CN102488900B - 癸酸二乙醇酰胺及类似物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及癸酸二乙醇酰胺及其类似物的应用，具体涉及癸酸二乙醇酰胺及其类似物（月桂酸二乙醇酰胺）在促大分子物质吸收方面的应用。本发明所涉及的癸酸二乙醇酰胺及其类似物（月桂酸二乙醇酰胺）的结构通式如下图（Ⅰ和Ⅱ）所示。图Ⅱ中R基团可以是碳数为1-12的直链及支链烷基。该类化合物结构稳定，配以适当药用辅料可制成临床上可以接受的各种剂型。促大分子物质吸收实验结果表明，该类化合物具有较强的促大分子物质吸收活性，其优点在于活性强，用药剂量小等。本发明所述的癸酸二乙醇酰胺及其类似物，可用于大分子物质的给药的促渗剂应用。式Ⅰ

Description

癸酸二乙醇酰胺及类似物的应用

技术领域：

本发明属于医药技术领域，涉及癸酸二乙醇酰胺及其类似物的应用，具体涉及癸酸二乙醇酰胺及其类似物体内促大分子物质吸收方面的应用。

背景技术：

随着生物技术的发展，活性大分子药物如多肽，蛋白质在临床上的应用越来越广泛，相应的药剂研究也日益受到重视。但在正常情况下，大多数多肽及蛋白质药物不能或很少经胃肠道吸收，因为其相对分子质量大，脂溶性差，难以通过生物膜屏障，且胃肠道内存在大量的肽水解酶和蛋白水解酶可以降解多肽及蛋白质。以肝素，重组人体生长激素（rhGH）等为代表的大分子药物比较难吸收入血，因此如何提高这些大分子物质的体内吸收就成了当下亟待解决的问题。以癸酸二乙醇酰胺及其类似物为辅剂的药物可以弥补大分子药物不易吸收入血这些不足，同时促进药物的吸收 ,提高药物生物利用度。

发明内容：

本发明的目的在于提供以癸酸二乙醇酰胺及其类似物为辅剂，解决以肝素，重组人体生长激素（rhGH）等为代表的大分子药物吸收入血难的问题。

本发明的目的在于提供以癸酸二乙醇酰胺及其类似物为辅剂，提高肝素，重组人体生长激素（rhGH）等为代表的大分子药物体内生物利用度的问题。

本发明的癸酸二乙醇酰胺如式I所述：

式I。

本发明的癸酸二乙醇酰胺类似物的通式如式II所述：

式II。

本发明的癸酸二乙醇酰胺及癸酸二乙醇酰胺类似物可以通过以下方法制备：

将1mol癸酸或其类似物（如式Ⅲ所示, R可以是碳数为1-12的直链或者支链烷基，R为碳数为9的直链烷基时即为癸酸）加入50ml三颈瓶中，在氮气保护下加热到110℃左右，加入0.6mol二乙醇胺，升温至150℃。在此温度下反应4小时，停止加热，自然降温至70℃，再投入0.5mol二乙醇胺和0.5%（wt）的KOH催化剂，搅拌至反应物的胺值不再改变为终点。终点通过盐酸标准溶液滴定测得，所得产物为淡黄色软膏。注：wt为反应物质量之和。

       

      式 Ⅲ。

本发明中的癸酸二乙醇酰胺或其类似物结构稳定。药理学实验表明，该类化合物在促进以肝素，重组人体生长激素（rhGH）为代表的大分子药物直肠吸收方面，有较强的活性，且结构稳定，配以药用辅料可以制成临床上可以接受的各种剂型。

附图说明：

图1为APTT实验柱形图。

图2为RTT实验柱形图。

图3为给予单体重组人体生长激素（rhGH）的药时曲线图。

图4为给予单体重组人体生长激素（rhGH）加癸酸二乙醇酰胺的药时曲线图。

图5为给予单体重组人体生长激素（rhGH）加月桂酸二乙醇酰胺的药时曲线图。

图6为给予重组人体生长激素（rhGH）不同组分的实验柱形图。

具体实施方式：

     下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1: 大分子药物肝素体内促吸收实验

( 1 ) 实验动物：

健康雄性Wistar 大鼠30只，每只体重220~250g，随机分为5组，每组6只。〔购自沈阳药科大学动物中心，试验动物生产许可证号：SCXK（辽）2003-008；试验动物使用许可证号：SYXK（辽）2003-0012〕。试验期间自由饮水，大鼠给药试验前禁食12 h。

