CN102516066A - Ostopanic acid类似物及制备方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及ostopanic acid及类似物，本发明还提供了所述化合物的制备方法及用途，利用Weinreb酰胺与格氏试剂反应时选择性停留在酮阶段，而不会发生过反应的特性来构建ostopanic acid类似物的两个侧链，可以快速合成一系列的ostopanic acid类似物。本发明反应原料易得，反应条件温和，操作简单。所合成的系列ostopanic acid及其类似物均具有显著的抗肿瘤作用。

Description

Ostopanic acid类似物及制备方法及用途

技术领域

本发明涉及ostopanic acid及类似物，本发明还提供了所述化合物的制备方法及用途，属于生物制药技术领域。

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病。目前药物治疗仍然是恶性肿瘤的主要治疗方法之一，但现有的化疗药物由于存在耐药性和毒副作用等诸多问题，致使恶性肿瘤药物治疗的效果并不理想，因此寻找高效、低毒的抗肿瘤药物成为人们关注的焦点。近几十年来，从天然产物中寻找理想的抗肿瘤药物先导化合物，并对其构效关系进行研究，从而开发出高效低毒的抗肿瘤药物已成为研究的热点。

Ostopanic acid是一个含18碳的不饱和脂肪酸，它是于Ostodes Paniculata Blume中首次分离得到的天然产物。Ostopanic acid的分子式为C₁₈H₂₈O₄，分子量为308.4，熔点132～133 ^oC。

Ostopanic acid的化学结构如下：

                                                 

白血病是造血组织的恶性疾病，又称“血癌”。其特征为白血病细胞在骨髓及其他造血组织中呈恶性、无限制地增长，产生各种症状，位居年轻人恶性疾病中的首位。研究证明ostopanic acid具有抑制P388白血病细胞生长的作用，为白血病的研究提供支持。它的生物活性源于其特殊的E, E-二烯二酮结构。此外，多种已经被发现的含有这种特殊共轭多烯骨架的天然产物，都被证明具有良好的生物活性。如RK-39，Mrabilin，以及Marinomycin C均具有较好的抗癌活性，并且它们都含有共轭多烯骨架。对于这类化合物，特定的双键几何构型对其生物活性具有决定性的作用。因此，研究合成一类ostopanic acid及其类似物的方法是十分必要的。

RK-39，Mrabilin以及Marinomycin C结构式如下：

 

 关于ostopanic acid的活性研究以及合成方法，已有一系列相关报道，现例举如下：

[1] Ghosh, S. K.; Chada, M. S. J.Chem. 1989, 288, 3-4.

[2] Hamburger, M.; Handa, S. S.; Cordell, G. A.; Kinghorn, A. D.; Farnsworth, N. R. J. Nat. Prod.

1987, 50, 281-283.

[3] Bhalerao, U. T.; Devalla, S.; Dasaradhi, L.; Rao, B. V. Syn.Commun. 1993, 23, 2213-2217.

[4] Babudri, F.; Fiandanese, V.; Naso, F. J. Org. Chem. 1991, 56, 6245-6248.

[5] Sheu, J. H.; Yen, C. F.; Huang, H. C. J.Org.Chem. 1989, 54, 5126-5128.

[6] Guo, C.; Lu, X. Y. Tetrahedron. Lett.  1992, 33, 3659-3662.

[7] Dominique, C. C.; Yvan, R.; Gerard, P.; Lucette, D. Tetrahedron. 1999, 55, 7583-7588。

发明内容

本发明提供ostopanic acid及其类似物，为一种新化合物。

本发明进一步提供了ostopanic acid及其类似物的制备方法，适用于工业生产。

本发明还提供ostopanic acid及其类似物在制备抗肿瘤药物方面的用途。

本发明提供用ostopanic acid及其类似物和药学上可接受的赋形剂或载体制成的药物组合物。

本发明的技术方案概述如下：

本发明所述的ostopanic acid及其类似物，其结构为通式I。

 

 

 

其中m=2-5；n=3-5; 当m、n 不等于5时，为ostopanic acid类似物。

本发明的ostopanic acid及其类似物的合成方法的反应方程式如下：

 

本发明的ostopanic acid及其类似物的合成方法，其包括下列步骤：

1、以己二酸为起始原料，与氯化亚砜作用，得到酰氯；然后与溴素作用得到溴代产物；接着酰氯与乙醇反应得到2,5-二溴己二酸二乙酯；最后在氢氧化钾甲醇溶液中发生消除与水解反应得到中间体化合物（II）；

2、化合物（II）与N, O-二甲基羟胺盐酸盐缩合生成化合物（III）。所使用的溶剂为二氯甲烷，所用的缩合剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑的组合，碱为三乙胺，反应时间为12小时，反应温度为室温。

3、由步骤2得到的化合物（III）与烷基格氏试剂或芳香基格氏试剂反应生成中间体化合物（IV）。所使用的溶剂为乙醚或四氢呋喃，优选为四氢呋喃，格氏试剂当量为1.0-2.0，反应温度为0 ^oC，反应时间为1 h。

4、由步骤3得到的化合物（IV）在催化剂作用下与乙二醇或原甲酸三甲酯反应生成羰基被保护的缩酮化合物，接着与烷基格氏试剂或芳香基格氏试剂反应，最后脱除缩酮保护得到化合物（V）。羰基保护过程中，所用催化剂为对甲苯磺酸，乙二醇或原甲酸三甲酯的当量为1.0-2.0；当使用乙二醇时，溶剂为甲苯，反应温度为回流，反应时间为12 h；当使用原甲酸三甲酯时，反应溶剂为甲醇，反应温度为室温，反应时间为4 h。格氏反应中，所使用的溶剂为乙醚或四氢呋喃，优选为四氢呋喃，格氏试剂当量为1.0-2.0，反应温度为0 ^oC，反应时间为1 h。脱保护时，反应条件为四氢呋喃和体积浓度为10%的盐酸水溶液的混合溶剂，反应温度为室温，反应时间为12 h。

5、由步骤4得到的化合物（V）经氧化剂氧化生成最终产物（I）。所用溶剂为丙酮，氧化剂为琼斯试剂，反应温度为0 ^oC，反应时间为4 h。

药物组合物和治疗方法

药物组合物以及治疗肿瘤的方法亦在本发明的范围之内。所述药物组合物包括治疗有效量的本发明的ostopanic acid及其类似物以及可药用载体。“可药用载体”包括溶剂、分散剂（dispersion medium）、包衣（a coating）、抗细菌和抗真菌剂以及等张剂（isotonic agent）、吸收延迟剂（absorption delaying agent）和吸收促进剂等。

