CN102475661A - 一种具有非酶糖基化抑制功效的中药提取物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有抑制非酶糖基化功效的中药提取物及其制备方法与应用。该中药提取物是从厚朴和马齿苋组成的中药组合物中提取得到的；所述中药组合物中厚朴和马齿苋的质量比为20-60∶40-80。制备方法如下：将厚朴和马齿苋按照比例混合，加水，煮沸提取，提取结束后冷却，过滤、离心，抽滤，取上清液，得到所述中药提取物。本发明提供的中药提取物的提取分离方法简便，所得产品纯度较高，产品质量有了很大的改进。功能测试结果表明，该提取物具有较强的抑制非酶糖基化作用的能力，同时具有亮化肌肤、改善暗哑肌肤的功效。

Description

一种具有非酶糖基化抑制功效的中药提取物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种具有非酶糖基化抑制功效的中药提取物及其制备方法与应用。

背景技术

皮肤老化的一个主要特征就是皮肤变黄和老年色斑的出现，这一变化主要与老年色素的形成有关。老年色素泛指细胞内外所有与老化相关的荧光物质及其复合成分，如眼球晶体白内障、细胞间质中黄色荧光的老化胶原组织等，另外还包括在生物化学研究中来自老化组织的荧光色素等。

老年色素主要包括生物体内的高级糖基化终末产物、脂褐素等。两种物质主要是非酶糖基化作用的结果。来自非酶糖基化(NEG)反应的羰基化合物与不同生物分子以交联或聚合的方式生成棕色、具荧光性的物质即高级糖基化终末产物，随着年龄的增加高级糖基化终末产物会逐渐累积在皮肤细胞及色素细胞上，导致皮肤发黄，产生褐斑、老年斑。

皮肤老化是一个非常缓慢的过程，高级糖基化终末产物的积累是造成随年龄增长皮肤逐渐变黄的重要因素。高级糖基化终末产物的积累以及与胶原蛋白和弹性蛋白发生交联后在某一点的堆积而形成皮肤色斑。这个过程在体内的其它组织内也时刻在进行，经年累月，造成结构蛋白的交联，功能蛋白的损伤。而且光照、辐射、糖尿病等因素能大大促进这种荧光化和褐变反应的发生。

在追求自然的今天，天然植物资源越来越受到重视。通过现代生物技术从天然植物中分离提取得到抑制NEG活性成分，已经成为延缓皮肤衰老的一个重要研究方向。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有非酶糖基化抑制功效的中药提取物及其制备方法。

本发明所提供的中药提取物是从厚朴和马齿苋组成的中药组合物中提取得到的；

所述中药组合物中厚朴和马齿苋的质量比为20-60∶40-80。

所述中药组合物中厚朴和马齿苋的质量比可进一步为30-50∶50-70。

所述中药提取物的制备方法如下：

将厚朴和马齿苋按照上述质量比混合，得到中药组合物；向所述中药组合物加水，煮沸提取，得到所述中药提取物。

所述提取过程中，中药组合物与水的质量比可为1∶(10-15)，优选为1∶10；所述煮沸提取的时间可为45-60分钟，优选60分钟。

本发明的方法还包括下述纯化步骤：提取结束后，冷却、过滤、离心、收集上清液，所述上清液即为纯化后的中药提取物。

此外，还可对所述上清液进行抽滤，进一步除去其中的不溶性杂质。

在纯化步骤中，所述冷却的终温度可为45-50℃，优选50℃。所述过滤采用纱布进行过滤，所述纱布为100-200目，优选200目。所述离心的离心转速可为4000-5000r/min，优选为4000r/min；离心的时间可为10-15分钟，优选10分钟。所述抽滤中采用助滤剂硅藻土进行抽滤。

本发明的再一个目的是提供上述中药提取物的应用。

本发明所提供的中药提取物的应用是其在制备具有非酶糖基化抑制功效的产品中的应用；或在制备化妆品中的应用，尤其是制备具有非酶糖基化抑制功效的化妆品。

含有本发明中药提取物的化妆品以及含有该中药提取物的组合物也属于本发明的保护范围。

本发明提供的制备中药提取物的方法，不需要有机试剂，提取分离方法简便，所得产品纯度较高，产品质量有了很大的改进。对本发明得到的中药提取物进行功能测试，结果表明该提取物具有较强的抑制非酶糖基化作用的能力，同时具有亮化肌肤、改善暗哑肌肤的功效。故本发明得到的提取物可作为非酶糖基化抑制剂，在制备化妆品中，尤其是制备具有通过抑制非酶糖基化作用延缓皮肤衰老功效的化妆品中，具有广泛应用。

