CN102481288B - 含氨基酸稳定剂的替莫唑胺药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了含氨基酸稳定剂的替莫唑胺药物组合物及其制备方法。所述药物组合物包含替莫唑胺或其药学上可接受的盐以及至少一种氨基酸稳定剂。所述的氨基酸稳定剂选自一种或多种L-丙氨酸、L-甘氨酸、半胱氨酸类似物或它们的药学上可接受的盐。制备所述药物组合物的方法包括将替莫唑胺或其可药用盐与至少一种氨基酸稳定剂均匀混合的步骤。

Description

含氨基酸稳定剂的替莫唑胺药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种稳定的替莫唑胺药物组合物，其由包含抗肿瘤药替莫唑胺或其可药用盐、至少一种氨基酸稳定剂。

背景技术

替莫唑胺(temozolomide)化学名：3，4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑并[5，1-d]-1，2，3，5-四嗪-8-酰胺，为咪唑并四嗪类具有抗肿瘤活性的烷化剂，由先灵葆雅公司开发。替莫唑胺适用于新诊断的多形性胶质母细胞瘤，开始先与放疗联合治疗，随后作为辅助治疗；替莫唑胺还适用于常规治疗后复发或进展的多形性胶质母细胞瘤或间变性星形细胞瘤。1998年替莫唑胺胶囊在欧盟首先上市，随后1999年经美国FDA批准在美国上市。替莫唑胺是目前治疗恶性脑瘤的一线药物，被美国与欧洲医学界评定为治疗恶性脑瘤的“金标准”。

目前国内替莫唑胺上市制剂为硬胶囊，口服制剂使用方便，口服后可被完全吸收，生物利用度高达98％，主要的副作用为恶心、呕吐、乏力、便秘和轻度的骨髓抑制，其中重度恶心、呕吐等副反应常见。这常常造成药物吸收的波动，从而影响生物利用度。一些患者恶心、呕吐反应过于严重而难以通过口服给药，并且在临床上有很多患者吞咽困难，不能通过口服给药，临床急需能够静脉给药的替莫唑胺制剂。但是替莫唑胺在pH＜7下稳定，pH＞7时易分解，替莫唑胺作为前体药物，在水溶液中易降解为活性产物，制备成为常规的静脉注射液不能保证长期稳定性。

为实现替莫唑胺的非胃肠道给药，美国专利US6251886中公开了一种以微粒化的悬浮液给药的替莫唑胺制剂，但是，悬浮制剂并不理想，它可以导致血管堵塞。考虑到替莫唑胺在水溶液中不稳定的特性，因此将其通过冷冻干燥固化而制备成为无菌冻干粉临用前将其使用注射用的水性稀释剂重建得到能够非胃肠道给药的替莫唑胺注射剂，将是一个很好的策略。

此外，美国专利US6987108公开了一种替莫唑胺的冻干粉针剂，用于替莫唑胺的静脉注射给药。上述替莫唑胺的冻干粉在长期和加速条件下颜色能够由白色变为淡粉色，这预示着其质量或者稳定性可能存在一定问题。而冻干粉颜色的改变，易使患者怀疑药品的质量，而降低病人的依从性和认可度。因此需要研究开发一种能够保证替莫唑胺非胃肠道给药，稳定的并且适合长期保存的技术及其制剂。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种稳定的替莫唑胺药物组合物，以及其制备方法。发明人通过研究发现一些氨基酸有提高替莫唑胺稳定性的作用。

本发明提供一种药物组合物，其特征在于包含替莫唑胺或其药学上可接受的盐，以及至少一种氨基酸稳定剂，其中所述的氨基酸稳定剂选自一种或多种L-丙氨酸、L-甘氨酸、半胱氨酸类似物或它们的药学上可接受的盐，其中半胱氨酸类似物为具有半胱氨酸主结构的氨基酸。进一步，所述的药物组合物还包含至少一种水性稀释剂。

