CN102512568B - 一种药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药物组合物，由以下重量份配比的原料药材制成：络石藤10-25份，僵蚕1-10份，水蛭0.5-6份，鱼腥草10-30份，萆薢5-25份，水红花子5-25份，黄芪5-25份，土牛膝2-20份；该药物组合物治疗慢性肾炎效果明确、安全无毒副作用，且不易复发；本发明还公开了上述药物组合物的制备方法和用途。

Description

一种药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于医药制剂技术领域，特别涉及一种药物组合物及其制备方法和用途。

背景技术

慢性肾炎是慢性肾小球肾炎(chronic glomerulonephritis)的简称，系指蛋白尿、血尿、高血压、水肿为基本临床表现，起病方式各有不同，病情迁延，病变缓慢进展，可以不同程度肾功能减退，最终将发展为慢性肾衰竭的一组肾小球疾病，属于原发性肾小疾病的临床分型，由多种病理类型引起。由于本组疾病的病理类型及病期不同，主要临床表现各不相同，疾病表现呈多样化。

蛋白尿是CGN最常见的临床表现和最早能检测到的指标之一，大量的临床和实验研究发现，尿蛋白本身具有肾毒性，是进行肾衰的一种持久、独立的恶化因素，是CGN预后不良的一种重要标志，所以减少和消除蛋白尿，是保护肾脏功能的重要措施之一。目前现代医学对CGN蛋白尿的治疗尚无理想的治疗方案。一般采用西药治疗，蛋白尿、潜血易在短时间内得到控制，但也易在感冒、感染下复发，病情则在不断反复中发展到后期，出现贫血、严重高血压、恶心、呕吐等症状，最终发展到尿毒症。

因此，治疗慢性肾炎主要是不复发，其传统治疗措施通常采用一般治疗和激素、免疫抑制剂治疗等。由于反复性及强烈的副作用，越来越多的人排斥激素、免疫抑制剂类药物，需要新的慢性肾炎治疗方法。

此外，运用中医药治疗CGN蛋白尿受到国内医家的关注，有作者基于近年来的文献资料对CGN蛋白尿的中医用药规律进行总结。其方法是以中国期刊全文数据库为检索库，检索年限为1980一2009年，对有关中医药治疗CGN文献进行检索。建立CGN蛋白尿中医用药文献研究数据库，采用sPss 11.5软件统计描述。结果共检索得到有关文献105篇，其中中药共计163味，使用频次1996次；所用药物种类依次为补益药、利水渗湿药、清热药、活血祛瘀药，收涩药，占总体用药的80.02％；其中药味以甘、苦，辛为主，累积频率迭86.08％；药性以寒、温、平为主，累积频率迭96.92％；归经以肝、肾.脾.肺、心、胃为主，累积频率达86.31％。结论本病病机为本虚标实，脾虚、肾虚为本，湿热和瘀血为标。临床以补益药、利水渗湿药、清热药、活血化瘀药、收涩药等中药运用为主。但这些中药治疗慢性肾炎的效果通常并不理想，部分中药成分也会引起副作用，导致病情反复发作。

发明内容

本发明的主要目的是针对上述现有技术中存在的西药治疗慢性肾炎副作用大、不彻底、易复发，中药治疗慢性肾炎效果不明确、同样有副作用及易复发等问题，提供一种新的药物组合物，该药物组合物治疗慢性肾炎效果明确、安全无毒副作用，且不易复发。

本发明的另一个目的是提供一种上述药物组合物的制备方法。

本发明的又一个目的是提供一种上述药物组合物的用途。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

根据本发明的第一个技术方案，提供一种药物组合物，它由以下重量份配比的原料药材制成：

络石藤8-30份，僵蚕0.5-12份，水蛭0.3-10份，鱼腥草8-35份，萆薢3-30份，水红花子3-30份，黄芪3-30份，土牛膝1-25份。

上述原料药材的重量份配比优选为：

络石藤10-25份，僵蚕1-10份，水蛭0.5-6份，鱼腥草10-30份，萆薢5-25份，水红花子5-25份，黄芪5-25份，土牛膝2-20份。

上述原料药材的重量份配比更优选为：

络石藤15-20份，僵蚕2-7份，水蛭0.8-5份，鱼腥草15-25份，萆薢10-20份，水红花子10-20份，黄芪10-20份，土牛膝5-15份。

上述原料药材的重量份配比更优选为：

络石藤16-19份，僵蚕2-5份，水蛭1-3份，鱼腥草16-22份，萆薢12-18份，水红花子12-18份，黄芪12-18份，土牛膝7-12份。

可进一步优选为：

络石藤18份，僵蚕3份，水蛭1.5份，鱼腥草20份，萆薢15份，水红花子15份，黄芪15份，土牛膝10份。

在制成药物时，可根据本领域技术人员公知的药剂常识，将上述原料药材进行适当的预处理，然后制成各种药剂学上的常用剂型的药物。

根据本发明的第二个技术方案，提供上述药物组合物的制备方法，它包括以下步骤：

所述配比用量的僵蚕和水蛭分别单独粉碎、然后将粉料进行混合后过筛或过筛后混合，或者两者一起被粉碎然后过筛，从而制得第一种细粉I；

所述配比用量的络石藤、鱼腥草、萆薢、水红花子、黄芪和土牛膝分别进行提取，或这六种原料中以各种组合进行提取，从而获得一种或两种或多种提取物和任选的挥发油(例如在提取过程中任选地收集挥发油)，所得提取物任选地进行浓缩和任选地进行干燥和/或粉碎(例如喷雾干燥，或烘干与粉碎)；这里，“这六种原料中以各种组合进行提取”例如采用按照以下组合进行提取的方式：其中的两种原料(例如络石藤和水红花子)被混合在一起进行提取(例如用乙醇或乙醇溶液进行提取，如用50-95wt％浓度的乙醇水溶液进行提取)和另外四种原料(例如鱼腥草、萆薢、黄芪和土牛膝)被混在一起进行提取(例如水煮提取)(获得两种提取物)；或其中的三种原料(例如络石藤、水红花子和黄芪)被混合在一起进行提取(例如用乙醇或乙醇溶液进行提取，如用50-95wt％浓度的乙醇水溶液进行提取)和另外三种原料(例如鱼腥草、萆薢和土牛膝)被混在一起进行提取(例如水煮提取)(获得两种提取物)；或其中的两种原料被混合在一起进行提取、另外两种原料被混在一起进行提取和剩下的两种原料被混在一起进行提取(获得三种提取物)；其中的一种原料(例如鱼腥草)进行提取、另外两种原料(例如络石藤和水红花子)被混在一起进行提取和剩下的三种原料(萆薢、黄芪和土牛膝)被混在一起进行提取(获得三种提取物)；或这六种原料被混合在一起进行提取(获得一种提取物)，等等；

和

将所获得的第一种细粉I与以上所获得的提取物和任选的挥发油进行混合，获得药物组合物。

所获得的药物组合物在添加或不添加辅料的情况下按照常规方法被制成各种剂型，例如颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、合剂、口服液、滴丸、糖浆剂等形式的药物或药剂或制剂。

以上所述的提取优选是乙醇提取和/或水煮提取。优选，乙醇提取是乙醇回流提取，和水煮提取是煎煮提取。优选，当进行水煮提取时任选地还收集挥发油。所收集的挥发油优选用β-环糊精包结。

“任选”在这里表示“有”或“没有”或表示“进行”或“不进行”。

这里所述的“乙醇提取”中的“乙醇”是指纯乙醇(纯度＞98wt％至100wt％的乙醇)或任何浓度的乙醇水溶液，例如30-98wt％或30-95wt％浓度或40-90wt％浓度或50-85wt％或60wt％～80wt％的乙醇水溶液。在下文中某浓度的乙醇水溶液简称某浓度的乙醇，例如60wt％～80wt％的乙醇水溶液简称60％～80％的乙醇。