本发明的药物组合物可通过传统方法制成各种适应于不同给药途径的药物剂型。例如，它可制成口服的胶囊、gel seal或片剂。胶囊剂可包含任何标准的可药用物质如明胶、纤维素等。片剂可按传统方法即将药物组合物与固相载体以及润滑剂压缩制得。所述固相载体包括淀粉和糖斑脱土（sugar bentonite）。本发明的药物组合物还可制成硬壳片剂（hard shell tablet）或包含捆绑剂（binder）如乳糖或甘露醇、常规填充剂以及tableting agent的胶囊。本发明的药物组合物还可通过非肠道途径给药。非肠道途径给药剂型包括本发明的药物组合物的水剂、等张盐溶液或5％的糖溶液以及与其它本领域公知的可药用赋形剂形成的制剂。环式糊精或其他本领域技术人员所公知的促溶剂均可作为药用赋形剂来递呈本发明的药物组合物。

概括地讲，本发明的ostopanic acid及其类似物可悬溶于可药用载体（如生理溶液）中，通过口服或静脉输液，或通过皮下、肌内、胸腔内、腹腔内、直肠内、阴道内、鼻内、胃内、气道内、肺内注射或输液及气雾吸入、喷雾吸入、滴入及灌注等途径给药。

剂型的选择受到给药途径、制剂类型、患者（病种、病情、体形、体重、体表面积、年龄、性别）、药物相互影响以及收治医师的诊断等诸多因素的影响。适用的制剂用量范围为0.01～100.00 mg/kg。用量范围可随病人情况与给药途径的不同而做相应的调整。其将主要取决于收治医师的诊断。例如，口服剂量一般要高于静脉注射剂量。所述剂量可通过本领域公知的经验优化方法进行调整。将本发明的药物组合物包裹于适宜的药物递呈载体（如聚合微粒体或输入设备）可提高给药，特别是口服给药的效率。

本发明的药物组合物的活性可通过体外（in vitro）和体内（in vivo）实验进行评价。简而言之，本发明的药物组合物的药理活性反映在抗肿瘤活性上。在体内实验中，所述药物组合物被注射入动物（如小鼠模型）体内以评价其药理活性。在此基础上，合适的剂量范围和给药途径遂得以确定。

本发明的积极效果在于：利用Weinreb酰胺与格氏试剂反应时选择性停留在酮阶段，而不会发生过反应的特性来构建ostopanic acid类似物的两个侧链，可以快速合成一系列的ostopanic acid类似物。本发明反应原料易得，反应条件温和，操作简单。所合成的系列ostopanic acid及其类似物均具有显著的抗肿瘤作用。

附图说明

图1为中间体化合物III 的1H-NMR 谱图；

图2为(2E,4E)-N-甲氧基-N-甲基-6-丙基酮-2,4-己二烯酰胺（化合物IV）的1H-NMR 谱图；

图3为(5E,7E)-1-羟基-十三碳-5, 7-二烯-4, 9-二酮（中间体化合物V-1）的1H-NMR 谱图；

图4为化合物I-1 的1H-NMR 谱图；

图5为化合物I-1 的13C-NMR 谱图；

图6为(8E,10E)-1-羟基-十八碳-8, 10-二烯-7, 12-二酮（中间体V-2）的1H-NMR 谱图；

图7为Ostopanic acid（化合物I-6）的1H-NMR 谱图；

图8为Ostopanic acid（化合物I-6）的13C-NMR 谱图。

具体实施方式：

为了便于理解本发明，特列举以下实施例。其作用应被理解为是对本发明的阐释而非对本发明的任何形式的限制。

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

及其类似物的制备

实施例1. 反式,反式-1,3-丁二烯-1,4-二羧酸（中间体II）的制备

往一个预先装有己二酸（10.0 g, 68.4 mmol）的100 mL的圆底烧瓶里慢慢滴加二氯亚砜（15.0 mL, 207 mmol）。反应混合物在80 ^oC的油浴中加热搅拌。3小时后，反应液变澄清。过量的二氯亚砜通过减压蒸馏除去。接着往反应液中滴加溴素（8.8 mL, 171 mmol），滴加持续了3小时。滴加完后，反应混合液继续在80 ^oC的油浴中加热搅拌10个小时。然后用往反应装置中鼓干燥的氮气以除去过量的溴素。反应液接着被转移到一滴液漏斗中，并慢慢地滴加到装有60 mL无水乙醇的圆底烧瓶中。滴加持续了1.5小时。得到的反应液搅拌过夜后用200 mL的乙酸乙酯稀释，并用2% NaHSO₃ （100 mL × 2）和水（100 mL × 2）洗涤。得到的有机相用无水硫酸钠干燥，然后浓缩即得2,5-二溴己二酸二乙酯（23.75 g, 97%）。LCMS (ESI) m/z Calcd. for C₁₀H₁₆Br₂O₄Na⁺ ([M+Na]⁺): 383.0; Found 382.7。

将该二乙酯加热为液体状态后，滴加到氢氧化钾（60 g, 1.1 mol）和甲醇（170 mL）的混合液中。反应温度为80 ^oC。反应过程发生了颜色的变化。当二乙酯刚加进去时，反应液变为粉红色，慢慢地又变灰色，最后变为白色牛奶状。滴加完后继续加热搅拌2小时。反应液接着用布氏漏斗过滤，并用甲醇（170 mL）和石油醚（170 mL）洗涤。然后直接将得到的固体转移到装有活性碳（5.3 g）的沸水（130 mL）中。回流1小时后，热过滤除去活性碳。待滤液冷却后加入过量的浓盐酸。滴加过程中可以观察到大量白色固体的产生。最后将酸化后的溶液过滤即得反式,反式-1,3-丁二烯-1,4-二羧酸，即化合物（II）（3.0 g, 32%），mp 265-278 ^oC （文献值286-287 ^oC）。LCMS (ESI) m/z Calcd. for C₁₂H₁₁O₈ ^- ([2M-H]^-): 283.2; Found 282.9。

实施例2. (2E,4E)-N  ¹ ,N  ⁶ -二甲氧基- N  ¹ ,N  ⁶ -二甲基-2,4-己二烯酰胺（中间体化合物III）的制备

将中间体化合物II（2.64 g, 18.6 mmol）、N,O-二甲基羟胺（5.44 g, 55.7 mmol）、1-羟基苯并三氮唑（5.52 g, 40.9 mmol）和三乙胺（13.5 mL）混合于100 mL干燥的二氯甲烷中。

搅拌5分钟后再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（7.83 g, 40.9 mmol）。室温下搅拌过夜。将反应液中的二氯甲烷真空旋走。剩余的固体用乙酸乙酯稀释（200 mL × 2），然后用1 N的稀盐酸、0.5 N NaOH（150 mL）以及水（150 mL）洗涤。得到的有机相混合在一起并用无水硫酸钠干燥，然后浓缩得黄色固体（4.20 g）。该初产品再经硅胶色谱柱分离（15%到50%的乙酸乙酯/石油醚体系），得中间体化合物III（3.46 g, 82%），mp 120-123 ^oC。LCMS (ESI) m/z Calcd. for C₁₀H₁₆N₂O₄Na⁺ ([M+Na]⁺): 251.2; Found 250.8; ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.43 (m, 2H), 6.80 (m, 2H), 3.731 (s, 6H), 3.281 (s, 6H)（见图1）。

