CN102525946A

CN102525946A - 硫氰酸红霉素明胶微球制剂的制备方法

Info

Publication number: CN102525946A
Application number: CN2012100077752A
Authority: CN
Inventors: 刘焕奇; 钱泽升; 邹明; 张启迪; 毕可东; 曲志娜
Original assignee: Qingdao Agricultural University
Current assignee: Qingdao Agricultural University
Priority date: 2012-01-12
Filing date: 2012-01-12
Publication date: 2012-07-04

Abstract

本发明公开了一种硫氰酸红霉素明胶微球制剂的制备方法，该方法利用明胶为载体，液体石蜡为油相，Span85和Tween80作为混合乳化剂，在机械的搅拌下形成W/O乳液，低温冷却戊二醛交联固化形成7-20μm微球，就静脉给药而言，微球混悬剂经静注后，首先将与直径为3-11μm的肺部毛细血管网接触，而被肺部有效截获，微球内的药物缓慢释放，获得平稳长期的有效浓度。本发明采用乳化缩聚法制备，设备要求简单，制备成本较低，易于推广应用。

Description

硫氰酸红霉素明胶微球制剂的制备方法

技术领域

本发明属于农业技术领域，涉及一种硫氰酸红霉素明胶微球制剂的制备方法。

背景技术

缓释、控释制剂又称为缓释控释给药系统，它们不需频繁给药，能有效地减少对患病动物的给药量，此外，缓释控释药物能降低血药浓度的波动，使其在人体内保持平稳血药浓度，大大提高了药效和降低毒副作用。然而国内外肺靶向微球的研究中，关于载体材料的选择和微球的制备还存在一些问题：如白蛋白价格昂贵且储存条件要求较高，不适合兽药制剂的研发，PLGA的降解速度较慢，不能短期从肺中清除，韩冰等制备紫杉醇PLGA微球研究发现其体外释药可以维持30d。

目前微球的制备方法主要有单凝聚法、乳化化学交联法及喷雾干燥法等。喷雾干燥法需要特殊的仪器设备，且制备过程中所需温度较高(＞100℃)，明胶在此条件下会快速水解而发生性质的改变，从而影响微球的机械强度；单凝聚法是用降温或加入凝聚剂等手段使明胶溶液发生分离，明胶溶解度降低而析出，丁素丽等在明胶溶液中滴加丙酮使明胶发生凝聚，再用戊二醛交联得到明胶微球；乳化化学交联法是在搅拌或超声等外力作用下，使明胶溶液在不相混溶的油相中分散乳化成小液滴，再降温冷却交联固化成球。这种方法通过对各种影响因素的配比进行优化，增强乳液稳定性，改善微球制剂粒径分布，并降低变形或聚集的微球数量。

硫氰酸红霉素属于大环内酯类药物，在临床上主要有注射制剂和可溶性粉两种制剂类型，普通的制剂给药吸收后广泛的分布于全身各组织和体液中，在胆汁中浓度最高，可引起肝脏损害等不良反应。

目前硫氰酸红霉素的主要剂型是可溶性粉和肌肉注射制剂，给药后广泛分布于全身，药物利用率较低且对肝脏有毒害作用，本发明以微球为载体，通过被动靶向到肺中发挥药效，有效地降低了其余健康组织的含药量，降低毒副作用。

发明内容

本发明的目的在于克服上述技术缺陷，提供一种设备要求简单，成本低的硫氰酸红霉素明胶微球制剂的制备方法。硫氰酸红霉素主要用于治疗革兰氏阳性菌和支原体感染，但该药物被吸收后广泛分布于全身各组织和体液中，尤其是胆汁中浓度最高。本发明以A型明胶为载体，采用乳化化学交联法制备粒径为7-20μm的微球，通过肺部毛细血管的机械性截留达到肺靶向的效果，避免了对肝脏的毒害作用。

其技术方案为：

一种硫氰酸红霉素明胶微球制剂的制备方法，其具体步骤为：精确称取1.56g明胶、0357g Tween80和0.69g硫氰酸红霉素溶于10ml的经0.22μm滤膜过滤的双蒸水中，于58℃水浴中加热搅拌溶解作为水相，加入到含有1743g span85的60ml液体石蜡中，1000r/min，58℃磁力搅拌25min，转移到5-10℃的冰水浴中1000r/min继续搅拌15min，加入戊二醛固化6h，2000rpm离心，去下层沉淀用石油醚和异丙醇洗涤2次，加入甘氨酸洗涤10min，异丙醇洗涤2次，冷冻干燥得淡黄色粉末。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明所述技术方案以微球为载体提高了硫氰酸红霉素的生物利用度，减少了药物用量。

(2)本发明的制备方法简单，成本较低，且微球粒径符合要求(7-30μm)，静脉注射后被动靶向于肺。

(3)本发明所述方法制备出的硫氰酸红霉素明胶微球在猪霉形体肺炎的疗效试验表明，硫氰酸红霉素明胶微球(相当于硫氰酸红霉素3mg/kg)注射组治愈率80％，有效率93％；普通硫氰酸红霉素常规注射剂(相当于硫氰酸红霉素3mg/Kg)治愈率67％，有效率为87％；阴性对照组治愈率0％，有效率0％，本发明制备的硫氰酸红霉素明胶微球临床效果显著好于普通注射剂组和阴性对照组。

附图说明

图1硫氰酸红霉素明胶微球的粒径分布范围；

图2硫氰酸红霉素明胶微球的光学显微镜照片(*100)；

图3硫氰酸红霉素明胶微球在释放介质中的溶出度曲线。

具体实施方式

下面结合附图与具体实施例对本发明作进一步详细地说明。

精确称取1.56g明胶、0.357g Tween80和0.69g硫氰酸红霉素溶于10ml的经0.22μm滤膜过滤的双蒸水中，于58℃水浴中加热搅拌溶解作为水相，加入到含有1.743g span85的60ml液体石蜡中，1000r/min，58℃磁力搅拌25min，快速转移到5-10℃的冰水浴中1000r/min继续搅拌15min，加入戊二醛固化6h，2000rpm离心，去下层沉淀用石油醚和异丙醇洗涤2次，加入甘氨酸洗涤10min，异丙醇洗涤2次，冷冻干燥得淡黄色粉末。

取适量微球于载玻片上，覆以盖玻片，滴加石油醚轻压使微球分散均匀，100倍油镜下观察，对微球的粒径和表面形态进行考察，如图1；去适量微球均匀分散在100ml水中，取4ml于BT9300-H激光粒度分布仪下考察其粒径分布范围，图2所示，微球平均粒径为12.51μm，微球的粒径在3-7μm之间占总数的10％，7-10μm占总数的9％，10-20μm占总数的73％，20-26μm占总数的7％，

体外释放度的考察精密称取含药微球和硫氰酸红霉素原料药各200mg，分别装入透析袋中，加入5ml的PBS释放介质(pH＝7.4)，置于加有释放介质495ml的烧杯中，37±0.5℃、100r/min恒温搅拌，分别于第0.083、0.17、0.25、0.5、0.75、1、2、4、8、12、24、48h取样HPLC检测，同时补充等量的释放介质，检测后计算累积释放度，绘制体外释放累积曲线。检测发现硫氰酸红霉素微球在1h处药物释放量达到52％，之后释放缓慢，在第48h释药率达到94.5％，其释药曲线见图3，由曲线可知该微球具有良好的缓释效果，以ln(1-Q)对时间t作图经回归处理得到释药方程，ln(1-Q)＝-0.0533t+4.1654(R²＝0.9573)，Q为累积释药百分率，，可见ln(1-Q)与时间(t)相关系良好，故可推论该微球在pH＝7.4的缓冲溶液中属一级释药。

按照本发明上述的方法制备硫氰酸红霉素明胶微球临床药效学研究考察。

试验方法：将诊断为猪霉形体肺炎的病猪随机分为三组，每组15头。A组注射硫氰酸红霉素明胶微球(相当于硫氰酸红霉素3mg/kg)，一天一次，连用三天；B组注射硫氰酸红霉素注射液(相当于硫氰酸红霉素3mg/kg)，一天一次，连用三天；C组为阴性对照组，不给任何药物治疗。

疗效判定

治愈：用药后，猪霉形体各种临床症状消失，且停药后20天内不复发，称为治愈，根据各组治愈数计算治愈率

有效：经注射给药后完全治愈的和没有死亡但有临床症状表现者均为有效；试验结束后，每组存活的头数占试验数的百分率为有效率。

数据处理和分析：用生物统计进行数据进行死亡率、有效率和治愈率的显著性检验。

实验结果：硫氰酸红霉素肺靶向微球临床药效实验结果见表1，

表1硫氰酸红霉素肺靶向明胶微球和常规注射剂对猪霉形体肺炎的疗效比较

组别	治愈头数	治愈率	死亡率	有效率
					A组	12	80％	1	93％
B组	10	67％	3	87％
					C组	0	0％	15	0％

实验结果显示：本方法制备的明胶微球的临床效果显著好于对照组及阴性对照组(P＜0.01)，有显著的差异性。

Claims

1.一种硫氰酸红霉素明胶微球制剂的制备方法，其特征在于，其具体步骤为：精密称取1.56g明胶、0.357g Tween80和0.69g硫氰酸红霉素溶于10ml的经0.22μm滤膜过滤的双蒸水中，于58℃水浴中加热搅拌溶解作为水相，加入到含有1.743g span85的60ml液体石蜡中，1000r/min，58℃磁力搅拌25min，转移到5-10℃的冰水浴中1000r/min继续搅拌15min，加入戊二醛固化6h，2000rpm离心，去下层沉淀用石油醚和异丙醇洗涤2次，加入甘氨酸洗涤10min，异丙醇洗涤2次，冷冻干燥得淡黄色粉末。