CN102559869A - 利用rgp-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法 - Google Patents
利用rgp-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102559869A CN102559869A CN2011103883046A CN201110388304A CN102559869A CN 102559869 A CN102559869 A CN 102559869A CN 2011103883046 A CN2011103883046 A CN 2011103883046A CN 201110388304 A CN201110388304 A CN 201110388304A CN 102559869 A CN102559869 A CN 102559869A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tobacco
- primer
- dna
- rgp
- genomic dna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用RGP-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法，所述的11个烟草种为K326、红花大金元、林烟草、粉蓝烟草、古特斯皮氏烟草、蓝茉莉烟草、匍匐烟草、黄花烟草、克利夫兰氏烟草、波叶烟草、花烟草，提取这11种烟草的基因组DNA，以其为模板，设计合成RGP-3引物，进行PCR扩增，以扩增产物经过测序后进行种质鉴别。本发明与现有技术相比：本发明具有能对烟草基因组DNA分子进行快速鉴别和检测的功能，为烟草抗逆育种研究提供科学、高效研究手段；当育成品种被非法使用和生产时，可利用该特异性引物进行准确鉴别，成为解决法律纠纷有力证据；有关这11个烟草种质来源的分子标记鉴别尚未见报道，这为烟草不同资源类型分子鉴别奠定基础。
Description
技术领域
本发明属于属分子生物学技术领域，涉及一种利用RGP-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法。
背景技术
烟草是我国重要的经济作物之一，中国是当今世界最大的烟草生产国，烟叶总产量和总销量都占世界的50％左右。目前烟草税收已经占到我国财政收入的1/10，在国民经济收入中占有重要的地位。但随着栽培条件的变化，烟草的病虫害危害也日益严重，造成巨大的经济损失。据不完全统计，我国每年烟草病害造成的直接经济损失在7亿元以上，烟草野生资源应用于烟草抗病育种日益受到重视。
在烟草育种过程中，很多野生资源的烟草品种具有特异性的品质，如匍匐烟草（N.repanda）具有抗野火病、黑胫病、白粉病、角斑病、蛙眼病和TMV、PV的特性，黄花烟草（N.rustica）具有抗根黑腐病、野火病、黑胫病、白粉病、角斑病、TMV的特性，林烟草（N.sylvestris）具有抗白粉病、角斑病、根黑腐病、TMV、PVY和TEV的特性，克利夫兰氏烟草（N.clevelandii）具有抗PVY和霜霉病的特性，粉蓝烟草（N.glauca）具有抗野火病、白粉病、线虫病和多种病毒病的特性，波叶烟草（N.undulata）具有抗野火病、角斑病、根黑腐病、TMV、PVY和TEV的特性，古特斯皮氏烟草（N.goodspeedi）具有抗霜霉病、白粉病、赤星病和TMV的特性，花烟草（N.alata）具有抗野火病、白粉病、线虫病和炭疽病的特性，蓝茉莉烟草（N.plumbaginifolia）具有抗黑胫病、霜霉病、白粉病、角斑病和多个根结线虫生理小种的特性。但是这些野生资源的传统鉴别方法中往往因生育期过长，从而影响了烟草育种进程；同样，其中间材料的鉴定也存在类似的问题。目前，虽然研究开发了许多分子生物学方法用于作物的种质资源快速鉴别，如使用AFLP、SSR，但是这些方法在烟草野生资源的种质鉴别中均存在一定的局限性，检测过程中灵敏度和准确性不高。因此，研究开发一种能够快速简便的鉴别烟草种质的方法，以提高检测效率非常必要。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种利用RGP-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法。
本发明的目的是这样实现的，所述的11个烟草种为K326、红花大金元、林烟草、粉蓝烟草、古特斯皮氏烟草、蓝茉莉烟草、匍匐烟草、黄花烟草、克利夫兰氏烟草、波叶烟草、花烟草，提取这11个烟草种的基因组DNA，以其为模板，设计合成RGP-3引物，进行PCR扩增，以扩增产物经过测序后进行种质鉴别，具体步骤为：
A、基因组DNA获得：分别提取上述烟草种的基因组DNA；
B、引物设计合成：以A步骤获得的基因组DNA为模板，经搜索GenBank数据库，根据林烟草的NsRGP-3序列（D67086），用Primer 5.0 软件，分别设计一对包含编码区在内的特异性引物，即正向引物F-primer具有5′ TGTCAATTTATCTGCACAAATG
3′的碱基序列和反向引物R-primer具有5′
GCACGAAAAGAAGTCTTAATATA 3′的碱基序列，然后完成引物的合成；
C、基因组DNA的RGP-3基因序列PCR扩增：将A步骤提取的烟草基因组DNA作为模板DNA进行PCR扩增，所述的PCR反应体系为30μl，包括无菌水19.3μl、不含有MgCl2的10×Taq DNA聚合酶缓冲液3.0μl、浓度为25mM的MgCl2 2.5μl、浓度为2.5mM的脱氧核糖核苷三磷酸dNTP 2.0μl、浓度为5U/μl的 Taq DNA聚合酶 0.2μl、A步骤获得的模板DNA 1.0μl和B步骤获得的浓度为10μM 的F-primer和R-primer各1.0μl；PCR反应条件为在94℃下变性3 分钟后，再进行在94℃下变性1分钟，在55℃下退火40秒，在72℃下延伸2分钟，经过35个循环，随后，在72℃下延伸5分钟，并放置在4℃下保存备用；
D、特异性DNA片段获得、测序和差异比对：用电泳法对扩增出的特异性DNA片段在紫外观察仪下分别切取后，用QIAquick Gel
Extraction Kit快速提取试剂盒回收纯化该DNA片段；将该片段分别用pGEM®-T-Easy
Vector Systems试剂盒进行克隆，通过蓝白斑平板筛选重组克隆菌落，并制备重组克隆质粒DNA，电泳检测其分子量大小，确定特异性DNA片段单拷贝插入的重组质粒后送去测序，将此步骤获得的11个烟草种的RGP-3基因组序列进行差异比对。本发明与现有技术相比：
1、本发明具有能对烟草基因组DNA分子进行快速鉴别和检测的功能，为烟草抗逆育种研究提供科学、高效研究手段；比如：林烟草（N.sylvestris）、K326和红花大金元（N.tabacum(Hongda)），恰恰都易感黑胫病和抗黑根腐，而与它们遗传距离较远的波叶烟草（N.undulata）和匍匐烟草（N.repanda）却含有丰富的病害抗源（包括黑胫病和根黑腐病的抗源），这为利用野生种质资源开展烟属种间的远缘杂交，为提高栽培烟草的抗病性提供了理论基础。K326和红花大金元是中国烤烟品种栽培面积最大的烟草类型，但是由于烟草育种中过度使用主体亲本，使得现有烤烟品种同一化现象严重。从该RGP-3的进化分析结果来看，普通烟草和其它8个野生烟草遗传距离相对较远，所以在以后的育种过程中，为拓宽烤烟育成品种的遗传基础，应充分挖掘野生烟草的遗传潜力。
2、当育成品种被非法使用和生产时，可利用该特异性引物进行准确鉴别，成为解决法律纠纷有力证据。
3、有关这11个烟草种质来源的分子标记鉴别尚未见报道，这为烟草不同资源类型分子鉴别奠定了基础。
附图说明
图1-用MP法构建的11个烟草的RGP-3基因组序列的系统进化树。
图2-用MP法构建的11个烟草的RGP-3内含子序列的系统进化树。
所附的《核苷酸和氨基酸序列表》为正向引物、反向引物的碱基序列和11个烟草的RGP-3基因序列。
具体实施方式
下面对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变更或改进，均属于本发明的保护范围。
本发明的方法为：所述的11个烟草种为K326、红花大金元、林烟草、粉蓝烟草、古特斯皮氏烟草、蓝茉莉烟草、匍匐烟草、黄花烟草、克利夫兰氏烟草、波叶烟草、花烟草，提取这11个烟草种的基因组DNA，以其为模板，设计合成RGP-3引物，进行PCR扩增，以扩增产物经过测序后进行种质鉴别，具体步骤为：