例如，上述药物组合物可按照包括下述步骤的方法一制备：

(1)、粉碎：将所述配比的僵蚕和水蛭粉碎，过100目筛，得细粉I备用；

(2)、乙醇提取：将所述配比的络石藤和水红花子加30-95wt％浓度(优选40-90wt％，更优选60wt％～80wt％)的乙醇回流提取2～3次，每次1～2小时，每次按药材重量的4～8倍体积量加乙醇，滤过，合并滤液，回收乙醇，将回收乙醇后的药液浓缩成相对密度为1.05～1.35(60℃热测)的膏状，喷雾干燥，或者干燥后粉碎，得细粉II，备用；

(3)、水煮提取：将所述配比的鱼腥草、萆薢、黄芪、土牛膝加水煎煮2～3次，每次1～2小时，每次按药材重量的6～10倍体积量加水，同时收集挥发油；将水煮液滤过，合并滤液，浓缩成相对密度为1.05～1.35(60℃热测)的膏状，喷雾干燥，或者干燥后粉碎，得细粉III，备用；收集的挥发油加β-环糊精包结，得挥发油包结物，备用；

(4)、制剂：取上述步骤(1)、(2)、(3)得到的细粉I、II、III和挥发油包结物，混匀，按照不同剂型药物的常规制剂方法，必要时加入适量辅料，制成制剂，即得。

上述方法的步骤(2)和步骤(3)中，将药液浓缩时，可浓缩成相对密度为1.05～1.20的清膏(60℃热测)，喷雾干燥成干膏粉，备用；也可浓缩成相对密度为1.30～1.32的稠膏(60℃热测)，干燥成干膏，再粉碎成细粉，备用。

或者，上述药物组合物还可按照包括下述步骤的方法二制备：

(1)、粉碎：将所述配比的僵蚕和水蛭粉碎，过100目筛，得细粉I备用；

(2)、水煮提取：将所述配比的络石藤、水红花子、鱼腥草、萆薢、黄芪、土牛膝加水煎煮2～3次，每次1～2小时，每次按药材重量的6～10倍体积量加水，同时收集挥发油；将水煮液滤过，合并滤液，浓缩成相对密度为1.05～1.35(60℃热测)的膏状，喷雾干燥，或者干燥后粉碎，得细粉II，备用；收集的挥发油加β-环糊精包结，得挥发油包结物，备用；

(3)、制剂：取上述步骤(1)、(2)得到的细粉I、II和挥发油包结物，混匀，按照不同剂型药物的常规制剂方法，必要时加入适量辅料，制成制剂，即得。

上述方法的步骤(2)和步骤(3)中，将药液浓缩时，可浓缩成相对密度为1.05～1.20的清膏(60℃热测)，喷雾干燥成干膏粉，备用；也可浓缩成相对密度为1.30～1.32的稠膏(60℃热测)，干燥成干膏，再粉碎成细粉，备用。

上述制备方法的“制剂”步骤中，加入辅料的种类和份量，可按照药剂学中不同剂型药物的常规加入种类及份量等进行选择。上述药物组合物，可制成各种药剂学上可行的口服药物剂型，如颗粒剂、片剂、胶囊剂、合剂、口服液、滴丸等。

上述原料药材均分别为国家药品标准收载的中药材，其来源分别如下：

络石藤为夹竹桃科植物络石Trachelospermum jasminoioides(Lindl.)Lem.的干燥带叶藤茎。

僵蚕为蚕蛾科昆虫家蚕Bombyx mori Linnaeus 4～5龄的幼虫感染(或人工接种)白僵菌Beauveria bassiana(Bals.)Vuillant而致死的干燥体。

水蛭为水蛭科动物蚂蝗Whitmania pigra Whitman、水蛭Hirudonipponica Whitman或柳叶蚂蝗Whitmania acranulata Whitman的干燥全体。

鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的干燥地上部分。

萆薢为百合科植物菝葜Smilax china L.、长托菝葜Smilax ferox Wall.ex Kunth、黑果菝葜Smilax  glauco-china  Warb.或红果菝葜Smilaxpolycoiea Warb.的干燥根茎。

水红花子为蓼科植物红蓼Polygonum orientale L.的干燥成熟果实。

黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)的干燥根。

土牛膝为苋科植物粗毛牛膝Achyranthes aspera L.、牛膝Achyranthesbidentata Bl.的干燥根及根茎。

上述原料药配方中，络石藤味苦、辛、性微寒，入肾经，又以其藤蔓之属能直达肾络，并藉其辛以散风，苦以燥湿，寒以清热，故能驱逐窜入肾络之风湿热合邪，通络除痹以为君药；僵蚕咸、辛性平，具有祛风解毒，化痰散结之作用，对风热挟痰，郁滞肾络正为其所治；川萆薢性平，味苦，功擅利湿去浊，祛风通痹。二药为臣，有助君药祛风通络，清热利湿之功；佐以水蛭破瘀消积，通络利水；鱼腥草清热解毒，利尿通淋；黄芪补气充络，托邪外出。使以土牛膝活血散瘀，解毒利湿，引药下行。诸药共奏祛风清热利湿，活血通络之功。主治慢性肾炎之风湿热扰肾，肾络瘀痹证。症见：蛋白尿和/或血尿，咽喉肿痛，肢体重滞，肌肉关节疫楚，皮肤湿疹瘙痒，面色黧黒或晦暗，腰痛固定或刺痛，小便黄赤，舌质紫暗或有瘀点、瘀斑、舌苔黄腻。

根据本发明的第三个技术方案，提供了上述药物组合物用于制备治疗慢性肾炎的药物或药剂的用途。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明通过大量试验筛选而选用特定的原料药材组成，祛风清热利湿、活血通络功能显著，特别适用于风湿热邪袭扰肾络，导致肾络瘀痹，日久络息成积之慢性肾小球肾炎。通过动物药效学试验和毒性试验证实其治疗效果明显，毒副作用小。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的上述发明内容作进一步的详细描述。

但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括在本发明的范围内。

实施例1

本实施例为治疗慢性肾炎的颗粒剂，由以下重量的原料药材制成：

络石藤180g，僵蚕30g，水蛭15g，鱼腥草200g，萆薢150g，水红花子150g，黄芪150g，土牛膝100g。

本实施例治疗慢性肾炎的颗粒剂由包括下述主要步骤的方法制得：

(1)、粉碎：将所述配比的僵蚕和水蛭粉碎，过100目筛，得细粉I备用；

(2)、乙醇提取：将所述配比的络石藤和水红花子加60％的乙醇回流提取3次，每次分别2小时、1小时、1小时，每次分别按药材重量的8倍体积量、6倍体积量和4倍体积量加乙醇，滤过，合并滤液，回收乙醇，将回收乙醇后的药液浓缩成相对密度约为1.05～1.20(60℃热测)的清膏，喷雾干燥，得细粉II，备用；

(3)、水煮提取：将所述配比的鱼腥草、萆薢、黄芪、土牛膝加水煎煮3次，每次分别2小时、1.5小时、1小时，每次分别按药材重量的10倍体积量、8倍体积量和6倍体积量加水，同时收集挥发油；将水煮液滤过，合并滤液，浓缩成相对密度为1.05～1.20(60℃热测)，干燥后粉碎，得细粉III，备用；收集的挥发油加β-环糊精包结，得挥发油包结物，备用；

(4)、制剂：取上述步骤(1)、(2)、(3)得到的细粉I、II、III和挥发油包结物，混匀，按照颗粒剂的常规制剂方法，加入适量辅料(可溶性淀粉100g、蔗糖35g)，制成颗粒剂，即得。

