CN102464581B - 一种制备丹参素钠的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种制备高纯度丹参素钠的方法，该方法包括以下步骤：1)丹参素钠的提取2)丹参素的分离3)丹参素的转化成盐4)丹参素钠的分离5)丹参素钠的粘制与纯化。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种丹参素钠的制备方法。
背景技术
丹参是我国传统医学中常用药物之一，有悠久的临床应用历史。丹参的化学成分主要可分为水溶性成分和脂溶性成分两大部分。20世纪早期的研究主要集中在以丹参酮为代表的脂溶性成分方面，经几十年努力，取得巨大成就。从20世纪80年代初，我国药物研究人员对丹参水溶性成分进行了研究，首先报道了丹参水溶性成分丹参素的结构，此后陆续发现了数十种水溶性成分，并明确其化学结构，其中丹参素钠是丹参干燥根部的水提取液中分离得到的一种有效成分，化学结构如下：
丹参素钠为白色针状结晶，易溶于水，溶于甲醇及乙醇，不溶于氯仿、乙醚、丙酮等有机溶剂。
丹参素钠具有以下重要的药理活性：
1.对心肌的作用：丹参素具有缩小心肌梗死范围和减轻病程的作用，同时对心肌缺血ö；再灌注损伤具有保护作用。
2.抑制血小板聚集及抗凝作用：丹参素能明显抑制血小板的聚集，并明显增加血小板膜的流动性，提示其对冠心病有效。
3.抗菌消炎及增强机体免疫作用：丹参素阻止钙离子内流，显著抑制大鼠腹腔巨噬细胞产生前列腺素E2(DGE2)及血栓丸B2(TXB2)。
4.抗动脉粥样硬化及降血脂作用：丹参素抑制细胞内源性胆固醇的合成， 还具有抗脂质蛋白氧化作用，降低血胆固醇，因此具有保护血管屏障，防止脂质沉积及动脉粥样硬化(AS)作用。
5.抗血栓形成作用：严常开等研究丹参素的活血化瘀作用，发现丹参素能明显抑制由ADP诱导的大鼠血小板体外聚集活性，延长电刺激大鼠颈总动脉后血栓形成时间，明显降低血瘀大鼠低、中、高切变率的全血黏度，血液黏度，红细胞压积，卡松屈服应力，红细胞电泳时间以及红细胞聚集指数。
6.防止创面的过度愈合，对增生性疤痕的治疗作用。
7.扩张冠状动脉作用：丹参素能明显扩张冠状动脉，使冠状动脉的血流量显著增加，并能对抗吗啡、心得安等的缩冠脉效应。
8.治疗肝损伤的作用：丹参素可以在一定范围内呈剂量依赖性地直接刺激体外培养小鼠肝细胞的增殖，表明丹参素还有促进肝细胞修复再生的作用。
9.抗脑缺血损伤作用 丹参素可明显缩小脑梗死面积，改善神经功能缺损，并减少脑水含量。
10.丹参素对肿心病的治疗 丹参素具有扩张动脉的作用，并且可抑制血小板释放收缩物质。
11.丹参素抗肿瘤作用 丹参素的抑癌作用可能是其抗癌作用的原因之。
12.丹参素对高原病的防治 高原病是高原缺氧使机体生理代偿(失代偿)所致组织和器官负荷加重(病理改变)而出现的临床症候群，主要原因是高原缺氧所至。
13.丹参素对银屑病的治疗作用。
丹参素钠作为丹参的主要活性成分，近来研究较多，有关丹参素钠制备方法的中国专利有：
200910102731一种丹参素的制备方法及其医药用途
200610117931一种高纯度丹参素的制备方法
200710166154丹参素钠纯品的制备方法
200810123906一种丹参素钠的制备方法
200510043608一种丹参素钠的制备方法
