CN102449482B - 侧向流动分析时的信号放大方法 - Google Patents

Abstract

在用于以高敏感方式探测分析物的侧向流动式分析的背景下，参考三明治分析方法，本发明涉及一种高敏感性侧向流动分析中的信号放大方法，其中所述信号是通过使用纳米粒子作为种子加入金属离子和还原剂引发反应而放大。本发明还涉及一种使用该方法的侧向流动分析装置。

Description

侧向流动分析时的信号放大方法

技术领域

本发明涉及以高灵敏度检测分析物的侧向流动（Lateral flow）分析中的信号放大方法及利用上述方法的侧向流动分析装置。更具体而言，本发明涉及高灵敏度侧向流动分析中的信号放大方法及利用该方法的侧向流动分析装置，在所述方法中，加入金离子和还原剂并与金纳米粒子的种子反应以放大信号。

背景技术

免疫色谱分析法是利用生物学物质或化学物质相互特异性附着的性质，在短时间内对分析物进行定性及定量分析的方法。尤其是，根据夹心免疫测定法，将与分析物（即，存在和浓度测试中的目标）的第一抗原决定部位（epitope）特异性结合的第一抗体固定到固体支撑体，并且将特异性第二抗体用于分析物的第二抗原决定部位。

作为用于上述分析的装置，通常使用分析带或将分析带安装和装配在分析装置的壳体内部的分析装置。此时，若将包含分析物的流体施加于多孔性带的一面，则在流体通过毛细管现象流动时，分析物被附着到包含根据分析方法的标记物和固定抗体的抗体上。

更具体而言，在侧向流动装置中，抗体通常被固定在多孔膜上，在所述多孔膜处，液体试料通过毛细管现象流动；样品片和结合片被设置在所述膜的上游；以及吸收片被设置在所述膜的下游。上述样品片吸收包含分析物的液体试料并且还保证均匀的流动。标记物在结合片中干燥，该标记物附着有可选择性地与分析物结合的抗体。将与分析物选择性结合的固定抗体及与固定于标记物上的抗体结合的物质固定在上述膜的各个不同的位置，以形成检测部及控制部。与上述分析物选择性结合的固定于膜上的抗体和固定于标记物上的抗体，可被设置成与分析物以夹心形式结合。上述吸收片由用于吸收液体试料的物质构成。照此，在免疫色谱分析装置中，当将包含分析物的液体试料滴加于样品片中时，对分析物具有选择性的抗体-标记物和固定于膜的抗体以夹心形式结合。因此，在固定有上述抗体的膜的位置处形成可用肉眼观察到的带。

作为典型的技术，有这样一种免疫色谱信号放大方法，其中在第一结合物和抗原结合然后另外使第二结合物与抗原结合之后，最终将它们与固定于膜上的抗体结合。但因利用现有技术的免疫色谱法测量的灵敏度太低，因此，在需要更高灵敏度的试料的情况下，难以进行测量。另外，在其他研究人员的报告中披露了使金离子和还原剂进行反应生成金纳米粒子的方法（Angew.Chem.Int.Ed.2002,41,2176-2179;Colloids and Surfaces B:Biointerfaces,2005,44,99-103）。但是，还未曾公开如下的技术构思：将金纳米粒子的生成用于免疫色谱传感器中的信号放大方法或者将包含金离子及还原剂的另外的片设置在免疫色谱装置中以容易地放大信号。

因此，本发明的发明人提供了一种提高信号放大的灵敏度的方法以及利用该方法的侧向流动分析。在所述方法中，使结合物和分析物结合，所述结合物具有第一抗体或第一特异性结合物质和与之结合的金纳米粒子。然后，使结合所得产物通过夹心反应与固定的抗体或特异性结合物质结合。然后，使金离子和还原剂反应还原金离子。在此之后，通过使用金离子作为种子形成金纳米粒子。

发明内容

技术问题

本发明提供了一种侧向流动分析中的信号放大方法。

本发明还提供了一种使侧向流动分析中的灵敏度得到提高的侧向流动分析装置。

技术方案

根据本发明的一个方面，侧向流动分析中的信号放大方法包括如下步骤：使结合物与分析物结合，所述结合物包含：与所述分析物的第一抗原决定部位或第一结合部位（配体）特异性结合的第一抗体或第一特异性结合物质，和结合所述第一抗体或第一特异性结合物质的金纳米粒子；使结合了结合物的分析物和与所述分析物的第二抗原决定部位或第二结合部位（配体）特异性结合的固定的第二抗体或第二特异性结合物质结合；及添加金离子及还原剂以引发反应。

