CN102552396A - 一种白花丹参总酚酸提取物、制备方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种白花丹参总酚酸提取物、制备方法及用途。所述白花丹参总酚酸提取物是从白花丹参根中经溶剂提取、溶剂萃取、柱层析纯化而得到,总酚酸的含量大于90%,其中丹酚酸A、丹酚酸B总含量不低于65%,丹酚酸A与丹酚酸B的质量比为0.10~0.40∶1。白花丹参总酚酸提取物对血栓闭塞性脉管炎具有较好的治疗作用,可按照药剂学常规生产工艺将其加工制成片剂、胶囊剂、冲剂、注射用冻干制剂、白花丹参总酚酸盐的注射用冻干制剂或其粉针剂,用于治疗脉管炎。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药提取物,更具体地说是由白花丹参提取精制而成的一种白花丹参总酚酸提取物(多种酚酸类化合物的混合物)、制备方法及其在治疗脉管炎和药物组合物方面的用途。
背景技术
血栓闭塞性脉管炎(Thromboangitis Obliterans,TAO)是一种累及血管的炎症性、闭塞性和周期发作的一种慢性周围血管疾病,主要侵犯四肢远端的中小动静脉,尤其是下肢血管,常致肢体发生缺血或瘀血病损,甚者肢体溃烂脱落。我国各地均有发病,尤其是青壮年男性多见,严重危害人们的身体健康。
白花丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge var alba)是唇形科植物丹参的变型,主产于山东章丘、莱芜、泰安等丘陵地区。2002年白花丹参被收入《山东省中药材标准》。《全国中草药汇编》中记载:白花丹参形似丹参(注:丹参即指药典中所收载的紫花丹参),惟花白色,有的可略带紫晕,亦以根入药,产于山东,当地有用白花丹参酒治疗血栓闭塞性脉管炎者,参见全国中草药汇编[上册],人民卫生出版社,1975。
白花丹参根用于治疗脉管炎具有比较好的临床基础。山东省章丘县医院从1967年开始应用民间验方白花丹参治疗血栓闭塞性脉管炎,自1971年10月至1975年12月应用白花丹参治疗脉管炎147例,临床治愈率27.2%,显著好转率45.6%,总有效率93.2%,经过治疗,患肢血液循环有不同程度的改善,并能减轻疼痛和促进溃疡愈合,且临床分组对比观察,白花丹参的疗效高于丹参的,参见中医杂志,1976,(11):23-24。原山东中医学院附属医院(即现在山东中医药大学附属医院)尚德俊教授等采用白花丹参注射液静脉滴注、辅以内服通脉II号治疗血栓闭塞性脉管炎144例,临床治愈和显著好转率为86.11%,在3个月内达到治疗目的的占75.0%;其中1例III期1级(湿热下注型)病人,右足拇趾慢性溃疡2年9个月不愈合,给予白花丹参注射液静脉滴注15天后,患肢血运改善,溃疡愈合,参见尚德俊等,山东中医杂志,1986(2):14-16。
《治疗与保健药酒》记载:民间用以治疗脉管炎已有80多年的历史,而且认为白花丹参对脉管炎的疗效优于丹参的,可将白花丹参浸泡于55度的白酒制成5~10%的白花丹参酒作为单方或验方用于治疗脉管炎,参见许青峰,治疗与保健药酒,1988,p177。
药理实验研究为临床应用白花丹参治疗脉管炎提供了可靠的理论依据。韩纪举等研究了白花丹参根水浸液对小鼠血小板粘附功能及血液流变学的影响,发现白花丹参具有明显的抗血小板粘附凝集作用,并且具有降低血液粘度的作用,参见韩纪举等,中药材,2007,30(6):699-701。白花丹参根水煎液对H2O2损伤后人脐血内皮祖细胞有显著保护作用,参见焦鹏等,中国中药杂志,2011,36(13):1830-1832;能有效促进人脐血内皮祖细胞的增值、黏附和释放NO能力,显著改善人脐血内皮祖细胞的功能,参见焦鹏等,中华中医药杂志,2011,26(11):2687-2689。
CN1899371A(CN200610045270.X)提供一种白花丹参在制药领域中的应用及白花丹参药物的制备方法。白花丹参的丹参素含量是紫花丹参的两倍,该物质用于治疗心脑血管疾病及其他相关疾病,具有祛淤止痛、活血通经、清心除烦的功效。所述白花丹参药物的制备方法是:①取白花丹参置入提取罐内,加入4~10倍重量份的水进行水提取,过滤得水提液;或将白花丹参超微粉碎后进行超声提取,过滤得超微提取粉;②取①工序的超微提取粉或经浓缩至相对密度为1.0~1.4的水提液,加入50%~90%的乙醇进行醇沉淀,过滤后用20%~40%的强碱,溶液调pH=6.5~8.5,冷放后过滤,重复醇沉淀,得滤液;③将②工序的滤液浓缩至相对密度为1.0~1.4,加入0.5%~2%活性炭,加热煮沸,过滤,灭菌,得液体剂。
