CN102443009B

CN102443009B - 并环激酶抑制剂

Info

Publication number: CN102443009B
Application number: CN201110309200.1A
Authority: CN
Inventors: 黄振华
Original assignee: Shandong Xuanzhu Pharma Co Ltd
Current assignee: Xuanzhu Biopharmaceutical Co Ltd; Shandong Xuanzhu Pharma Co Ltd
Priority date: 2010-09-30
Filing date: 2011-09-29
Publication date: 2014-04-16
Anticipated expiration: 2031-09-29
Also published as: CN102443009A

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及通式(I)所示的并环激酶抑制剂、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中R¹、R²、R³、X、Y、Z、M、L或Q如说明书中所定义；本发明还涉及这些化合物的制备方法，以及这些化合物在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。

Description

并环激酶抑制剂

1、技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及并环激酶抑制剂、其药学上可接受的盐或其立体异构体，这些化合物的制备方法，以及这些化合物在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。

2、背景技术

间变性淋巴瘤激酶(Anaplastic lymphoma kinase，ALK)是受体酪氨酸激酶家族成员，可通过自身磷酸化募集下游蛋白，进而表达特定的基因，调节细胞代谢和生长。

间变性淋巴瘤激酶最早发现于间变性大细胞淋巴瘤(Anaplastic large cell lymphoma，ALCL)中，ALCL是非霍奇金淋巴瘤(NHL)的一种独立类型，最新的WHO分类中ALCL被归类于外周T细胞淋巴瘤，占同期NHL的2％～7％。研究发现，正常的ALK专一表达于神经系统中，如脑，尤其是新生儿的脑中。约有半数患者产生致癌性的异常间变性淋巴瘤激酶融合蛋白(比如NPM-ALK)，从而具有独特的临床病理特征，这种变异的蛋白对临床诊断、治疗以及预后都有重要指导意义，成为目前研究的热点。

ALK在某些ALCL中的异常表达来源于不同的染色体易位。这些染色体易位均可产生相应的融合蛋白。对这些融合基因分析表明，它们都含有ALK基因3′端编码胞内激酶区的基因序列，而与ALK融合的基因片段均含启动子元件及编码介导自身二聚化的序列，从而导致细胞内具有ALK激酶活性的融合蛋白高表达及过度激活，引起细胞的恶性转化。由此，ALK胞内激酶区的活性及相应的信号传导途径是导致ALCL形成的重要分子机制。

ALK易位的基因组断裂点多发生在16及17号外显子中间的内含子，而17-26号外显子编码ALK胞内结构域，每个易位产生一种不同的融合蛋白质，由配偶体的5’端和ALK酪氨酸激酶结构域3’端融合得到。大多数情况下，5’端的配偶体具有可以形成同源或异源二聚体的结构域，使得ALK激酶结构域交互磷酸化，相互作用增强并且使多种下游蛋白质磷酸化。失去调控的ALK活性增高，使其功能近似原癌蛋白质，这些融合蛋白质定位在不同的亚细胞区域上，因此可能导致不同的细胞功能改变.目前，染色体易位和ALK的表达已经被WHO规定为ALCL的临床诊断指标之一。

由此可见，研发针对ALK的小分子抑制剂，可以有效的降低突变ALK基因对下游蛋白的影响，进而影响到肿瘤细胞侵袭、增殖等效应，最终影响肿瘤细胞的生长，起到抗肿瘤的作用，具有显著的临床意义。

3、发明内容

本申请人本着开发对治疗和/或预防癌症具有良好效果的药物为目标，作出本发明。

本发明的具体技术方案，提供了下述通式(I)所示的化合物：

其中，

R¹选自氨基，硝基，羟基，C_1-6烷基胺基或二(C_1-6烷基)胺基；

R²选自未被取代或被1-4个独立地选自卤素原子、氰基、氨基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、羟基的取代基取代的芳香环或3-8元杂环基；