( 2 ) 直肠给药液的制备：

Blank ：生理盐水6ml。

Postive : 将5毫升普通肝素（规格12500U/2ml）、2毫升1, 2-丙二醇（促渗剂），500mg水杨酸钠（阳性对照药）以蒸馏水调至10毫升，超声10分钟混匀，作为试验样品（置37度水浴锅中保温）。

Group 1 : 将5 毫升普通肝素（规格12500U/2ml）、2 毫升1, 2-丙二醇（促渗剂），以蒸馏水调至10 毫升，超声10分钟混匀，作为试验样品（置37度水浴锅中保温）。

Group 2 : 将5毫升普通肝素（规格12500U/2ml）、2毫升1, 2-丙二醇（促渗剂），500 mg癸酸二乙醇胺（准品））以蒸馏水调至10毫升，超声10分钟混匀，作为试验样品（置37度水浴锅中保温）。

Group 3 : 将5毫升普通肝素（规格12500U/2ml）、2毫升1, 2-丙二醇（促渗剂），500 mg月桂酸二乙醇胺（准品））以蒸馏水调至10毫升，超声10分钟混匀，作为试验样品（置37度水浴锅中保）。  

( 3 ) 血浆样品制备：

1）首先用乙醚将大鼠麻醉，大鼠体重每只约为重220～250g。

2）将样品（1）-（5），按1毫升/250克（大鼠重量）的剂量，通过30ml长、8fr.的导尿管进行直肠给药。

3）大鼠给药45min后，眼眶取血3ml。按9:1加入3.2%的柠檬酸钠进行抗凝。

( 4 ) 实验步骤：

复钙时间(RTT)试验：

取0.05毫升（50微升）的3.2% 的柠檬酸钠置1毫升的离心管中，再加入0.45毫升大鼠血（用毛细管进行大鼠眼眶取血），置离心机中离心15分钟左右（转速为4000RPM），取上清液。

取上清液0.1毫升置小试管中，再加入1毫升的NaCl，轻摇混匀。置37度的水浴锅中保温2分钟。再加入预先在37度保温的CaCl₂ 0.1毫升混匀。在加入CaCl₂的同时用秒表开始计时。试管仍浸于水浴中，至约10秒钟时，自水浴中取出，在纱布上迅速擦去试管外水滴，在明亮处不断倾斜试管，在流动状态下观察有无纤维蛋白形成。一旦见到纤维蛋白（同时将出现液体流动减慢），立即停表，记录时间。每次测定二管，按平均数报告.（图1）

 APTT试验：

按APTT检测试剂说明书进行操作：吸取枸橼酸抗凝血浆0.1mL，加入一小试管中：加入凝血活酶试剂0.1mL混匀后置37℃水浴中。再加入25mmol/L CaCl2液0.1mL，文章来自临床实验室仪器信息网立即开动秒表计时。至规定的接触活化时间(各商品要求不同)终了时，加入预温37℃的CaCl₂液一份，混匀，同时开动秒表。至出现血浆凝固时，停表，记录血浆凝固时间以秒计。（图2）

实验结果表明：癸酸二乙醇酰胺及其类似物具有明显的促大分子物质（以肝素为代表）直肠吸收的作用。(表 1)

实施例 2：大分子药物重组人体生长激素（rhGH）体内促吸收实验

（1）实验动物：

健康雄性Wistar 大鼠18 只，每只体重220～250g，随机分为3组，每组6只。〔购自沈阳药科大学动物中心，试验动物生产许可证号：SCXK（辽）2003-008；试验动物使用许可证号：SYXK（辽）2003-0012〕。试验期间自由饮水，大鼠给药试验前禁食12 h。

（2）灌胃液的制备：

Group 1 ：称取重组人体生长激素（rhGH,粉剂）20 mg,，加水稀释成 rhGH 含量为 1mg/ml.。

Group 2 ： 称取重组人体生长激素（rhGH,粉剂）20 mg,，癸酸二乙醇酰胺500 mg ，加水稀释成 rhGH，癸酸二乙醇酰胺含量分别为为1mg/ml.，25mg/ml。

Group3 ： 称取重组人体生长激素（rhGH,粉剂）20 mg,，癸酸二乙醇酰胺500 mg ，加水稀释成 rhGH，月桂酸二乙醇酰胺含量分别为为1mg/ml, 25mg/ml。