实施例3. 化合物I-1的制备（当通式I中m=2, n=3时，命名为化合物I-1）

（1）(2E,4E)-N-甲氧基-N-甲基-6-丙基酮-2,4-己二烯酰胺（中间体化合物IV）的制备

将正丙基溴化镁的THF溶液慢慢地滴加到中间体III (4.0 g, 17.5 mmol）的四氢呋喃溶液（100 mL）中，直至中间体III消失为止（通过TLC监测）。此反应在冰水浴及氮气保护下进行。滴加完毕后，继续搅拌1小时。然后用饱和氯化铵（150 mL）淬灭，并用乙酸乙酯萃取（100 mL × 4），得到的有机相再用饱和食盐水（50 mL × 2）洗涤。得到的有机相混合在一起并用无水硫酸钠干燥，然后浓缩得黄色固体。该初产品再经硅胶色谱柱分离（洗脱剂极性为30%的乙酸乙酯/石油醚体系），最终得中间体化合物（IV）（0.34 g，15%）。Mp 32 - 33 ^oC。.LCMS (ESI) m/z Calcd. for C₁₂H₁₂O₈ ⁺ ([M+H]⁺): 212.3; Found 212.1; Calcd. for C₁₂H₁₁O₈Na⁺ ([M+Na]⁺): 234.3; Found 234.0; ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.36 (m, 1H), 7.25(m, 1H), 6.84(d,1H, J = 14.8 Hz), 6.45(d,1H, J = 14.8 Hz), 3.73(s, 3H) , 3.28(s, 3H), 2.58(t, 2H, J = 7.2 Hz), 1.67(m, 1H), 0.95(t, 3H, J = 7.2 Hz)（见图2）。

（2）(5E,7E)-1-羟基-十三碳-5, 7-二烯-4, 9-二酮（中间体化合物V）的制备

在IV（0.62 g，2.9 mmol）的甲苯溶液（15 mL）中加入乙二醇以及催化量的对甲苯磺酸（36 mg）。反应液在架有分水器的装置中120 ^oC下回流15个小时。然后用乙酸乙酯进行萃取（80 mL × 2），并用水洗涤（40 mL × 2）。得到的有机相混合在一起并用无水硫酸钠干燥，然后浓缩得0.71 g红棕色液体。该初产品再经硅胶色谱柱分离（洗脱剂极性为10%的乙酸乙酯/石油醚体系），最终得黄色液体（0.45 g, 75%），回收了0.11 g原料。LCMS (ESI) m/z Calcd. for C₁₂H₂₀NO₄ ⁺ ([M+H]⁺): 256.3; Found 256.2; Calcd. for C₁₂H₁₉NO₄Na⁺ ([M+Na]⁺): 278.3; Found 278.0。

将此黄色液体（0.38 g, 1.49 mmol）与6-叔丁基二甲基硅基丁基溴化镁反应。此步反应的格氏试剂的制备及后续操作与（1）类似。反应结束后得到的粗产品溶解在THF（15 mL）中。加入稀盐酸（2 N, 13 mL），室温搅拌10小时后，反应液用乙酸乙酯稀释萃取。然后用饱和碳酸钠（20 mL）、水（20 mL）洗涤。得到的有机相混合在一起并用无水硫酸钠干燥。浓缩所得的初产品再经硅胶色谱柱分离（洗脱剂极性为40%的乙酸乙酯/石油醚体系），得中间体V（72 mg , 25%）。LCMS (ESI) m/z Calcd. for C₁₃H₂₀O₃Na⁺ ([M+Na]⁺): 247.3; Found 247.6。¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.21 (m, 1H), 6.51(m, 1H), 6.24(m, 2H), 5.1(t, 1H, J = 4 Hz), 4.10(m, 2H), 2.55(t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.21(m, 2H), 1.90(m, 2H), 1.67(m, 4H), 0.96(t,3H, J = 7.2 Hz)（见图3）。

（3）Ostopanic acid类似物（化合物I-1）的制备

将琼斯试剂（约2N, 0.2 mL）慢慢滴加到中间体V（42 mg, 0.19 mmol）的丙酮溶液（3 mL）中。滴加过程中反应液由红变绿，滴加结束时，红色不再消失。冰水浴下搅拌1小时后，将丙酮真空旋走，剩余的固体直接进行色谱分离（洗脱剂极性为10%的乙酸乙酯/石油醚 + 10%冰醋酸），得化合物I-1（14 mg, 33%）, mp 123-128 ^oC。LCMS (ESI) m/z Calcd. for C₁₃H₁₇O₄ ^- ([M-H]^-): 237.3; Found 238.0; Calcd. for C₁₃H₁₉O₄ ⁺ ([M+H]⁺): 239.3; Found 240.0；Calcd. for C₁₃H₁₈O₄Na⁺ ([M+Na]⁺): 261.3; Found 261.3。¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.21(m, 2H), 6.50 (m, 2H), 2.74 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.60 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.46 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.01 (m, 2H), 1.70 (m, 2H) , 0.97 (t, 2H, J = 7.2 Hz)（见图4）; ¹³C-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 199.97, 198.78, 178.38, 139.30, 138.62, 136.27, 135.66, 43.21, 39.81, 32.76, 18.70, 17.47, 13.72（见图5）。

实施例4. 化合物I-2的制备（当通式I中m=2, n=4时，命名为化合物I-2）

（1）(2E,4E)-N-甲氧基-N-甲基-6-丙基酮-2,4-己二烯酰胺（中间体化合物IV）的制备

用与实施例3相同的方法制备中间体化合物IV。

（2）(5E,7E)-1-羟基-十四碳-5, 7-二烯-4, 9-二酮（中间体V）的制备

在化合物IV（0.43 g，2.0 mmol）的甲醇溶液（15 mL）中加入原甲酸三甲酯（0.5 mL，4.5 mmol）、适量分子筛以及催化量的对甲苯磺酸（50 mg）。室温反应3小时。然后用乙酸乙酯进行萃取（50 mL × 3），得到的有机相混合在一起并用饱和食盐水洗涤（20 mL × 2），无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色液体并将其溶解在THF（15 mL）中。

将6-叔丁基二甲基硅基戊基溴化镁的THF溶液慢慢地滴加到上述THF溶液中，直至反应完全。此反应在冰水浴及氮气保护下进行。滴加完毕后，继续搅拌1小时。然后用1 N氯化铵（25 mL）淬灭，并用乙酸乙酯萃取（50 mL × 3），得到的有机相再用饱和食盐水（25 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得浓缩得黄色液体。

将上述黄色液体溶解在THF（25 mL）中，加入10% HCl溶液（10 mL），室温反应过夜。反应液用乙酸乙酯（50 mL × 3）萃取，然后用饱和食盐水（20 mL）洗涤，得到的有机相无水硫酸钠干燥。浓缩所得的粗产品再经硅胶色谱柱纯化（洗脱剂极性为5%的乙酸乙酯/二氯甲烷体系），最终得浅黄色固体，即化合物V（0.13 g, 32%）。 