发明内容
本发明针对现有技术的不足,提供了一种白花丹参总酚酸提取物、制备方法及其在治疗脉管炎方面的用途。
本发明还提供白花丹参总酚酸提取物在药物组合物方面的用途。
术语说明:
白花丹参总酚酸,是白花丹参中所含的丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、紫草素等多种酚酸类化合物的总称,该类化合物从结构母核上均属于苯丙酸类成分。
白花丹参总酚酸提取物,是指从白花丹参中提取的多种酚酸类化合物的混合物。
本发明技术方案如下:
一种治疗脉管炎的白花丹参总酚酸提取物,以白花丹参的根为原料,通过溶剂提取、溶剂萃取、柱层析纯化制备而成,主要含有丹酚酸B、丹酚酸A、迷迭香酸、丹酚酸E、丹酚酸L和紫草素,总酚酸的含量大于90%,其中丹酚酸B和丹酚酸A的质量总含量不低于65%,丹酚酸A和丹酚酸B的质量比为0.10~0.40∶1。
本发明治疗脉管炎的白花丹参总酚酸提取物,是按包括下列步骤的方法制备的:
以白花丹参的根为原料,粉碎后,以10wt%~90wt%甲醇、10wt%~90wt%乙醇、水或pH=3~5的酸水为提取溶剂进行提取,所述溶剂量与原料的重量比为6~30∶1,重复提取2~3次,合并滤液;进行以下处理,得酸性滤液:
i.对于所述提取溶剂为浓度10~90wt%甲醇水溶液、10~90wt%乙醇提取得到的滤液,浓缩后,用有机溶剂萃取脱去脂溶性杂质,将水层以2.5N盐酸调pH=3~5,滤过,得酸性滤液;或者,
ii对于所述提取溶剂为水得到的提取液,以2.5N盐酸调pH=3~5,滤过,得酸性滤液;或者,
iii.对于所述提取溶剂为pH=3~5的酸水得到的提取液,直接过滤,得酸性滤液;
将上述的酸性滤液直接进行大孔吸附柱层析,先以水洗脱,再分别以pH=3~5的50wt%、70wt%酸性乙醇洗脱,收集50wt%、70wt%酸性乙醇洗脱液,以NaHCO3水溶液调pH至中性,在50℃条件下减压浓缩至无乙醇,然后加水稀释,加水量为原料重量的2倍,以2.5N盐酸调pH=3~5,滤过,将滤液直接加到C18反相硅胶柱的顶端,进行反相硅胶柱层析纯化,先以水洗脱,再以50wt%乙醇洗脱,收集50wt%乙醇洗脱液,在50℃条件下减压蒸干,即得白花丹参总酚酸提取物。
根据本发明,一种治疗脉管炎的白花丹参总酚酸提取物的制备方法,详细步骤如下:
(1)溶剂提取
原料白花丹参的根经过粉碎后,以10~90wt%甲醇水溶液、10~90wt%乙醇、水或pH=3~5的酸水为提取溶剂进行提取,所用溶剂量与原料的重量比为6~30∶1,重复提取2~3次,除去药渣,合并滤液;
优选的,所述的提取方法是用加热提取法、超声提取法、渗滤提取法或植物组织破碎提取法。
优选的,所述的提取溶剂是50~70wt%乙醇、水或pH=3~5的酸水,最优选的为pH=3~5的酸水。
优选的,加热提取法、超声提取法和植物组织破碎提取法中所用的提取溶剂用量为原料重量的6~10倍,渗滤提取法中所用的提取溶剂用量为原料重量的20~30倍。
(2)浓缩,脱脂
对于所述提取溶剂为10wt%~90wt%甲醇水溶液、10wt%~90wt%乙醇所得到的提取液,在50℃条件下减压浓缩至无乙醇,加水稀释,加水量为原料重量的4~6倍,再以等体积的有机溶剂萃取,重复萃取2次,弃去石油醚层,将萃取后水层溶液以2.5N盐酸调pH=3~5,得酸水溶液。
所述萃取脱脂用的有机溶剂是石油醚、二氯甲烷或氯仿,优选的石油醚或二氯甲烷。
(3)大孔吸附树脂柱层析
a.步骤(1)中以pH=3~5的酸水为提取溶剂时,直接过滤,得酸性滤液;
b.步骤(1)中以水为提取溶剂时,所得水提液以2.5N盐酸调pH=3~5,滤过,得酸性滤液;
c.步骤(2)所得的酸水溶液,滤过,得酸性滤液;
将上述a,b或c中所述的酸性滤液直接加到大孔吸附树脂柱的顶端,使其缓慢流过大孔吸附树脂柱,然后以水洗脱6~8个保留体积,再分别以pH=3~5的50wt%乙醇洗脱4~6个保留体积,pH=3~5的70wt%乙醇洗脱6~8个保留体积,收集50wt%、70wt%酸性乙醇洗脱液,以10wt%NaHCO3水溶液调pH至中性,在50℃条件下减压浓缩至无乙醇。