半胱氨酸结构如下：

半胱氨酸类似物可以在半胱氨酸的结构上进行结构修饰，修饰位点为巯基、羧基和氨基。即半胱氨酸类似物都具有以下半胱氨酸主体结构：

具体的半胱氨酸类似物选自L-半胱氨酸、L-半胱氨酸盐酸盐、乙酰半胱氨酸、S-羧甲基-L-半胱氨酸、L-半胱氨酸乙酯、L-半胱氨酸甲酯的一种或多种，优选该类似物为L-半胱氨酸、L-半胱氨酸盐酸盐或乙酰半胱氨酸，更优选L-半胱氨酸或L-半胱氨酸盐酸盐，其中L-半胱氨酸盐酸盐包括其无水物和水合物，如L-半胱氨酸盐酸盐一水合物。

可以利用本发明提供的替莫唑胺和氨基酸稳定剂的药物组合物制备可注射的胃肠外用药物制剂，特别是冻干粉形式的药物制剂。

基于本发明的氨基酸稳定剂对替莫唑胺有稳定效果，本领域技术人员可以认识到，只要添加本发明的氨基酸稳定剂就会对替莫唑胺有稳定作用。较好的实施方式是以替莫唑胺计，替莫唑胺或其药学上可接受的盐与氨基酸稳定剂之间的重量比满足以下关系：

氨基酸稳定剂：替莫唑胺或其药学上可接受的盐的重量比大于0.5：1；

优选氨基酸稳定剂：替莫唑胺或其药学上可接受的盐的重量比大于0.8：1；

更优选氨基酸稳定剂：替莫唑胺或其药学上可接受的盐的重量比大于1.2：1；

最优选氨基酸稳定剂：替莫唑胺或其药学上可接受的盐的重量比大于1.6：1。

药物组合物可以包含赋形剂、润湿剂、pH调节剂或缓冲剂中的一种或多种，优选赋形剂为甘露醇；所述的润湿剂为聚山梨醇酯；所述的pH调节剂为盐酸；所述的缓冲剂选自枸橼酸钠、醋酸或醋酸盐。

本发明提供了以下两种具体实施方式，药物组合物含有以下重量比的组分，或由以下重量比的组分组成：

实施方式1

实施方式2

以替莫唑胺计的替莫唑胺或其盐           2.5份

L-半胱氨酸盐酸盐计的L-半胱氨酸或其盐   4份

甘露醇                                 15份

另外，本发明还提供了药物组合物的制备方法。所述的制备方法包括将替莫唑胺或其可药用盐与至少一种氨基酸稳定剂均匀混合的步骤。

具体的，本发明的制备方法包括下列步骤：

1)将至少一种氨基酸稳定剂溶解在水性稀释剂中形成溶液，优选溶液温度控制在0-60℃；

2)将替莫唑胺或其药学上可接受的盐加入上述溶液中溶解。

上述制备方法，具体包括以下步骤：

1)称取处方量的稳定剂，以及任选的润湿剂、赋形剂或缓冲剂，搅拌溶解在水性稀释剂中；

2)称取处方量的替莫唑胺或其可药用盐，搅拌溶解在上述溶液中，使用pH调节剂对溶液pH值进行调整；

优选pH为2.0至6.0，更优选为2.5至4.5，最优选为3.5至4.0；

3)加入水性稀释剂至最终体积，搅拌均匀。

上述制备方法中所使用的水性稀释剂选自水、生理盐水、5％的右旋糖溶液或它们的混合物。

制备本发明的药物组合物，可以进一步制备成冻干粉制剂，将替莫唑胺或其可药用盐和稳定剂的混合溶液进行冷冻干燥。

本发明通过氨基酸稳定剂的加入，得到了能够保证替莫唑胺稳定的药物组合物。令人惊喜的发现，对于以冻干粉为代表的替莫唑胺药物组合物，盐酸半胱氨酸一水合物为代表的氨基酸稳定剂提高了替莫唑胺的稳定性，这种稳定性不仅表现在能够保证替莫唑胺的含量和有关物质能够保持稳定，而且表现在长期和加速条件下以盐酸半胱氨酸为稳定剂的替莫唑胺组合物的颜色没有发生变化。制备得到的替莫唑胺冻干粉针剂保持白色至类白色的冻干粉外观，没有发生冻干粉颜色变为淡粉色的现象，而替莫唑胺颜色的变化是其的一个难以克服的难点，在药品的使用中，药品颜色外观的变化会极大的降低医生和病人对其的可信度与顺应性。