实施例2

本实施例为治疗慢性肾炎的颗粒剂，由以下重量的原料药材制成：

络石藤150g，僵蚕20g，水蛭15g，鱼腥草150g，萆薢150g，水红花子150g，黄芪150g，土牛膝100g。

本实施例治疗慢性肾炎的颗粒剂由包括下述主要步骤的方法制得：

(1)、粉碎：将所述配比的僵蚕和水蛭粉碎，过100目筛，得细粉I备用；

(2)、乙醇提取：将所述配比的络石藤和水红花子加80％的乙醇回流提取2次，每次2小时，每次按药材重量的8倍体积量加乙醇，滤过，合并滤液，回收乙醇，将回收乙醇后的药液浓缩成相对密度为1.30～1.32的稠膏(60℃热测)，干燥后粉碎，得细粉II，备用；

(3)、水煮提取：将所述配比的鱼腥草、萆薢、黄芪、土牛膝加水煎煮2次，每次2小时，每次按药材重量的10倍体积量加水，同时收集挥发油；将水煮液滤过，合并滤液，浓缩成相对密度为1.30～1.32的稠膏(60℃热测)，干燥后粉碎，得细粉III，备用；收集的挥发油加β-环糊精包结，得挥发油包结物，备用；

(4)、制剂：取上述步骤(1)、(2)、(3)得到的细粉I、II、III和挥发油包结物，混匀，按照颗粒剂的常规制剂方法，加入适量辅料(糊精150g、蔗糖30g)，制成颗粒剂，即得。

实施例3

本实施例为治疗慢性肾炎的片剂，由以下重量的原料药材制成：

络石藤250g，僵蚕20g，水蛭30g，鱼腥草100g，萆薢200g，水红花子250g，黄芪50g，土牛膝150g。

本实施例治疗慢性肾炎的片剂由包括下述主要步骤的方法制得：

(1)、粉碎：将所述配比的僵蚕和水蛭粉碎，过100目筛，得细粉I备用；

(2)、乙醇提取：将所述配比的络石藤和水红花子加70％的乙醇回流提取2次，每次2小时，每次按药材重量的6倍体积量加乙醇，滤过，合并滤液，回收乙醇，将回收乙醇后的药液浓缩成相对密度为1.10～1.20的清膏(60℃热测)，喷雾干燥，得细粉II，备用；

(3)、水煮提取：将所述配比的鱼腥草、萆薢、黄芪、土牛膝加水煎煮2次，每次2小时，每次按药材重量的10倍体积量加水，同时收集挥发油；将水煮液滤过，合并滤液，浓缩成相对密度为1.05～1.10的清膏(60℃热测)，喷雾干燥，得细粉III，备用；收集的挥发油加β-环糊精包结，得挥发油包结物，备用；

(4)、制剂：取上述步骤(1)、(2)、(3)得到的细粉I、II、III和挥发油包结物，混匀，按照片剂的常规制剂方法，加入适量辅料(淀粉50g)，制粒、压制成片剂，即得。

实施例4

本实施例为治疗慢性肾炎的颗粒剂，由以下重量的原料药材制成：

络石藤100g，僵蚕100g，水蛭5g，鱼腥草250g，萆薢250g，水红花子50g，黄芪160g，土牛膝50g。

本实施例治疗慢性肾炎的颗粒剂由包括下述主要步骤的方法制得：

(1)、粉碎：将所述配比的僵蚕和水蛭粉碎，过100目筛，得细粉I备用；

(2)、水煮提取：将所述配比的络石藤、水红花子、鱼腥草、萆薢、黄芪、土牛膝加水煎煮3次，每次分别2小时、1.5小时、1小时，每次分别按药材重量的10倍体积量、8倍体积量和6倍体积量加水，同时收集挥发油；将水煮液滤过，合并滤液，浓缩成相对密度为1.05～1.20(60℃热测)，干燥后粉碎，得细粉II，备用；收集的挥发油加β-环糊精包结，得挥发油包结物，备用；

(3)、制剂：取上述步骤(1)、(2)得到的细粉I、II和挥发油包结物，混匀，按照颗粒剂的常规制剂方法，加入适量辅料(糊精50g、蔗糖20g)，制成颗粒剂，即得。

实施例5

本实施例为治疗慢性肾炎的颗粒剂，由以下重量的原料药材制成：

络石藤200g，僵蚕60g，水蛭60g，鱼腥草100g，萆薢150g，水红花子200g，黄芪200g，土牛膝20g。

本实施例治疗慢性肾炎的颗粒剂由包括下述主要步骤的方法制得：

(1)、粉碎：将所述配比的僵蚕和水蛭粉碎，过100目筛，得细粉I备用；

(2)、水煮提取：将所述配比的络石藤、水红花子、鱼腥草、萆薢、黄芪、土牛膝加水煎煮2次，每次2小时，每次按药材重量的10倍体积量加水，同时收集挥发油；将水煮液滤过，合并滤液，浓缩成相对密度为1.30～1.32的稠膏(60℃热测)，干燥后粉碎，得细粉II，备用；收集的挥发油加β-环糊精包结，得挥发油包结物，备用；

(3)、制剂：取上述步骤(1)、(2)得到的细粉I、II和挥发油包结物，混匀，按照颗粒剂的常规制剂方法，加入适量辅料(蔗糖40g)，制成颗粒剂，即得。

实施例6

本实施例为治疗慢性肾炎的片剂，由以下重量的原料药材制成：

络石藤220g，僵蚕10g，水蛭40g，鱼腥草180g，萆薢100g，水红花子120g，黄芪100g，土牛膝180g。

本实施例治疗慢性肾炎的片剂由包括下述主要步骤的方法制得：

(1)、粉碎：将所述配比的僵蚕和水蛭粉碎，过100目筛，得细粉I备用；

(2)、水煮提取：将所述配比的络石藤、水红花子、鱼腥草、萆薢、黄芪、土牛膝加水煎煮2次，每次2小时，每次按药材重量的10倍体积量加水，同时收集挥发油；将水煮液滤过，合并滤液，浓缩成相对密度为1.05～1.10的清膏(60℃热测)，喷雾干燥，得细粉II，备用；收集的挥发油加β-环糊精包结，得挥发油包结物，备用；

(3)、制剂：取上述步骤(1)、(2)得到的细粉I、II和挥发油包结物，混匀，按照片剂的常规制剂方法，加入适量辅料(糊精20g)，制粒、压制成片剂，即得。

实施例7

本实施例为治疗慢性肾炎的片剂，由以下重量的原料药材制成：

络石藤220g，僵蚕50g，水蛭20g，鱼腥草300g，萆薢50g，水红花子100g，黄芪250g，土牛膝20g。

本实施例治疗慢性肾炎的片剂由包括下述主要步骤的方法制得：

(1)、粉碎：将所述配比的僵蚕和水蛭粉碎，过100目筛，得细粉I备用；

(2)、水煮提取：将所述配比的络石藤、水红花子、鱼腥草、萆薢、黄芪、土牛膝加水煎煮2次，每次分别2小时、1小时，每次分别按药材重量的10倍和8倍体积量加水，同时收集挥发油；将水煮液滤过，合并滤液，浓缩成相对密度为1.05～1.10的清膏(60℃热测)，喷雾干燥，得细粉II，备用；收集的挥发油加β-环糊精包结，得挥发油包结物，备用；