200710111799采用液相层析串联质谱技术检测丹参素的方法
200810246220一种高纯度丹参素钠的制备方法
发明内容
本发明在现有技术的基础上，对丹参素钠制备方法进行了改进，通过本发明的方法，可以用工业化手段制备纯度高的丹参素钠，降低了纯化成本，避免有毒有机试剂的作用，生产上能适应，操作简单，重复性好，单体转移率高。
本发明的丹参素钠制备方法，包括以下步骤：
1)提取
丹参药材加碱水提取，醇沉去除杂质；
2)分离
a)调节pH至2.0-4.5，经AB-8、D101或HPD100大孔吸附树脂吸附，分离丹参素；
h)经LS-18树脂柱脱糖；
3)转化成盐
加入NaHCO3溶液转化成盐；
4)丹参素钠的分离
浓缩，用乙醇使丹参素钠析出；
5)精制与纯化
经凝胶柱进一步精制，在冷冻条件下使丹参素钠析出，用无水乙醇洗涤。本发明的方法，其中所述的碱水优选碳酸氢钠或氢氧化钠水溶液，更优选0.30％～0.68％的碳酸氢钠或0.0025‰～0.004‰氢氧化钠水溶液，最优选0.45％的碳酸氢钠水溶液。
本发明的丹参素钠制备方法，优选包括以下步骤：
1)丹参素钠的提取
丹参药材加水，煎煮，滤过，浓缩，加入乙醇，静置过夜，过滤，滤液浓缩至无醇味。
2)丹参素的分离
a)醇沉浓缩液加入水，用盐酸调节pH，经AB-8、D101、HPD100大孔吸附树脂吸附；分离，用水洗脱，收集洗脱液。
b)洗脱液经LS-18树脂柱吸附，水洗脱至，乙醇洗脱，收集醇洗脱液，浓缩至无醇味。
3)丹参素的转化成盐
洗脱浓缩液加入NaHCO3溶液，静置。
4)丹参素钠的分离
加入乙醇，静置过夜，过滤，滤液中继续加入乙醇至，冷库中静置过夜，溶液中析出丹参素钠粗品，过滤滤液，浓缩重复上述过程，收集析出物，得丹参素钠粗品。
5)丹参素钠的精制与纯化
丹参素钠粗品加水溶解，加入乙醇，经凝胶柱过滤分离，乙醇洗脱，收集到的丹参素钠洗脱液快速冷冻过夜，溶液中析出丹参素钠，过滤、滤出物用无水乙醇反复洗涤，即得丹参素钠纯品。
本发明的丹参素钠制备方法，优选的包括以下步骤：
1)丹参素钠的提取
丹参药材，碱水煎煮，滤过；药渣用水继续煎煮，滤过；合并滤液，浓缩，加入乙醇至乙醇浓度达到50％-55％，静置过夜，过滤，滤液浓缩至无醇味。
2)丹参素的分离
a)丹参素的分离工艺：醇沉浓缩液加入等体积水，用盐酸调节pH(控制pH(2.0-4.5)，经AB-8大孔吸附树脂吸附分离，用pH＝3(2.0-4.5)的水洗脱，收集3倍于上样液体积的洗脱液。
b)丹参素洗脱液脱糖：AB-8分离收集的洗脱液，经LS-18树脂柱吸附，水洗脱至洗脱液pH＝5；95％乙醇洗脱，收集醇洗脱液，浓缩至无醇味。
3)丹参素的转化成盐
LS-18树脂柱醇洗脱浓缩液中加入饱和NaHCO3溶液，控制在7.0-7.5之间，静置4-6h。
4)丹参素钠的分离
丹参素转化液浓缩，加入乙醇至乙醇浓度达到50-70％，静置过夜，过滤，滤液中继续加入乙醇至乙醇浓度达到80-90％，冷库中静置过夜，溶液中析出丹参素钠粗品，过滤滤液，浓缩重复上述过程，收集析出物，得丹参素钠粗品。
5)丹参素钠的精制与纯化
丹参素钠粗品加水溶解，溶解后加入95％乙醇至乙醇浓度达到40％左右， 经葡聚糖凝胶柱sephadex LH-20，用乙醇洗脱，收集到的丹参素钠洗脱液，待溶液中析出丹参素钠，过滤、洗涤，即得丹参素钠纯品，经水和乙醇再次重结晶操作，样品纯度可达99％以上。