进一步的研究表明，这种效果是与氨基酸中的半胱氨酸结构有关，通过实验证明具有半胱氨酸主体结构的多种氨基酸都具有类似效果，例如半胱氨酸结构性质类似的物质有：L-半胱氨酸、L-半胱氨酸盐酸盐无水物、L-半胱氨酸盐酸盐一水合物、乙酰半胱氨酸、S-羧甲基-L-半胱氨酸、L-半胱氨酸乙酯盐酸盐、L-半胱氨酸甲酯盐酸，这些主体结构相同且取代基团差异较小的氨基酸等都能达到类似稳定替莫唑胺的效果。

本发明药物组合物中，其中所述的稳定剂选自L-半胱氨酸、L-半胱氨酸盐酸盐无水物、L-半胱氨酸盐酸盐一水合物、乙酰半胱氨酸或它们的混合物。优选L-半胱氨酸盐酸盐一水合物。

本发明的药物组合物，其中稳定剂的含量理论上越高越好，但是对于组合物的制备，还要考虑其冻干过程及成型等各种性质，综合组合物制备的各因素其中以组合物总重量计稳定剂的含量范围在2wt％-60wt％。优选为5wt％-30wt％；本发明的药物组合物，其中以组合物总重量计替莫唑胺或其药学上可接受的盐含量为2wt％-60wt％。优选为5wt％-20wt％。

在本发明的药物组合物制备过程中，加入至少一种水性稀释剂，所述的水性稀释剂选自注射用水、生理盐水、5％的右旋糖溶液或它们的混合物。

可用于本发明的赋形剂选自氯化钠、葡萄糖、乳糖、甘露醇、海藻糖、木糖醇、蔗糖、山梨醇、右旋糖、白蛋白、羟乙基淀粉、环糊精、甘氨酸或它们的混合物，优选为甘露醇；润湿剂选自聚山梨醇酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、胆汁盐、卵磷脂、聚乙二醇或它们的混合物，优选选自聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-80或它们的混合物，最优选为聚山梨醇酯-80；缓冲剂选自枸橼酸盐、乳酸盐、醋酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、磷酸盐或它们的混合物，优选选自枸橼酸盐、醋酸盐、磷酸盐或它们的混合物，最优选为醋酸盐或枸橼酸盐；pH调节剂选自盐酸、氢氧化钠、枸橼酸、磷酸、乳酸、酒石酸、琥珀酸或它们的混合物，优选为盐酸或醋酸。

对于赋形剂、缓冲剂、常规pH调节剂、缓冲剂，本领域技术人员根据冻干制剂制备要求可以作出选择和调整。

在本发明的可注射的胃肠外用药物制剂中，所述的赋形剂优选为甘露醇；所述的润湿剂优选为聚山梨醇酯-80；所述的常规pH调节剂优选为盐酸；所述的缓冲剂优选为枸橼酸钠、醋酸和醋酸盐。

用于本发明的术语“重量百分比”(wt％)是在药物组合物的总重量的基础上计算的。

本发明通过润湿剂的加入，改善了替莫唑胺因为水难溶性，难以被水润湿溶解的特点，增加了替莫唑胺的溶解速率，减少了整个溶液的配制时间，减少了替莫唑胺在溶液中降解的时间，从而减少了替莫唑胺的降解。

对于冻干粉针制剂而言，通过赋形剂的加入，保证了替莫唑胺冻干粉针剂最后的成形性，并且有赋形剂的保护支撑作用，使替莫唑胺冻干粉针剂重建为适宜患者给药的制剂的时间，大大减少。当赋形剂在药物组合物中使用时，以药物组合物总重量计它的wt％可以在20wt％至80wt％。