(3)、制剂：取上述步骤(1)、(2)得到的细粉I、II和挥发油包结物，混匀，按照片剂的常规制剂方法，加入适量辅料(糊精30g)，制粒、压制成片剂，即得。

为证实本发明药物组合物的有效性及安全性，发明人进行了严格的动物药效学试验和毒性试验考察，从而证实了上述原料药材制成的药物组合物具有显著的祛风清热利湿、活血通络等功能，特别适用于风湿热邪袭扰肾络，导致肾络瘀痹，日久络息成积之慢性肾小球肾炎。部分动物药效学试验和急性毒性试验考察方法和结果分别如下：

一、本发明药物组合物对大鼠C-BSA肾炎模型的影响

本试验以阳离子化牛血清蛋白(C-BSA)制成的大鼠原位免疫复合物型慢性肾炎模型为实验对象，观察本发明药物组合物的疗效。

1实验材料

1.1受试药物

以上述实施例1和实施例4所得的颗粒剂为试验药物，

天藤通肾络颗粒I和II(试验药物，即本发明药物组合物颗粒剂)，分别按实施例1和实施例4的配比及制备方法生产，10g/袋，1袋/次，3次/日，由湖南明瑞制药有限公司生产，批号100301；肾复康胶囊(中药阳性对照)，国药准字Z22024866，0.30g/粒，4～6粒/次，3次/日，通化茂祥制药有限公司出品，批号091105；醋酸泼尼松片(化学药阳性对照)，国药准字H44021868，5.0mg/片，5～10mg/次，10～60mg/日，广东南国药业有限公司出品，批号091004。实验时，所有药品均用纯水配制成相应浓度的混悬液供动物灌胃用。

1.2实验试剂

牛血清白蛋白(BSA)，纯度96～99％，上海伯奥生物科技有限公司，批号090811；乙二胺(EDA)，AR，广东汕头市西陇化工厂，批号081210；1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)，Sigma分装；透析袋，MW8000-14000，USA，Exp2010.08；弗氏不完全佐剂，10ml/瓶，北京鼎国生物技术有限责任公司。

尿蛋白定量(CBB法，批号20090912)、隐血(邻联甲苯胺显色法，20091010)、尿蛋白定性(磺基水杨酸法，批号20090820)、N0(硝酸还原法，20090725)、SOD(黄嘌呤氧化法，20091104)、MDA(硫代巴比妥酸法，20100120)，购自南京建成生物工程研究所。

TC(氧化酶法，20091213)、TG(甘油磷酸氧化酶法，20090901)、Cre(肌氨酸氧化酶法，20091124)、BUN(紫外-谷氨酸脱氢酶法，20091101)、TP(双缩脲比色法，20091208)、ALB(溴甲酚绿法，20091101)测定试剂盒，购自上海科华生物工程股份有限公司。

其它试剂，浓盐酸、冰醋酸、乙酸钠、NaH₂PO₄·2H₂O、Na₂HPO₄·12H₂O、(NH₄)₂SO₄、EDTA-2Na、CuSO₄·5H₂O、NaOH、NaF、NaCl、PEG6000、柠檬酸钠、酒石酸钾钠、硼酸、硼砂、无水乙醇、丙酮、甲醛等，均为国产AR。

1.3实验仪器

AL104电子分析天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；JJ2000型电子天平，常熟双杰测试仪器厂；F5810-R型台式高速冷冻离心机，德国Eppendorf公司；ALPHA1-4LSC型冷冻干燥机，德国CHRIST公司；Thermo1500型酶标仪，芬兰雷勃公司；1575洗板机，美国BIO-Rad公司；TMS-1024全自动生化分析仪，日本东京株市会社；UV2801紫外分光光度计，日本岛津；722分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；C2000-4高性能血凝仪，北京普利生仪器有限公司；Millipore超纯水处理系统，美国Millipore公司；828精密PH计，美国奥立龙；L-4磁力搅拌器，巩义市英峪予华仪器厂；LDZX-40BI压力灭菌器，上海申安医疗器械厂；PYX-DHS600B II隔水电热恒温培养箱，上海跃进医疗器械厂。

1.4实验动物

选用SPF级雄性SD大鼠，体重180～220g，由由成都百康医药工业药理毒理研究院提供(生产许可证号：SCXK(川)2003-06)。

动物饲养于IVC动物实验室，温度20～25℃(日温差≤3℃)，湿度40％～70％，照明12h：12h明暗交替，照度150～300lx，噪音≤60dB；成都中医药大学药学院动物观察室(四川省试验动物管理委员会试验动物设施条件合格证号：川实动管使第2003-015号)。

2实验方法

2.1模型制备与给药分组

2.1.1阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的制备

根据改进的Border法，取EDA350ml，加入双蒸水2.5L，再加入6mol/L盐酸1.75L，搅拌均匀，冷却至25℃，以浓盐酸调pH至4.75；搅拌中加入20％BSA水溶液150ml(30g)，然后加入12gEDC(以25ml水溶解)，25℃搅拌反应6h；加入4mol/L、PH 4.75的醋酸缓冲溶液150ml，以终止反应；按反应液体积加入粉末(NH₄)₂SO₄使饱和度达到0.8(561g/L)，搅拌均匀，静置8h以上；12000rpm离心10min，收集沉淀，上清液按73g/L加入粉末(NH₄)₂SO₄至饱和度达0.9，静置、离心收集沉淀，合并两次沉淀以500ml水溶解，过滤，滤液于4℃对水透析除盐72h(渗透液PH6.5～8.0)，浓缩液过滤后经冷冻干燥得C-BSA粉剂成品25g。

按上述方法制备的C-BSA，紫外法检测(以不同浓度的标准BSA对OD₂₈₀制作标准曲线，曲线方程A＝0.607C+0.0005，r²＝0.9999，线性范围0.2～2.0mg/ml)纯度为86.39％，成品净收率72.99％；等电聚焦电泳检测其PI为9.0。

2.1.2C-BSA致大鼠肾小球肾炎模型制备

称取适量C-BSA冻干粉末，以0.15mol/L、PH7.4的灭菌PBS溶液配制为2.5.0mg/ml溶液，用0.22μm微孔滤膜过滤除菌并无菌分装，-20℃保存。临用前取出缓慢融化，与等量弗氏不完全佐剂研磨成白色乳剂，在造模大鼠双侧腋下、腹股沟作多部位皮下预免疫注射，每只1ml。预免疫1周后，每只大鼠尾静脉注射1ml浓度为2.5mg/ml的C-BSA作为正式免疫，每周3次，共10次；正常对照组大鼠注射等量PBS。

给药期间应根据模型动物的尿蛋白测定结果，决定是否持续免疫，以保证实验模型的稳定性。在本实验中，给药2周的造模各组动物24h尿蛋白量均显著下降，因此确定从第3周起每周持续免疫2次，直至实验结束。

2.1.3动物分组及给药

取180～200g雄性SD大鼠在IVC动物实验室适应性饲养2周，选择尿蛋白为阴性者136只，除留10只为正常对照外，其余126只均用于造模。在正式免疫10次后，将造模成功的109只大鼠根据尿蛋白和体重相对均匀分为9组：模型对照组13只；化学药阳性对照醋酸泼尼松5.0mg/kg(相当于临床人用量的5倍)组12只；中药对照肾复康胶囊0.9g/kg(相当于临床人用量的10倍)组12只；天藤通肾络颗粒I(实施例1的颗粒剂)2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg剂量组(分别相当于临床人用量的5倍、10倍、20倍)各12只、天藤通肾络颗粒II(实施例4的颗粒剂)2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg剂量组(分别相当于临床人用量的5倍、10倍、20倍)各12只。各组动物每日按剂量灌胃给药一次，连续35d，容量均为10ml/kg，正常和模型对照组给予等容量纯水。