A、基因组DNA获得：分别提取上述烟草种的基因组DNA；
B、引物设计合成：以A步骤获得的基因组DNA为模板，经搜索GenBank数据库，根据林烟草的NsRGP-3序列（D67086），用Primer 5.0 软件，分别设计一对包含编码区在内的特异性引物，即正向引物F-primer具有5′
TGTCAATTTATCTGCACAAATG 3′的碱基序列和反向引物R-primer具有5′
GCACGAAAAGAAGTCTTAATATA 3′的碱基序列，然后完成引物的合成；
C、基因组DNA的RGP-3基因序列PCR扩增：将A步骤提取的烟草基因组DNA作为模板DNA进行PCR扩增，所述的PCR反应体系为30μl，包括无菌水19.3μl、不含有MgCl2的10×Taq DNA聚合酶缓冲液3.0μl、浓度为25mM的MgCl2 2.5μl、浓度为2.5mM的脱氧核糖核苷三磷酸dNTP 2.0μl、浓度为5U/μl的 Taq DNA聚合酶 0.2μl、A步骤获得的模板DNA 1.0μl和B步骤获得的浓度为10μM 的F-primer和R-primer各1.0μl；PCR反应条件为在94℃下变性3 分钟后，再进行在94℃下变性1分钟，在55℃下退火40秒，在72℃下延伸2分钟，经过35个循环，随后，在72℃下延伸5分钟，并放置在4℃下保存备用；
D、特异性DNA片段获得、测序和差异比对：用电泳法对扩增出的特异性DNA片段在紫外观察仪下分别切取后，用QIAquick Gel
Extraction Kit快速提取试剂盒回收纯化该DNA片段；将该片段分别用pGEM®-T-Easy
Vector Systems试剂盒进行克隆，通过蓝白斑平板筛选重组克隆菌落，并制备重组克隆质粒DNA，电泳检测其分子量大小，确定特异性DNA片段单拷贝插入的重组质粒后送去测序，将此步骤获得的11个烟草种的RGP-3基因组序列进行差异比对。
A步骤中所述的提取烟草的基因组DNA的方法为Qiagen 植物DNA提取试剂盒进行提取。
D步骤所述的电泳法为琼脂糖电泳。
表1 PCR反应体系的组成
| 无菌水 | 19.3μl |
| 10×Taq DNA聚合酶缓冲液（不含氯化镁MgCl2） | 3.0μl |
| MgCl2（25mM） | 2.5μl |
| dNTP（2.5mM） | 2.0μl |
| Taq DNA聚合酶（5U/μl） | 0.2μl |
| 模板DNA | 1.0μl |
| F-primer（10μM） | 1.0μl |
| R-primer（10μM） | 1.0μl |
| 合计 | 30μl |
本发明的工作原理：
很多研究表明：许多逆境因子，包括冷害、致伤、干旱、过敏反应、脱落酸（ABA）处理、水杨酸（SA）处理和水逆境（Water stress）等因子均能有效地诱导GR-RBPs基因家族，使其RNA水平显著提高。就烟草而言，目前已经从林烟草（N. sylvestris）之中已分离获得的NsRGP-1a、NsRGP-1b、NsRGP-1c、NsRGP-2和NsRGP-3等5个基因（Genbank
No.D16204、D16205、D16206、D26182和D67086），但是对于其他烟草中GRPs基因未见报道。
在对11个烟草种中的RGP-3进行了基因对比的基础上，发现其RGP-3基因具有很高的相似度（见表2、3）。以林烟草（N.sylvestris）作为普通烟草的假定的祖先，栽培烟草K326和红花大金元（N.tabacum(Hongda)）与林烟草均具有很高同源性，其同源性分别为100%和97.4%；从表4和表5的聚类分析中也显示K326和红花大金元与林烟草（N.sylvestris）聚为一类，这表明普通烟草与林烟草（N.sylvestris）遗传相似性较高，因而也从侧面也印证了普通烟草的起源问题。研究中发现，11个烟草种中RGP-3基因组序列上存在着426个碱基变异位点，其中有383个变异位点位于内含子上，说明了RGP-3基因的内含子变异较快。内含子序列进化树也表明，粉蓝烟草（N.glauca）和黄花烟草（N.rustica）可聚为一类，由于两者共同为黄花烟草亚属（Rustica）的成员，所以它们的遗传相似性较高。林烟草（N.sylvestris）、蓝茉莉烟草（N.plumbaginifolia）和花烟草（N.alata）可聚在一起，它们同属碧冬烟亚属花烟草组。可见，聚类结果与传统的分类（根据地理、种间杂交的可能性、种间杂种育性来分类）的情况吻合。
表2 11个烟草的RGP-3基因长度对比
表3 11个烟草的RGP-3基因组序列相似性分析
本发明在上述研究的基础上，以林烟草（N.sylvestris）报道的NsRGP-3序列（D67086）为基础设计引物。由于PCR反应存在反应条件特异性的问题，如引物的GC含量、发夹结构、产物效率等等，而且不同烟草种的基因组序列不同，同一引物不一定就能PCR。经搜索GenBank数据库，根据林烟草（N.sylvestris）报道中的NsRGP-3序列（D67086），以11个烟草的基因组DNA为模板，用Primer 5.0 软件，分别设计一对包含编码区在内的特异性引物，即正向引物F-primer具有（5′
TGTCAATTTATCTGCACAAATG 3′）的碱基序列和反向引物R-primer具有（5′
GCACGAAAAGAAGTCTTAATATA 3′）的碱基序列，然后完成引物的合成。通过PCR对11个烟草的基因组DNA扩增，用电泳法获得特异性DNA片段，测序后与11个烟草的基因序列进行差异性对比，从而得到11个烟草种质资源的鉴别结果。
实施例1
A、基因组DNA获得：用Qiagen 植物DNA提取试剂盒进行提取K326（N. tabacum
(K326)）烟草种的基因组DNA；
B、引物设计：以A步骤获得的K326烟草基因组DNA为模板，经搜索GenBank数据库，根据林烟草的NsRGP-3序列（D67086），用Primer 5.0 软件，分别设计一对包含编码区在内的特异性引物，即正向引物F-primer具有5′
TGTCAATTTATCTGCACAAATG 3′的碱基序列和反向引物R-primer具有5′
GCACGAAAAGAAGTCTTAATATA 3′的碱基序列，然后完成引物的合成；
C、基因组DNA的PCR扩增：将A步骤提取的烟草基因组DNA作为模板DNA进行PCR扩增；所述的PCR反应体系为30μl，包括无菌水19.3μl、不含有MgCl2的10×Taq DNA聚合酶缓冲液3.0μl、浓度为25mM的MgCl2 2.5μl、浓度为2.5mM的脱氧核糖核苷三磷酸dNTP 2.0μl、浓度为5U/μl的 Taq DNA聚合酶 0.2μl、A步骤获得的模板DNA 1.0μl和B步骤获得的浓度为10μM的F-primer和R-primer各1.0μl；PCR反应条件为在94℃下变性3 分钟后，再进行在94℃下变性1分钟，在55℃下退火40秒，在72℃下延伸2分钟，经过35个循环，随后，在72℃下延伸5分钟，并放置在4℃下保存备用；
D、特异性DNA片段获得、测序和差异比对：用琼脂糖电泳法对扩增出的特异性DNA片段在紫外观察仪下分别切取后，用QIAquick Gel
Extraction Kit快速提取试剂盒回收纯化该DNA片段；将该片段分别用pGEM®-T-Easy
Vector Systems试剂盒进行克隆，通过蓝白斑平板筛选重组克隆菌落，并制备重组克隆质粒DNA，电泳检测其分子量大小，确定特异性DNA片段单拷贝插入的重组质粒后送去测序，将此步骤获得的11个烟草种的RGP-3基因组序列进行差异比对。
实施例2
本实施例是提取红花大金元（N.tabacum(Hongda)）烟草的基因组DNA，以该基因组DNA设计合成引物外，其余方法和步骤同实施例1。
实施例3
本实施例是提取粉蓝烟草（N.glauca）的基因组DNA，以该基因组DNA设计合成引物外，其余方法和步骤同实施例1。
实施例4
本实施例是提取古特斯皮氏烟草（N.goodspeedi）的基因组DNA，以该基因组DNA设计合成引物外，其余方法和步骤同实施例1。
实施例5
本实施例是提取蓝茉莉烟草（N.plumbaginifolia）的基因组DNA，以该基因组DNA设计合成引物外，其余方法和步骤同实施例1。
实施例6
本实施例是提取匍匐烟草（N.repanda）的基因组DNA，以该基因组DNA设计合成引物外，其余方法和步骤同实施例1。
实施例7
本实施例是提取黄花烟草（N.rustica）的基因组DNA，以该基因组DNA设计合成引物外，其余方法和步骤同实施例1。
实施例8
本实施例是提取克利夫兰氏烟草（N.clevelandii）的基因组DNA，以该基因组DNA设计合成引物外，其余方法和步骤同实施例1。