根据本发明的另一个方面，侧向流动分析装置包括：结合片，其包括结合物，所述结合物具有与分析物的第一抗原决定部位或第一结合部位（配体）特异性结合的第一抗体或第一特异性结合物质，和结合所述第一抗体或第一特异性结合物质的金纳米粒子；膜，其具有检测部，所述检测部包含与结合了结合物的分析物的第二抗原决定部位或第二结合部位特异性结合的固定的第二抗体或第二特异性物质；和信号放大片，其包含金离子及还原剂。

有益效果

根据本发明的信号放大方法，结合物与分析物被固定于捕获抗体或特异性结合物质上，随后，添加包含金离子和还原剂的反应液以引发反应。因此，可以提供优秀的信号放大效果，而且，可利用上述信号放大方法制造灵敏度得到提高的侧向流动分析装置。

附图说明

图1为通过根据本发明的方法在抗原分析过程中信号放大时的示意图，其中，附图标记1为第一抗体、2为金纳米粒子、3为结合物、4为分析物、5为第二抗体、以及6为金离子被还原时所形成的金纳米粒子。

图2（a）为显示根据本发明的侧向流动分析装置内各片的结构的示意图，其中，附图标记10为样品片、11为结合片、12为膜、13为检测部、14为控制部、15为吸收片、以及16为包含金离子和还原剂的信号放大片。

图2（b）为显示在将片设置在侧向流动分析装置中之后的结构的示意图。

图2（c）为显示侧向流动分析装置的剖面图，其中，信号放大片16保持不与分析装置的基带（basic strip）接触。

图3及图4为显示通过利用肌红蛋白随金离子还原的信号放大效果的实验结果的示意图。

图5及图6为显示通过利用肌红蛋白在免疫色谱分析中的信号放大效果的实验结果的示意图。

具体实施方式

根据本发明的信号放大方法，在免疫色谱分析法中，使包含第一抗体和金纳米粒子的结合物与抗原结合，而后与第二抗体（即，固定的捕获抗体）通过夹心反应结合。随后，添加金离子及还原剂。也就是说，根据本发明的信号放大方法，使包含第一抗体或第一特异性结合物质及金纳米粒子的结合物与分析物结合，而后，与固定的第二抗体（即，固定的捕获抗体）或固定的第二特异性结合物质结合。随后，在添加金离子及还原剂以引发反应之后，通过使用金纳米粒子作为种子而使在金纳米粒子周围的Au（III）离子还原。作为结果，显示很强的颜色。因此，信号被放大。

本发明的信号放大方法可适用于侧向流动分析法。所述侧向流动分析方法可以包括垂直流动（vertical flow）或流通（flow though）方式。在上述垂直流动方式的情况下，试料被垂直叠加到并列设置的多孔层中。

另外，上述侧向流动方式不限于抗体-抗原反应。本说明书中提到的“结合部位（配体）”包括蛋白质配体（Ligand）和核酸分子（DNA或RNA）序列的结合部位，而“特异性结合物质”包括生物分子，例如，蛋白质、病毒噬菌体、核酸分子（适体（Aptamer））、半抗原（hapten；DNP）。本发明不限于这些。

本说明书中提到的“结合物”包含第一抗体或第一特异性结合物质，及金纳米粒子。所述结合物在与分析物结合之后，流经带，而后被固定于捕获第二抗体或第二特异性结合物质上。

将参考图1更详细地描述本发明的侧向流动分析中的信号放大方法的机理。图1是在侧向流动分析中利用抗原-抗体反应时的图。如图1所示，使包含与分析物的第一抗原决定部位特异性结合的第一抗体1和与第一抗体1结合的金纳米粒子2的结合物3与分析物4结合。并且结合有结合物3的分析物沿着带流动，并且与可与所述分析物的第二抗原决定部位结合的固定的第二抗体5结合。在这些夹心结合之后，使金离子与还原剂进行反应。因此，通过以上述金纳米粒子2作为种子另外形成的金纳米粒子6，在侧向流动分析过程中信号被放大。