本发明通过缓冲剂和常规pH调节剂的加入，保证了替莫唑胺在溶液状态时在一个比较低的pH环境和一定的缓冲体系中，降低了其的降解速率。当缓冲剂在药物组合物中使用时，以药物组合物总重量计它的wt％可以在5wt％至60wt％。当常规pH调节剂在药物组合物中使用时，以药物组合物总重量计它的wt％可以在0.1wt％至20wt％。

本发明通过降低替莫唑胺在溶解过程和溶液状态时的降解速度，而保证了替莫唑胺在溶液状态下可以较长时间保持稳定，从而有利于其的配制，灌装，冷冻干燥等整个过程，而易于实现工业化的生产。

该制备方法中，在药液的配制过程中应适当的控制温度，以降低替莫唑胺降解。

具体实施方式

为了阐述发明，以冻干制剂的制剂形式作为实施例进行比较说明。

本发明的药物组合物通常通过下面的步骤制得：

称取处方量的稳定剂、润湿剂、赋形剂、缓冲剂，搅拌溶解在注射用水中，水为处方量的90％左右，水温控制在0-60℃。

称取处方量的替莫唑胺，搅拌溶解在上述溶液中，完全溶解后测定溶液的pH值，根据需要，调节溶液pH值至3.5-4.5。

加入注射用水至最终体积，将溶液继续搅拌至混合均匀。

将上述的溶液过滤，冷冻干燥。

实施例1

称取15.00g甘露醇，4.00g L-半胱氨酸盐酸盐一水合物，5.88g枸橼酸钠，加入900mL已冷至室温的注射用水，搅拌溶解，使用盐酸调节溶液pH为3.7，加入2.50g替莫唑胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，以下实施例中来源相同)，搅拌溶解，加水至1000mL，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，得到替莫唑胺冻干粉。

实施例2

称取15.00g甘露醇，3.00g聚山梨酯-80，4.00g L-半胱氨酸盐酸盐一水合物，5.88g枸橼酸钠，加入900mL已冷至室温的注射用水，搅拌溶解，使用盐酸调节溶液pH为3.7，加入2.50g替莫唑胺，搅拌溶解，加水至1000mL，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，得到替莫唑胺冻干粉。

实施例3

称取15.00g甘露醇，3.00g聚山梨酯-80，2.00g L-半胱氨酸，5.88g枸橼酸钠，加入900mL已冷至室温的注射用水，搅拌溶解，使用盐酸调节溶液pH为3.7，加入2.50g替莫唑胺，搅拌溶解，加水至1000mL，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，得到替莫唑胺冻干粉。

实施例4

称取15.00g甘露醇，3.00g聚山梨酯-80，4.00g乙酰半胱氨酸，5.88g枸橼酸钠，加入900mL已冷至室温的注射用水，搅拌溶解，使用盐酸调节溶液pH为3.7，加入2.50g替莫唑胺，搅拌溶解，加水至1000mL，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，得到替莫唑胺冻干粉。

实施例5

称取3.00g聚山梨醇酯-80，4.00g L-甘氨酸，10.00g甘露醇，5.67g醋酸，5.03g醋酸钠，加入900mL注射用水，于40℃水浴下搅拌溶解，加入2.50g替莫唑胺，搅拌溶解，加水至1000mL，用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，冷冻干燥，得到替莫唑胺冻干粉。

实施例6

称取3.00g聚山梨醇酯-80，4.00g L-丙氨酸，10.00g甘露醇，5.67g醋酸，5.03g醋酸钠，加入900mL注射用水，于40℃水浴下搅拌溶解，加入2.50g替莫唑胺，搅拌溶解，加水至1000mL，用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，冷冻干燥，得到替莫唑胺冻干粉。

对照例1(常规冷冻干燥处方)

称取15.00g甘露醇，5.88g枸橼酸钠，加入900mL已冷至室温的注射用水，搅拌溶解，使用盐酸调节溶液pH为3.7，加入2.50g替莫唑胺，搅拌溶解，加水至1000mL，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，得到替莫唑胺冻干粉。