（3）Ostopanic acid类似物（化合物I-2）的制备

冰浴下，将溶有化合物V（190 mg，0.8 mmol）的丙酮溶液（110 mL）慢慢滴加到琼斯试剂（约2 N，0.8 mL）中。滴加持续了4小时，继续反应0.5小时，异丙醇淬灭反应。减压浓缩，加入水（100 mL），用二氯甲烷（100 mL × 3）萃取，然后用饱和食盐水（50 mL × 2）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品。粗产品经重结晶操作纯化得Ostopanic acid类似物（化合物I-2）（141 mg，70%）。

实施例5. 化合物I-3的制备（当通式I中m=2, n=5时，命名为化合物I-3）

（1）(2E,4E)-N-甲氧基-N-甲基-6-丙基酮-2,4-己二烯酰胺（中间体化合物IV）的制备

用与实施例3相同的方法制备中间体化合物IV。

（2）(5E,7E)-1-羟基-十五碳-5, 7-二烯-4, 9-二酮（中间体V-1）的制备

在化合物IV（0.63 g，3.0 mmol）的甲醇溶液（20 mL）中加入原甲酸三甲酯（0.67 mL，6 mmol）、适量分子筛以及催化量的对甲苯磺酸（75 mg）。室温反应3小时。然后用乙酸乙酯进行萃取（70 mL × 3），得到的有机相混合在一起并用饱和食盐水洗涤（20 mL × 2），无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色液体并将其溶解在THF（20 mL）中。

将6-叔丁基二甲基硅基戊基溴化镁的THF溶液慢慢地滴加到上述THF溶液中，直至反应完全。此反应在冰水浴及氮气保护下进行。滴加完毕后，继续搅拌1小时。然后用1 N氯化铵（40 mL）淬灭，并用乙酸乙酯萃取（50 mL × 3），得到的有机相再用饱和食盐水（25 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得浓缩得黄色液体。

将上述黄色液体溶解在THF（40 mL）中，加入10% HCl溶液（15 mL），室温反应过夜。反应液用乙酸乙酯（100 mL × 3）萃取，然后用饱和食盐水（50 mL）洗涤，得到的有机相无水硫酸钠干燥。浓缩所得的粗产品再经硅胶色谱柱纯化（洗脱剂极性为5%的乙酸乙酯/二氯甲烷体系），最终得浅黄色固体，即化合物V（0.24 g, 30%）。 

（3）Ostopanic acid类似物（化合物I-3）的制备

冰浴下，将溶有化合物V（200 mg，0.8 mmol）的丙酮溶液（100 mL）慢慢滴加到琼斯试剂（约 2 N，0.8 mL）中。滴加持续了4小时，继续反应0.5小时，异丙醇淬灭反应。减压浓缩，加入水（100 mL），用二氯甲烷（100 mL × 3）萃取，然后用饱和食盐水（50 mL × 2）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品。粗产品经重结晶操作纯化得Ostopanic acid类似物（化合物I-3）（170 mg，80%）。

实施例6. 化合物I-4的制备（当通式I中m=3, n=4时，命名为化合物I-4）

（1）(2E,4E)-N-甲氧基-N-甲基-6-丁基酮-2,4-己二烯酰胺（中间体化合物IV）的制备

将正丙基溴化镁的THF溶液慢慢地滴加到中间体III (4.0 g, 17.5 mmol）的四氢呋喃溶液（100 mL）中，直至中间体III消失为止（通过TLC监测）。此反应在冰水浴及氮气保护下进行。滴加完毕后，继续搅拌1小时。然后用饱和氯化铵（150 mL）淬灭，并用乙酸乙酯萃取（100 mL × 4），得到的有机相再用饱和食盐水（50 mL × 2）洗涤。得到的有机相混合在一起并用无水硫酸钠干燥，然后浓缩得黄色固体。该初产品再经硅胶色谱柱分离（洗脱剂极性为30%的乙酸乙酯/石油醚体系），最终得中间体化合物（IV）（0.43 g，18%）。

（2）(6E,8E)-1-羟基-十五碳-6, 8-二烯-5, 10-二酮（中间体V）的制备

在化合物IV（0.43 g，1.9 mmol）的甲醇溶液（10 mL）中加入原甲酸三甲酯（0.55 mL，5 mmol）、适量分子筛以及催化量的对甲苯磺酸（50 mg）。室温反应3小时。然后用乙酸乙酯进行萃取（50 mL × 3），得到的有机相混合在一起并用饱和食盐水洗涤（15 mL × 2），无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色液体并将其溶解在THF（15 mL）中。

将6-叔丁基二甲基硅基戊基溴化镁的THF溶液慢慢地滴加到上述THF溶液中，直至反应完全。此反应在冰水浴及氮气保护下进行。滴加完毕后，继续搅拌1小时。然后用1 N氯化铵（30 mL）淬灭，并用乙酸乙酯萃取（50 mL × 3），得到的有机相再用饱和食盐水（20 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得浓缩得黄色液体。

将上述黄色液体溶解在THF（30 mL）中，加入10% HCl溶液（10 mL），室温反应过夜。反应液用乙酸乙酯（100 mL × 2）萃取，然后用饱和食盐水（50 mL）洗涤，得到的有机相无水硫酸钠干燥。浓缩所得的粗产品再经硅胶色谱柱纯化（洗脱剂极性为5%的乙酸乙酯/二氯甲烷体系），最终得浅黄色固体，即化合物V（0.16 g, 33%）。 

（3）Ostopanic acid类似物（化合物I-4）的制备

冰浴下，将溶有化合物V（100 mg，0.4 mmol）的丙酮溶液（50 mL）慢慢滴加到琼斯试剂（约 2 N，0.4 mL）中。滴加持续了4小时，继续反应0.5小时，异丙醇淬灭反应。减压浓缩，加入水（50 mL），用二氯甲烷（50 mL × 3）萃取，然后用饱和食盐水（50 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品。粗产品经重结晶操作纯化得Ostopanic acid类似物（化合物I-4）（80 mg，75%）。.