优选的,所述大孔吸附树脂为YWD06大孔吸附树脂,市购产品。
(4)C18反相硅胶柱层析
将步骤(3)中浓缩后的洗脱液加水稀释,加水量为原料重量的2倍,以2.5N盐酸调pH=3~5,过滤,将滤液加到C18反相硅胶柱的顶端,进行反相硅胶柱层析纯化,先以水洗脱6~8个保留体积,再以50wt%乙醇洗脱4~6个保留体积,在50℃条件下减压蒸干,即得白花丹参总酚酸提取物。
优选的,C18反相硅胶填料用量为原料重量的1倍,上样后,先用蒸馏水洗脱C18反相硅胶柱5~8个保留体积,再以50wt%乙醇洗脱4~6个保留体积。
本发明方法所得的白花丹参总酚酸含量大于90%,其中丹酚酸A、丹酚酸B的总含量不低于65wt%,且二者的质量比为0.15~0.40∶1。该总酚酸提取物的特点在于其中有效成分丹酚酸A的含量较大,与其他类似的提取物不同。
本发明的白花丹参总酚酸的制药用途,用于制备治疗脉管炎的药物,特别是用于制备治疗血栓闭塞性脉管炎的药物。
本发明的白花丹参总酚酸提取物或其药学上可接受的盐与药用辅料组合制成不同剂型的药物制剂,用于治疗脉管炎。
一种治疗脉管炎的白花丹参总酚酸提取物的药物组合物,包括本发明的白花丹参总酚酸提取物或其药学上可接受的盐、一种或多种药学上可接受载体或赋形剂、抗氧化剂。
优选的,所述的药学上可接受的白花丹参总酚酸盐是将白花丹参总酚酸提取物溶于蒸馏水中,以碱化试剂NaOH、KOH、Na2CO3、K2CO3、NaHCO3、KHCO3、MgHPO3、Mg(H2PO3)2中的一种调pH=6.8~8.0,使其形成钠盐、钾盐或镁盐而制得,优选的碱化试剂是NaHCO3或MgHPO3。
优选的,所述的抗氧化剂选自抗坏血酸钠、抗坏血酸、枸橼酸或焦亚硫酸钠。
优选的,所述的药物组合物为白花丹参总酚酸的片剂、胶囊剂、冲剂、注射用冻干制剂之一,总酚酸盐的注射用冻干制剂或粉针剂,最优选的是其总酚酸盐的注射用冻干制剂或粉针剂,可按照药剂学常规生产工艺制备。
所述药物组合物不同剂型的药物制剂详细说明如下:
1.白花丹参总酚酸片剂、胶囊剂或冲剂的制作,均按白花丹参总酚酸提取物总量的重量百分比:
取所述的白花丹参总酚酸提取物,加入2~5重量倍的稀释剂I,5~10wt%的湿润剂,4~15wt%的崩解剂,按常规湿法制粒,干燥,整粒,装袋,得冲剂;或者将整粒后的颗粒再加入0.5~3wt%的润滑剂,混匀,装入胶囊壳得胶囊剂或压片得片剂。
上述稀释剂I选自淀粉、糖粉、糊精或微晶纤维;
上述湿润剂选自水或乙醇;
上述崩解剂为羧甲基淀粉钠;
上述润滑剂为硬脂酸镁或滑石粉。
2.白花丹参总酚酸注射用冻干制剂的制作
取所述的白花丹参总酚酸提取物,加入抗氧化剂,加入占总体积5%(w/v)的甘露醇,溶解于蒸馏水中,定容,过滤除菌,无菌条件下分装,冷冻干燥,然后在氮气下密封,即得。
3.白花丹参总酚酸盐注射用冻干制剂的制作
取所述的白花丹参总酚酸提取物,溶于蒸馏水中,加入抗氧化剂,加入占总体积5%(w/v)的甘露醇,以碱化试剂水溶液调pH=6.8~8.0,过滤除去不容物,再过滤除菌,无菌条件下分装到西林瓶中,冷冻干燥,然后在氮气下密封,即得。
4.白花丹参总酚酸盐注射用粉针剂的制作
取所述的白花丹参总酚酸提取物,溶于蒸馏水中,加入抗氧化剂,加入占总体积5%(w/v)的甘露醇,以碱化试剂水溶液调pH=6.8~8.0,搅拌,过滤除去不溶物,再过滤除菌,在无菌条件下冷冻干燥,将所制得的药物组合物研细、混匀,分装到西林瓶中,在氮气下密封,即得。
本发明的一种白花丹参总酚酸提取物及其药物组合物制剂用于治疗血栓闭塞性脉管炎,改善肢体缺血所引起的慢性溃疡、疼痛、发冷及间歇跛行,促进溃疡愈合。
本发明的治疗脉管炎的白花丹参总酚酸提取物的药效学研究。
动物:Wistar雄性大白鼠60只,体重280~300g,由山东大学实验动物中心提供。
试剂与仪器:LCMS-2020色谱仪(岛津公司)、乙腈(色谱纯)、冰乙酸(分析纯)、通塞脉片(江苏南星药业有限责任公司),批号:Z32020535、月桂酸(国药集团化学试剂有限公司),批号:F200909284;血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α、ET酶免试剂盒(RD公司),批号:20110701A。
高效液相色谱条件:取白花丹参总酚酸提取物10mg,精密称定,置10ml容量瓶中,甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过即得。参照文献Liu A H,et al.Journal of ChromatographyA,2007,1161,(1-2):170-182,采用Agilent Eclipse XDB-C18柱(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;以乙腈为流动相A相,以0.4%乙酸水溶液为流动相B。线性梯度洗脱时间程序为0min,5%A;19min,20%A;37min,24%A;45min,33%A;55min,33%A;流速1.0ml/min;UV检测波长288nm;进样量10μl。
药物:将按照实施例1方法制备白花丹参总酚酸提取物,用0.5%羧甲基纤维素钠水溶液配制成0.1g/ml、0.05g/ml和0.025g/ml的溶液。以目前临床上治疗血栓闭塞性脉管炎的常用口服药通塞脉片(江苏南星药业有限责任公司生产)为阳性对照,将其研细,过80目筛,用0.5%羧甲基纤维素钠水溶液配制成0.132g/ml的混悬液。
造模与分组:采用国内外通用的股动脉注射月桂酸法,参照文献方法苗智如等,中药材,2008,31(6):880-882,制备血栓闭塞性脉管炎大鼠模型。将60只大鼠随机为假手术组、模型组、通塞脉片对照组、白花丹参总酚酸提取物高剂量组、中剂量组和低剂量组。
给药:采用灌胃法给药。白花丹参总酚酸提取物高剂量组、中剂量组和低剂量组分别按照0.5g/kg、0.25g/kg和0.125g/kg的给药剂量给予已配制的高、中、低三种不同浓度的白花丹参总酚酸提取物溶液。阳性对照组按照0.66g/kg的剂量给予已配制的通塞脉片混悬溶液。各组均于手术后灌胃给药,每天给药1次,连续1周。
实验结果:
大鼠体征指标观察:大体观察大鼠患肢皮肤颜色、温度、患肢有无肿胀、有无坏疽及坏疽的程度、跛行状况。参照王军等,中国中西医结合杂志,1996,16(7):421-423。采用的分级标准分级,I级:病变局限于趾甲部;II级:病变局限于趾部;III级:病变局限于足爪部;IV级:病变局限于膝关节以下;V级:病变发展到膝关节以上。实验结果见表1,模型组的病变最严重,通塞脉片组与白花丹参总酚酸中、高剂量组的病变最轻,与模型组比较有显著性差异P<0.05。
表1 白花丹参总酚酸对TAO大鼠局部体征变化的影响
注:与模型组比较*P<0.05
病理学观察:取实验大鼠患肢的动脉血管,石蜡包埋,切片,观察血管平滑肌、纤维组织病变情况,同时分别对动脉壁炎性细胞浸润、纤维增生等情况进行观察。结果与TAO模型相比,通塞脉片组与中、高剂量给药组的血栓范围均减少,管腔较规则,血管及周围组织少量炎性细胞的浸润,炎症反应减轻。
血清生化指标测定:测定实验大鼠血清TXB2、6-K-PGF1α、ET的含量,结果见表2。与模型组比较,通塞脉片组及白花丹参总酚酸中、高剂量组血清中6-K-PGF1α含量明显升高,TXB2、ET含量降低,表明白花丹参总酚酸能改善造模大鼠血管的抗血栓功能、对血管内皮细胞具有保护作用。
表2 白花丹参总酚酸对TAO大鼠血清TXB2、6-K-PGF1α、ET的影响
注:与模型组比较*P<0.05
上述实验结果表明,本发明的治疗脉管炎的白花丹参总酚酸提取物具有抗血栓形成、改善患肢血液循环、减轻患肢炎症反应的作用,可用于治疗血栓闭塞性脉管炎,以及由其引起的患肢慢性溃疡、疼痛、发冷及间歇跛行,具有疗效好、使用方便的特点。
与目前临床上用于治疗血栓闭塞性脉管炎的通塞脉片进行比较,其中剂量组优于通塞脉片对照组,说明白花丹参总酚酸提取物可应用于临床上对血栓闭塞性脉管炎的治疗。该总酚酸提取物或其药学上可接受的盐可按照药剂学常规生产工艺将其加工成各种剂型,如片剂、胶囊剂、冲剂、注射用冻干制剂、总酚酸盐的注射用冻干制剂及粉针剂,
附图说明
图1是白花丹参总酚酸提取物液-质联用色谱图,A为紫外吸收色谱图;B为总离子流色谱图。其中,峰1.丹酚酸E;峰2.迷迭香酸;峰3.紫草酸;峰4.丹酚酸B;峰5.丹酚酸L;峰6.丹酚酸A。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明,但不限于此。
C18反相硅胶填料,型号为YMC 75μm ODS-AQ,为日本YMC公司产品。
大孔吸附树脂填料,为YWD06大孔吸附树脂,河北沧州远威化工有限公司产品。
实施例中的百分比浓度均为质量百分比。
实施例1:
原料白花丹参根粉碎后,加入8倍量蒸馏水,在80℃条件下加热提取,提取2次,每次1小时,合并提取液,以2.5N盐酸调pH=4,滤过,滤液直接加到大孔吸附树脂的顶端,进行大孔吸附树脂柱层析,先以中性蒸馏水洗脱,洗脱至洗脱液的Molish反应(酚醛缩合反应)为阴性时,以pH=4的50%乙醇洗脱4~6个保留体积,pH=4的70%乙醇洗脱6~8个保留体积,收集50%、70%乙醇洗脱液,将其以10%NaHCO3水溶液调pH至中性,然后在50℃条件下减压浓缩至无乙醇,再加原料2重量倍的蒸馏水稀释,以2.5N盐酸将其调pH=4,过滤,将滤液直接加到C18反相硅胶柱的顶端,进行反相硅胶柱层析纯化,先以蒸馏水洗脱6~8个保留体积,再以50%乙醇洗脱4~6个保留体积,收集50%乙醇洗脱液,在50℃条件下减压蒸干,室温真空干燥,即得白花丹参总酚酸提取物。
白花丹参总酚酸提取物中,总酚酸含量大于90%,其中丹酚酸A、丹酚酸B的总量不低于72%,且二者的的质量比为0.21∶1。其液-质联用色谱图的紫外吸收色谱图和总离子流色谱图如图1。
实施例2:
原料白花丹参根粉碎后,加入10重量倍的70%乙醇,回流提取,共提取2次,每次1小时,合并提取液,在50℃条件下减压浓缩至无乙醇,加原料2重量倍的水稀释,再以等体积的石油醚萃取脱脂,重复萃取2次,弃去石油醚层,将水层以2.5N盐酸将其调pH=4,滤过,将滤液进行大孔吸附树脂柱层析和C18反相硅胶柱层析,层析方法同实施例1,即得白花丹参总酚酸提取物。
白花丹参总酚酸提取物中,总酚酸含量大于90%,其中丹酚酸A、丹酚酸B的总量不低于68%,且二者的的质量比为0.19∶1。
实施例3:
原料白花丹参根粉碎后,加入8倍量pH=4的酸水,在80℃条件下提取,提取2次,每次1小时,合并提取液,滤过,将滤液进行大孔吸附树脂柱层析和C18反相硅胶柱层析,层析方法同实施例1,即得白花丹参总酚酸提取物。
白花丹参总酚酸提取物中,总酚酸含量大于90%,其中丹酚酸A、丹酚酸B的总量不低于70%,且二者的的质量比为0.25∶1。
实施例4:
原料白花丹参根粉碎后,加入原料6重量倍pH=4的水,在70℃条件下超声提取,共提取3次,每次30分钟,合并提取液,过滤,将滤液进行大孔吸附树脂柱层析和C18反相硅胶柱层析,层析方法同实施例1,即得白花丹参总酚酸提取物。
白花丹参总酚酸提取物中,总酚酸含量大于90%,其中丹酚酸A、丹酚酸B的总量不低于70%,且二者的的质量比为0.21∶1。
实施例5:
原料白花丹参根经粉碎成细粉后,装入渗滤筒中,从渗滤筒的上口加入50%乙醇,打开渗滤筒的下口,待乙醇从渗滤筒下口流出时关闭下口开关,放置,浸泡24小时,再打开渗滤筒下口开关,渗滤液从其下口流出,并从其上口不断补充50%乙醇,保持渗滤筒中的乙醇始终能浸过原料。用原料体积25倍量的50%乙醇在室温条件下进行渗滤,控制渗滤液的流出速度为5~10ml/min,收集渗滤液,在50℃条件下减压浓缩至无乙醇,加原料5重量倍的水稀释,再以等倍体积的石油醚萃取脱脂,重复萃取2次,弃去石油醚层,将水层以2.5N盐酸将其调pH=4,滤过,滤液进行大孔吸附树脂柱层析和C18反相硅胶柱层析,层析方法同实施例1,即得白花丹参总酚酸提取物。
白花丹参总酚酸提取物中,总酚酸含量大于90%,其中丹酚酸A、丹酚酸B的总量不低于67%,且二者的的质量比为0.20∶1。
实施例6:
原料白花丹参根经粉碎后,用蒸馏水浸泡1小时,然后利用“闪式提取器”破碎植物组织,室温下提取3次,分别加入原料重量8倍量、6倍量、6倍量的pH=4的酸水,提取时间分别为3分钟、2分钟、2分钟,提取完毕后静置15分钟,离心过滤,合并滤液,滤液进行大孔吸附树脂柱层析和C18反相硅胶柱层析,层析方法同实施例1,即得白花丹参总酚酸提取物。
白花丹参总酚酸提取物中,总酚酸含量大于90%,其中丹酚酸A、丹酚酸B的总量不低于75%,且二者的的质量比为0.22∶1。
实施例7:白花丹参总酚酸提取物药物组合物片剂
实施例1所得的白花丹参总酚酸提取物150g,加入淀粉150g,糊精45g,蔗糖粉3.5g,以上固体物质均分别研磨过80目筛,混匀,加入适量10%淀粉浆作粘合剂,制成湿颗粒,60℃下干燥,整粒,加入滑石粉1.5g,混匀,压制成1000片,即得。
实施例8:白花丹参总酚酸提取物药物组合物胶囊剂
实施例2所得的白花丹参总酚酸提取物150g,加入淀粉150g,糊精45g,微晶纤维素3.5g,以上固体物质均分别研磨过80目筛,混匀,加入适量10%淀粉浆作粘合剂,制成湿颗粒,60℃下干燥,整粒,加入硬脂酸镁1.5g,混匀,装入胶囊壳1000粒,即得。
实施例9:白花丹参总酚酸提取物药物组合物冲剂
实施例3所得的白花丹参总酚酸提取物200g,加入淀粉200g,糊精75g,微晶纤维素25g,以上固体物质均分别研磨过80目筛,混匀,加入适量10%淀粉浆作粘合剂,制成湿颗粒,60℃下干燥,整粒,分装成100袋,即得。
实施例10:白花丹参总酚酸提取物药物组合物注射用冻干制剂
实施例6所得的白花丹参总酚酸提取物20g,加入20g抗坏血酸钠,12.5g甘露醇,溶解于250毫升的蒸馏水中,定容至300毫升,过滤除菌,无菌条件下分装于100个西林瓶中,冷冻干燥,然后在氮气下密封,即得。
实施例11:白花丹参总酚酸盐注射用冻干制剂
实施例5所得的白花丹参总酚酸提取物20g,溶于250毫升蒸馏水中,以10% Na2CO3水溶液调pH值至7.0,加入20g抗坏血酸钠,12.5g甘露醇,加入蒸馏水定容至300毫升,过滤除菌,无菌条件下分装于100个西林瓶中,冷冻干燥,然后在氮气下密封,即得。
实施例12:白花丹参总酚酸盐注射用粉针剂
实施例2所得的白花丹参总酚酸提取物20g,溶于250毫升蒸馏水中,加入20g抗坏血酸钠,10g无水磷酸氢镁,12.5g甘露醇,室温下搅拌半小时,过滤除去不溶物,再过滤除菌,在无菌条件下冷冻干燥,将所制得的药物组合物研细、混匀,分装入100个西林瓶中,在氮气下密封,即得。
Claims (10)
1.一种白花丹参总酚酸提取物,以白花丹参的根为原料,通过溶剂提取、溶剂萃取、柱层析纯化制备而成,主要含有丹酚酸B、丹酚酸A、迷迭香酸、丹酚酸E、丹酚酸L和紫草素,总酚酸的含量大于90%,其中丹酚酸B和丹酚酸A的质量总含量不低于65%,丹酚酸A和丹酚酸B的质量比为0.10~0.40∶1。
2.如权利要求1所述的白花丹参总酚酸提取物,其特征在于是按以下方法制备的:
以白花丹参的根为原料,粉碎后,以10wt%~90wt%甲醇、10wt%~90wt%乙醇、水或pH=3~5的酸水为提取溶剂进行提取,所述溶剂量与原料的重量比为6~30∶1,重复提取2~3次,合并滤液;进行以下处理,得酸性滤液:
i.对于所述提取溶剂为浓度10~90wt%甲醇水溶液、10~90wt%乙醇提取得到的滤液,浓缩后,用有机溶剂萃取脱去脂溶性杂质,将水层以2.5N盐酸调pH=3~5,滤过,得酸性滤液;或者,
ii.对于所述提取溶剂为水得到的提取液,以2.5N盐酸调pH=3~5,滤过,得酸性滤液;或者,
iii.对于所述提取溶剂为pH=3~5的酸水得到的提取液,直接过滤,得酸性滤液;
将所得酸性滤液直接进行大孔吸附柱层析,先以水洗脱,再分别以pH=3~5的50wt%、70wt%酸性乙醇洗脱,收集50wt%、70wt%酸性乙醇洗脱液,以NaHCO3水溶液调pH至中性,在50℃条件下减压浓缩至无乙醇,然后加水稀释,加水量为原料重量的2倍,以2.5N盐酸调pH=3~5,滤过,将滤液直接加到C18反相硅胶柱的顶端,进行反相硅胶柱层析纯化,先以水洗脱,再以50wt%乙醇洗脱,收集50wt%乙醇洗脱液,在50℃条件下减压蒸干,即得白花丹参总酚酸提取物。
3.权利要求1所述的白花丹参总酚酸提取物制备方法,步骤如下:
(1)溶剂提取
原料白花丹参的根经过粉碎后,以10~90wt%甲醇水溶液、10~90wt%乙醇、水或pH=3~5的酸水为提取溶剂进行提取,所用溶剂量与原料的重量比为6~30∶1,重复提取2~3次,除去药渣,合并滤液;
优选的,所述的提取溶剂是50~70wt%乙醇、水或pH=3~5的酸水,最优选的为pH=3~5的酸水;
(2)浓缩,脱脂
对于所述提取溶剂为10wt%~90wt%甲醇水溶液、10wt%~90wt%乙醇所得到的提取液,在50℃条件下减压浓缩至无乙醇,然后加水稀释,加水量为原料重量的4~6倍,再以等体积的有机溶剂萃取,重复萃取2次,弃去石油醚层,将萃取后的水层以2.5N盐酸调pH=3~5,得酸水溶液;
所述萃取脱脂用的有机溶剂是石油醚、二氯甲烷或氯仿,优选的石油醚或二氯甲烷;
(3)大孔吸附树脂柱层析
a.步骤(1)中以pH=3~5的酸水为提取溶剂时,得酸性滤液;
b.步骤(1)中以水为提取溶剂时,所得水提液以2.5N盐酸调pH=3~5,得酸性滤液;
c.步骤(2)所得的酸水溶液,滤过,得酸性滤液;
将上述a、b或c中所述的酸性滤液直接加到大孔吸附树脂柱的顶端,使其缓慢流过大孔吸附树脂柱,然后以水洗脱6~8个保留体积,再分别以pH=3~5的50wt%乙醇洗脱4~6个保留体积,pH=3~5的70wt%乙醇洗脱6~8个保留体积,收集50wt%、70wt%酸性乙醇洗脱液,以10wt%NaHCO3水溶液调pH至中性,在50℃条件下减压浓缩至无乙醇;
优选的,所述大孔吸附树脂为YWD06大孔吸附树脂;
(4)C18反相硅胶柱层析
将步骤(3)中浓缩后的洗脱液加水稀释,加水量为原料重量的2倍,以2.5N盐酸调pH=3~5,过滤,将滤液加到C18反相硅胶柱的顶端,进行反相硅胶柱层析纯化,先以水洗脱6~8个保留体积,再以50wt%乙醇洗脱4~6个保留体积,在50℃条件下减压蒸干,即得白花丹参总酚酸提取物。
4.如权利要求3所述的白花丹参总酚酸提取物制备方法,其特征在于步骤(1)中所述的提取方法是用加热提取法、超声提取法、渗滤提取法或植物组织破碎提取法;其中优选的,加热提取法、超声提取法和植物组织破碎提取法中所用的提取溶剂用量为原料重量的6~10倍,渗滤提取法中所用的提取溶剂用量为原料重量的20~30倍。
5.如权利要求3所述的白花丹参总酚酸提取物制备方法,其特征在于步骤(4)中C18反相硅胶填料用量为原料重量的1倍,上样后,先用蒸馏水洗脱C18反相硅胶柱5~8个保留体积,再以50wt%乙醇洗脱4~6个保留体积。
6.权利要求1或2所述的白花丹参总酚酸的制药用途,用于制备治疗脉管炎的药物。
7.如权利要求6所述的白花丹参总酚酸的制药用途,其特征在于用于制备治疗血栓闭塞性脉管炎的药物。
8.一种治疗脉管炎的白花丹参总酚酸提取物的药物组合物,包括权利要求1或2所述的白花丹参总酚酸提取物或其药学上可接受的盐、一种或多种药学上可接受载体或赋形剂及抗氧化剂。
9.如权利要求8所述的白花丹参总酚酸提取物的药物组合物,其特征在于,所述的药学上可接受的白花丹参总酚酸盐是将白花丹参总酚酸提取物溶于蒸馏水中,以碱化试剂NaOH、KOH、Na2CO3、K2CO3、NaHCO3、KHCO3、MgHPO3、Mg(H2PO3)2中的一种调pH=6.8~8.0,使其形成钠盐、钾盐或镁盐而制得;优选的碱化试剂是NaHCO3或MgHPO3。
10.如权利要求8所述的白花丹参总酚酸提取物的药物组合物,其特征在于,所述的药物组合物为白花丹参总酚酸的片剂、胶囊剂、冲剂、注射用冻干制剂之一,或其总酚酸盐的注射用冻干制剂或粉针剂。
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Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104130226A (zh) * | 2014-04-01 | 2014-11-05 | 王平 | 一种高含量丹参丹酚酸b的制备方法 |
CN104208147A (zh) * | 2013-05-30 | 2014-12-17 | 中国中医科学院中药研究所 | 一种白花丹参提取物制剂 |
CN104523831A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-04-22 | 九寨沟天然药业集团有限责任公司 | 一种丹参叶提取物的制备方法及检测方法 |
CN104922206A (zh) * | 2015-05-27 | 2015-09-23 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 三种高山鼠尾草属植物中酚酸类组分的前处理方法 |
CN105523926A (zh) * | 2015-12-29 | 2016-04-27 | 山东大学 | 一种丹酚酸a的提取分离纯化方法及丹酚酸a盐的制备方法 |
CN106361847A (zh) * | 2016-11-07 | 2017-02-01 | 中国农业科学院郑州果树研究所 | 一种梨幼果总酚提取方法 |
CN114762703A (zh) * | 2021-02-05 | 2022-07-19 | 天津华泰森淼超高压装备工程技术有限公司 | 超高压白花丹参浓缩口服液及其制备方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1943569A (zh) * | 2006-10-30 | 2007-04-11 | 王煜 | 一种中药活性成分组合物及其制备方法和用途 |
CN101073599A (zh) * | 2007-06-18 | 2007-11-21 | 石任兵 | 丹参中总丹参酮及总酚酸提取物及其制备方法 |
-
2012
- 2012-02-13 CN CN201210031890.3A patent/CN102552396B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1943569A (zh) * | 2006-10-30 | 2007-04-11 | 王煜 | 一种中药活性成分组合物及其制备方法和用途 |
CN101073599A (zh) * | 2007-06-18 | 2007-11-21 | 石任兵 | 丹参中总丹参酮及总酚酸提取物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
王敏等: "加减清营汤对H2O2损伤的血管内皮细胞存活率和SOD活力的影响", 《中华中医药学刊》 * |
Cited By (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104208147A (zh) * | 2013-05-30 | 2014-12-17 | 中国中医科学院中药研究所 | 一种白花丹参提取物制剂 |
CN104208147B (zh) * | 2013-05-30 | 2018-08-03 | 中国中医科学院中药研究所 | 一种白花丹参提取物制剂 |
CN104130226A (zh) * | 2014-04-01 | 2014-11-05 | 王平 | 一种高含量丹参丹酚酸b的制备方法 |
CN104523831A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-04-22 | 九寨沟天然药业集团有限责任公司 | 一种丹参叶提取物的制备方法及检测方法 |
CN104922206A (zh) * | 2015-05-27 | 2015-09-23 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 三种高山鼠尾草属植物中酚酸类组分的前处理方法 |
CN104922206B (zh) * | 2015-05-27 | 2019-06-14 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 三种高山鼠尾草属植物中酚酸类组分的前处理方法 |
CN105523926A (zh) * | 2015-12-29 | 2016-04-27 | 山东大学 | 一种丹酚酸a的提取分离纯化方法及丹酚酸a盐的制备方法 |
CN106361847A (zh) * | 2016-11-07 | 2017-02-01 | 中国农业科学院郑州果树研究所 | 一种梨幼果总酚提取方法 |
CN106361847B (zh) * | 2016-11-07 | 2019-06-11 | 中国农业科学院郑州果树研究所 | 一种梨幼果总酚提取方法 |
CN114762703A (zh) * | 2021-02-05 | 2022-07-19 | 天津华泰森淼超高压装备工程技术有限公司 | 超高压白花丹参浓缩口服液及其制备方法 |
CN114762703B (zh) * | 2021-02-05 | 2024-03-22 | 天津华泰森淼超高压装备工程技术有限公司 | 超高压白花丹参浓缩口服液及其制备方法 |
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Publication number | Publication date |
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