对照例2

称取15.00g甘露醇，3.00g聚山梨酯-80，5.88g枸橼酸钠，加入900mL已冷至室温的注射用水，搅拌溶解，使用盐酸调节溶液pH为3.7，加入2.50g替莫唑胺，搅拌溶解，加水至1000mL，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，得到替莫唑胺冻干粉。

对照例3(美国专利US6987108实施例2)

称取15.00g甘露醇，3.00g聚山梨酯-80，4.00g L-苏氨酸，5.88g枸橼酸钠，加入900mL已冷至室温的注射用水，搅拌溶解，使用盐酸调节溶液pH为3.7，加入2.50g替莫唑胺，搅拌溶解，加水至1000mL，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，得到替莫唑胺冻干粉。

稳定性比较实验一

按照实施例2和对照例3(美国专利US6987108实施例2)配制替莫唑胺的溶液，并将配制得到的溶液冷冻干燥，制备得到替莫唑胺冻干粉针剂。使用反向高效液相色谱法(HPLC)分别测定实施例2和对照例3的冻干前溶液的溶液稳定性和冻干后的复溶后的溶液稳定性，结果见表1。

表1实施例2与对照例3(US6987108)溶液稳定性对比

表中结果表明，本发明中实施例2的替莫唑胺冻干前溶液状态的降解速率与美国专利US6987108中处方的降解速率相近，而冻干后重建后的降解速率低于美国专利US6987108中处方降解速率，从而说明本发明的处方具有更好的稳定性，L-半胱氨酸盐酸盐一水合物的加入能够保证替莫唑胺的稳定。

稳定性比较实验二

按照实施例1、2、4处方和对照例1、2、3处方配制相应的替莫唑胺溶液，冷冻干燥制备得到冻干粉。将制备的冻干粉在40℃条件下，留样考察。考察5天，10天留样后的样品外观和有关物质，有关物质使用反向高效液相色谱法(HPLC)测定，结果见表2。

表2实施例1、2、4处方和对照例1，2，3外观和有关物质考察

由表中结果可知，本发明得到的冻干粉具有更好的稳定性，实施例1、2、4中的冻干粉样品令人惊喜的发现外观均无变化，而且具有更优异的稳定性；而对照例1、2、3中的冻干粉均发生了明显的颜色外观变化，冻干粉颜色的变化说明样品可能发生了显著变化，而且样品外观的变化会降低病人用药的顺应性，甚至这预示着样品稳定性差。由上述测定结果可以看出，具有半胱氨酸主结构的氨基酸具有改善替莫唑胺稳定性的作用，其中L-半胱氨酸或其盐效果最好。

稳定性比较实验三

将按照实施例2和对照例3(美国专利US6987108实施例2)制备得到的冻干粉，分别在2-8℃，25℃和40℃条件下，以有关物质的变化为指标，对其进行稳定性留样考察，结果见表3，4。

表3美国专利US6987108实施例2得到的替莫唑胺冻干粉针剂的稳定性

表4本发明实施例2得到的替莫唑胺冻干粉针剂的稳定性

表3，4中的结果表明，本发明中制备的替莫唑胺冻干粉针剂经过6个月后仍保持稳定，稳定性优于美国专利US6987108制备的替莫唑胺冻干粉针剂的稳定性。但是美国专利US6987108制备的替莫唑胺冻干粉针剂40℃在留样期间颜色由白色或类白色变为淡粉色，并且颜色不断加深加深，25℃条件时也存在这样的现象；而本发明中得到的冻干粉颜色没有改变，保持白色至类白色不变。这一令人惊喜的结果，表明本发明制备的替莫唑胺冻干粉针剂具有更好的稳定性。

Claims (21)

1.一种药物组合物，其特征在于包含替莫唑胺或其药学上可接受的盐，以及至少一种氨基酸稳定剂，

其中所述的氨基酸稳定剂选自半胱氨酸类似物或它们的药学上可接受的盐的一种或多种，其中半胱氨酸类似物为具有半胱氨酸主结构的氨基酸，其选自L-半胱氨酸、L-半胱氨酸盐酸盐无水物、L-半胱氨酸盐酸盐一水合物；

其中所述的药物组合物还包含至少一种水性稀释剂，且所述的药物组合物为可注射的胃肠外用药物制剂。

2.一种药物组合物，其特征在于包含替莫唑胺或其药学上可接受的盐，以及至少一种氨基酸稳定剂，其中所述的氨基酸稳定剂为乙酰半胱氨酸，其中所述的药物组合物还包含至少一种水性稀释剂，且所述的药物组合物为可注射的胃肠外用药物制剂。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述的药物组合物为冻干粉形式。

4.根据权利要求2所述的药物组合物，其中以药物组合物总重量计氨基酸稳定剂的含量为2wt%-60wt%。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中以药物组合物总重量计氨基酸稳定剂的含量为5wt%-30wt%。

6.根据权利要求4或5所述的药物组合物，其中以药物组合物总重量计替莫唑胺或其药学上可接受的盐含量为2wt%-60wt%。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中以药物组合物总重量计替莫唑胺或其药学上可接受的盐含量为5wt%-20wt%。

8.根据权利要求2或3所述的药物组合物，其中以替莫唑胺计，替莫唑胺或其药学上可接受的盐与氨基酸稳定剂之间的重量比满足以下关系：

氨基酸稳定剂：替莫唑胺或其药学上可接受的盐的重量比大于0.5：1。

9.根据权利要求2或3所述的药物组合物，其中以替莫唑胺计，替莫唑胺或其药学上可接受的盐与氨基酸稳定剂之间的重量比满足以下关系：

氨基酸稳定剂：替莫唑胺或其药学上可接受的盐的重量比大于0.8：1。

10.根据权利要求2或3所述的药物组合物，其中以替莫唑胺计，替莫唑胺或其药学上可接受的盐与氨基酸稳定剂之间的重量比满足以下关系：

氨基酸稳定剂：替莫唑胺或其药学上可接受的盐的重量比大于1.2：1。

11.根据权利要求2或3所述的药物组合物，其中以替莫唑胺计，替莫唑胺或其药学上可接受的盐与氨基酸稳定剂之间的重量比满足以下关系：

氨基酸稳定剂：替莫唑胺或其药学上可接受的盐的重量比大于1.6：1。

12.根据权利要求2或3所述的药物组合物，其中所述的药物组合物还包含赋形剂、润湿剂、pH调节剂或缓冲剂中的一种或多种。

13.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述的赋形剂为甘露醇；所述的润湿剂为聚山梨醇酯-80；所述的pH调节剂为盐酸；所述的缓冲剂选自枸橼酸钠、醋酸和醋酸盐。

14.一种制备如权利要求2-13任意一项所述的药物组合物的方法，包括将替莫唑胺或其可药用盐与至少一种氨基酸稳定剂均匀混合的步骤。

15.根据权利要求14所述的方法，包括下列步骤：

1）将至少一种氨基酸稳定剂溶解在水性稀释剂中形成溶液；

2）将替莫唑胺或其药学上可接受的盐加入上述溶液中溶解。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于步骤1）中溶液温度控制在在0-60℃。

17.根据权利要求15或16所述的方法，包括以下步骤：

1）称取处方量的氨基酸稳定剂，以及任选的润湿剂、赋形剂或缓冲剂，搅拌溶解在水性稀释剂中；

2）称取处方量的替莫唑胺或其可药用盐，搅拌溶解在上述溶液中，使用pH调节剂对溶液pH值进行调整；

调整pH为2.0至6.0，

3）加入水性稀释剂至最终体积，搅拌均匀。

18.根据权利要求15或16所述的方法，其中，调整pH为2.5至4.5。

19.根据权利要求15或16所述的方法，其中，调整pH为3.5至4.0。

20.根据权利要求15所述的方法，其中所述的水性稀释剂选自水、生理盐水、5%的右旋糖溶液或它们的混合物。

21.根据权利要求15所述的方法，还包括将替莫唑胺或其可药用盐和稳定剂的混合溶液进行冷冻干燥，以得到一种冻干粉的步骤。