（3）大鼠血浆样品中重组人体生长激素（rhGH）分析方法的建立

色谱条件

色谱柱： Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，Phenomenex公司）；

流 动 相： 乙腈：0.1%三氟乙酸水 梯度洗脱

洗脱梯度： 采用二元梯度洗脱系统，溶剂 A （乙腈）－溶剂 B（0.1%三氟乙酸水）梯度洗脱，梯度程序如下：

Time(min)      A%        B%

0           5          95

30          50         50

流速：1.0 mL·min-1

柱温：常温

进样量： 10 μ L

质谱条件

离子源为电喷雾电离源 (ESI 源）；接口温度为400 ℃ ； CDL 温度 250 ℃ ；加热块温度200 ℃ ；雾化气（N 2）流速 2.5 L/min ；干燥气（N 2）流速 2.0 L/min ；检测电压 1.5 kv ；正离子方式检测；扫描方式为选择离子监测（SIM），用于定量分析的离子分别为 m/z 22124 （重组人体生长因素 rhGH）和 m/z 164.08 (内标 苯丁酸） 。

（4）溶液的制备

标准溶液的制备 取重组人体生长激素（rhGH），精密称定，置5 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1.0 mg·mL^-1的储备液。分别精密量取储备液适量，用甲醇稀释制成重组人体生长激素（rhGH）为1.0, 2.5, 5.0, 10, 20,50, 100, 和 250 ng/ml的系列标准溶液，于4 ℃冰箱保存，备用。

内标溶液的制备 取苯丁酸约5.0 mg，精密称定，置5 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为50 ng·mL^-1 的内标溶液，于4 ℃冰箱保存，备用。

血浆样品的预处理(1.1.1)

取大鼠血浆 100 μ L ，置于 1.5 mLEP 管中，加入甲醇 200 μ L ，乙腈 300 μ L，内标溶液 10 μ L（50 ng·mL^-1 ，甲醇溶解），涡旋 3 min ， 12000 × g ,4 ℃ 离心 10 min 后取上层，40 ℃ 水浴下 氮气吹干，残留物用 100 μ L 甲醇溶解，超声 1 min ，涡旋 1 min ， 4000 × g 离心 5 mi n 后，取 20 μ L 注入液质联用仪，记录色谱图。

（5）健康大鼠灌胃给予不同提取液后血浆中重组人体生长激素（rhGH）的测定

血浆样品的采集与预处理

取健康雄性Wistar 大鼠18只，随机分成3个给药组，每组6 只。试验前禁食12 h，自由饮水。以2mL·kg^-1 剂量分别灌胃给药，每组大鼠给予相同灌胃液，间隔时间点取血。分别于给药前（0 min）和给予单体重组人体生长激素（rhGH）水溶液后，给予单体重组人体生长激素（rhGH）和癸酸二乙醇酰胺水溶液后，给予单体重组人体生长激素（rhGH）和月桂酸二乙醇酰胺水溶液后，后 0, 0.25, 0.5, 1.0, 1.5 h ，由眼眶后静脉丛取血约0.3 mL，置肝素抗凝离心管中，混匀，离心（4000 r·min-¹）10 min，分取血浆，于-20 ℃冷冻保存，备用。取各采血时间点血浆100μL，按照“１.1.1”项下“血浆样品的预处理”方法操作，进样分析结果见 (表2 )。

药动学研究结果

不同给药组不同时间重组人体生长激素（rhGH）平均药-时曲线见图3-5。灌胃给予重组人体生长激素（rhGH）加癸酸二乙醇酰胺，灌胃给予重组人体生长激素（rhGH）月桂酸二乙醇酰胺后，其药时曲线最高点的血药浓度均大于单独灌胃给予重组人体生长激素（rhGH），且增加的比较明显。实验结果表明癸酸二乙醇酰胺及其类似物具有明显的促大分子物质（以重组人体生长激素 rhGH 为代表）吸收的作用,结果见（图 6）。

Claims (4)

1.癸酸二乙醇酰胺及类似物在制备促大分子物质直肠吸收药物中的应用，其中，所述的癸酸二乙醇酰胺类似物的结构如（II）所示：

（II ）                                          。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的癸酸二乙醇酰胺的结构如（I）所示：

    （I）                        。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的癸酸二乙醇酰胺及类似物还包括其盐酸盐，硫酸盐，磷酸盐。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的癸酸二乙醇酰胺及类似物，可以和药学上可以接受的赋形剂混合，制成临床上接受的各种制剂。

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