实施例9
本实施例是提取波叶烟草（N.undulata）的基因组DNA，以该基因组DNA设计合成引物外，其余方法和步骤同实施例1。
实施例10
本实施例是提取花烟草（N.alata）的基因组DNA，以该基因组DNA设计合成引物外，其余方法和步骤同实施例1。
实施例11
本实施例是提取林烟草（N.sylvestris）的基因组DNA，以该基因组DNA设计合成引物外，其余方法和步骤同实施例1。
SEQUENCE LISTING
<110> 云南省烟草农业科学研究院
<120> 利用RGP-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法
<130> 01
<160> 13
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 正向引物F-primer 人工序列
<400> 1
tgtcaattta tctgcacaaa
tg
22
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 反向引物R-primer 人工序列
<400> 2
gcacgaaaag aagtcttaat
ata
23
<210> 3
<211> 1242
<212> DNA
<213> K326烟草（N.tabacum (K326)）
<400> 3
atggctttct acaacaaact cggtggtctt ttgaggcaga gcatttctgg
aaatgcagta 60
agtgcaacat caccaatgcc gtcaatgctt gatgccgtcc ggtgcatgtc
gacgaagctt 120
ttcgttggtg gtatgtttcg aatagtcttt taaaattctt actggttgta
gttaccagct 180
gataattttg tgcaacatgt atgtatttgc ttattcatcc atatattttg taggtctttc
240
atggggaact gatgatcagt ctctgagaga tgcctttgct acctttggtg
atgttgttga 300
tggtaagctc caggggcaga tgtctgctgc tttattttca atagttttct
tatctctgcg 360
gacatcgttt gaataaacat agtgaaaagt aagctcacat aataatgtgg
tatcattgta 420
gtttatgaag gatctgtaga tcatgccctg tgtgtccgtt tatactcatt
gtagtgtggt 480
ttttctgtat aagtttatgg gtttaagttc tcaataaaga ccatactgat
ggaaattttg 540
atgggctttc agcagctctt gaacaggggg ttttacattt ttttttgggg
taaattgagc 600
agttcagatt tgttaatctt tagttttaag ttgtagctta cctagtgatt gggcagggag
660
ctttgcagta ctatggttta ttgtgaattt gttttgtcag gtaagttatt
acctctcttt 720
cttggttgag atggggtagg aattgttaag tttggagttg caattgtagt
tttggttcct 780
ctgaactgtt actcttagct tgctgctcag tttacgctag tgtttgaata
ctcaggaact 840
gtgttttttt tttggtccag caagggtaat tgttgacaga gattctggca
gatcaagggg 900
atttggattt gtgaacttct cagatgatga atgtgccaat gaggctatta
aggcaatgga 960
tggtcaggta aatttcatta gggaaatatc agaagacttg gtcctgttgg
cgcaagtcat 1020
gtttacttta tcagtcgtgg ctatatattg ttgtttccgt taactgcttt actttattcg
1080
tcatggcact gatcatacat tatgtccttg caggaactcc agggaaggaa
tattcgtgtt 1140
agtattgccc aagagagagc tcctcgaagc ggaggttttg gcggttccgg
tggtggattt 1200
ggtggcggct atggtcaagc tagagacaat gatggatact
aa
1242
<210> 4
<211> 1243
<212> DNA
<213> 红花大金元烟草(N.tabacum(Hongda))
<400> 4
atggctttct acaacaaact cggtggtctt ttgaggcaga gcatttctgg
aaatgcagta 60
agtgcaacat caccaatgcc gtcaatgctt gatgccgtcc gttgcatgtc
gacgaagctt 120
ttcgttggtg gtatgtttcg actggtcttt taaagttctt actgggttgt agttaccaac
180
tggtaatttt gtgcaacgtg tatatatttg cttattcatc catatatttt
gtaggtcttt 240
cctggggaac tgatgatcag tcactgagag atgcctttgc tacctttggt
gatgttgttg 300
atggtaagct ccagaggcag atgtctgctg ctttattttc aatagttttc
ttatctctgc 360
ggacatcgtt tgaataaaca tagtgaaaag taagctcaca taataatgtg
gtatcattgt 420
agtttatgaa ggatctgtag atcatgccct gtgtgtccgt ttatactcat
tgtagtgtgg 480
tttttctgta taagtttata ggtttaagtt ctcaatcaag atcataatga
tggaaatttg 540
ataggtttca gcagctcttg aacgggtttt ttttcataat ctttttttgg gtaaattgag
600
cagttcagat ttgttaatct ttagttttaa gttgtagctt acctagtgat
tgggcaggga 660
gctttgcagt actatggttt attgtgaatt tgttttgtca ggtaagttat
tacctctctt 720
tcttggttga gatggggtag gaattgttaa gtttggagtt gcaattgtag
ttttggttcc 780
tctgaactgt tactcttagc ttgctgctca gttcacgcta gtgtttgaat
actcaggaac 840
tgcgtttttt ttttggtcca gcaggggtaa ttgttgacgg agattctggc
agatcaaggg 900
gatttggatt tgtgaacttc tcagatgatg aatgtgccaa tgaggctatt
aaggcaatgg 960
atggtcaggt aaatttcatt agggaaatat cagaagactt ggtcctgttg gcgcaagtca
1020
tgtttacttt atcagtcgtg gctatatatt gttgtttccg ttaactgctt
tactttattc 1080
gtcatggcac tgatcataca ttatgtcctt gcaggaactc cagggaagga
atattcgtgt 1140
tagtattgcc caagagagag ctcctcgaag cggaggtttt ggcggttccg
gtggtggatt 1200
tggtggcggc tatggtcaag ctagagacaa tgatggatac
taa
1243
<210> 5
<211> 1222
<212> DNA
<213> 匍匐烟草(N.repanda)
<400> 5
atggcttttt acaacaaact cggtggtctt ctgaggcaga gcatttctgg
aaatgcagta 60