本发明的丹参素钠制备方法，最优选的包括以下步骤：
1)丹参素钠的提取
丹参药材用碳酸氢钠或氢氧化钠水溶液提取，第一次用量为药材5倍量NaHCO3用量控制在0.45％-0.90％，提取时间2h，过滤；药渣加4倍量水提取1h，过滤，合并两次提取液。提取液浓缩至原体积的1/5，加入95％乙醇至乙醇浓度达到50％-55％，静置过夜，过滤，滤液浓缩至无醇味。
2)丹参素的分离
a)丹参素的分离工艺：醇沉浓缩液加入等体积水，用盐酸调节pH(控制pH值在3.5-4.0)，经AB-8大孔吸附树脂吸附分离，用pH＝2.5-3.5的水洗脱，收集3倍于上样液体积的洗脱液。
b)丹参素洗脱液脱糖：AB-8分离收集的洗脱液，经LS-18(树脂柱吸附，水洗脱至洗脱液pH＝5；95％乙醇洗脱，收集醇洗脱液(2倍柱体积)，浓缩至无醇味。
3)丹参素的转化成盐
LS-18树脂柱醇洗脱浓缩液中加入饱和NaHCO3溶液，监测溶液pH值，控制在7.0-7.5之间，静置4-6h。
4)丹参素钠的分离
丹参素转化液浓缩至原液的1/2，加入95％乙醇至乙醇浓度达到70％，静置过夜，过滤，滤液中继续加入95％乙醇至乙醇浓度达到85％，冷库中静置过夜，溶液中析出丹参素钠粗品，过滤滤液，浓缩重复上述过程，收集析出物，得丹参素钠粗品。
5)丹参素钠的精制与纯化
丹参素钠粗品加水溶解，溶解后加入95％乙醇至乙醇浓度达到40％左右，经葡聚糖凝胶sephadex LH-20，70％乙醇洗脱，弃掉柱前沿色素部分，收集到的丹参素钠洗脱液快速冷冻过夜，溶液中析出丹参素钠，过滤、滤出物用无水乙醇反复洗涤，即得丹参素钠纯品(98％左右)。经水和乙醇再次重结晶操作，样 品纯度可达99％以上。
含量测定：
用以下方法对本发明的产品进行了含量测定，纯度都符合99％以上的要求。
1、仪器及色谱条件
仪器：安捷伦1100高效液相色谱仪，四元泵，紫外检测器。
色谱柱：Agilent C18分析柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：采用梯度洗脱，见表1；流速：1mL·min-1；检测波长280nm；柱温：30℃。
表1色谱条件梯度
2、对照品溶液剂待测样品溶液的配制
取丹参素钠对照品(购于中国药品生物制品检定所)10mg，精密称定，置100ml容量瓶中，用水溶解，并定溶至刻度，即得浓度为0.11mg/ml的对照品溶液。
分别取丹参素钠粗品及高纯度丹参素钠10mg，每个样品平行取两份，精密称定，置100ml容量瓶中，用水溶解，并定溶至刻度，摇匀，待测。
3、测定
取对照品溶液及样品溶液各10μL，进行测定，每个样平行进两针。
4、结果，见表2。
表2丹参素钠样品含量测定结果
本发明得到的制备工艺操作简单，采用乙醇-水体系，无毒无有机污染，可以大批量制备。可以实现制备含量99％以上原料药。本发明工艺紧密联系生产实际条件，因此，可以实现产业化。
附图说明
图1丹参素钠HPLC分析谱图
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的药物做进一步说明，下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。