2.2观察指标及测定

2.2.1尿蛋白定量

分别收集每只动物预免疫前、正式免疫10次及给药后2、4、5周的24h尿液，量取体积，用CBB法测定尿液中蛋白含量，计算尿蛋白总量，以mg/24h表示。

2.2.2血液相关指标检测

给药后5周，所有动物禁食不禁水12小时，股动脉取血5ml，4℃、4000rpm离心10min，分离血清，用全自动生化分析仪测定TC、TG、Cre、BUN、TP、ALB，计算A/G；芬兰科华ST-360酶标仪、SW-36W洗板机测定IgG、IgA、IgM含量；用722分光光度计595nm处按PEG-NaF比浊法测定血清CIC(循环免疫复合物)含量；按试剂盒方法测定SOD、MDA含量。

另取动脉血1.35ml，加入到含0.15ml柠檬酸钠抗凝剂(109mmol/L)的试管中，置旋涡震荡器上充分混匀，4℃、4000rpm离心10min，分离血浆，用C2000-4高性能血凝仪(磁珠法)检测PT、APTT、TT、FIB。

2.2.3普通光镜观察

放血处死动物，剖取左右肾脏称重，肉眼观察外观大小和色泽，计算各组大鼠的肾脏指数；取左侧新鲜肾皮质组织，FAA固定液固定，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，制成3μm切片分别进行HE、PAS和Masson染色；光镜下观察肾组织的各种病理变化。

2.3统计学方法

计量资料用平均数±标准差

表示，差异显著性检验若方差齐则采用SNK检验，方差不齐采用Kruskal-Wallis检验；若差异具有统计学意义(P＜0.05)则进行组间比较，方差齐时组间比较采用LSD检验，方差不齐时组间比较采用Tamhane’s T2检验。计数资料差异显著性检验采用参照单位分析(Reference Identical Unit，Ridit)，Fisher’s确切概率法X²检验。

3实验结果及结论

3.1试验结果

见表-1、表-2、表-3、表-3、表-4、表-5和表-6。

3.2结论

3.2.1对模型动物尿蛋白的影响

由表-1可见，模型动物调整分组后，各模型组给药前24h尿蛋白水平大致均匀，并显著高于空白对照组，表明给药前各模型组肾脏的损伤程度大致相当。

给药14d，用药各组24h的尿蛋白总量均低于模型对照组，以肾复康0.9g/kg组作用显著，与模型对照相比降低了34.42％。

给药28d，各给药组均能非常显著地降低模型大鼠24h的尿蛋白。

给药35d，各给药组均能非常显著地降低模型大鼠24h的尿蛋白，提示天藤通肾络颗粒可明显减轻慢性肾炎所致的蛋白尿。

3.2.2对血液相关指标的影响

3.2.2.1对血液生化的影响：

由表-2可见，与空白组相比，模型组动物血清TC、TG显著升高，TP、ALB显著下降，A/G有降低趋势，但Cre、BUN的变化不明显；表明由C-BSA介导的慢性肾炎模型大鼠同时并发高脂血症和低蛋白血症，与慢性肾炎病人临床观察结果一致。

连续给药35d，阳性对照醋酸泼尼松5.0mg/kg，能明显升高模型大鼠血清TP和ALB、降低TC，对TG仅有降低趋势，对A/G、Cre、BUN无明显影响；中药对照肾复康胶囊0.9g/kg，可明显降低模型动物的TG，对TP和ALB有升高趋势，对TC有降低趋势，对A/G无明显影响，但能增加Cre和BUN；天藤通肾络颗粒各个剂量组，均能显著升高模型动物的血清TP、ALB(TP接近正常水平)，显著降低TC、TG(均接近正常水平)，对A/G、Cre、BUN无明显影响；提示天藤通肾络颗粒可纠正慢性肾炎所致的低蛋白血症和高脂血症。

3.2.2.2对免疫球蛋白和循环免疫复合物的影响

由表-3可见，与空白组相比，模型对照组动物的血清CIC和IgM显著增加、IgA和IgG显著下降，表明由C-BSA介导的慢性肾炎模型大鼠血液中循环免疫复合物过高、各种免疫球蛋白的水平异常，与慢性肾炎病人的临床观察结果一致。

连续给药35d，醋酸泼尼松5.0mg/kg，能明显升高模型大鼠的血清IgG，对CIC和IgM仅有降低趋势而无统计学差异，对IgA无明显影响；肾复康胶囊0.9g/kg和天藤通肾络颗粒各剂量组，均能明显降低模型动物的血清CIC，升高IgA；不同程度升高IgG，不同程度降低IgM。提示天藤通肾络颗粒可纠正慢性肾炎所致主要免疫球蛋白水平的异常，减少CIC的生成或促进其从血液中消除。

3.2.2.3对血液凝血功能的影响

由表-4可见，与空白组相比，模型组动物的FIB含量显著增高、时间明显缩短，TT明显延长、APTT和PT变化不明显，表明由C-BSA介导的慢性肾炎模型大鼠血液中纤维蛋白原含量的明显增加使血液处于高凝状态，与慢性肾炎病人的临床观察结果一致。

连续给药35d，照醋酸泼尼松5.0mg/kg和肾复康胶囊0.9g/kg，能明显降低模型大鼠的FIB含量、延长FIB时间、缩短TT，对APTT有缩短趋势，对PT无明显影响；天藤通肾络颗粒各个剂量组均能明显降低FIB的含量、延长FIB时间，不同程度缩短TT和PT时间，中、高剂量组有延长APTT的趋势；提示天藤通肾络颗粒可调节慢性肾炎的异常凝血功能，改善血液的高凝状态。

3.2.2.4对抗氧化能力的影响

由表-5可见，与空白组相比，模型组动物血清SOD活力显著降低、MDA含量显著升高，表明由C-BSA介导的慢性肾炎模型大鼠抗氧化能力降低，间接反映肾小球的损伤程度。

连续给药35d，醋酸泼尼松5.0mg/kg组，仅有增加模型大鼠血清中SOD活力、降低MDA含量的趋势，但无统计学差异；肾复康胶囊0.9g/kg，有增加模型大鼠血清中SOD活力的趋势，还能明显降低MDA含量；天藤通肾络颗粒各个剂量组能不同程度增加模型大鼠血清中的SOD活力，明显降低MDA的含量，提示天藤通肾络颗粒可通过提高抗氧化能力，对慢性肾炎所致的肾脏损伤具有明显保护作用。

3.2.3对肾组织观察

空白对照组肾脏棕褐色；与空白对照组相比，模型对照组8例(8/13)、醋酸泼尼松组2例(2/12)肾脏表面及切面皮质颜色变浅，呈苍白色；其余各组肉眼观察未见明显异常。

由表-6可见，模型组肾脏指数显著高于空白对照组，表明由C-BSA介导的慢性肾炎大鼠肾脏明显增大，可能与肾小球损伤或肿胀有关；与模型对照组相比，醋酸泼尼松、肾复康胶囊、天藤通肾络颗粒(I)2.5、5.0g/kg组和天藤通肾络颗粒(II)5.0、10.0g/kg组的肾脏指数显著降低，天藤通肾络颗粒(I)10.0g/kg组和天藤通肾络颗粒(II)2.5g/kg组的肾脏指数亦有降低趋势。

