且能保证极性相似的二个化合物在色谱柱上有很好的分离度。

3、同时本发明还对流动相的流动速度进行了考察，如流速过快，分离度不够理想，因此本发明分别考察了1mL/min、0.8mL/min、0.6mL/min、0.5mL/min、0.4mL/min不同流速，实验结果表明，当流动相的流速为1mL/min时，1-(3-氯-2-羟丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑和2-甲基-5-硝基咪唑的峰形最好、分离度最好，理论塔板数最高，因此本发明采用流动相的流速为1mL/min。

4、同时本发明对色谱柱的柱温进行了筛选，考察了色谱柱在20℃、25℃、28℃、30℃和35℃条件下化合物的分离效果，实验结果表明，色谱柱在30℃条件下分离效果最好，分离重复性和稳定性最好。因此本发明采用色谱柱的柱温为30℃。

5、同时本发明对色谱柱也进行了筛选，分别考察了安捷伦(Agilent)反相C18、反相C8柱，Waters反相C18、反相C8柱，实验结果表明，以安捷伦(Agilent)反相C18柱的分离效果最好。因此，本发明以安捷伦(Agilent)反相C18柱作为分析柱。

有益效果：本发明提供的奥硝唑的质量控制方法和现有技术相比具有以下优点：

本发明根据奥硝唑注射剂中活性成分和杂质成分的结构性质特点，通过大量实验筛选出最佳的流动相组成，洗脱程序、流速，检测波长、色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的奥硝唑的质量控制方法可以在线同时检测活性成分和杂质，因此具有很高的分析效率，可以克服现有检测方法中准确度低、稳定性差，不能同时检测二个成分等诸多缺点，且本发明提供的质量检测方法稳定性好、对各分析成分的分离度好，可以灵敏准确的定性、定量检测分析各化合物。因此，本发明提供的奥硝唑的质量控制方法可以可以客观、全面、准确的评价奥硝唑注射剂的质量，对控制奥硝唑注射剂的质量和保证临床疗效具有重要意义。

附图说明

图1为奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑混合标准品的高效液相色谱检测分析图。

图2为奥硝唑注射剂样品的高效液相色谱检测分析图。

具体实施方式：

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施列：奥硝唑的质量控制方法，包括以下步骤：

(2)奥硝唑样品的制备：精密取扬子江药业集团南京海陵药业有限公司生产的奥硝唑注射液5批(1110191、1110151、1109072、1109211、1117311)在120℃条件下加热3小时，放冷，备用；

(3)标准曲线的制备：取步骤(1)得到的混合标准品，用0.45μm微孔滤膜过滤后注入高效液相色谱仪制备标准曲线，色谱条件为：色谱柱：反相C₁₈柱，流动相：体积比为30∶70∶0.2的甲醇-水-冰醋酸，流速为1.0ml/min，检测波长为310nm，柱温为30℃

(4)样品中奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量测定：精密吸取步骤(2)奥硝唑注射液样品20μl，注入高效液相色谱仪分析40分钟，色谱条件为：色谱柱：反相C₁₈柱，流动相：体积比为30∶70∶0.2的甲醇-水-冰醋酸，流速为1.0ml/min，检测波长为310nm，柱温为30℃，并按步骤(3)标准曲线检测奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量，具体实验结果如表1和表2所示。

以上所述的奥硝唑的质量控制方法，步骤(3)以步骤(3)以奥硝唑的峰面积为纵坐标，浓度(μg/ml)为横坐标绘制标准曲线为：Y＝6528X-42.71，r＝0.9997；

以2-甲基-5-硝基咪唑的峰面积为纵坐标，浓度(μg/ml)为横坐标绘制标准曲线为：Y＝8319X-155.8，r＝0.9999。

通过以上分析，有效成分奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物在本发明提供的分析条件下，能够很好的达到分离，分离度均达到1.5以上，各化合物的标准曲线的线性关系良好，r值均达到0.999以上。因此本发明提供的分析方法，准确可靠，可以灵敏准确的定性、定量检测奥硝唑注射液，为奥硝唑注射液的质量控制提供科学依据。

表1 奥硝唑注射剂中奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物的检测结果

表2 奥硝唑注射剂中奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物的检测结果

由表1和表2的实验结果表明，本发明提供的奥硝唑注射剂的检测方法，可以同时检测到5批奥硝唑注射剂中奥硝唑化合物和2-甲基-5-硝基咪唑类化合物，且具有较好的分离度，从保留时间看出，各化合物和对照品具有很好的匹配度；并且从本发明表2的实验结果表明，本发明处理过的奥硝唑样品中，杂质2-甲基-5-硝基咪唑的百分含量均低于0.2％，也表明本发明样品的质量可靠性。

且以上实验结果表明，本发明提供的检测方法只要进一针样品即可定性和定量检测到活性成分和是否有杂质成分，相比现有技术具有方便、快捷、工作效率高的优点，且对控制和全面评价奥硝唑注射剂质量具有很好的应用价值。另外本发明提供的奥硝唑的质量控制方法稳定性和重复性好，可以客观、全面、准确的评价奥硝唑注射剂的质量，对控制奥硝唑注射剂的质量和保证临床疗效具有重要意义。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种奥硝唑的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)标准品的制备：取奥硝唑标准品50毫克，用体积比为30：70：0.2的甲醇-水-冰醋酸稀释成浓度为500μg/ml奥硝唑标准品的溶液，另取2-甲基-5-硝基咪唑标准品25毫克，用体积比为30：70：0.2的甲醇-水-冰醋酸稀释成浓度为250μg/ml的2-甲基-5-硝基咪唑标准品溶液，然后将奥硝唑标准品和2-甲基-5-硝基咪唑标准品按体积比为1：1混合得到混合标准品，备用；

(3)标准曲线的制备：取步骤(1)得到的混合标准品注入高效液相色谱仪制备标准曲线，色谱条件为：色谱柱：反相C₁₈柱，流动相：体积比为30：70：0.2的甲醇-水-冰醋酸，流速为1.0ml/min，检测波长为310nm，柱温为30℃；

(4)样品中奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量测定：精密吸取步骤(2)奥硝唑注射液样品20μl，注入高效液相色谱仪分析40分钟，色谱条件为：色谱柱：反相C₁₈柱，流动相：体积比为30：70：0.2的甲醇-水-冰醋酸，流速为1.0ml/min，检测波长为310nm，柱温为30℃，并按步骤(3)标准曲线检测奥硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量。

2.根据权利要求1所述的奥硝唑的质量控制方法，其特征在于，步骤(3)中以奥硝唑的峰面积为纵坐标，浓度μg/ml为横坐标绘制标准曲线为：Y＝6528X－42.71，r=0.9997；，以2-甲基-5-硝基咪唑的峰面积为纵坐标，浓度μg/ml为横坐标绘制标准曲线为：Y＝8319X－155.8，r=0.9999。

3.根据权利要求1所述的奥硝唑的质量控制方法，其特征在于，步骤(2)奥硝唑样品制备过程中在120℃条件下加热4小时。

4.根据权利要求1所述的奥硝唑的质量控制方法，其特征在于，步骤(3)和(4)所述的反相C₁₈柱为安捷伦Zorbax Extend 反相C₁₈柱。