agtgcaacat caccaatgcc gtcaatgctt gatgccgtcc ggtgcatgtc
cacaaagctt 120
ttcgttggtg gtatgtttcg agtagtcttt taaaattctt actcgttgta
gttaccaact 180
gataattttg tgcaacgtgt atttatttgc ttattcatcc atatattttt
tgtaggtctt 240
tcatggggaa ctgatgatca gtcgctgaga gatgcctttg ctacctttgg
tgatgttgtt 300
gatggtaagc tccagaggca gatatctgct tatttatttt caatagttat
ctctgctgac 360
atagtttgaa taaactataa tgaaaagcaa gagcacataa ataatgtagt
atttttgtac 420
ttctcgaagg gttggtagat catgcactgt gtgtcttttt atactcgatg
tggtgtggtt 480
tttctgtata agtttatcgg ttaggttctc aataaagacc atactgatgg
aaatttgatg 540
ggttctcagc aggtcttgaa cagggttttt tgcataatct tttttgggta
aaattgagca 600
tttcagattt gttgatcatt agttttaagt tgtcggttac ctagtgattg
ggcagggagc 660
tttgcagtac tatggcttat tgtgaatttg ttttgtcagg taagttaagt
aataacctct 720
cttttttggt tgaaaagggg taggattgtt aagtttggag tcgcaatagt
agttttagtt 780
cctctgaact gttactcttg gcttgctgct cattttatgc ttgtgtttga
atactcagaa 840
ctgttgtatt tcttggtcca gctagggtaa ttgttgacag agattctggc
agatcaaggg 900
ggtttggatt tgtgaacttc tcagatgatg aaagtgccaa tgaggctatc
aaagcaatgg 960
atggtcaggt aatttcatta ggggaatatt agaagacttg gtcttagtct
tatgttcaaa 1020
gtgccaatga ggctatcaaa gcatatgctt aaatgcttac cgtcatggct
gatcgtatgt 1080
tatgtccttg caggaactcc aaggaaggaa tattcgtgtt actattgccc
aagagagagc 1140
tcctcgaagt ggtggttttg gcggctccgg tggtggattt ggtggcggct
atggtcaagc 1200
tagagacaat gatggatact
aa
1222
<210> 6
<211> 1230
<212> DNA
<213> 黄花烟草(N.rustica)
<400> 6
atggctttct acaacaaact cggtggtctt ttgaggcaga gcatttctgg
aaatgcagta 60
agtgcaacat caccaatgcc gtcaatgctt gatgccgtcc ggtgcatgtc
gacgaagctt 120
ttcgttggtg gtatgtttcg aatagtcttt taaaattctt actggttgta
gttaccagct 180
gataattttg tgcaacatgt atgtatttgc ttattcatcc atatattttg
taggtctttc 240
atggggaact gatgatcagt cgctaagaga tgcctttgct acctttggtg
atgttgttga 300
tggtaagttc tcacggcaga tgtctgctgc tttattttca atagttttct
tatctctgct 360
gacatcgtct gaataaacat agtgaaaagc aggcgcacat aaataatgca
gtatcattgt 420
agtttatgaa ggattggtag ttccgtttat actcattgta gtgtggtttt
tctgtgtaag 480
tttataggtt ccaagttctc aataaagacc atactgatgg taatttgatg
ggttctcagc 540
agctcttgaa ctggttttat acatcaatct ttttttgggg gggggggggg
ggggggttaa 600
tttgagcagt tcagatttgt taatcattag ttttaagttg tcggttacct
agtgattggg 660
cagggagcct tgccgtacta tggtttatcg tgtatttttt ctgtcagata
ggttattacc 720
tctcttagtt gagatggggt aggattgttg aattgagttg caatagtagt
tttggttcct 780
cctaacagtt actcttagct tgctgctcgg tttgcctctg tttgaatact
cataactgtg 840
ggttttttgt tccagcgagg gtaatcgttg acagagattc tggcagatca
aggggatttg 900
gatttgtgaa cttctcagat gatgaaagtg ccaatgaggc tatcaaagca
atggatggtc 960
aggtaaattt cattaggggg aatatcagaa gacttggtct tagtcttatg
ttttacttca 1020
tcagtcgtgg ctgcatattc ttatttgcgt taactgcttt actttatcgg
ccatggctga 1080
tcgtacgtta tgtcctcgca ggaactccag ggaaggaata ttcgtgttag
tattgcccaa 1140
gagagagctc ctcgaagtgg tggttttggc ggctccggtg gtggatttgg
tggcggctat 1200
ggtcaagcta gagacaatga
tggatactaa
1230
<210> 7
<211> 1227
<212> DNA
<213> 克利夫兰氏烟草（N.clevelandii）
<400> 7
atggctttct acaacaaact cggtggtctt ttgaggcaga gcatttctgg
aaatgcagta 60
agtgcaacat caacaatgcc gtcaatgctt gatgctgtcc ggtgcatgtc
gacgaagctt 120
tttgttggtg gtatgtttcg attagtcttt aaaattctta ctggttgtag
ttaccaactg 180
ataattttgt gcaacatgta tgtatttgct tattcgtcca tatattttgt
aggtctttca 240
tggggaactg atgatcagtc tctgagagat gcctttgcta cctttggtga
tgttgttgat 300
ggtaagctcc aggggcagat gtctgctgct aattatcaat agttttctta
tctctgctgt 360
caatttttga ataagcatag tgaaaagcaa gtgcacataa ataatgtggt
atcattgtag 420
tttatgaagg atgtgtagat catgccctgt gtgtccgttt atactcattg
tagtgtggtt 480
tttctgtata agtttgtagg tttaagttct caataaagac catactgatg
aaaatttgat 540
gggctttcag cagctcttga actgggtttc ttacataaat gtaaattgag
cagttcagat 600
ttgttaatct ttagttttaa gttgttgctt acctagtgat tgggcagaga
gccctgcagt 660