附图说明

图1为本发明提供的中药提取物的生产工艺流程图；

图2为不同浓度的中药提取物对非酶糖基化作用的抑制率比较图；

图3为5％中药提取物对皮肤色度L值的影响效果图；

图4为5％中药提取物对皮肤色度B值的影响效果图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此。

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1、制备中药提取物

中药提取物的生产工艺流程图如图1所示，具体过程如下：

取料液比1∶10，即100g厚朴和马齿苋的混合物，其中，厚朴30克，马齿苋70克，之后加入1000mL去离子水；煮沸60min(加盖保鲜膜，减少蒸发)；停止加热，水循环冷却到50℃，200目纱布粗滤；4000r/min的转速下离心10分钟，取上清液；真空硅藻土滤饼抽滤，所得滤液即为中药提取物溶液(提取物质量浓度记为100％)；之后95℃保温30分钟，水浴降温至50℃，加入0.6％LGP液体防腐剂(全称为LIQUIDGERMALL PLUS，购自ISP国际特品有限公司)，得到产品。之后根据需要，可进行后续操作，如洗桶，消毒，灌装，装箱，打码，入库。

实施例2、制备中药提取物

中药提取物的生产工艺流程同实施例1，具体过程如下：

取料液比1∶15，即100g厚朴和马齿苋的混合物，其中，厚朴50克，马齿苋50克，之后加入1500mL去离子水；煮沸45min(加盖保鲜膜，减少蒸发)；停止加热，水循环冷却到50℃，200目纱布粗滤；5000r/min的转速下离心10分钟，取上清液；真空硅藻土滤饼抽滤，所得滤液，即为中药提取物溶液(提取物质量浓度记为100％)；之后95℃保温30分钟，水浴降温至50℃，加入0.6％LGP液体防腐剂(全称为LIQUIDGERMALL PLUS，购自ISP国际特品有限公司)，得到产品。之后根据需要，可进行后续操作，如洗桶，消毒，灌装，装箱，打码，入库。

实施例3、制备中药提取物

中药提取物的生产工艺流程同实施例1，具体过程如下：

取料液比1∶12，即100g厚朴和马齿苋的混合物，其中，厚朴40克，马齿苋60克，之后加入1200mL去离子水；煮沸55min(加盖保鲜膜，减少蒸发)；停止加热，水循环冷却到50℃，200目纱布粗滤；4000r/min的转速下离心10分钟，取上清液；真空硅藻土滤饼抽滤，所得滤液，即为中药提取物溶液(提取物质量浓度记为100％)；之后95℃保温30分钟，水浴降温至50℃，加入0.6％LGP液体防腐剂，得到产品。之后根据需要，可进行后续操作，如洗桶，消毒，灌装，装箱，打码，入库。

实施例4、中药提取物的功能测定试验

下述试验中所用的中药提取物溶液，即为实施例1制备得到的浓度记为100％的中药提取物，其它浓度的提取物是将该溶液进行相应稀释得到的。

1、抑制非酶糖基化作用能力测定

实验方法：

在抑制非酶糖基化最佳反应条件的基础上，在体系中本发明的中药提取液，检测所产生荧光物质含量的变化，从而检测该中药提取液对非酶糖基化(NEG)反应的抑制作用。

(1)实验准备：在100mL PBS(pH值为7.4)中依次加入1.7g的乙二醛，1.0g的牛血清白蛋白和0.2g的叠氮化钠，依次溶解混匀，形成反应液；取1.0mL反应液与1.0mL待测溶液混合，于37℃恒温培养箱避光孵育72h(A1管)；取1.0mL待测溶液与1.0mL PBS缓冲液混合，于37℃恒温培养箱避光孵育72h(A2管)；取1.0mL反应液与1.0mL PBS缓冲液混合，于37℃恒温培养箱避光孵育(A0管)；恒温培养箱37℃避光孵育72h。

(2)结果检测：反应体系孵育72h后检测整个体系的荧光强度，激发波长440nm，狭缝10nm，发射波长480nm，狭缝10nm，检测范围460-600nm；对各检测结果进行峰面积积分，以峰面积表示荧光产物的量进行数据处理。