用于本发明的上述金离子用作金纳米粒子的前体。只要所述金离子包含Au（III），则本发明没有特别的限制。所述金离子可以包括氯金酸（HAuCl₄）。

用于本发明的还原剂可以包括柠檬酸、抗坏血酸、硼氢化钠、羟胺、氯化鏻。上述还原剂可两种以上混合使用。更优选地，所述还原剂可以包括羟胺及柠檬酸。柠檬酸不仅起到还原剂的作用，而且，在粘附于金纳米粒子的表面之后可以防止纳米粒子相互粘结。

通过本发明的方法检测的分析物不限于通过免疫学反应（即抗原抗体反应）与第一抗体及第二抗体结合并且形成夹心免疫复合体。例如，所述分析物还可适用于蛋白质或DNA、如内分泌干扰物的污染物、以及病毒。

根据本发明，只要抗原和抗体是通过抗原-抗体反应与分析物特异性结合的物质，就对它们没有特别的限制。而在分析物为抗体的情况下，与该分析物特异性结合的物质可被用作抗原。上述抗原及抗体可根据分析物选用公知的抗原及抗体。进而，将分析物识别为“结合部位（配体）”并且与其选择性地结合的“特异性结合物质”的反应，广义上也可视为包含于抗原-抗体反应中。

在实施例3中证实了以肌红蛋白为分析物由金离子还原得到的信号放大效果。因此，如图4所示，其结果表明，较之未放大信号的情况，其灵敏度增加了至少10倍。

本发明的侧向流动分析装置利用上述信号放大方法，并且包括样品片、结合片、信号放大片、多孔膜和吸收片。所述样品片接受包含分析物的液体试料。所述结合片包括结合物，所述结合物具有与第一抗原决定部位或第一结合部位（即，配体）特异性结合的第一抗体或第一特异性结合物质，和与所述第一抗体或第一特异性结合物质结合的金纳米粒子。所述信号放大片包含金离子及还原剂。所述多孔膜包括具有与结合了所述结合物的分析物的第二抗原决定部位或第二结合部位（配体）特异性结合的固定的第二抗体或第二特异性物质的检测部以及检查错误的控制部（control site）。所述吸收片通过毛细管现象吸收液体试料。

图2（a）为显示根据本发明的侧向流动分析装置内各片的结构的示意图，其中，附图标记10为样品片、11为结合片、12为膜、13为检测部、14为控制部、15为吸收片、以及16为包含金离子及还原剂的信号放大片。图2（b）为显示在将片设置在侧向流动分析装置中之后的结构的示意图。图2（c）为显示侧向流动分析装置的剖面图，其中，信号放大片16保持不接触分析装置的基带（包括样品片、结合片及膜）。

用于制造本发明的侧向流动分析装置的片由多孔性材料（包括天然或合成材料）形成。较佳地，使用硝化纤维素。

上述样品片（sample pad）可以是首先吸收包含分析物的液体试料的部分，并且可以直接使用膜的一侧末端或用其他的单元构成。另外，所述样品片吸收包含分析物的试料并通过毛细管现象将分析物转移至结合片。另外，根据一个实施例，如果不设置样品片，则直接将包含目标分析物的试料施加于结合片。

在上述结合片上，结合物以干燥状态存在，而在吸收包含分析物的液体试料时，获得流动性并移动至膜。上述结合片可由玻璃纤维和纤维素构成。

信号放大片可使用与上述结合片相同的材料或不同的材料构成。在上述信号放大片上涂布金离子及还原剂并进行干燥。上述金离子及还原剂可以同时或分别涂布于信号放大片上并干燥。如果它们被分别地涂布和干燥，则可使用多个信号放大片。信号放大片保持不与侧向流动分析装置的样品片、结合片及膜接触。在包含分析物的液体试料被吸收在吸收片中之后，使包含第一抗体及金纳米粒子的结合物与抗原结合，以通过夹心反应与第二抗体（即，固定的捕获抗体）结合。随后，因为结合的产物与侧向流动分析装置中的结合片及膜中的至少一个接触，所以金离子及还原剂相互反应。因此，以金纳米粒子为种子还原在金纳米粒子周围的Au（III）离子。作为结果，信号被放大。