actatggttt attgtaaatt tgttatgtca ggtaagttat tacctctctt
tcttggtcac 720
gatggggtag gattgttaag tttggagttg caattgtagt tttggttcct
ctgaagagtc 780
actgctactc ttagcttgct gctcagttta tgcttgtatt ttgactactc
taaactgtgt 840
tatttttggt ccagcgaggg taattgttga tagagattct ggcagatcaa
ggggatttgg 900
atttgtgaac ttctcagatg atgaaagtgc caatgaggct attaaggcaa
tggatggtca 960
ggtaaatctc attaggggaa tatcagaaga tttggtcctg ttgccaagtc
atatgtttac 1020
agtcgtggct atatattctt atttgtgtta actgcttgag tttatcgtca
tggcttatca 1080
tacgttattt ccttgcagga actccaagga aggaatattc gtgttagtat
tgcccaagag 1140
agagctcctc gaagtggtgg atttggtgga tccggtggtg gatttggtgg
cggctatggt 1200
caagctagag acaatgatga atactaa
1227
<210> 8
<211> 1243
<212> DNA
<213> 粉蓝烟草（N.glauca）
<400> 8
atggctttct acaacaaact cggtggtctt ttgaggcaga gcatttctgg
aaatgcagta 60
agtgcaacat caccaatgcc gtcgatgctt gatgccatcc ggtgcatgtc
gacgaagctt 120
ttcgttggtg gtatgtttcg agtagtgttt taaaattctt actggttgta
gttaccaact 180
gataattttg tgcaacgtgt atgtatttgc ttattcatcc atatattttg
taggtctttc 240
atggggaact gatgatcagt ctctgagaga tgcctttgct acctttggtg
atgttgttga 300
tggtaagctc cagcctccag gggcagatgt ctgctggttt attttcaata
tttttttaat 360
cttagctgac atcgtttgaa taaacatagt aaaaagcaag cgcacataaa
taatgtggta 420
tcattgtagt ttatgaagga tctgtagatt atgcactgtg tgtctgttta
tactcattgt 480
attgttgttt ttctgtataa ggttattggt ttaagttctc gataaagacc
atactgatgg 540
aaatttgatg ggcctttagc agctcttgaa ctgggttttg ttacatagat
cttttttttt 600
ttggggtaaa ttgagcagtt cagatttgtt aatctttagt tttaagttgt
cccatatcta 660
gtgattgggc agggagccat gcagtactat ggtttattgt gaatttgtta
tgtcaggtaa 720
ggtattacct ctctttcctg gttgagatgg ggtaggattg ttaagtttgg
agttgcaata 780
gtagttctgg ttcctctgaa ctgttactct tagcttgctg ctcagtttat
gtttgtgttt 840
gaatactcag aactgtcatt tttcttggtc cagcgagggt aatcgttgac
agagattctg 900
gcagatcaag gggatttgga tttgtgaact tctcagatga tgaaagtgcc
aatgaggcta 960
ttaaagcaat ggatggtcag gtaaatttca ttaggggaat atcagacttg
gtcttagtct 1020
tatctttact taatgaatct tggctgcata ttcttatttg cattaactgc
tttactttat 1080
ccatcatggc tgattgtacg ttatgttctt gcaggaactc caaggaagga
atattcgtgt 1140
tagtattgcc caagaaagag ctcctcgaag tggtggtttt ggtggctccg
gtggtggatt 1200
tggtggcggc tatggtcaag ctagagacaa tgatggatac taa
1243
<210> 9
<211> 1222
<212> DNA
<213> 波叶烟草（N.undulata）
<400> 9
atggctttct acaacaaact cggtggtctt ttgaggcaga gcatttctgg
aaatgcagta 60
agtgcaacat cacctatgcc gtcaatgttt gatgccgtcc gttgcatgtc
gacaaaactt 120
ttcgttggtg gtatgtttcg aatagtcttt aaaaattctt gctggttgta
cttaccaact 180
ggtaattttg tgcaacgtgt atatatttgc tcattcatcc atatattttg
taggtctttc 240
atggggaact gatgatcagt cgctaagaga tgcctttgct acctttggtg
atgttgttga 300
tggtaagttc tcacggcaga tgtctgctgc tttattttca atagttttct
tatctctgct 360
gacatcgtct gaataaacat agtgaaaagc aggcgcacat aaataatgta
gtatcattgt 420
agtttatgaa ggattggtag ttccgtttat actcattgta gtgtggtttt
tctgtgtaag 480
tttataggtt ccaagttctc aataaagacc atactgatgg taatttgatg
ggttctcagc 540
agctcttgaa ctggttttat acatcaatct ttttttgggg ggggggggtt
aatttgagca 600
gttcagattt gttaatcatt agttttaagt tgtcggttac ctagtgattg
ggcagggagc 660
cttgctgtac tatggtttat tgtgtatttt ttctgtcaga taggttatta
cctctcttag 720
ttgagatggg gtaggattgt tgaattgagt tgcaatagta gttttggttc
ctcctaacag 780
ttactcttag cttgctgctc ggtttgcctc tgtttgaata ctcataactg
tgggtttttt 840
gttccagcga gggtaatcgt tgacagagat tctggcagat caaggggatt
tggatttgtg 900
aacttctcag atgatgaaag tgccaatgag gctatcaaag caatggatgg
tcaggtaaat 960
ttcattaggg ggaatatcag aagacttggt cttagtctta tgttttactt
catcagtcgt 1020
ggctgcatat tcttatttgc gttaactgcc ttactttatc ggtcatggct
gatcgtacgt 1080
tatgtccttg caggaactcc agggaaggaa tattcgtgtt agtattgccc
aagagagagc 1140
tcctcgaagt ggtggttttg gcggctccgg tggtggattt ggtggcggct
atggtcaagc 1200
tagagacaat gatggatact
aa
1222
<210> 10
<211> 1212
<212> DNA
<213> 古特斯皮氏烟草（N.goodspeedi）