实施例7. 化合物I-5的制备（当通式I中m=5, n=4时，命名为化合物I-5）

（1）(2E,4E)-N-甲氧基-N-甲基-6-己基酮-2,4-己二烯酰胺（中间体化合物IV）的制备

将正己基溴化镁的THF溶液慢慢地滴加到中间体III (3.0 g, 13.1 mmol）的四氢呋喃溶液（80 mL）中，直至中间体III消失为止（通过TLC监测）。此反应在冰水浴及氮气保护下进行。滴加完毕后，继续搅拌1小时。然后用饱和氯化铵（150 mL）淬灭，并用乙酸乙酯萃取（100 mL × 4），得到的有机相再用饱和食盐水（50 mL × 2）洗涤。得到的有机相混合在一起并用无水硫酸钠干燥，然后浓缩得4.01 g黄色固体。该初产品再经硅胶色谱柱分离（洗脱剂极性为20%的乙酸乙酯/石油醚体系），最终得中间体化合物（IV）（0.34 g，11%）。

（2）(7E,9E)-1-羟基-十七碳-7, 9-二烯-6, 11-二酮（中间体V）的制备

在化合物IV（0.25 g，1.0 mmol）的甲醇溶液（5 mL）中加入原甲酸三甲酯（0.55 mL，3 mmol）、适量分子筛以及催化量的对甲苯磺酸（25 mg）。室温反应3小时。然后用乙酸乙酯进行萃取（25 mL × 2），得到的有机相混合在一起并用饱和食盐水洗涤（10 mL × 2），无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色液体并将其溶解在THF（10 mL）中。

将6-叔丁基二甲基硅基戊基溴化镁的THF溶液慢慢地滴加到上述THF溶液中，直至反应完全。此反应在冰水浴及氮气保护下进行。滴加完毕后，继续搅拌1小时。然后用1 N氯化铵（15 mL）淬灭，并用乙酸乙酯萃取（30 mL × 2），得到的有机相再用饱和食盐水（100 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得浓缩得黄色液体。

将上述黄色液体溶解在THF（15 mL）中，加入10% HCl溶液（5 mL），室温反应过夜。反应液用乙酸乙酯（50 mL × 2）萃取，然后用饱和食盐水（20 mL）洗涤，得到的有机相无水硫酸钠干燥。浓缩所得的粗产品再经硅胶色谱柱纯化（洗脱剂极性为5%的乙酸乙酯/二氯甲烷体系），最终得化合物V（0.11 g, 40%）。 

（3）Ostopanic acid类似物（化合物I-5）的制备

冰浴下，将溶有化合物V（84 mg，0.3 mmol）的丙酮溶液（40 mL）慢慢滴加到琼斯试剂（约 2 N, 0.3 mL）中。滴加持续了4小时，继续反应0.5小时，异丙醇淬灭反应。减压浓缩，加入水（25 mL），用二氯甲烷（50 mL × 2）萃取，然后用饱和食盐水（30 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品。粗产品经重结晶操作纯化得Ostopanic acid类似物（化合物I-5）（73 mg，83%）。.

实施例8. 化合物I-6的制备（当通式I中m=5, n=5时，命名为化合物I-6）

（1）(2E,4E)-N-甲氧基-N-甲基-6-己基酮-2,4-己二烯酰胺（中间体化合物IV）的制备

将正己基溴化镁的THF溶液慢慢地滴加到中间体III (3.0 g, 13.1 mmol）的四氢呋喃溶液（80 mL）中，直至中间体III消失为止（通过TLC监测）。此反应在冰水浴及氮气保护下进行。滴加完毕后，继续搅拌1小时。然后用饱和氯化铵（150 mL）淬灭，并用乙酸乙酯萃取（100 mL × 4），得到的有机相再用饱和食盐水（50 mL × 2）洗涤。得到的有机相混合在一起并用无水硫酸钠干燥，然后浓缩得4.01 g黄色固体。该初产品再经硅胶色谱柱分离（洗脱剂极性为20%的乙酸乙酯/石油醚体系），最终得中间体化合物（IV）（0.34 g，11%）。¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.35 (m, 1H), 7.27(m, 1H), 6.84(d,1H, J = 14.8 Hz), 6.45(d,1H, J = 14.8 Hz), 3.75(s, 3H) , 3.3(s, 3H), 2.61(t, 2H, J = 7.2 Hz), 1.63(m, 2H), 1.32(m, 6H), 0.9(t, 3H, J = 6.6 Hz)。

（2）(8E,10E)-1-羟基-十八碳-8, 10-二烯-7, 12-二酮（中间体V）的制备

在化合物IV（0.97 g，3.9 mmol）的甲醇溶液（30 mL）中加入原甲酸三甲酯（1 mL，9.1 mmol）、适量分子筛以及催化量的对甲苯磺酸（117 mg）。室温反应3小时。然后用乙酸乙酯进行萃取（80 mL × 3），得到的有机相混合在一起并用饱和食盐水洗涤（40 mL × 2），无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色液体（0.97 g），并将其溶解在THF（30 mL）中。

将6-叔丁基二甲基硅基己基溴化镁的THF溶液慢慢地滴加到上述THF溶液中，直至反应完全。此反应在冰水浴及氮气保护下进行。滴加完毕后，继续搅拌1小时。。然后用1 N氯化铵（50 mL）淬灭，并用乙酸乙酯萃取（100 mL × 3），得到的有机相再用饱和食盐水（50 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色液体。

将上述黄色液体溶解在THF（45 mL）中，加入10% HCl溶液（15 mL），室温反应过夜。反应液用乙酸乙酯（100 mL × 3）萃取，然后用饱和食盐水（50 mL）洗涤，得到的有机相无水硫酸钠干燥。浓缩所得的粗产品再经硅胶色谱柱纯化（洗脱剂极性为5%的乙酸乙酯/二氯甲烷体系），最终得浅黄色固体，即化合物V（0.35 g, 36%）。 ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.21(m, 1H), 7.15(m, 1H), 6.52 (m, 1H), 6.47(m, 1H), 3.66(t, 2H, J=6.6), 2.61(m, 4H), 1.32-1.7(m, 17H), 0.9(t distorted, 3H)(见图6)。

（3）Ostopanic acid（化合物I-6）的制备

冰浴下，将溶有化合物V（325 mg，1.1 mmol）的丙酮溶液（150 mL）慢慢滴加到琼斯试剂（约2 N, 1.2 mL）中。滴加持续了4小时，继续反应0.5小时，异丙醇淬灭反应。减压浓缩，加入水（100 mL），用二氯甲烷（150 mL × 3）萃取，然后用饱和食盐水（50 mL × 2）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品。粗产品经重结晶操作纯化得Ostopanic acid（化合物I-6） （286 mg，84%），mp 136-138 ^oC（文献值132-133 ^oC）。¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.21(m, 2H), 6.51 (m, 2H), 2.65(m, 4H), 2.40(t, 2H, J = 7.2 Hz), 1.70 (m, 6H), 1.42 (m, 8H), 0.90(t distorted, 3H) （见图7）；¹³C-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 200.07, 199.59, 178.96, 138.98, 138.71, 136.09, 135.83, 41.34, 40.90, 33.65, 31.56, 28.87, 28.54, 24.39, 24.00, 23.49, 22.45, 13.97（见图8）。