因此，上述信号放大片不与侧向流动分析装置的基带接触。例如，信号放大片附着于外壳，而不与侧向流动分析装置的基带接触的状态。所述信号放大片可以在向样品片投入试料之后经过预定时间时，以手动方式接触与侧向流动分析装置的基带接触。或者，所述信号放大片可以在自动装置施加压力时与侧向流动分析装置的基带接触。然而，信号放大片可以以任意方式附着于侧向流动分析装置的外壳，其中，所述保持不接触的信号放大片，在投入试料之后经过预定时间时，通过主动或被动方式接触侧向流动分析装置的基带。本发明不受特定附着方式的限制。所述信号放大片可以以各种形式来制造。例如，如图2（c）所示，当将信号放大片的两末端附着于侧向流动分析装置的外壳而后施压时，信号放大片可与侧向流动分析装置的基带接触。另外，保持不与分析装置的基带接触的信号放大片可以在经过预定时间时通过其他测量装置自动接触基带。

由于上述信号放大片需在使包含第一抗体或第一特异性结合物质及金纳米粒子的结合物与第二抗体（即，固定的捕获抗体）或第二特异性结合物质结合之后顺序地与基带接触，因此，所述信号放大片可以在投入试料的约1分钟至约10分钟之后与侧向流动分析装置的基带接触，而较佳地，在约3分钟～约7分钟之后接触。但是，本发明不受上述时间范围的限制。例如，在侧向流动分析装置的基带的孔径大的情况下，因反应在很短时间内结束，因此，所述信号放大片可以在投入试料后短时间内接触。也就是说，根据不同的情况，接触基带的时间可以变化。

在信号放大片一开始就与侧向流动分析装置的基带接触的情况下，上述信号放大片可在结合片和膜之间接触。另外，上述信号放大片可被设置成与结合片接触。另外，信号放大片可被设置成与膜接触。另外，信号放大片可被设置成在接触片及膜上接触。

可以使用任何膜，只要其可提供液体试料的流动性，并且，可以由多孔层构成。更具体而言，可使用能够调节预定微孔大小的疏水性多孔层，例如，硝化纤维素、纤维素、PVDF（聚偏二氟乙烯（Poly-vinylidene fluoride））、PET（聚对苯二甲酸乙二醇酯（poly（ethylene terephthalate））、PES（聚醚砜（polyethersulfone））、玻璃纤维和尼龙，来固定抗体或特异性结合物质及酶蛋白并最大限度地减少非特异性反应。所述膜包括检测部和控制部。所述检测部具有特异性结合于所述结合了结合物的分析物的第二结合部位的第二抗体或第二特异性结合物质。所述控制部作为其相应的对照组用于检测是否有反常反应存在。检测部是用于显示测试结果的部分。控制部的作用是确认金纳米粒子结合物和捕获抗体或固定的第二特异性结合物质的错误，并确认具有移动性的物质是否很好地反应直至检测部/控制部无错误地完成反应。

可以使用任何吸收片（absorbing pad），只要其可通过毛细现象充分吸收在反应后剩余的残留物，例如，可包括纤维素、棉、亲水性多孔聚合物。

下面，通过实施例对本发明进行更详细的说明，而这些实施例仅是对本发明的示例，而本发明的范围不受这些实施例的限制。

实施例1：金纳米粒子-抗体结合物的合成

向1mL金纳米粒子胶体溶液（BB International，20nm）中添加0.1mL的0.1M的硼酸盐缓冲液（Borate buffer）（pH8.5），然后，加入10μL的1mg/mL的第一抗体反应约30分钟。上述反应之后，在室温条件下，添加0.1mL的通过将1%（w/v）的BSA（牛血清白蛋白（Bovine serum albumin），Sigma）溶解于PBS（磷酸盐缓冲盐水（Phosphate buffered saline））中而制得的溶液并反应约15分钟的。上述反应之后，以10,000rpm、4℃的条件进行20分钟的离心分离，而后将1mL的以1mg/mL的浓度溶解的BSA（牛血清白蛋白，Sigma）溶液添加到10mM的PBS中三次以上以提纯，而后回收。在对肌红蛋白进行免疫分析的过程中，上述第一抗体可使用M012607（Fitzgerald）。