表-1对C-BSA肾炎模型大鼠尿蛋白的影响

与空白相比：^ΔΔP＜0.01；与模型相比：^*/**P＜0.05/0.01

表-3对C-BSA肾炎模型大鼠CIC和免疫球蛋白的影响

与空白相比：^Δ/ΔΔP＜0.05/0.01；与模型相比：*/**P＜0.05/0.01

表-5对C-BSA肾炎模型大鼠抗氧化能力的影响

与空白相比：^ΔΔP＜0.01；与模型相比：*P＜0.05

表-6对C-BSA肾炎模型大鼠肾脏指数的影响

与空白相比：^ΔΔP＜0.01；与模型相比：^*/**P＜0.05/0.01

二、本发明药物组合物对大鼠阿霉素肾炎模型的影响

盐酸阿霉素(adriamycin hydrochloride，ADMh)是一种强效的抗肿瘤药物，对肾脏近曲小管有明显的损伤作用而产生直接肾毒性，可用于制造肾损伤动物模型以评价药物疗效。本试验以阿霉素制成的大鼠肾炎模型为实验对象，观察本发明药物组合物的疗效。

1实验材料

1.1受试药物

天藤通肾络颗粒I和II(试验药物，即本发明药物组合物颗粒剂)，分别按实施例1和实施例4的配比及制备方法生产，10g/袋，1袋/次，3次/日，由湖南明瑞制药有限公司生产，批号100301；肾复康胶囊(中药阳性对照)，国药准字Z22024866，0.30g/粒，4～6粒/次，3次/日，通化茂祥制药有限公司出品，批号091105；醋酸泼尼松片(化学药阳性对照)，国药准字H44021868，5.0mg/片，5～10mg/次，10～60mg/日，广东南国药业有限公司出品，批号091004。实验时，所有药品均用纯水配制成相应浓度的混悬液供动物灌胃用。

1.2实验试剂

盐酸阿霉素，国药准字H44024359，10mg/瓶，深圳万乐药业有限公司，批号0909E4，2～8℃保存，临用时用氯化钠注射液配成1mg/ml。

尿蛋白定量(CBB法，批号20090912)、隐血(邻联甲苯胺显色法，20091010)、尿蛋白定性(磺基水杨酸法，批号20090820)、NO(硝酸还原法，20090725)、SOD(黄嘌呤氧化法，20091104)、MDA(硫代巴比妥酸法，20100120)、GSH-Px(过氧化氢法，20090916)试剂盒，购自南京建成生物工程研究所。

ALT(紫外-乳酸脱氢酶法，20091102)、AST(紫外-苹果酸脱氢酶法，20090922)、TC(氧化酶法，20091213)、TG(甘油磷酸氧化酶法，20090901)、Cre(肌氨酸氧化酶法，20091124)、BUN(紫外-谷氨酸脱氢酶法，20091101)、TP(双缩脲比色法，20091208)、ALB(溴甲酚绿法，20091101)测定试剂盒，购自上海科华生物工程股份有限公司。

EDTA-2K溶液(20090712)、TXB2(放射免疫法)、6-keto-PGF1a(放射免疫法)试剂盒，北京北方生物技术研究所。

其它试剂：冰醋酸、NaOH、无水乙醇、柠檬酸钠、丙酮、甲醛等，均为国产AR。

1.3实验仪器

AL104电子分析天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；JJ2000型电子天平，常熟双杰测试仪器厂；F5810-R型台式高速冷冻离心机，德国Eppendorf；Thermo1500型酶标仪，芬兰雷勃；1575洗板机，美国BIO-Rad；TMS-1024全自动生化分析仪，日本东京株市会社；C2000-4高性能血凝仪，北京普利生仪器有限公司；FT-630G10探头r免疫计数器，北京261厂；Millipore超纯水处理系统，美国Millipore公司；828精密PH计，美国奥立龙；LDZX-40BI压力灭菌器，上海申安医疗器械厂；PYX-DHS600B II隔水电热恒温培养箱，上海跃进医疗器械厂。

1.4实验动物

选用SPF级雄性SD大鼠，体重180～220g，由由成都百康医药工业药理毒理研究院提供(生产许可证号：SCXK(川)2003-06)。

动物饲养于IVC动物实验室，温度20～25℃(日温差≤3℃)，湿度40％～70％，照明12h∶12h明暗交替，照度150～300lx，噪音≤60dB；成都中医药大学药学院动物观察室(四川省试验动物管理委员会试验动物设施条件合格证号：川实动管使第2003-015号)。

2实验方法

2.1模型制备与给药分组

将180～220g雄性SD大鼠100只在IVC动物房适应性喂养10天，选择尿蛋白定性测试结果为阴性者90只，除留10只为正常对照外，其余80只于造模首日、7日分别按3mg/kg、2mg/kg的剂量给每只大鼠尾静脉注射0.1％盐酸阿霉素溶液，空白对照组注射等容量的生理盐水。造模14、21天分别测定24小时尿蛋白，结果显示21天尿蛋白普遍升高，表明模型成功。

将造模成功的107只大鼠(24h尿蛋白总量小于20mg者淘汰)，按24h尿蛋白总量和体重均匀分为9组：模型对照组12只；化学药阳性对照醋酸泼尼松5.0mg/kg(相当于临床人用量的5倍)组11只；中药对照肾复康胶囊0.9g/kg(相当于临床人用量的10倍)组12只；天藤通肾络颗粒I(实施例1的颗粒剂)2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg剂量组(分别相当于临床人用量的5倍、10倍、20倍)各12只、天藤通肾络颗粒II(实施例4的颗粒剂)2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg剂量组(分别相当于临床人用量的5倍、10倍、20倍)各12只。各组动物每日按剂量灌胃给药一次，连续35d，容量均为10ml/kg，正常和模型对照组给予等容量纯水。

2.2观察指标及测定

2.2.2尿蛋白定量

分别收集每只动物造模前、造模14、21天及给药后7、14、21、28、35天的24h尿液，量取体积，用CBB法测定尿液中蛋白含量，计算尿蛋白总量，以mg/24h表示；于给药前、给药后14和28天，以隐血试剂盒半定量检测血尿情况。

2.2.3血液相关指标检测

给药后35天，股动脉取血5ml，4℃、4000rpm离心10min，分离血清，全自动生化分析仪测定血清AST、ALT、TC、TG、Cre、BUN、TP、ALB含量，按试剂盒方法测定血清NO、SOD、MDA、GSH-Px含量。

另取股动脉血1.35ml，加入到0.15ml柠檬酸钠抗凝剂(109mmol/L)中，置旋涡混合器上充分混匀，4℃、4000rpm离心10min，分离血浆，用C2000-4高性能血凝仪检测PT、APTT、TT、FIB。

2.2.4肾组织病理学观察

给药后35天，放血处死动物，剖取左、右肾称重后，均从肾门处纵行剖开，于右肾纵剖口处取1×1mm²肾皮质组织2块，放入1％锇酸固定液中，作为备检的电镜组织立即置于冰箱内4℃冷藏保存。剩余组织放入盛有FAA混合固定液(40％甲醛10ml，冰醋酸5ml，95％酒精50ml，蒸馏水35ml)的固定瓶中备检。解剖时仔细观察，并详细记录病变情况，包括：位置、大小、颜色、质地、包膜、光滑度、活动度、与周围组织的关系、切面情况等。

2.3统计学方法

计量资料用平均数±标准差

表示，差异显著性检验若方差齐则采用SNK检验，方差不齐采用Kruskal-Wallis检验；若差异具有统计学意义(P＜0.05)则进行组间比较，方差齐时组间比较采用LSD检验，方差不齐时组间比较采用Tamhane’s T2检验。计数资料差异显著性检验采用参照单位分析(Reference Identical Unit，Ridit)，Fisher’s确切概率法X2检验。

3实验结果及结论

3.1试验结果

见表-7、表-8、表-9、表-10、表-11、表-12、表-13和表-14。

3.2结论

3.2.1对模型大鼠尿液检测指标的影响(请根据分组的修改情况对结论部分进行相应的修改)