及其类似物的抗肿瘤活性检测

试验例1.化合物I-1的体外抗肿瘤活性检测

采用MTT方法进行化合物I-1的体外抗肿瘤活性研究。分别接种各肿瘤细胞于96孔板中，细胞密度为5×10⁴个/ml；次日加入化合物I-1，浓度分别为100μg /ml、10μg /ml、1μg /ml药物用DMSO进行稀释，同时设DMSO对照组，每组设3复孔，给药容积为100μl/孔；细胞在含5% CO₂的37℃培养箱继续培养44h后，每孔加20μl MTT（5mg/ml），继续培养4h；吸弃上清，每孔加入100μl DMSO，在酶标仪上，振动600s，检测570nm处的OD值；独立实验重复三次以上。结果显示，本发明所提到的化合物I-1对多种肿瘤细胞株，包括人白血病细胞K562、人肝癌细胞HepG2、人肝癌细胞HepG2/ADM、人结肠癌细胞HCT-8细胞、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞SGC7901、宫颈癌Hela和前列腺癌PC-3均有不同程度的增殖抑制作用，而在相应浓度下对正常细胞L02的影响较小，表明化合物I-1在一定安全范围内，对体外培养的肿瘤细胞有增殖抑制作用，结果见表1。

 表1  化合物Ⅵ对实验用肿瘤细胞的抑制率

试验例2. 化合物化合物I-2的体外抗肿瘤活性检测

采用MTT方法进行体外抗肿瘤活性研究。分别各肿瘤细胞于96孔板中，细胞密度为5×10⁴个/ml；次日加入化合物I-2，浓度分别为100μg /ml、10μg /ml、1μg /ml药物用DMSO进行稀释，同时设DMSO对照组，每组设3复孔，给药容积为100μl/孔；细胞在含5% CO₂的37℃培养箱继续培养44h后，每孔加20μl MTT（5mg/ml），继续培养4h；吸弃上清，每孔加入100μl DMSO，在酶标仪上，振动600s，检测570nm处的OD值；独立实验重复三次以上。结果显示，本发明所提到的化合物I-2对多种肿瘤细胞株，包括人白血病细胞K562、人肝癌细胞HepG2、人结肠癌细胞HCT-8细胞、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞SGC7901、宫颈癌Hela和前列腺癌PC-3均有不同程度的增殖抑制作用。而同等浓度下对正常细胞L02的影响较小，表明化合物I-2在一定安全范围内，对体外培养的肿瘤细胞有增殖抑制作用。化合物I-2在高、中、低三个浓度下对HepG2、HepG2/ADM、HCT-8、A549、K562及L02等的抑制率见表2。

表2  化合物Ⅶ对实验用肿瘤细胞的抑制率

试验例3.化合物I-3的体外抗肿瘤活性检测

采用MTT方法进行体外抗肿瘤活性研究。分别各肿瘤细胞于96孔板中，细胞密度为5×10⁴个/ml；次日加入化合物I-3，浓度分别为100μg /ml、10μg /ml、1μg /ml药物用DMSO进行稀释，同时设DMSO对照组，每组设3复孔，给药容积为100μl/孔；细胞在含5% CO₂的37℃培养箱继续培养44h后，每孔加20μl MTT（5mg/ml），继续培养4h；吸弃上清，每孔加入100μl DMSO，在酶标仪上，振动600s，检测570nm处的OD值；独立实验重复三次以上。结果显示，本发明所提到的化合物I-3对多种肿瘤细胞株，包括人肝癌细胞HepG2、人肝癌耐药细胞 (HepG2/ADM)、人白血病细胞K562、人结肠癌细胞HCT-8细胞、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞SGC7901、宫颈癌Hela和前列腺癌PC-3均有不同程度的增殖抑制作用，而相应药物浓度对正常细胞L02的影响较小，表明化合物I-3在一定安全范围内，对体外培养的肿瘤细胞有增殖抑制作用。化合物I-3在高、中、低三个浓度下对HepG2、HepG2/ADM、HCT-8、A549、K562及L02等的抑制率见表3。

表3  化合物Ⅷ对实验用肿瘤细胞的抑制率

试验例4. 化合物I-4的体外抗肿瘤活性检测

采用MTT方法进行体外抗肿瘤活性研究。分别各肿瘤细胞于96孔板中，细胞密度为5×10⁴个/ml；次日加入化合物I-4，浓度分别为100μg /ml、10μg /ml、1μg /ml药物用DMSO进行稀释，同时设DMSO对照组，每组设3复孔，给药容积为100μl/孔；细胞在含5% CO₂的37℃培养箱继续培养44h后，每孔加20μl MTT（5mg/ml），继续培养4h；吸弃上清，每孔加入100μl DMSO，在酶标仪上，振动600s，检测570nm处的OD值；独立实验重复三次以上。结果显示，本发明所提到的化合物I-4对多种肿瘤细胞株，包括人肝癌细胞HepG2、人肝癌耐药细胞 (HepG2/ADM)、人白血病细胞K562、人结肠癌细胞HCT-8细胞、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞SGC7901、宫颈癌Hela和前列腺癌PC-3均有不同程度的增殖抑制作用，而相应浓度对正常细胞L02的影响较小，表明化合物I-4在一定安全范围内，对体外培养的肿瘤细胞有增殖抑制作用。化合物I-4在高、中、低三个浓度下对HepG2、HepG2/ADM、HCT-8、A549、K562及L02等的抑制率见表4。

表4  化合物Ⅸ对实验用肿瘤细胞的抑制率

试验例5. 化合物I-5的体外抗肿瘤活性检测

采用MTT方法进行体外抗肿瘤活性研究。分别各肿瘤细胞于96孔板中，细胞密度为5×10⁴个/ml；次日加入化合物I-5，浓度分别为100μg /ml、10μg /ml、1μg /ml药物用DMSO进行稀释，同时设DMSO对照组，每组设3复孔，给药容积为100μl/孔；细胞在含5% CO₂的37℃培养箱继续培养44h后，每孔加20μl MTT（5mg/ml），继续培养4h；吸弃上清，每孔加入100μl DMSO，在酶标仪上，振动600s，检测570nm处的OD值；独立实验重复三次以上。结果显示，本发明所提到的化合物I-5对多种肿瘤细胞株，包括人肝癌细胞HepG2、人肝癌耐药细胞 (HepG2/ADM)、人白血病细胞K562、人结肠癌细胞HCT-8细胞、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞SGC7901、宫颈癌Hela和前列腺癌PC-3均有不同程度的增殖抑制作用，而相应浓度对正常细胞L02的影响较小，表明化合物I-5在一定安全范围内，对体外培养的肿瘤细胞有增殖抑制作用。化合物I-5在高、中、低三个浓度下对HepG2、HepG2/ADM、HCT-8、A549、K562及L02等的抑制率见表5。

表5  化合物Ⅹ对实验用肿瘤细胞的抑制率

试验例6. 化合物I-6的体外抗肿瘤活性检测

采用MTT方法进行体外抗肿瘤活性研究。分别各肿瘤细胞于96孔板中，细胞密度为5×10⁴个/ml；次日加入化合物I-6，浓度分别为100μg /ml、10μg /ml、1μg /ml药物用DMSO进行稀释，同时设DMSO对照组，每组设3复孔，给药容积为100μl/孔；细胞在含5% CO₂的37℃培养箱继续培养44h后，每孔加20μl MTT（5mg/ml），继续培养4h；吸弃上清，每孔加入100μl DMSO，在酶标仪上，振动600s，检测570nm处的OD值；独立实验重复三次以上。结果显示，本发明所提到的化合物I-6对多种肿瘤细胞株，包括人肝癌细胞HepG2、人肝癌耐药细胞 (HepG2/ADM)、人白血病细胞K562、人结肠癌细胞HCT-8细胞、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞SGC7901、宫颈癌Hela和前列腺癌PC-3均有不同程度的增殖抑制作用，而相应浓度对正常细胞L02的影响较小，表明化合物I-6在一定安全范围内，对体外培养的肿瘤细胞有增殖抑制作用。化合物I-6在高、中、低三个浓度下对HepG2、HepG2/ADM、HCT-8、A549、K562及L02等的抑制率见表6。

表6  化合物Ⅺ对实验用肿瘤细胞的抑制率

试验例7. Ostopanic acid类似物的体内抗肿瘤活性检测

将5×10⁶个肿瘤细胞接种于BALB/c(nu/nu)裸鼠背部皮下。于肿瘤接种后10天开始静脉注射ostopanic acid类似物0.4mg／kg／天，共注射15天，对照组则注射等体积的生理盐水。30天后处死动物，剥取肿瘤称重，计算抑瘤率，抑瘤率（％）＝[肿瘤对照组平均瘤重－治疗组平均瘤重]/肿瘤对照组平均瘤重×100%。结果显示，注射ostopanic acid类似物均具有明显的体内抑瘤作用。 

 表7.  Ostopanic acid类似物对HepG2移植瘤生长的影响

分组           动物数     体重(克)    瘤重(克)    抑瘤率(%)  P 值

对照组              12     21.3±1.5    1.31±0.37               

化合物I-1组          12     22.1±2.5    0.62±0.15    52.7%    < 0.01

化合物I-2组          12     21.6±1.3    0.58±0.16    55.7%    < 0.01

化合物I-3组          12     20.5±1.7    0.61±0.19    53.4%    < 0.01

化合物I-4组          12     21.5±1.6    0.73±0.21    44.3%    < 0.01

化合物I-5组         12     22.9±1.2     0.51±0.22    61.1%    < 0.01

化合物I-6组         12     20.4±1.8     0.69±0.18    47.3%    < 0.01

          表8.  Ostopanic acid类似物对HepG2/ADM移植瘤生长的影响

分组         动物数     体重(克)     瘤重(克)    抑瘤率(%)    P 值

对照组              12      22.5±1.7    1.36±0.25               

化合物I-1组          12      21.8±2.9    0.96±0.21     29.4%     < 0.01

化合物I-2组          12      20.4±1.2    0.88±0.13     35.3%     < 0.01

化合物I-3组          12      23.1±1.9    0.79±0.16     41.9%     < 0.01

化合物I-4组          12      21.2±1.4    0.78±0.12     42.6%     < 0.01

化合物I-5组          12      23.5±1.1    0.65±0.14     52.2%     < 0.01

化合物I-6组          12      20.1±1.8    0.69±0.11     49.3%     < 0.01

          表9.  Ostopanic acid类似物对HCT-8移植瘤生长的影响

分组        动物数     体重(克)     瘤重(克)     抑瘤率(%)    P 值

对照组             12      23.1±2.8    1.34±0.11               

化合物I-1组         12      22.8±2.1    0.73±0.23      45.5%     < 0.01

化合物I-2组         12      20.3±1.5    0.67±0.12      50.0%     < 0.01

化合物I-3组         12      21.2±1.7    0.74±0.27      44.8%     < 0.01

化合物I-4组         12      20.7±1.3    0.70±0.19      47.8%     < 0.01

化合物I-5组         12      23.2±1.5    0.65±0.15      51.5%     < 0.01

化合物I-6组         12      20.7±1.8    0.69±0.14      48.5%     < 0.01

        表10.  Ostopanic acid类似物对A549移植瘤生长的影响

分组        动物数     体重(克)     瘤重(克)    抑瘤率(%)    P 值

对照组             12      21.8±1.1     1.25±0.15               

化合物I-1组         12      20.9±2.3     0.55±0.21    56.0%     < 0.01

化合物I-2组         12      22.5±1.7     0.65±0.13    48.0%     < 0.01

化合物I-3组        12      20.5±2.2     0.51±0.24    59.2%     < 0.01

化合物I-4组         12      23.2±1.6     0.57±0.11    54.4%     < 0.01

化合物I-5组         12      21.6±1.4     0.64±0.15    48.8%     < 0.01

化合物I-6组         12      20.4±1.8     0.61±0.17    51.2%     < 0.01

         表11.  Ostopanic acid类似物对K562荷瘤鼠生存期的影响

分组         动物数    平均生存时期(天)   生命延长率(%)     P 值

对照组            12        8.2±1.8             

化合物I-1组        12       13.1±2.3            59.7%         < 0.01

化合物I-2组        12       10.9±2.1            32.9%         < 0.01

化合物I-3组        12       12.8±2.8            56.1%         < 0.01

化合物I-4组        12       11.9±2.4            45.1%         < 0.01

化合物I-5组        12       15.7±1.1            91.5%         < 0.01

化合物I-6组        12       14.5±1.5            76.8%         < 0.01

        表12.  Ostopanic acid类似物对MCF-7移植瘤生长的影响

分组           动物数     体重(克)     瘤重(克)    抑瘤率(%)    P 值

对照组            12     23.4±1.2    1.38±0.18               

化合物I-1组        12     21.6±2.7    0.45±0.25      67.4%      < 0.01

化合物I-2组        12     22.8±1.2    0.56±0.14      59.4%      < 0.01

化合物I-3组        12     21.3±2.3    0.68±0.23      50.7%      < 0.01

化合物I-4组        12     23.6±1.3    0.75±0.12      45.7%      < 0.01

化合物I-5组        12     23.2±1.5    0.64±0.15      53.6%      < 0.01

化合物I-6组        12     21.3±1.8    0.78±0.17      43.5%      < 0.01

       表13.  Ostopanic acid类似物对SGC7901移植瘤生长的影响

分组          动物数     体重(克)     瘤重(克)    抑瘤率(%)    P 值

对照组            12      21.8±1.3     1.28±0.11               

化合物I-1组        12      22.1±2.6     0.65±0.15     89.8%     < 0.01

化合物I-2组        12      23.2±1.9     0.48±0.23     62.5%     < 0.01

化合物I-3组        12      20.6±2.3     0.75±0.25     41.4%     < 0.01

化合物I-4组        12      21.7±1.8     0.67±0.24     47.6%     < 0.01

化合物I-5组        12      22.4±1.5     0.53±0.18     58.6%     < 0.01

化合物I-6组        12      20.5±1.4     0.67±0.12     47.7%     < 0.01

        表14.  Ostopanic acid类似物对Hela移植瘤生长的影响

分组        动物数     体重(克)     瘤重(克)    抑瘤率(%)     P 值

对照组            12      20.8±1.2    1.35±0.26               

化合物I-1组        12      22.2±2.6    0.69±0.21     48.9%      < 0.01

化合物I-2组        12      23.4±1.8    0.72±0.14     46.7%      < 0.01

化合物I-3组        12     20.2±2.1     0.74±0.21     45.2%     < 0.01

化合物I-4组        12     22.8±1.3     0.65±0.15     51.8%     < 0.01

化合物I-5组       12     23.3±1.7     0.73±0.13     45.9%     < 0.01

化合物I-6组        12     21.6±1.5     0.69±0.16     48.9%     < 0.01

       表15.  Ostopanic acid类似物对PC3移植瘤生长的影响

分组          动物数     体重(克)     瘤重(克)    抑瘤率(%)    P 值

对照组            12      22.1±1.1    1.19±0.25               

化合物I-1组        12      21.5±2.5    0.65±0.32    45.4%      < 0.01

化合物I-2组        12      20.2±2.4    0.56±0.17    52.9%      < 0.01

化合物I-3组        12      23.5±2.2    0.69±0.21    40.0%      < 0.01

化合物I-4组        12      22.6±1.3    0.72±0.27    39.5%      < 0.01

化合物I-5组        12      21.1±1.7    0.61±0.13    48.7%      < 0.01

化合物I-6组       12      20.5±1.6    0.66±0.18    44.5%      < 0.01

以上所述，仅是本发明的部分实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对上述实施例作的任何简单的修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案范围内。

Claims (7)

1.Ostopanic acid及其类似物，这类化合物的特征在于具有通式I的结构： 

                                                 

当m = 5、 n = 5时，为ostopanic acid；

当m、n不等于时，为ostopanic acid类似物。

2.权利要求1的ostopanic acid及其类似物的制备方法，包括下列步骤： 

（1）用己二酸与氯化亚砜作用，得到酰氯；然后与溴素作用得到溴代产物；接着酰氯与乙醇反应得到2,5-二溴己二酸二乙酯；最后在氢氧化钾甲醇溶液中发生消除与水解反应得到(2E,4E)-2,4-己二烯二酸（II）：

；

（2）用(2E,4E)-2,4-己二烯二酸（II）与N, O-二甲基羟胺盐酸盐缩合生成化合物（III）：

 

 

（3）由化合物（III）与碳数为m+1的直链烷基格氏试剂发生格氏反应生成中间体化合物（IV）：

 

；

所述m=2-5；

(4)化合物（IV）在对甲苯磺酸催化作用下与乙二醇或原甲酸三甲酯反应生成羰基被保护的缩酮化合物，再与碳数为n+1的直链烷基格氏试剂发生格氏反应，最后脱除缩酮保护得到化合物（V）：

 

；

所述n=3-5；

(5)化合物（V）经氧化剂氧化生成（I）：

。

3.根据权利要求2所述方法，具体步骤如下：

1）以己二酸为起始原料，与氯化亚砜作用，得到酰氯；然后与溴素作用得到溴代产物；接着酰氯与乙醇反应得到2,5-二溴己二酸二乙酯；最后在氢氧化钾甲醇溶液中发生消除与水解反应得到中间体化合物（II）；

2）化合物（II）与N, O-二甲基羟胺盐酸盐缩合生成化合物（III）；

所使用的溶剂为二氯甲烷，所用的缩合剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑的组合，碱为三乙胺，反应时间为12小时，反应温度为室温；

3）由步骤2）得到的化合物（III）与烷基格氏试剂或芳香基格氏试剂反应生成中间体化合物（IV）；

所使用的溶剂为乙醚或四氢呋喃，优选为四氢呋喃，格氏试剂当量为1.0-2.0，反应温度为0 ^oC，反应时间为1 h；

4）由步骤3）得到的化合物（IV）在催化剂作用下与乙二醇或原甲酸三甲酯反应生成羰基被保护的缩酮化合物，接着与烷基格氏试剂或芳香基格氏试剂反应，最后脱除缩酮保护得到化合物（V）；

羰基保护过程中，所用催化剂为对甲苯磺酸，乙二醇或原甲酸三甲酯的当量为1.0-2.0；当使用乙二醇时，溶剂为甲苯，反应温度为回流，反应时间为12 h；当使用原甲酸三甲酯时，反应溶剂为甲醇，反应温度为室温，反应时间为4 h；

格氏反应中，所使用的溶剂为乙醚或四氢呋喃，优选为四氢呋喃，格氏试剂当量为1.0-2.0，反应温度为0 ^oC，反应时间为1 h；

脱保护时，反应条件为四氢呋喃和体积浓度为10%的盐酸水溶液的混合溶剂，反应温度为室温，反应时间为12 h；

5）由步骤4得到的化合物（V）经氧化剂氧化生成最终产物（I）；所用溶剂为丙酮，氧化剂为琼斯试剂，反应温度为0 ^oC，反应时间为4 h； 

其特征是所述步骤(1)为：将化合物（II）溶于二氯甲烷中，加入三乙胺为缚酸剂，在催化剂作用下，与N, O-二甲基羟胺盐酸盐缩合生成化合物（III）；所述催化剂是1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑的组合，摩尔比是1:1；

所述步骤(2)中格氏反应所使用的溶剂为干燥的四氢呋喃；

所述步骤(3) 为：将所述化合物（IV）溶于干燥的甲苯中，在对甲苯磺酸催化作用下与乙二醇反应得到羰基被保护的缩酮化合物；或将所述化合物（IV）溶于干燥的甲醇中，在对甲苯磺酸催化作用下与原甲酸三甲酯反应得到羰基被保护的缩酮化合物；将所得到的羰基被保护的缩酮化合物溶于干燥的四氢呋喃中，与碳数为n+1的直链烷基格氏试剂发生格氏反应，所得到的产品在四氢呋喃和体积浓度为10%的盐酸水溶液的混合溶剂体系下脱除缩酮保护得到化合物（V），其中，四氢呋喃和盐酸水溶液的体积比是3:1；

所述步骤(4)为：将所述化合物（V）溶于丙酮中，经琼斯试剂、重铬酸吡啶盐或高锰酸钾氧化生成（I）。

4.权利要求1 所述ostopanic acid及其类似物在制备抗肿瘤药物中的用途。

5.权利要求4所述ostopanic acid及其类似物在制备抗肿瘤药物中的用途，其特征是所述肿瘤为肝癌、肺癌、结肠癌、白血病、胃癌、乳腺癌、宫颈癌或前列腺癌。

6.权利要求1所述ostopanic acid及类似物和药学上可接受的赋形剂或载体制成的药物组合物。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于所述的药物组合物为注射剂、口服剂、霜剂或喷剂。

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