实施例2：免疫色谱的制造

在塑料片（Millipore）上附着硝化纤维素膜（Millipore，180secNitrocellulose）和吸收片（Millipore）之后，通过使用含有溶解于PBS中的捕获抗体（即，第二抗体）的1mg/mL溶液和作为对照的含有溶解于PBS中的羊抗小鼠（Goat anti-mouse）IgG抗体（Sigma，M8642）的1mg/mL溶液，使用分配器（Dispenser）系统（Zeta Co.）各以6cm/sec的速度在膜上划线以形成检测线（detection line）和控制线（control line）。对上述膜进行干燥之后，放入切割机以3mm的间隔进行切割。为进行对肌红蛋白的免疫分析，作为上述捕获抗体的第二抗体可使用肌红蛋白捕获抗体（Fitzgerald）。将结合片（GFC，Millipore公司）切割成5×3mm的大小之后，涂布5μL的在上述实施例1中制造而成的结合物并进行干燥，备用。样品片浸渍于1%的BSA、0.5%的吐温20、5%的蔗糖、5%的右旋糖苷、0.05%的叠氮化钠（sodium azide）的水溶液之后进行干燥并切割成10×3mm左右的大小。在组装有上述膜和吸收片的塑料片上，将结合片和样品片组装成如图2b所示的形式。

实施例3：确认根据金离子还原的信号放大效果

将在上述实施例2中组装的免疫色谱传感器浸渍于96孔（well）板中，在该96孔板中浸渍了70μL的通过以0ng/mL、0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL及100ng/mL的浓度溶解肌红蛋白抗原得到的PBS。在信号没有放大的情况下，浸渍时间为10分钟，而在放大信号的情况下，在浸渍5分钟之后，将免疫色谱传感器浸渍于50μL的溶解有50mM的HAuCl4和10mM的羟胺（HONH2）的柠檬酸盐（citrate）缓冲溶液（5mM，pH4.0）中。然后，5分钟之后，观察到信号。测量的结果如图3及图4所示。图3显示实验之后的带，而图4为用图表表示实验结果的图。结果表明，与信号没有放大的情况相比，灵敏度增加10倍以上。

实施例4：利用信号放大片根据金离子还原的信号放大效果

将在上述实施例2中组装的免疫色谱传感器浸渍于96孔（well）板中，在该96孔板中浸渍了70μL的通过以0ng/mL、0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL及100ng/mL的浓度溶解肌红蛋白抗原得到的PBS。在信号没有放大的情况下，浸渍时间为10分钟，而在放大信号的情况下，在浸渍5分钟之后，在浸渍上述免疫色谱传感器的同时，在结合片上放置信号放大片。在将Fusion5（Whatman）切割成5×3mm大小的片上涂布10μl的250mM的HAuCl₄，并10μL的溶解25mM羟胺（HONH2）得到的柠檬酸盐（citrate）缓冲溶液（25mM，pH4.0）涂布在另外的Fusion5（Whatman）片上之后，进行干燥来制备信号放大片。测量结果如图5及图6所示。图5表示实验之后的带，而图6为用图表表示实验结果的图。结果表明，与信号没有放大的情况相比，灵敏度增加5倍以上。

本发明不受上述实施例的限制，而由如下的权利要求限定。本领域技术人员可对本发明进行各种变形及修改。下面，示例性地公开几个变形事项。

例如，虽然未在图中显示，但在一些情况下根据包括样品片10（可选）、结合片11、膜12及吸收片15（可选）的分析装置，随着所述装置的侧方移动，包含分析物的试料在膜12的测试线中进行反应之后，当经过预定时间时，可以将包含金离子和还原剂的信号放大溶液涂布于样品片或结合片。在此情况下，包含金离子及还原剂的溶液装在单独的容器中并与上述分析装置一起成套提供。另外，在定量测量而非定性测量的情况下，在投入试料之后经过预定时间时，具备用于读取测试线13的读取单元的测量装置可以使保持不接触的信号放大片16与上述结合片及膜中的至少一个接触。在此情况下，该测量装置包括用于使信号放大片接触的单元。因此，包含于信号放大片中的金离子通过扩散流动向测试线13移动。另外，在投入试料之后经过预定时间时，用户可以手动向所述测量装置外壳的一部分施压以使通常保持不接触的信号放大片与上述结合片及膜中的至少一个接触。另外，可在开始制造时，使信号放大片接触基带或插入基本带中间。最后，具有测量分析装置的测试线的结果的读取单元的测量装置，可以包括用于存储上述信号放大溶液的存储单元及在投入分析试料之后经过预定时间时，将此溶液涂布至结合片或膜上的单元。这些各种方法及结构将包含于以下的权利要求书的技术思想范围之内。