3.2.1.1对模型大鼠尿蛋白的影响

由表-7可见，模型动物调整分组后，各组给药前24h尿蛋白水平大致均匀，并显著高于空白对照组，表明给药前各模型组肾脏的损伤程度大致相当。

给药7d，模型组24h的尿蛋白总量持续升高，各给药组测定结果均低于模型对照组，以天藤通肾络颗粒(I)高剂量组(10.0g/kg)作用显著，比模型对照降低24.78％，其余各组仅有降低趋势而无统计学差异。

给药14d，模型组24h的尿蛋白总量持续升高，各给药测定结果均低于模型对照组，但仅有降低趋势而无统计学差异，其中天藤通肾络颗粒(I)和天藤通肾络颗粒(II)高剂量组(10.0g/kg)的降幅接近统计学差异。

给药21d，模型组24h的尿蛋白总量持续升高，各给药测定结果均低于模型对照组，以天藤通肾络颗粒(I)和天藤通肾络颗粒(II)的高剂量组(10.0g/kg)组作用显著，分别比模型对照降低24.53％和25.77％，其余各组仅有降低趋势而无统计学差异。

给药28d，模型组24h的尿蛋白总量持续升高，比给药前增加了44.88％；肾复康组表现出降低趋势，其余各给药组均能显著降低模型大鼠24h的尿蛋白。

给药35d，模型对照组24h尿蛋白与28d相比有所回落，但与21d基本相当；醋酸泼尼松组、天藤通肾络颗粒(I)和天藤通肾络颗粒(II)高剂量组(10.0g/kg)、中剂量组(5.0g/kg)、低剂量组(2.5g/kg)均能显著降低模型大鼠24h的尿蛋白。

对模型动物尿蛋白的动态测定结果表明，天藤通肾络颗粒高剂量组给药7天即可明显减轻阿霉素肾炎所致的蛋白尿，随着给药时间的继续，各组作用强度增加，至28d时高、中、低三个剂量组均产生明显的降低尿蛋白作用。

3.2.1.2对模型大鼠尿隐血的影响

由表-8可见，各组给药前24h尿隐血程度大致相当，并显著高于空白对照组，表明给药前各模型组肾脏的损伤程度大致均匀。

由表-9可见，给药14d，模型组24h的尿隐血程度加重，+++者已由给药前的0只增加至6只动物，表明阿霉素肾炎模型大鼠的肾脏损伤呈进行性加重；各给药组的半定量测定结果均低于模型对照组，其中除醋酸泼尼松组外，所有给药组与模型对照组相比，均有显著差异。

由表-10可见，给药28d，模型组24h的尿隐血程度明显高于空白对照组，除醋酸泼尼松表现出降低趋势外，天藤通肾络颗粒的各个剂量组和肾复康胶囊组均能显著减轻模型大鼠24h的尿隐血。

对模型动物尿隐血的动态测定结果表明，天藤通肾络颗粒各组给药14天即可明显减轻阿霉素肾炎所致的血尿，随着给药时间的继续，作用持续，至28d时2.5、5.0、10.0g/kg三个剂量组仍能明显减轻模型动物的血尿。

3.2.2对血液相关指标的影响

3.2.2.1对血液生化的影响

由表-11可见，与空白组相比，模型组动物的血清ALT、TC、TG、A/G显著升高，TP显著下降，Cre、BUN有升高趋势，ALB和AST无明显影响；表明由阿霉素引起的肾炎模型大鼠同时并发高脂血症和低蛋白血症，但对肾功能影响不大；连续给药35d，与模型对照组相比，除醋酸泼尼松组对TC有降低、对TG有升高趋势外，其余各组对TC无明显影响、对TG有不同程度降低趋势，天藤通肾络颗粒10.0g/kg对TG的降低作用接近统计学差异；醋酸泼尼松有增加而肾复康胶囊、天藤通肾络颗粒有降低BUN的趋势；各给药组对Cre均无明显影响，对TP无回升趋势；提示醋酸泼尼松和天藤通肾络颗粒对模型动物的高血脂有一定降低作用，但对低蛋白血症无明显影响。

3.2.2.2对凝血功能的影响

由表-12可见，与空白对照相比，模型组FIB含量显著增高、TT明显延长、APTT有缩短趋势，表明阿霉素肾炎模型大鼠的凝血功能有异常改变；连续给药35d，醋酸泼尼松和肾复康胶囊能明显缩短PT、延长APTT时间，有降低FIB含量和缩短TT的趋势；天藤通肾络颗粒各个剂量组均能明显延长APTT时间，缩短TT时间，不同程度降低FIB含量，提示天藤通肾络颗粒对阿霉素肾炎模型大鼠的异常凝血功能有调整作用。

3.2.2.3对抗氧化能力的影响

由表-13可见，与空白对照组相比，模型组动物血清MDA含量显著升高，GSH-PX和SOD活力无明显变化；连续给药35d，醋酸泼尼松、肾复康胶囊0.9g/kg和天藤通肾络颗粒5.0g/kg剂量组，对血清MDA有降低趋势，但对GSH-PX和SOD活力无明显影响。

3.2.3对模型大鼠肾组织的观察

由表-14可见，模型组肾脏指数显著高于空白对照组，表明阿霉素肾炎模型大鼠的肾脏明显增大，可能与肾脏损伤或肾小管肿胀有关；与模型对照组相比，各给药组大鼠的肾脏指数无明显影响。肉眼观察除模型组外，所有动物肾脏外观均未见明显异常。

表-8阿霉素肾炎模型大鼠给药前尿隐血情况

与空白相比：^ΔP＜0.05；与模型相比：P＞0.05

表-9给药14天对霉素肾炎模型大鼠尿隐血的影响

与空白相比：ΔP＜0.01；模型相比：^**P＜0.01

表-10给药28天对阿霉素肾炎模型大鼠尿隐血的影响

与空白相比：ΔΔP＜0.01；与模型相比：**P＜0.01

表-13对阿霉素肾炎模型大鼠抗氧化能力的影响

与空白相比：^ΔΔP＜0.01；与模型相比：P＞0.05

表-14对阿霉素肾炎模型大鼠肾脏指数的影响

与空白相比：^ΔΔP＜0.01；与模型相比：P＞0.05

三、本发明药物的动物急性毒性试验研究

1.试验目的

观察受试药物天藤通肾络颗粒(本发明药物，发明人对上述各实施例1和4的药物组合物分别进行了考察)1次大剂量给予动物后所产生的急性毒性反应和死亡情况。或在受试药物未测出LD50值时，测定其最大给药量。

2.实验材料

2.1药物

天藤通肾络颗粒I组和II组(试验药物，即本发明药物组合物颗粒剂)，分别按实施例1和实施例4的配比及制备方法生产，10g/袋，1袋/次，3次/日，由湖南明瑞制药有限公司生产，批号100301。成人(60kg)每日服用天藤通肾络颗粒量为30g，天藤通肾络颗粒I每g颗粒含原生药3.25g，即成人每日服用量为1.625g原生药/kg体重。天藤通肾络颗粒II每g颗粒含原生药3.22g，即成人每日服用量为1.61g原生药/kg体重大鼠给药体积为2ml/100g体重，实验时用蒸馏水配制成混悬液灌胃。

2.2动物

SD大鼠，一级，体重180～220g，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物质量合格证：scxk(川)2004-15。实验时在成都中医药大学药学院动物观察室(四川省实验动物管理委员会实验动物设施条件合格证号：川实动管使第2003-015号)观察及饲养。

4.方法与结果

因受天藤通肾络颗粒药物浓度和体积的影响，一次给药无法测出其LD50，按要求，依据动物能耐受的最大浓度、最大体积的药量一次或一日内连续给予2-3次的规定，选取健康SD大鼠60只，按体重分层随机分为对照组和药物组(包括天藤通肾络颗粒I组和II组，即分别对应实施例1和实施例4的药物组合物)，每组20只动物，实验前动物禁食不禁水12小时，药物I组每只大鼠灌胃给予浓度为278.6％的天藤通肾络颗粒(I)药液2ml/100g体重/次，药物II组每只大鼠灌胃给予浓度为288.2％的天藤通肾络颗粒(II)药液2ml/100g体重/次，24小时内给药2次，对照组同法处理，给予蒸馏水，然后按常规饲养，观察7天。

结果表明，大鼠灌胃给药后，与对照组比较，无异常症状表现，在饲养观察期间，食量、活动、大小便均正常，饲养7天后所有动物的体重均正常增加，大鼠体重为248.6±14.2g。脱颈椎处死动物，系统尸解，肉眼观察重要脏器(心、肝、脾、肺、肾)，均无异常发现。

经计算，大鼠灌胃给药天藤通肾络颗粒(I)的最大给药量为362.18g(原生药)/Kg/日，采用最大耐受倍数公式计算，该剂量为成人(60Kg)临床日用量(1.625g/Kg/日)的222.88倍。大鼠灌胃给药天藤通肾络颗粒(II)的最大给药量为371.20g(原生药)/Kg/日，采用最大耐受倍数公式计算，该剂量为成人(60Kg)临床日用量(1.61g/Kg/日)的230.56倍。

5.结论

经大剂量灌胃给药测定其急性毒性，结果显示大鼠灌胃给药天藤通肾络颗粒(I)的最大给药量为362.18g(原生药)/Kg/日，采用最大耐受倍数公式计算，该剂量为成人(60Kg)临床日用量(1.625g/Kg/日)的222.88倍。大鼠灌胃给药天藤通肾络颗粒(II)的最大给药量为371.20g(原生药)/Kg/日，采用最大耐受倍数公式计算，该剂量为成人(60Kg)临床日用量(1.61g/Kg/日)的230.56倍，表明天藤通肾络颗粒在临床治疗量时安全。

综上所述，药效学试验结果表明：天藤通肾络颗粒可明显减轻阳离子化牛血清蛋白(C-BSA)所致的大鼠原位免疫复合物型慢性肾炎的蛋白尿，纠正低蛋白血症、高脂血症和主要免疫球蛋白水平的异常，减少CIC的生成或促进其从血液中消除，调节慢性肾炎的异常凝血功能，改善血液的高凝状态，并可通过提高抗氧化能力，对肾脏损伤进行保护。同时，天藤通肾络颗粒可明显降低阿霉素肾炎大鼠的蛋白尿，减轻模型动物的血尿，调节异常凝血功能，并对血清MDA有降低趋势。

而急性毒性试验结果表明：天藤通肾络颗粒在临床治疗量时是非常安全的。

Claims (14)

1.一种治疗慢性肾炎的药物组合物，由以下重量份配比的原料药材制成：

络石藤8-30份，僵蚕0.5-12份，水蛭0.3-10份，鱼腥草8-35份，萆薢3-30份，水红花子3-30份，黄芪3-30份，土牛膝1-25份。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的原料药材的重量份配比为：

络石藤10-25份，僵蚕1-10份，水蛭0.5-6份，鱼腥草10-30份，萆薢5-25份，水红花子5-25份，黄芪5-25份，土牛膝2-20份。

3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于：

所述的原料药材的重量份配比为：

络石藤15-20份，僵蚕2-7份，水蛭0.8-5份，鱼腥草15-25份，萆薢10-20份，水红花子10-20份，黄芪10-20份，土牛膝5-15份。

4.根据权利要求1－3中任何一项所述的药物组合物，其特征在于：

所述的原料药材的重量份配比为：

络石藤15-20份，僵蚕1-5份，水蛭0.5-3份，鱼腥草15-25份，萆薢10-20份，水红花子10-20份，黄芪10-20份，土牛膝5-15份。

5.根据权利要求1－4中任何一项所述的药物组合物，其中药物组合物是颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、合剂、口服液、或糖浆剂形式的药物。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中，丸剂是滴丸。

7.制备权利要求1-4中任一项所述的药物组合物的方法，该方法包括以下步骤：

所述配比用量的僵蚕和水蛭分别单独粉碎、然后将粉料进行混合后过筛或过筛后混合，或者两者一起被粉碎然后过筛，从而制得第一种细粉；

所述配比用量的络石藤、鱼腥草、萆薢、水红花子、黄芪和土牛膝分别进行提取，或这六种原料中以各种组合进行提取，从而获得一种或两种或多种提取物和任选的挥发油，所得提取物任选地进行浓缩和任选地进行干燥和/或粉碎；

和

将所获得的第一种细粉与以上所获得的提取物和任选的挥发油进行混合，获得药物组合物。

8.根据权利要求7的方法，包括下述主要步骤：

（1）、粉碎：将所述配比的僵蚕和水蛭粉碎，过100目筛，得细粉Ⅰ备用；

（2）、乙醇提取：将所述配比的络石藤和水红花子加30-95wt%的乙醇回流提取2～3次，每次1～2小时，每次按药材重量的4～8倍体积量加乙醇，滤过，合并滤液，回收乙醇，将回收乙醇后的药液浓缩成60℃热测其相对密度为1.05～1.35的膏状，喷雾干燥，或者干燥后粉碎，得细粉Ⅱ，备用；

（3）、水煮提取：将所述配比的鱼腥草、萆薢、黄芪、土牛膝加水煎煮2～3次，每次1～2小时，每次按药材重量的6～10倍体积量加水，同时收集挥发油；将水煮液滤过，合并滤液，浓缩成60℃热测其相对密度为1.05～1.35的膏状，喷雾干燥，或者干燥后粉碎，得细粉Ⅲ，备用；收集的挥发油加β-环糊精包结，得挥发油包结物，备用；

（4）、制剂：取上述步骤（1）、（2）、（3）得到的细粉Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和挥发油包结物，混匀，按照不同剂型药物的常规制剂方法，制成制剂，即得。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：

所述的步骤（2）和步骤（3）中，将药液浓缩时，浓缩成60℃热测其相对密度为1.05～1.20的清膏，喷雾干燥成干膏粉，备用。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：

所述的步骤（2）和步骤（3）中，将药液浓缩时，浓缩成60℃热测其相对密度为1.30～1.32的稠膏，干燥成干膏，再粉碎成细粉，备用。

11.根据权利要求7的方法，包括下述主要步骤：

（1）、粉碎：将所述配比的僵蚕和水蛭粉碎，过100目筛，得细粉Ⅰ备用；

（2）、水煮提取：将所述配比的络石藤、水红花子、鱼腥草、萆薢、黄芪、土牛膝加水煎煮2～3次，每次1～2小时，每次按药材重量的6～10倍体积量加水，同时收集挥发油；将水煮液滤过，合并滤液，浓缩成60℃热测其相对密度为1.05～1.35的膏状，喷雾干燥，或者干燥后粉碎，得细粉Ⅱ，备用；收集的挥发油加β-环糊精包结，得挥发油包结物，备用；

（3）、制剂：取上述步骤（1）、（2）得到的细粉Ⅰ、Ⅱ和挥发油包结物，混匀，按照不同剂型药物的常规制剂方法，制成制剂，即得。

12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于：

所述的步骤（2）中，将药液浓缩时，浓缩成60℃热测其相对密度为1.05～1.20的清膏，喷雾干燥成干膏粉，备用。

13.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于：

所述的步骤（2）中，将药液浓缩时，浓缩成60℃热测其相对密度为1.30～1.32的稠膏，干燥成干膏，再粉碎成细粉，备用。

14.权利要求1－4中任何一项的药物组合物用于制备治疗慢性肾炎的药物的用途。