<400> 10
atggctttct acaacaaact cggtggtctt ttgaggcaga acatttctgg
aaatgcagta 60
agtgcaacaa caccaatgcc gtcaatgctt gatgccttcc ggtgcatgtc
gacgaagctt 120
ttcgttggtg gtatgtttcg aatagtcttt taaaattctt agtggttgta
gttaccagct 180
gataattttg tgcaagatgt atgtatttgc ttattcatcc atatattttg
taggtctttc 240
atggggaact gatgatcagt cactgagaga tgcccttgct acctttggtg
atgttgttga 300
tggtaagctc aaagggcaga tgtctgctgc tttattttca atagttttct
tatctctgcg 360
gacatcgttt gaataaacat agtgaaaagt aagctcacat aaataatgtg
gtatcattgt 420
agtttatgaa tgatctgtag atcatgctct gtgtgtccgt ttatactcat
tgtagtgtgg 480
tttttctgta taagtttata ggtttaggtt ctcaataaga ccatactgat
ggaaatttga 540
tgggctctca gcagctcttg aacaagggtt tttacatttt ttggggtaaa
ttgagcagtt 600
cagatttgtt aatctttagt tttaagttgt agctttcctt gcagtactat
gttttattgt 660
gaatttgttt cttcaggtaa gttattaccc ctctttctgg gttgagatgg
tgtaggattg 720
ttaagtttgg aattgaaatt gtagttttgg ttcctctgaa ctgttatttt
tagcttgctg 780
ctcaatttac actagtgttt gaatactcag aaaactctgt tttttttttg
ggtccagcaa 840
gggtaatcgt tgacagagat tctggcagat caaggggatt tggatttgtg
aacttctcag 900
atgatgaaag tgccaatgag gctattaaag caatggatgg tcaggtaaat
tttattaggg 960
gaatatcgga agacttggtc ttagtcttat gtgttttctt catcaatcgt
ggccgcatat 1020
tcttatttgc accaactgct ttacttcatc cgtcatggct gattgtacgt
tatgtccttt 1080
caggaactcc aaggaaggaa tattcgtgtt aatattgccc aagagagagc
tcctcgaagt 1140
ggtggttttg gtggctctgg tggtggattc ggtggcggct atggtcaagc
tagagacaat 1200
gatggatact
aa
1212
<210> 11
<211> 1233
<212> DNA
<213> 花烟草（N.alata）
<400> 11
atggctttct acaacaaact cggtggtctt ttgaggcaga gcatttctgg
aaatgcagta 60
agtgcaacat caccaatgcc gtcgatgctt gatgccgtcc ggtgcatgtc
gacgaagctt 120
ttcgttggtg gtatgtttcg agtggtgttt taaaattttt attggttgta
gttaccaact 180
gataattttg tgcaacgtgt atgtatttgc ttattcatcc atatattttg
taggtctttc 240
atggggaact gatgatcagt ctctgagaga tgcctttgct acctttggtg
atgttgttga 300
tggtaagctc caacctgcag gggcagatgt ctgctgcttt attttcaata
tttttcttat 360
ctcagctgac atcgtttgaa ataaacatag taaaaagcaa gcgcacataa
ataatgtggt 420
atcattgtag tttatgaagg atctgtagat catgccccgt gtgtccgttt
gtactcatta 480
tagtgtggtt tttctgtata agtttatagg tttaagttct caataaagac
catactgatg 540
ggaatttgat gggctctcag cagctcttga acagggtttt ttacataatc
tttttttggg 600
taaaatttag cagttcatat ttgttgatca ttagttttaa gttgttttgg
gcatatggag 660
ccgttcagta atatggttta ttgtgaattt gttctgtcag gtaagttatt
tcctctcttt 720
cttggttgag atgggggtag gattgttaaa tttggagttg caatagtaat
tttggtttct 780
ccgaactgtt gctcttagtt tgctgctcag tgtattttga ctactctaaa
ctgtgggttt 840
ttttggtcca gcgagggtaa ttgttgatag agattctggc agatcaaggg
gatttggatt 900
tgtgaacttc tcagacgatg aatgtgccaa tgaggctatt aaggcaatgg
atggtcaggt 960
aaatttcatt aggggaatat cagaagactt ggtcctgttg gcaagtcata
tgtttacttt 1020
atcagtcgtg gctatatatt gttgtttccg ttaactgctt tactttatcc
gtcatggcac 1080
tgatcgtaca ttatgtcctt gcaggagctc cagggaagga atattcgtgt
tagtattgcc 1140
caagagagag ctcctcgaag tggtggtttt ggcggctccg gtggtggatt
tggtggcggc 1200
tatggtcaag ctagagacaa tgatggatac taa 1233
<210> 12
<211> 1240
<212> DNA
<213> 蓝茉莉烟草（N.plumbaginifolia）
<400> 12
atggctttct acaacaaact cggtggtctt ttgaggcaga gcatttctgg
aaatgcagta 60
agtgcaacat caccaatgcc gtcaatgctt gatgccgtcc ggtgcatgtc
gacgaagctt 120
ttcgttggtg gtatgtttca aatagtcttt taaaattctt actggttgta attaccagct
180
gataaatttg tgcaacatgt atgtatttgc ttattcatcc atatactttg
taggtctttc 240
gtggggaact gatgatcagt ctctgagaga tgcctttgct acctttggtg
atgttgttga 300
tggtaagctc cacgggcaga tgtctgctgc tttattttca atagtttttt
tatctttgcg 360
gtcatcgttt gaataaacat agtgaaaagt aagctcacat aaataatgtg
gtatcattgt 420
agtttatgaa ggatctgtag atcatgccct gtgtgtctgt ttatactcgt
tgtaatgtgg 480
tttttctgta taagtttata tgtttaagtt ctcaataaag accatactga
tggaaatttg 540
atgggctttc agcagctctt gaacaggggt ctttacattt ttttttgtgg
gtaaatagca 600