实施例1
本发明的丹参素钠制备方法，最优选的包括以下步骤：
1)丹参素钠的提取
丹参药材，第一次用药材5倍量的0.45％NaHCO3溶液提取，时间2h，过滤；药渣加4倍量水提取1h，过滤，合并两次提取液。提取液浓缩至原体积的1/5，加入95％乙醇至乙醇浓度达到50％，静置过夜，过滤，滤液浓缩至无醇味。
2)丹参素的分离
a)丹参素的分离工艺：醇沉浓缩液加入等体积水，用盐酸调节pH值在3.5-4.0，经AB-8大孔吸附树脂吸附分离，用pH＝3的水洗脱，收集3倍于上样液体积的洗脱液。
b)丹参素洗脱液脱糖：AB-8分离收集的洗脱液，经LS-18(树脂柱吸附，水洗脱至洗脱液pH＝5；95％乙醇洗脱，收集2倍柱体积醇洗脱液，浓缩至无醇味。
3)丹参素的转化成盐
LS-18树脂柱醇洗脱浓缩液中加入饱和NaHCO3溶液，监测溶液pH值，控制在7.0-7.5之间，静置4-6h。
4)丹参素钠的分离
丹参素转化液浓缩至原液的1/2，加入95％乙醇至乙醇浓度达到70％，静置过夜，过滤，滤液中继续加入95％乙醇至乙醇浓度达到85％，冷库中静置过夜，溶液中析出丹参素钠粗品，过滤滤液，浓缩重复上述过程，收集析出物，得丹参素钠机品。
5)丹参素钠的精制与纯化
丹参素钠粗品加水溶解，溶解后加入95％乙醇至乙醇浓度达到40％左右，经葡聚糖凝胶sephadex LH-20，70％乙醇洗脱，弃掉柱前沿色素部分，收集到 的丹参素钠洗脱液快速冷冻过夜(＜-10℃)，溶液中析出丹参素钠，过滤、滤出物用无水乙醇反复洗涤，即得丹参素钠纯品(98％左右)。经水和乙醇再次重结晶操作，样品纯度可达99％以上。
实施例2
1)丹参素钠的提取
丹参药材，第一次用药材8倍量的0.9％NaHCO3溶液提取，时间2h，过滤；药渣加6倍量水提取2h，过滤，合并两次提取液。提取液浓缩至原体积的1/5，加入95％乙醇至乙醇浓度达到50％，静置过夜，过滤，滤液浓缩至无醇味。
2)丹参素的分离
a)丹参素的分离工艺：醇沉浓缩液加入等体积水，用盐酸调节pH值在3.5-4.0，经AB-8大孔吸附树脂吸附分离，用pH＝2.5的水洗脱，收集3倍于上样液体积的洗脱液。
b)丹参素洗脱液脱糖：AB-8分离收集的洗脱液，经LS-18(树脂柱吸附，水洗脱至洗脱液pH＝6；95％乙醇洗脱，收集2倍柱体积醇洗脱液，浓缩至无醇味。
3)丹参素的转化成盐
LS-18树脂柱醇洗脱浓缩液中加入饱和NaHCO3溶液，监测溶液pH值，控制在7.0-7.5之间，静置4-6h。
4)丹参素钠的分离
丹参素转化液浓缩至原液的1/2，加入95％乙醇至乙醇浓度达到70％，静置过夜，过滤，滤液中继续加入95％乙醇至乙醇浓度达到85％，冷库中静置过夜，溶液中析出丹参素钠粗品，过滤滤液，浓缩重复上述过程，收集析出物，得丹参素钠相品。
5)丹参素钠的精制与纯化
丹参素钠粗品加水溶解，溶解后加入95乙醇至乙醇浓度达到40％左右，经葡聚糖凝胶sephades LH-20，70％乙醇洗脱，弃掉柱前沿色素部分，收集到的丹参素钠洗脱液快速冷冻过夜(＜-10℃)，溶液中析出丹参素钠，过滤、滤出物用无水乙醇反复洗涤，即得丹参素钠纯品(98％左右)。经水和乙醇再次重结晶操作，样品纯度可达99％以上。
实施例3
1)丹参素钠的提取