(3)数据处理：计算样品对NEG的抑制作用，用抑制百分率(IR)表示：

抑制百分率IR(％)＝[1-(A₁-A₂)/A₀]×100％

A₁-添加中药提取物抑制组在460-600nm范围内的荧光峰面积；

A₂-待测中药提取物在460-600nm范围内的荧光峰面积；

A₀-空白对照组在460-600nm范围内的荧光峰面积。

抑制百分数越大表示该中药提取物对NEG的抑制效果越显著。

实验结果如图2所示。由图2可知，该中药提取物的非酶糖基化的抑制能力随浓度增加而增强，具有线性关系，质量浓度为5％的中药组合物提取液可以保持86％的抑制率。

2、皮肤色度LAB值测定

皮肤色度L值表征皮肤的亮度，L值越大表示皮肤的亮度越大，皮肤越有光泽。皮肤色度B值表征皮肤的黄度，B值越大表示皮肤的色泽越黄，肤色越暗哑。

实验方法：

(1)分别在每位志愿者的左、右手臂内侧划定区域标记受测部位(4cm×4cm)，同一手臂可同时标记多个区域，区域间隔1cm，测试样品和空白对照均随机分布在左右手臂上。

(2)由技术人员使用分光测色仪测定实验部位涂抹样品前的皮肤色度LAB值。

(3)每天早晚在样品测试区域使用含有中药提取物成分的啫喱，空白对照区域不使用任何样品。每个受测部位涂抹32mg样品，每天涂抹两次，早9点和晚8点各一次，实验期间，志愿者在实验部位不能涂抹任何其他化妆品。

(4)连续使用化妆品一周、两周、三周和四周后，每周同一时间志愿者将涂抹部位用清水洗净，由测试者使用分光测色仪测定涂抹部位皮肤色度L值和B值。同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成，以减小误差。

(5)统计志愿者实验部位每次测得的数值，用SPSS系统进行t检验，分析皮肤色度L值和B值变化规律。

实验结果如图3和图4所示。由图3可以看出，中药提取物浓度为5％的啫喱在使用两周后，皮肤色度L值开始逐渐增大，随使用时间延长L值由56.65增大到57.50左右，皮肤亮度分别提高了1.5％，而不含中药提取物的空白对照啫喱则对皮肤亮度没有明显的改善。根据t检验分析，样品使用后相对空白组存在显著性差异(p＜0.05)，表明该中药提取物对皮肤亮度有明显改善作用，即具有亮肤功效。由图4可以看出，中药提取物浓度为5％的啫喱在使用两周以后，皮肤色度B值开始下降，随使用时间延长B值持续下降，皮肤黄度降低了约5.4％，而含植物功效成分的空白对照啫喱则对皮肤黄度没有明显的降低作用。根据t检验分析，该提取物使用后相对空白组样品存在显著性差异(p＜0.05)，表明该提取物对皮肤黄度有明显降低作用，即具有去除皮肤暗黄、改善暗哑肌肤的功效。

上述实验验证了本发明中药提取物改善皮肤色度测试结果与体外抑制非酶糖基化实验结果的一致性。证明本发明的中药组合物提取液具有较强的非酶糖基化抑制效果，亮化肌肤，改善暗哑，可以用于制备化妆品，尤其是用来制备具有抑制非酶糖基化和改善肌肤色度功效的化妆品。

Claims (10)

1.一种中药提取物，是从厚朴和马齿苋组成的中药组合物中提取得到的；所述中药组合物中厚朴和马齿苋的质量比为20-60∶40-80。

2.根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于：所述中药组合物中厚朴和马齿苋的质量比为30-50∶50-70。

3.根据权利要求1或2所述的中药提取物，其特征在于：所述中药提取物是按照权利要求4-7中任一项所述方法制备得到的。

4.一种制备权利要求1所述中药提取物的方法，包括下述步骤：将厚朴和马齿苋按照权利要求1所述的质量比混合，得到中药组合物；向所述中药组合物加水，煮沸提取，得到所述中药提取物。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述中药组合物与加入的水的质量比为1∶(10-15)；所述煮沸提取的时间为45-60分钟。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述方法还包括下述的步骤：提取结束后，冷却、过滤、离心、收集上清液，对所述上清液进行抽滤，收集抽滤液即为纯化后的中药提取物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述冷却的终温度为45-50℃，；所述过滤采用纱布进行过滤，所述纱布为100-200目；所述离心的转速为4000-5000r/min，离心的时间为10-15分钟；所述抽滤中采用助滤剂硅藻土进行抽滤。

8.根据权利要求1-3中任一项所述的中药提取物在制备具有非酶糖基化抑制功效的产品中的应用。

9.根据权利要求1-3中任一项所述的中药提取物在制备化妆品中的应用。

10.一种具有非酶糖基化抑制功效的化妆品，其特征在于：所述化妆品含有权利要求1-3中任一项所述的中药提取物。

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