gttcagattt gttaatcttt agttttaagt tgtagcttac ctagtgattg
ggcagggagc 660
cttgcactac tatggtttat tgtgaatttg ttttgtcggg taagttatta
cctctctttc 720
tggattaaca tggggtagga ttgttaagtt tggagttgca attgtagttt
tggttcctct 780
gaactgttac tcttagcttg ctgctcagtt tacgctagtg tttgaatact
cagaactgtg 840
gttttttttg gggtccagca agggtaatcg ttgacagaga ttctggcaga
ccaaggggat 900
ttggattcgt gaacttctca gatgatgaat gtgccaatga ggctattaag
gcaatggatg 960
gtcaggtaaa tttcattagg ggaatatcgg aagacttggt cctgttggca
agtcatatgt 1020
gcactttatc agtcgtggct atatattgtt atttgcgtta actgctttac
tttatgcgtc 1080
atggcactga tcatacatta tgtccttgca ggaactccag ggaaggaata
ttcgtgttag 1140
tattgcccaa gagagagctc ctcgaagtgg tggttttggc ggctccggtg
gtggatttgg 1200
tggcggctat ggtcaagcta gagacaatga tggatactaa
1240
<210> 13
<211> 1243
<212> DNA
<213> 林烟草（N.sylvestris）
<400> 13
atggctttct acaacaaact cggtggtctt ttgaggcaga gcatttctgg
aaatgcagta 60
agtgcaacat caccaatgcc gtcaatgctt gatgccgtcc ggtgcatgtc
gacgaagctt 120
ttcgttggtg gtatgtttcg aatagtcttt taaaattctt actggttgta
gttaccagct 180
gataattttg tgcaacatgt atgtatttgc ttattcatcc atatattttg
taggtctttc 240
atggggaact gatgatcagt ctctgagaga tgcctttgct acctttggtg
atgttgttga 300
tggtaagctc caggggcaga tgtctgctgc tttattttca atagttttct
tatctctgcg 360
gacatcgttt gaataaacat agtgaaaagt aagctcacat aataatgtgg
tatcattgta 420
gtttatgaag gatctgtaga tcatgccctg tgtgtccgtt tatactcatt
gtagtgtggt 480
ttttctgtat aagtttatgg gtttaagttc tcaataaaga ccatactgat
ggaaattttg 540
atgggctttc agcagctctt gaacaggggg ttttacattt ttttttgggg
taaattgagc 600
agttcagatt tgttaatctt tagttttaag ttgtagctta cctagtgatt
gggcagggag 660
ctttgcagta ctatggttta ttgtgaattt gttttgtcag gtaagttatt
acctctcttt 720
cttggttgag atggggtagg aattgttaag tttggagttg caattgtagt
tttggttcct 780
ctgaactgtt actcttagct tgctgctcag tttacgctag tgtttgaata
ctcaggaact 840
gtgttttttt ttttggtcca gcaagggtaa ttgttgacag agattctggc
agatcaaggg 900
gatttggatt tgtgaacttc tcagatgatg aatgtgccaa tgaggctatt
aaggcaatgg 960
atggtcaggt aaatttcatt agggaaatat cagaagactt ggtcctgttg
gcgcaagtca 1020
tgtttacttt atcagtcgtg gctatatatt gttgtttccg ttaactgctt
tactttattc 1080
gtcatggcac tgatcataca ttatgtcctt gcaggaactc cagggaagga
atattcgtgt 1140
tagtattgcc caagagagag ctcctcgaag cggaggtttt ggcggttccg
gtggtggatt 1200
tggtggcggc tatggtcaag ctagagacaa tgatggatac
taa
1243
Claims (3)
1.一种利用RGP-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法，其特征是：所述的11个烟草种为K326、红花大金元、林烟草、粉蓝烟草、古特斯皮氏烟草、蓝茉莉烟草、匍匐烟草、黄花烟草、克利夫兰氏烟草、波叶烟草、花烟草，提取这11个烟草种的基因组DNA，以其为模板，设计合成RGP-3引物，进行PCR扩增，以扩增产物经过测序后进行种质鉴别，具体步骤为：
A、基因组DNA获得：分别提取上述烟草种的基因组DNA；
B、引物设计合成：以A步骤获得的基因组DNA为模板，经搜索GenBank数据库，根据林烟草的NsRGP-3序列（D67086），用Primer 5.0 软件，分别设计一对包含编码区在内的特异性引物，即正向引物F-primer具有5′ TGTCAATTTATCTGCACAAATG 3′的碱基序列和反向引物R-primer具有5′
GCACGAAAAGAAGTCTTAATATA 3′的碱基序列，然后完成引物的合成；
C、基因组DNA的RGP-3基因序列PCR扩增：将A步骤提取的烟草基因组DNA作为模板DNA进行PCR扩增，所述的PCR反应体系为30μl，包括无菌水19.3μl、不含有MgCl2的10×Taq DNA聚合酶缓冲液3.0μl、浓度为25mM的MgCl2 2.5μl、浓度为2.5mM的脱氧核糖核苷三磷酸dNTP
2.0μl、浓度为5U/μl的 Taq DNA聚合酶 0.2μl、A步骤获得的模板DNA 1.0μl和B步骤获得的浓度为10μM 的F-primer和R-primer各1.0μl；PCR反应条件为在94℃下变性3 分钟后，再进行在94℃下变性1分钟，在55℃下退火40秒，在72℃下延伸2分钟，经过35个循环，随后，在72℃下延伸5分钟，并放置在4℃下保存备用；
D、特异性DNA片段获得、测序和差异比对：用电泳法对扩增出的特异性DNA片段在紫外观察仪下分别切取后，用QIAquick Gel Extraction Kit快速提取试剂盒回收纯化该DNA片段；将该片段分别用pGEM®-T-Easy
Vector Systems试剂盒进行克隆，通过蓝白斑平板筛选重组克隆菌落，并制备重组克隆质粒DNA，电泳检测其分子量大小，确定特异性DNA片段单拷贝插入的重组质粒后送去测序，将此步骤获得的11个烟草种的RGP-3基因组序列进行差异比对。
2.根据权利要求1所述的利用RGP-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法，其特征是：A步骤中所述的提取烟草的基因组DNA的方法为用Qiagen 植物DNA提取试剂盒进行提取。
3.根据权利要求1所述的利用RGP-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法，其特征是：D步骤所述的电泳法为琼脂糖电泳。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201110388304 CN102559869B (zh) | 2011-11-30 | 2011-11-30 | 利用rgp-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201110388304 CN102559869B (zh) | 2011-11-30 | 2011-11-30 | 利用rgp-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102559869A true CN102559869A (zh) | 2012-07-11 |