工业实用性

本发明可用于测量生物测定数据。

Claims (11)

1.一种侧向流动分析中的信号放大方法，该方法包括如下步骤：

在样品片中提供包含分析物的样品；

使结合物与所述分析物结合，所述结合物包含：与所述分析物的第一抗原决定部位或第一结合部位(配体)特异性结合的第一抗体或第一特异性结合物质，和结合所述第一抗体或第一特异性结合物质的金纳米粒子；

使结合了结合物的分析物和与所述分析物的第二抗原决定部位或第二结合部位(配体)特异性结合的固定的第二抗体或第二特异性结合物质结合；及

向被设置成不与包括结合片和膜的基带接触的信号放大片施加压力，

其中，当向所述信号放大片施加压力时，所述信号放大片选择性接触所述结合片和所述膜中的至少一个，以及其中，所述信号放大片包含金离子及还原剂以引发反应。

2.根据权利要求1所述的侧向流动分析中的信号放大方法，其特征在于，所述结合部位(配体)为选自蛋白质配体和核酸(DNA或RNA)分子序列中的至少一种；以及

所述特异性结合物质是选自与所述结合部位特异性结合的蛋白质、病毒噬菌体、核酸分子适体和半抗原(DNP)中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的侧向流动分析中的信号放大方法，其中，所述还原剂是选自羟胺和柠檬酸中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的侧向流动分析中的信号放大方法，其特征在于，所述分析物是选自DNA、内分泌干扰物和抗原蛋白中的至少一种。

5.一种侧向流动分析装置，该装置包括：

结合片，其包括结合物，所述结合物具有与分析物的第一抗原决定部位或第一结合部位(配体)特异性结合的第一抗体或第一特异性结合物质，和结合所述第一抗体或第一特异性结合物质的金纳米粒子；

膜，其具有检测部，所述检测部包含与结合了结合物的分析物的第二抗原决定部位或第二结合部位特异性结合的固定的第二抗体或第二特异性物质；和

信号放大片，其包含金离子及还原剂，

其中，所述信号放大片被设置成不与包括所述结合片和所述膜的基带接触，并且当向所述信号放大片施加压力时，所述信号放大片选择性接触所述结合片和所述膜中的至少一个。

6.根据权利要求5所述的侧向流动分析装置，其特征在于，进一步包括样品片，该样品片上施加了包含分析物的液体试料。

7.根据权利要求5所述的侧向流动分析装置，其特征在于，进一步包括设置在所述膜的下游的吸收片以通过毛细管现象吸收液体试料。

8.根据权利要求5所述的侧向流动分析装置，其特征在于，所述信号放大片在投入试料之前保持不与所述结合片和所述膜中的任何一个接触，而在投入试料之后，才与所述结合片和所述膜中的至少一个接触。

9.根据权利要求8所述的侧向流动分析装置，其特征在于，所述信号放大片在投入试料1～10分钟之后，才与所述结合片和所述膜中的至少一个接触。

10.根据权利要求8所述的侧向流动分析装置，其特征在于，当用户施加压力时，所述信号放大片与所述结合片和膜中的至少一个接触。

11.一种生物测定数据分析系统，该系统包括：

测量装置，其用于读取权利要求5所述的侧向流动分析装置的测试结果，所述测量装置包括：

用于测量侧向流动分析装置的测试结果的读取单元，其中，所述侧向流动分析装置包括结合片和膜，

其中，所述结合片包括结合物，所述结合物具有与分析物的第一抗原决定部位或第一结合部位(配体)特异性结合的第一抗体或第一特异性结合物质，和结合所述第一抗体或第一特异性结合物质的金纳米粒子，

其中，所述膜具有检测部，所述检测部包含与结合了结合物的分析物的第二抗原决定部位或第二结合部位特异性结合的固定的第二抗体或第二特异性物质，

用于存储信号放大溶液的容器，其中，所述信号放大溶液包含金离子及还原剂；以及

单元，所述单元用于将所述信号放大溶液涂布至所述结合片或所述膜上，

其中，所述测量装置包括允许信号放大片在投入试料之后与所述结合片和所述膜中的至少一个接触的单元。