丹参药材，第一次用药材4倍量的0.9％NaHCO3溶液提取，时间2h，过滤；药渣加4倍量水提取2h，过滤，合并两次提取液。提取液浓缩至原体积的1/4，加入95％乙醇至乙醇浓度达到50％，静置过夜，过滤，滤液浓缩至无醇味。
2)丹参素的分离
a)丹参素的分离工艺：醇沉浓缩液加入等体积水，用盐酸调节pH值在3.5-4.0，经AB-8大孔吸附树脂吸附分离，用pH＝3的水洗脱，收集3倍于上样液体积的洗脱液。
b)丹参素洗脱液脱糖：AB-8分离收集的洗脱液，经LS-18(树脂柱吸附，水洗脱至洗脱液pH＝5；95％乙醇洗脱，收集2倍柱体积醇洗脱液，浓缩至无醇味。
3)丹参素的转化成盐
LS-18树脂柱醇洗脱浓缩液中加入饱和NaHCO3溶液，监测溶液pH值，控制在7-7.05之间，静置5h。
4)丹参素钠的分离
丹参素转化液浓缩至原液的1/2，加入95％乙醇至乙醇浓度达到70％，静置过夜，过滤，滤液中继续加入95％乙醇至乙醇浓度达到85％，冷库中静置过夜，溶液中析出丹参素钠粗品，过滤滤液，浓缩重复上述过程，收集析出物，得丹参素钠粗品。
5)丹参素钠的精制与纯化
丹参素钠粗品加水溶解，溶解后加入95％乙醇至乙醇浓度达到40％左右，经葡聚糖凝胶sephadex LH-20，70％乙醇洗脱，弃掉柱前沿色素部分，收集到的丹参素钠洗脱液快速冷冻过夜(＜-10℃)，溶液中析出丹参素钠，过滤、滤出物用无水乙醇反复洗涤，即得丹参素钠纯品(98％左右)。经水和乙醇再次重结晶操作，样品纯度可达99％以上。
Claims (1)
1.一种制备丹参素钠的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)丹参素钠的提取：丹参药材，第一次用药材5 倍量的0.45％NaHCO3
溶液提取，时间2h，过滤； 药渣加4 倍量水提取1h，过滤，合并两
次提取液，提取液浓缩至原体积的1/5，加入95％乙醇至乙醇浓度达
到50％，静置过夜，过滤，滤液浓缩至无醇味，
2)丹参素的分离：
a)丹参素的分离工艺：醇沉浓缩液加入等体积水，用盐酸调节pH 值
在 3.5-4.0，经AB-8 大孔吸附树脂吸附分离，用pH＝3 的水洗脱，
收集3 倍于上样液体积的洗脱液，
b)丹参素洗脱液脱糖：AB-8 分离收集的洗脱液，经LS-18 树脂柱吸
附，水洗脱至洗脱液pH＝5；95％乙醇洗脱，收集2 倍柱体积醇洗脱
液，浓缩至无醇味，
3)丹参素的转化成盐：LS-18 树脂柱醇洗脱浓缩液中加入饱和NaHCO3
溶液，监测溶液pH 值，控制 在7.0-7.5 之间，静置4-6h，
4)丹参素钠的分离：丹参素转化液浓缩至原液的1/2，加入95％乙醇
至乙醇浓度达到70％，静置过夜，过滤，滤液中继续加入95％乙醇
至乙醇浓度达到85％，冷库中静置过夜，溶液中析出丹参素钠粗品，
过滤滤液，浓缩重复上述过程，收集析出物，得丹参素钠粗品，
5)丹参素钠的精制与纯化：丹参素钠粗品加水溶解，溶解后加入95
％乙醇至乙醇浓度达到40％左右，经葡聚糖凝胶sephadex LH-20，
70％乙醇洗脱，弃掉柱前沿色素部分，收集到的丹参素钠洗脱液-10
℃以下快速冷冻过夜，溶液中析出丹参素钠，过滤、滤出物用无水乙
醇反复洗涤，即得丹参素钠纯品，经水和乙醇重结晶操作，样品纯度
可达99％以上。
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