| CN102559869B CN102559869B (zh) | 2013-06-19 |
Family
ID=46406471
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201110388304 Active CN102559869B (zh) | 2011-11-30 | 2011-11-30 | 利用rgp-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102559869B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103609436A (zh) * | 2013-10-17 | 2014-03-05 | 四川农业大学 | 蓝花丹快繁技术 |
| CN108642206A (zh) * | 2018-05-09 | 2018-10-12 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种烟草赤星病抗性相关的qtl及其定位方法与应用 |
| CN112575112A (zh) * | 2020-12-25 | 2021-03-30 | 红塔烟草(集团)有限责任公司 | 鉴定k326烤后品种的特异序列、试剂盒及其使用方法 |
| CN113549704A (zh) * | 2021-05-21 | 2021-10-26 | 云南省烟草质量监督检测站 | 一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记及其应用 |
-
2011
- 2011-11-30 CN CN 201110388304 patent/CN102559869B/zh active Active
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| KAZUKI MORIGUCHI，ET AL: "Structure and subcellular localization of a small RNA-binding protein from tobacco", 《THE PLANT JOURNAL》 * |
| 徐军等: "普通烟草种质资源的SSR 标记与指纹图谱分析", 《中国烟草科学》 * |
| 时焦等: "RAPD标记在烟草研究中的应用", 《中国烟草学报》 * |
| 许明辉等: "烟草品种RAPD分子标记多态性与品种鉴定", 《种子》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103609436A (zh) * | 2013-10-17 | 2014-03-05 | 四川农业大学 | 蓝花丹快繁技术 |
| CN108642206A (zh) * | 2018-05-09 | 2018-10-12 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种烟草赤星病抗性相关的qtl及其定位方法与应用 |
| CN108642206B (zh) * | 2018-05-09 | 2021-12-21 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种烟草赤星病抗性相关的qtl及其定位方法与应用 |
| CN112575112A (zh) * | 2020-12-25 | 2021-03-30 | 红塔烟草(集团)有限责任公司 | 鉴定k326烤后品种的特异序列、试剂盒及其使用方法 |
| CN113549704A (zh) * | 2021-05-21 | 2021-10-26 | 云南省烟草质量监督检测站 | 一种鉴别烟与非烟的烟草属特异性分子标记及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102559869B (zh) | 2013-06-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106868131B (zh) | 陆地棉6号染色体与纤维强度相关的snp分子标记 | |
| CN102162011B (zh) | 一个水稻抗稻瘟病基因的分子标记方法 | |
| Martínez-Estrada et al. | Assessment of somaclonal variation during sugarcane micropropagation in temporary immersion bioreactors by intersimple sequence repeat (ISSR) markers | |
| Fahim et al. | Resistance to Wheat streak mosaic virus–a survey of resources and development of molecular markers | |
| Li et al. | Identification and mapping of a novel Turnip mosaic virus resistance gene Tu RBCS 01 in Chinese cabbage (Brassica rapa L.) | |
| CN102559869B (zh) | 利用rgp-3特异性分子标记快速鉴别11个烟草种质的方法 | |
| CN105274120A (zh) | 一种抗烟草花叶病毒的N′au基因及其克隆方法和应用 | |
| CN106811462B (zh) | 与番茄抗灰叶斑病基因Sm连锁的Indel标记及其扩增引物与应用 | |
| CN108103219A (zh) | 一种用于鉴别杨梅雌雄的分子标记、引物对及其应用 | |
| CN110628945B (zh) | 胡椒叶片中胡椒黄斑驳病毒和黄瓜花叶病毒的多重pcr检测方法及专用试剂盒 | |
| CN106555001A (zh) | 一种水稻抗稻瘟病基因的分子标记及其应用 | |
| CN105647920A (zh) | 基于番茄黄化曲叶病毒病抗性基因Ty-3的InDel分子标记 | |
| CN107177667A (zh) | 小麦穗密度qtl连锁的hrm分子标记及其应用 | |
| CN104774922B (zh) | 小麦旗叶宽基因TaFLW1的分子标记WGRB125及其应用 | |
| CN103276054A (zh) | 用于辅助检测大豆百粒重的引物和检测方法 | |
| CN103866038B (zh) | 用于检测烟草对tmv抗性的n基因特异性引物对、检测方法及试剂盒 | |
| WO2018129704A1 (zh) | 玉米母本单倍体主效诱导基因及应用 | |
| CN102839220A (zh) | 一种鉴定大葱中与cms相关的线粒体基因的分子标记 | |
| Kiemo et al. | Detection and elimination of viruses infecting sweet potatoes in Hungary | |
| CN104805081A (zh) | 一种小麦粒重分子标记及其应用 | |
| CN103361340B (zh) | 海湾扇贝耐热相关热休克蛋白70基因标记及其辅助育种方法 | |
| CN108374006B (zh) | 抗病转基因大豆事件b5c9123-5外源插入片段侧翼序列及其应用 | |
| Diana et al. | Targeted editing of ossweet13, a bacterial leaf blight susceptible gene in rice using crispr tool | |
| CN101845504B (zh) | 用于鉴定黄瓜黑斑病抗性的引物序列及其鉴定方法 | |
| Islam et al. | Preliminary progress in jute (Corchorus species) genome analysis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |