CN102539367A - 一种液体中蛋白质氮含量的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种液体中蛋白质氮含量的测定方法，包括以下步骤：分离液体中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样；在加热条件下，向所述待测试样中加入过硫酸钾，得到混合溶液；将所述混合溶液依次进行紫外催化和高温加热，得到消解产物；检测所述消解产物，得到液体中非蛋白质氮含量；根据预定的所述液体中总氮含量和检测得到的非蛋白质氮含量，得到液体中蛋白质氮含量。本发明提供的方法能够更彻底和完全地消解液体中的含氮组分，具有良好的消解效果，在对含氮组分消解的同时也消解了其中的还原性组分，使其失去还原作用，减少了对含氮组分消解的干扰，提高了消解结果的均一性，提高了对蛋白质氮含量测定的回收率，提高了检测结果的准确性。

Description

一种液体中蛋白质氮含量的测定方法

技术领域

本发明涉及一种蛋白质氮的分析测定技术领域，尤其涉及一种液体中蛋白质氮含量的测定方法。

背景技术

蛋白质是构成细胞和生物体结构的重要物质，具有催化、运输、传递信息的作用，能够调节机体的生命活动，增强机体抵抗力，调节渗透压，供给热能，对生命活动起着至关重要的作用。充足的蛋白质能够保持生命体正常的生命体征，因此，对于蛋白质含量的测定具有重要的意义。

每一种蛋白质都有其恒定的含氮量，但由于蛋白质组成及其性质的复杂性，通常用总氮含量来表示蛋白质氮的含量，使得得到的蛋白质氮含量中也包含了非蛋白质氮，不利于对含氮物质品质的评价，也会给不法分子以可乘之机，向食品中添加非蛋白质氮类物质冒充蛋白质氮含量，给人民的健康带来巨大的威胁，因此，对真实蛋白质氮含量的测定具有重要的意义。

对于氮含量的测定，通常采用的方法是将其中的含氮化合物消解为硝酸盐，得到的硝酸盐被定量还原为亚硝酸盐，利用亚硝酸盐与磺胺和N-萘基乙二胺盐酸盐显色的性质，采用分光光度法测定得到其中的氮含量。如邹琳等采用流动注射分析仪测定了水中的总氮和总磷的含量(邹琳，周圣东，陈卫.高压消解\流动注射光度法同时测定水中总氮与总磷.中国给水排水，2009，25(22)：93～97.)，其过程为：在110℃下，将水样通过碱性过硫酸钾和硫酸两次消解，得到的消解产物分别进入流动注射分析仪中的总氮、总磷分析系统，得到水样中总氮、总磷的含量。在总氮分析系统中，消解产物通过一个镀铜的镉圈后，硝酸根被定量还原为亚硝酸根，在酸性条件下，亚硝酸根与磺胺和N-萘基乙二胺盐酸盐在45℃恒温条件下反应生成紫红色物质，其最佳吸收波长为550nm，采用分光光度法对得到的紫红色物质进行测定，得到水中的总氮含量。

上述高压消解对水体中的含氮化合物具有较好的消解效果，然而对于组成成分复杂的液体，如牛奶等，这种高压消解的方法对其中的某些含氮物质如植物碱、氨基酸、某些水溶性蛋白质等含氮成分消解不够完全和彻底，得到的消解产物不均一，给测定氮含量带来了较大的误差；而且液体中还含有还原性成分，如糖类，这些还原性成分会和氧化剂反应，从而影响对含氮组分的消解，使液体中的含氮化合物消解不够彻底，严重影响对液体中含氮化合物的消解效果，使得对液体中蛋白质氮含量的测定结果不准确。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液体中蛋白质氮含量的测定方法，本发明提供的方法对液体中蛋白质氮的测定结果具有较高准确度。

本发明提供一种液体中蛋白质氮含量的测定方法，包括以下步骤：

a)分离液体中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样；

b)在加热条件下，向所述待测试样中加入过硫酸钾，得到混合溶液；

c)将所述混合溶液依次进行紫外催化和高温加热，得到消解产物；

d)检测所述消解产物，得到液体中非蛋白质氮含量；

e)根据预定的所述液体中总氮含量和得到的非蛋白质氮含量，得到液体中蛋白质氮含量。

优选的，所述紫外催化为在非硫酸酸性环境中进行紫外催化。

优选的，所述紫外催化的温度为90℃～110℃。

优选的，所述高温加热的温度为95℃～150℃。

优选的，所述高温加热为加压高温加热。

优选的，所述加压高温加热的压力为5Psi～8Psi。

优选的，所述步骤b)中的加热温度为90℃～110℃。

优选的，所述步骤a)具体为：

向液体中加入蛋白质变性试剂，加热得到的混合物，分离后得到含有非蛋白质氮的待测试样。

优选的，所述蛋白质变性试剂为有机酸。

优选的，所述步骤b)前还包括：

向所述待测试样中加入过氧化氢，氧化所述待测试样中的还原性组分；

和/或向所述待测试样中加入活性炭，除去所述待测试样中的无机色素；

和/或向所述待测试样中加入乙二胺四乙酸二钠，除去所述待测试样中的金属离子。

本发明提供一种液体中蛋白质氮含量的测定方法，包括以下步骤：分离液体中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样；在加热条件下，向所述待测试样中加入过硫酸钾，得到混合溶液；将所述混合溶液依次进行紫外催化和高温加热，得到消解产物；检测所述消解产物，得到液体中非蛋白质氮含量；根据预定的所述液体中总氮含量和得到的非蛋白质氮含量，得到液体中蛋白质氮含量。在本发明中，过硫酸钾在加热条件下释放出活性氧原子[O]，得到的活性氧原子[O]对液体样品进行初步消解，然后在紫外催化条件下，部分活性氧原子[O]在紫外催化条件下与水反应生成自由基，该自由基使样品中的含氮物质得到消解；接着，在高温条件下，活性氧原子[O]对含氮物质进行进一步消解，最终使其中的各类含氮组分消解完全。本发明提供的方法在对液体中的含氮组分消解的同时也消解了其中的还原性组分，使其失去了还原作用，消除了还原性组分对氮含量测定的干扰，提高了消解结果均一性，提高了对液体中蛋白质氮检测的回收率和准确性。另外，本发明提供的测定方法具有良好的稳定性和重复性。

采用本发明提供的方法测定了牛奶中蛋白质氮含量，实验结果表明，本发明提供的方法对牛奶中蛋白质氮的测定结果准确。本发明提供的方法采用连续消解的方式，消解条件温和，操作简单、省时，步骤简便，提高结果的准确性，而且批量处理样品能力较强，处理周期较短，大大提高了检测效率。

附图说明

图1为本发明实施例1得到的紫外光谱图；

图2为本发明实施例1得到的非线性二级标准曲线；

图3为本发明实施例1得到的线性标准曲线。

具体实施方式

本发明提供了一种液体中蛋白质氮含量的测定方法，包括以下步骤：

a)分离液体中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样；

b)在加热条件下，向所述待测试样中加入过硫酸钾，得到混合溶液；

c)将所述混合溶液依次进行紫外催化和高温加热，得到消解产物；

d)检测所述消解产物，得到液体中非蛋白质氮含量；

e)根据预定的所述液体中的总氮含量和得到的非蛋白质氮含量，得到液体中蛋白质氮含量。

为了便于对液体中蛋白质氮含量的测定，本发明优选对所述液体进行前处理，具体包括以下步骤：

如果所述液体中含有不溶性杂质，如污水，过滤所述液体，除去其中的不溶性杂质，得到滤液；如果所述液体中氮含量较高，本发明优选将所述液体稀释2～20倍，更优选为5～15倍，最优选为8～10倍；如果所述液体中氮含量较低，本发明优选将所述液体浓缩2～20倍，更优选为5～15倍，最优选为8～10倍。

对所述液体进行前处理后，本发明分离所述滤液中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样。

本发明可以采用向所述滤液中加入蛋白质变性试剂，加热得到的混合物，或紫外烘烤所述滤液的方法，固化其中的蛋白质，分离固化后的蛋白质，得到含有非蛋白质氮的待测试样；本发明优选向所述滤液中加入蛋白质变性试剂，加热得到的混合物，分离固化后的蛋白质，得到含有非蛋白质氮的待测样品，所述蛋白质变性试剂优选为有机酸，更优选为醋酸水溶液；所述醋酸水溶液的体积分数优选为0.1％～5％，更优选为0.3％～4％，最优选为0.5％～3％；所述蛋白质变性试剂与所述液体样品的体积比为25∶(0.1～3)，更优选为25∶(0.3～1)；优选将得到的混合物加热至沸腾；所述加热时间优选为5分钟～50分钟，更优选为8分钟～40分钟，最优选为20分钟～30分钟。

停止加热后，优选将得到的溶液趁热过滤，用所述蛋白质变性试剂优选淋洗1次～10次，更优选为2次～8次，最优选为3～5次，合并每次得到的滤液，冷却后定容，得到含有非蛋白质氮的待测试样。

为了减小液体样品中的还原性组分对其中的氮含量测定的干扰，本发明对所述待测试样进行消解前优选氧化所述待测试样中的还原性组分。在本发明中，优选向所述待测试样中加入过氧化氢，氧化所述待测试样中的还原性组分。所述过氧化氢与所述待测试样中的还原性组分进行氧化还原反应，使其失去还原作用，所述过氧化氢的质量浓度优选为3％～50％，更优选为10％～30％，本发明对所述氧化还原反应中原料的配比，反应条件等没有特殊限制，为本领域技术人员熟知的还原性物质与过氧化氢之间的氧化还原反应。

为了减小杂质对氮含量测定的干扰，本发明在对所述待测试样进行消解前优选除去所述待测试样中的杂质，将得到的滤液定容，得到含有非蛋白质氮的待测试样，如所述待测试样中含有无机色素时，可以采用以下方法处理：优选向所述滤液中加入活性炭，过滤得到的混合溶液，除去其中的无机色素；所述待测试样中含有金属离子时，可以采用以下方法处理：优选向所述滤液中加入乙二胺四乙酸二钠溶液，过滤得到的混合溶液，除去其中的金属离子，所述乙二胺四乙酸二钠溶液的浓度优选为0.1g/L～5g/L，更优选为0.2g/L～3g/L，最优选为0.8g/L～2g/L；所述待测试样中含有无机色素和金属离子时，可以先用上述方法除去无机色素再除去金属离子，也可以先用上述方法除去金属离子再除去无机色素。

得到含有非蛋白质氮的待测试样后，本发明在加热条件下，向所述待测试样中加入过硫酸钾，得到混合溶液。所述过硫酸钾在加热条件下释放出活性氧原子[O]，得到的活性氧原子对待测试样中的含氮组分进行消解，得到消解产物。所述过硫酸钾的质量与所述液体的体积比优选为1g∶(1～20)mL，更优选为1g∶(2～15)mL，最优选为1g∶(3～10)mL；优选向所述待测试样中加入过硫酸钾溶液，所述过硫酸钾溶液的摩尔浓度优选为0.1mol/L～1mol/L，更优选为0.15mol/L～0.8mol/L，最优选为0.25mol/L～0.5mol/L；所述加热温度优选为90℃～110℃，更优选为95℃～105℃。

得到混合溶液后，本发明将所述混合溶液依次进行紫外催化和高温加热，得到待测试样的消解产物。

首先将所述混合溶液进行紫外催化，得到紫外催化的消解产物。在紫外催化过程中，上述得到的部分活性氧原子[O]在紫外催化的条件下与水反应，优选在紫外灯照射条件下，生成自由基，所述自由基可对待测试样中的各类有机氮等还原性组分进行消解，得到紫外催化的消解产物。所述紫外催化优选在非硫酸酸性环境中进行紫外催化，更优选为在盐酸酸性环境中进行紫外催化；所述紫外催化的温度优选为90℃～110℃，更优选为95℃～105℃。

得到紫外催化的消解产物后，本发明将所述紫外催化的消解产物继续进行高温加热，得到所述待测试样的消解产物。在高温加热过程中，上述得到的活性氧原子[O]在高温条件下对所述紫外催化的消解产物进行进一步的消解，得到所述待测样品的消解产物。所述高温加热的温度优选为95℃～150℃，更优选为100℃～140℃，最优选为110℃～130℃；所述高温加热优选为加压高温加热，所述加压高温加热的压力优选为5Psi～8Psi，更优选为5.5Psi～7.5Psi。

得到所述待测试样的消解产物后，检测所述消解产物，本发明优选采用紫外分光光度法检测所述消解产物，得到所述消解产物的紫外光谱数据。首先将得到的消解产物还原，得到亚硝酸盐，然后将所述亚硝酸盐优选与磺胺和N-(1-萘基)乙二胺二盐酸盐反应，得到紫红色产物，采用紫外分光光度法测定得到的紫红色产物，得到所述消解产物的紫外光谱数据。优选用镉将得到的消解产物还原，得到亚硝酸盐；所述磺胺的浓度优选为1g/L～50g/L，更优选为10g/L～40g/L，最优选为20g/L～30g/L；所述N-萘基乙二胺盐酸盐的浓度优选为0.1g/L～10g/L，更优选为0.5g/L～8g/L，最优选为1g/L～5g/L；所述测定波长优选为520nm～560nm，更优选为530nm～550nm，最优选为535nm～545nm。

根据上述技术方案得到的紫外光谱数据和预定的标准曲线，即可得到液体中非蛋白质氮含量。

在本发明中，所述标准曲线优选按照以下方法获得：

配制系列浓度的标准溶液；

在加热条件下，向所述标准溶液中加入过硫酸钾，得到混合溶液；

将所述混合溶液依次进行紫外催化和高温加热，得到消解产物；

检测所述消解产物，得到系列浓度标准溶液的紫外光谱数据；

根据所述紫外光谱数据绘制标准曲线。

本发明中所述标准溶液优选为硝酸钠水溶液，采用国家标准物质研究中心的硝酸盐氮标准，配制系列浓度的标准溶液。首先，配制标准物质的储备液，将得到的储备液稀释至标准溶液的浓度。所述标准溶液的质量浓度优选为0.001％～10％，更优选为0.01％～5％，最优选为0.1％～1％；优选用醋酸溶液将标准物质储备液稀释到标准溶液的浓度，所述醋酸溶液的体积分数优选为0.1％～10％，更优选为0.25％～8％，最优选为0.5％～5％。

得到系列浓度的标准溶液后，本发明在加热条件下，所述标准溶液中加入过硫酸钾，得到混合溶液。所述过硫酸钾在加热条件下释放出活性氧原子[O]，得到的活性氧原子[O]会对所述标准溶液进行消解，得到消解产物。所述过硫酸钾与所述标准溶液中标准物质的质量比优选为1∶(1～20)，更优选为1∶(2～15)，最优选为1∶(3～10)；优选向所述标准溶液中加入过硫酸钾溶液，所述过硫酸钾溶液的摩尔浓度优选为0.1mol/L～1mol/L，更优选为0.15mol/L～0.8mol/L，最优选为0.25mol/L～0.5mol/L；所述加热温度优选为90℃～110℃，更优选为95℃～105℃。

得到混合溶液后，本发明将所述混合溶液依次进行紫外催化和高温加热，得到消解产物。所述紫外催化和高温加热过程与上述技术方案中的紫外催化和高温加热过程相同。

按照上述技术方案中的紫外催化和高温加热过程，得到消解产物后，检测所述消解产物，得到系列浓度标准溶液的紫外光谱数据。所述检测过程与上述技术方案中的检测过程相同。

根据上述技术方案中的检测过程，得到系列浓度标准溶液的紫外光谱数据后，根据所述紫外光谱数据及其对应的浓度绘制标准曲线。所述标准曲线优选为非线性二级标准曲线或线性标准曲线。

根据上述技术方案得到的液体样品消解产物的紫外光谱图和标准曲线，经过计算得到液体中非蛋白质氮的质量，再将所述非蛋白质氮的质量除以上述液体的质量或体积，得到液体中非蛋白质氮含量。

得到液体中非蛋白质氮含量后，用预定的液体中总氮含量减去所述液体中非蛋白质氮含量，得到液体中非蛋白质氮含量。本发明中，可以采用上述测定液体中非蛋白质氮含量的方法测定液体中总氮含量，也可以采用连续流动法、蒸馏滴定法、氨气敏电极法或离子色谱法测定液体中总氮含量，本发明对所述连续流动法、蒸馏滴定法、氨气敏电极法或离子色谱法没有特殊限制，为本领域技术人员熟知的连续流动法、蒸馏滴定法、氨气敏电极法或离子色谱法。

采用上述测定液体中非蛋白质氮含量的方法测定液体中总氮含量时，所述液体中总氮含量测定的技术方案与上述液体中非蛋白质氮含量测定的技术方案的不同之处在于，液体中总氮含量的测定不包括步骤a)分离液体中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样。

得到液体中总氮含量和非蛋白质氮含量后，用所述液体中总氮含量减去非蛋白质氮含量，得到液体中蛋白质氮含量。

得到液体中蛋白质氮含量后，本发明还包括根据蛋白质氮含量计算液体中蛋白质含量，将所述蛋白质氮含量乘以蛋白质系数，即可得到液体中的蛋白质含量。

在本发明提供的液体中蛋白质氮含量的测定方法中，过硫酸钾释放出活性氧原子[O]，得到的活性氧原子[O]对待测试样进行初步地消解，然后依次在紫外催化和高温条件下对液体样品进行进一步地消解，使得其中的含氮物质较完全和彻底地消解，而且消除了其中还原性组分对消解产物的影响，具有良好的消解效果，提高了消解产物的均一性，本发明提供的方法对液体中蛋白质氮含量测定的结果准确可靠。实验结果表明，本发明提供的方法对牛奶中蛋白质氮含量的测定结果准确。另外，本发明提供的方法具有良好的稳定性和重复性。

为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的液体中蛋白质氮含量的测定方法进行详细描述，但不能将它们理解为对本法明保护范围的限定。

实施例1

将11g硝酸钠溶解于100mL蒸馏水中，得到质量浓度为10.0％的硝酸钠储备液。准确移取1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL所述标准储备液，用体积分数为0.5％的醋酸溶液分别将其定容到100mL，得到系列浓度的硝酸钠标准待测溶液。分别取所述标准待测溶液2mL，倾入连续流动分析仪样品管中分别平行测定三次，取其平均值。在连续流动分析仪中，样品进样量为0.1mL/min，进样时间为100s，冲洗时间为120s。首先在90℃下，向所述标准待测溶液中加入2mL摩尔浓度为0.3mol/L的过硫酸钾溶液，过硫酸钾溶液的进样量为0.8mL/min，然后得到的混合溶液在90℃、盐酸提供的酸性条件下进行紫外灯照射3min，接着在6Psi压力下高温加热得到的紫外催化的消解产物2.5min，加热温度为110℃，得到样品的消解产物。得到的消解产物经过镉柱时被还原为亚硝酸盐，进入检测器进行紫外分光光度法测定，检测波长为540nm，得到标准物质的紫外光谱图。

标准物质的紫外光谱图如图1所示，图1为本发明实施例1得到的紫外光谱图，图中曲线上的信号叉从第五个开始紧接着的6个信号叉依次为系列浓度的标准溶液的电信号强度。根据得到的系列浓度的标准物质的紫外光谱图及其对应的浓度绘制得到标准曲线，如图2和图3所示，图2为本发明实施例1得到的非线性二级标准曲线，图3为本发明实施例1得到的线性标准曲线，图3所示的线性标准曲线的硝酸根浓度线性范围为0.1％～1％，线性方程为：A(吸光度)＝-1076.98+47750.43C(％)，相关系数r为0.9981。由图中可以看出，本发明提供的方法对氮含量测定得到的电信号强度明显提高，而且电信号强度与其浓度之间存在良好的线性关系，本发明提供的方法具有良好的效果。

比较例1

将11g硝酸钠溶解于100mL蒸馏水中，得到质量浓度为10.0％的硝酸钠储备液。准确移取1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL所述标准储备液，用体积分数为0.5％的醋酸溶液分别将其到100mL，得到系列浓度的硝酸钠标准溶液。分别取得到的标准溶液2mL，倾入连续流动分析仪样品管中分别平行测定三次，取其平均值。在连续流动分析仪中，样品进样量为0.1mL/min，进样时间为100s，冲洗时间为120s。首先在90℃下，向所述标准溶液中加入2mL摩尔浓度为0.3mol/L的过硫酸钾溶液，过硫酸钾溶液的进样量为0.8mL/min，然后在6Psi压力下高温加热得到的混合溶液2.5min，加热温度为110℃，得到样品的消解产物。得到的消解产物经过镉柱时被还原为亚硝酸盐，进入检测器进行紫外分光光度法检测，检测波长为540nm，得到标准物质的紫外光谱图。

根据得到的系列浓度的标准物质的紫外光谱图绘制得到标准曲线。

实施例2～6

分别选择5种牛奶样品2mL，所述牛奶样品蒙牛特仑苏，生产日期分别为20111010、20111022、20111031、20111115、20111118。向其中加入50mL体积分数为0.5％的乙酸溶液，加热沸腾15分钟，迅速用无氮定性滤纸过滤，用体积分数为0.5％的乙酸溶液冲洗沉淀物，合并得到的滤液，冷却后定容到200mL，得到牛奶的待测溶液。移取所述牛奶的待测溶液2mL，倾入连续流动分析仪样品管中分别平行测定三次，取其平均值。在连续流动分析仪中，样品进样量为0.1mL/min，进样时间为100s，冲洗时间为120s。首先在90℃下，向所述牛奶的待测溶液中加入2mL摩尔浓度为0.3mol/L的过硫酸钾溶液，过硫酸钾溶液的进样量为0.8mL/min，然后得到的混合溶液在90℃、盐酸提供的酸性条件进行紫外灯照射3min，接着在6Psi压力下高温加热得到的紫外催化的消解产物2.5min，加热温度为110℃，得到样品的消解产物。得到的消解产物经过镉柱时被还原为亚硝酸盐，进入检测器进行紫外分光光度法测定，检测波长为540nm，得到牛奶样品的紫外光谱图。

根据得到的牛奶样品的紫外光谱图和实施例1得到的标准曲线，经过计算得到牛奶样品中的非蛋白质氮含量。

取2mL牛奶样品稀释到200mL，得到牛奶的待测溶液。移取所述牛奶的待测溶液2mL，倾入连续流动分析仪样品管中分别平行测定三次，取其平均值。所述测定过程与本实施例中牛奶中非蛋白质氮含量的测定过程相同，得到牛奶中总氮的紫外光谱图。

根据得到的牛奶中总氮的紫外光谱图和实施例1得到的标准曲线，经过计算得到牛奶样品中的总氮含量。

将得到的牛奶样品中的总氮含量减去上述得到的牛奶中的非蛋白质氮含量，得到牛奶样品中的蛋白质氮含量。结果如表1所示，表1为本发明实施例2～6和比较例2～6得到的测定结果。

比较例2～6

分别选择5种牛奶样品2mL，所述牛奶样品与实施例2～6中所用的牛奶样品相同。向其中加入50mL体积分数为0.5％的乙酸溶液，加热沸腾15分钟，迅速用无氮定性滤纸过滤，用体积分数为0.5％的乙酸溶液冲洗沉淀物，合并得到的滤液，冷却后定容到200mL，得到牛奶的待测溶液。移取所述2mL，倾入连续流动分析仪样品管中分别平行测定三次，取其平均值。在连续流动分析仪中，样品进样量为0.1mL/min，进样时间为100s，冲洗时间为120s。首先在90℃下，向所述牛奶的待测溶液中加入2mL摩尔浓度为0.3mol/L的过硫酸钾溶液，过硫酸钾溶液的进样量为0.8mL/min，然后在6Psi压力下高温加热得到的混合溶液2.5min，加热温度为110℃，得到样品的消解产物。得到的消解产物经过镉柱时被还原为亚硝酸盐，进入检测器进行紫外分光光度法检测，检测波长为540nm，得到牛奶样品的紫外光谱图。

根据得到的牛奶样品的紫外光谱图和实施例1得到的标准曲线，经过计算得到牛奶样品中的非蛋白质氮含量。

取2mL牛奶样品稀释到200mL，得到牛奶的待测溶液。移取所述牛奶的待测溶液2mL，倾入连续流动分析仪样品管中分别平行测定三次，取其平均值。所述测定过程与本比较例中牛奶中非蛋白质氮含量的测定过程相同，得到牛奶中总氮的紫外光谱图。

根据得到的牛奶中总氮的紫外光谱图和实施例1得到的标准曲线，经过计算得到牛奶样品中的总氮含量。

将得到的牛奶样品中的总氮含量减去上述得到的牛奶中的非蛋白质氮含量，得到牛奶样品中的蛋白质氮含量。结果如表1所示，表1为本发明实施例2～6和比较例2～6得到的测定结果。

表1本发明实施例2～6和比较例2～6得到的测定结果

注：蛋白质氮含量*为质量百分数。

由表1可知，本发明提供的方法对液体中蛋白质氮含量的测定结果准确，而且得到的数据的变异系数皆小于5％，符合分析检测的要求。

由以上实施例可知，本发明提供的方法对液体中蛋白质氮含量的测定得到的结果准确。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种液体中蛋白质氮含量的测定方法，包括以下步骤：

a)分离液体中的蛋白质氮，得到含有非蛋白质氮的待测试样；

b)在加热条件下，向所述待测试样中加入过硫酸钾，得到混合溶液；

c)将所述混合溶液依次进行紫外催化和高温加热，得到消解产物；

d)检测所述消解产物，得到液体中非蛋白质氮含量；

e)根据预定的所述液体中总氮含量和得到的非蛋白质氮含量，得到液体中蛋白质氮含量。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述紫外催化为在非硫酸酸性环境中进行紫外催化。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述紫外催化的温度为90℃～110℃。

4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述高温加热的温度为95℃～150℃。

5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述高温加热为加压高温加热。

6.根据权利要求5所述的测定方法，其特征在于，所述加压高温加热的压力为5Psi～8Psi。

7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤b)中的加热温度为90℃～110℃。

8.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤a)具体为：

向液体中加入蛋白质变性试剂，加热得到的混合物，分离后得到含有非蛋白质氮的待测试样。

9.根据权利要求8所述的测定方法，其特征在于，所述蛋白质变性试剂为有机酸。

10.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤b)前还包括：

向所述待测试样中加入过氧化氢，氧化所述待测试样中的还原性组分；

和/或向所述待测试样中加入活性炭，除去所述待测试样中的无机色素；

和/或向所述待测试样中加入乙二胺四乙酸二钠，除去所述待测试样中的金属离子。

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