R³选自氢原子；

X选自O，S，NH或N(C_1-6烷基)；

Y、Z独立地选自N或CR⁴，R⁴选自氢原子、卤素原子、氰基、氨基、C_1-6烷基胺基、二(C_1-6烷基)胺基、或被卤素原子、羟基或氨基取代或未被取代的C_1-6烷基或C_1-6烷氧基；

M选自未被取代芳香基，C_3-6环烷基或3-8元杂环基；

L不存在，M与Q直接相连；

Q选自未被取代或被1-3个R⁶取代的3-8元饱和杂环基，

R⁶独立地选自卤素原子或C_1-6烷基。

优选为：

其中，

R¹选自氨基，C_1-6烷基胺基或二(C_1-6烷基)胺基；

R²选自被1-3个独立地选自卤素原子、氰基、氨基、C_1-6烷基的取代基取代的苯基或5-6元杂环基；

R³选自氢原子；

X选自O，S，NH或N(C_1-6烷基)；

Y、Z独立地选自N或CR⁴，R⁴选自氢原子、卤素原子、氨基、C_1-6烷基胺基、二(C_1-6烷基)胺基、或被卤素原子、羟基或氨基取代或未被取代的C_1-6烷基或C_1-6烷氧基；

M选自未被取代的苯基，C_5-6环烷基或5-6元杂环基；

L不存在，M与Q直接相连；

Q选自未被取代或被1-3个R⁶取代的5-6元的饱和杂环基，

R⁶独立地选自卤素原子或C_1-6烷基。

优选为：

其中，

R¹选自氨基，C_1-6烷基胺基或二(C_1-6烷基)胺基；

R²选自被1-3个卤素原子取代的苯基；

R³选自氢原子；

X选自O，S，NH或N(CH₃)；

Y、Z独立地选自N或CR⁴，R⁴选自氢原子、卤素原子、氨基、C_1-6烷基胺基、二(C_1-6烷基)胺基或被卤素原子取代或未被取代的C_1-6烷基；

M选自未被取代的苯基，C_5-6环烷基或5-6元杂环基；

L不存在，M与Q直接相连；

Q选自未被取代或被1-2个R⁶取代的5-6元饱和杂环基，

R⁶独立地选自卤素原子或C_1-6烷基。

优选为：

其中，

R¹选自氨基，C_1-6烷基胺基或二(C_1-6烷基)胺基；

R²选自被1-3个氟原子或氯原子取代的苯基；

R³选自氢原子；

X选自O，S，NH或N(CH₃)；

Y、Z独立地选自N或CR⁴，且Y、Z不能同时为CR⁴，R⁴选自氢原子、卤素原子或被卤素原子取代或未被取代的C_1-6烷基；

M选自未被取代的呋喃基，四氢呋喃基，噻吩基，2，5-二氢噻吩基，四氢噻吩基，吡咯基，吡咯烷基，噁唑基，4，5-二氢噁唑基，异噁唑基，4，5-二氢异噁唑基，2，3-二氢异噁唑基，1，2，3-噁二唑基，1，2，5-噁二唑基，噻唑基，异噻唑基，1，2，3-噻二唑基，1，2，4-噻二唑基，1，3，4-噻二唑基，咪唑基，四氢咪唑基，吡唑基，四氢吡唑基，4，5-二氢吡唑基，1，2，3-三唑基，1，2，4-三唑基，四唑基，苯基，四氢吡喃基，1，3-二氧杂环己烷，哌啶基，哌嗪基，吗啉基，吡啶基，4H-1，4-噁嗪基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，1，2，3-三嗪基，1，2，4-三嗪基，1，3，5-三嗪基或1，2，4，5-四嗪基；

L不存在，M与Q直接相连；

Q选自未被取代或被1-2个R⁶取代的吡咯烷基，咪唑烷基，四氢呋喃基，吡唑烷基，四氢噻吩基，四氢吡喃基，1，3-二氧杂环己烷，哌啶基，哌嗪基或吗啉基，

R⁶独立地选自C_1-6烷基。

优选为：

其中，

R¹选自氨基，C_1-6烷基胺基或二(C_1-6烷基)胺基；

R²选自

R³选自氢原子；

X选自O，S，NH或N(CH₃)；

Y为CR⁴，R⁴选自氢原子、卤素原子或被卤素原子取代或未被取代的C_1-6烷基；

Z为N；

M选自未被取代的苯基，吡啶基，吡唑基或咪唑基；

L不存在，M与Q直接相连；

Q选自未被取代或被1-2个R⁶取代的哌啶基，吡咯烷基，哌嗪基或吗啉基，

R⁶独立地选自C_1-4烷基。

优选为：

其中，

R¹选自氨基；

R²选自

R³选自氢原子；

X选自O，S，NH或N(CH₃)；

Y为CH；

Z为N；

M选自苯基，吡啶基或吡唑基；

L不存在，M与Q直接相连；

R⁶独立地选自甲基、乙基或丙基。

本发明所述“卤素原子”是指氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等。

本发明所述“C_1-6烷基、C_1-6烷基胺基、二(C_1-6烷基)胺基、C_1-6烷基甲酰基、C_1-6烷基磺酰基”中的“C_1-6烷基”表示直链或支链的含有1-6个碳原子的烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、异己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1-甲基-2-甲基丙基等。

本发明所述“C_3-6环烷基”指含有3-6个碳原子的环烷烃基，如环丙基、环丁基、1-甲基环丁基、环戊基、环己基等。

本发明所述“C_1-6烷氧基”指术语“C_1-6烷基”通过氧原子与其他结构相连接的基团，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、戊氧基、新戊氧基、己氧基等。

本发明所述“芳香环”是指含有苯环的5-10元单环或双环芳香烃环，例如苯基、萘基等。

本发明所述“3-8元杂环基”包括3-8元饱和杂环基和3-8元不饱和杂环基。“3-8元饱和杂环基”指环中不存在不饱和键的3-8元杂环基团，例如氮杂环丙烷、2H-氮杂环丙烷、二氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、1，2-二氮杂环丁烷、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、氢化吡啶酮、哌啶、哌嗪、环氧乙烷、二氧杂环丙烷、硫杂环丙烷、氧杂环丁烷、1，2-二氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、四氢呋喃、四氢噻吩、1，3-二氧杂环戊烷、1，3-二硫杂环戊烷、四氢吡喃、1，4-二氧杂环己烷、1，3-二氧杂环己烷、1，3-氧硫杂环己烷、氧氮杂环丙烷、噁唑、吗啉等。其中，优选氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、氢化吡啶酮、哌啶、哌嗪、环氧乙烷、四氢呋喃、四氢噻吩、1，3-二氧杂环戊烷、1，3-二硫杂环戊烷、四氢吡喃、1，4-二氧杂环己烷、1，3-二氧杂环己烷、1，3-氧硫杂环己烷、氧氮杂环丙烷、噁唑、吗啉等。“3-8元不饱和杂环基”指环中存在不饱和键的3-8元杂环基团，例如3H-二氮杂环丙烯、氮杂环丁二烯、1，2-二氮杂环丁烯、吡咯、二氢吡咯、咪唑、4，5-二氢咪唑、吡唑、4，5-二氢吡唑、1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、四唑、吡啶、2-吡啶酮、4-吡啶酮、哒嗪、嘧啶、吡嗪、1，2，3-三嗪、1，2，4-三嗪、1，3，5-三嗪、1，2，4，5-四嗪、氮杂环庚三烯、1，2-二氮杂环庚三烯、1，3-二氮杂环庚三烯、1，4-二氮杂环庚三烯、氮杂环辛四烯、1，4-二氢-1，4-二氮杂环辛三烯，1，2-二硫杂环丁烯、呋喃、噻吩、2，5-二氢噻吩、1，2-二硫杂环戊烯、2H-吡喃、2H-吡喃-2-酮、3，4-二氢-2H-吡喃、4H-吡喃、4H-吡喃-4-酮、1，4-二氧杂环己二烯、1，4-二硫杂环己二烯、1，4-氧硫杂环己二烯、氧杂环庚三烯、硫杂环庚三烯、1，4-二氧杂环辛三烯，噁唑、4，5-二氢噁唑、异噁唑、4，5-二氢异噁唑、2，3-二氢异噁唑、1，2，3-噁二唑、1，2，5-噁二唑、噻唑、4，5-二氢噻唑、异噻唑、1，2，3-噻二唑、1，2，4-噻二唑、1，3，4-噻二唑、2H-1，2-噁嗪、4H-1，2-噁嗪、6H-1，2-噁嗪、2H-1，3-噁嗪、4H-1，3-噁嗪、5，6-二氢-4H-1，3-噁嗪、6H-1，3-噁嗪、2H-1，4-噁嗪、4H-1，4-噁嗪、2H-1，3-噻嗪、4H-1，3-噻嗪、5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪、6H-1，3-噻嗪、2H-1，4-噻嗪、4H-1，4-噻嗪、吗啉等。其中优选氮杂环丁二烯、1，2-二氮杂环丁烯、吡咯、二氢吡咯、咪唑、4，5-二氢咪唑、吡唑、4，5-二氢吡唑、吡啶、2-吡啶酮、4-吡啶酮、哒嗪、嘧啶、吡嗪、氮杂环庚三烯、1，2-二硫杂环丁烯、呋喃、噻吩、2，5-二氢噻吩、1，2-二硫杂环戊烯、2H-吡喃、2H-吡喃-2-酮、3，4-二氢-2H-吡喃、4H-吡喃、4H-吡喃-4-酮、1，4-二氧杂环己二烯、1，4-二硫杂环己二烯、1，4-氧硫杂环己二烯、氧杂环庚三烯、1，4-二氧杂环辛三烯、噁唑、4，5-二氢噁唑、异噁唑、4，5-二氢异噁唑、2，3-二氢异噁唑、1，2，3-噁二唑、1，2，5-噁二唑、噻唑、4，5-二氢噻唑、异噻唑、1，2，3-噻二唑、1，2，4-噻二唑、1，3，4-噻二唑、2H-1，2-噁嗪、4H-1，2-噁嗪、6H-1，2-噁嗪、2H-1，3-噁嗪、4H-1，3-噁嗪、5，6-二氢-4H-1，3-噁嗪、6H-1，3-噁嗪、2H-1，4-噁嗪、4H-1，4-噁嗪、2H-1，3-噻嗪、4H-1，3-噻嗪、5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪、6H-1，3-噻嗪、2H-1，4-噻嗪、4H-1，4-噻嗪、吗啉、1，3，4-噻二唑。更优选吡咯、二氢吡咯、咪唑、4，5-二氢咪唑、吡唑、4，5-二氢吡唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、呋喃、噻吩、2，5-二氢噻吩、2H-吡喃、2H-吡喃-2-酮、3，4-二氢-2H-吡喃、4H-吡喃、4H-吡喃-4-酮、1，4-二氧杂环己二烯、1，4-二硫杂环己二烯、1，4-氧硫杂环己二烯、噁唑、4，5-二氢噁唑、异噁唑、4，5-二氢异噁唑、2，3-二氢异噁唑、1，2，3-噁二唑、1，2，5-噁二唑、噻唑、4，5-二氢噻唑、异噻唑、1，2，3-噻二唑、1，2，4-噻二唑、1，3，4-噻二唑等。

特别优选的化合物包括：

本发明还提供了上述化合物的制备方法：

(1)中间体2的制备

于反应瓶中加入中间体1、原料1，加入溶剂(如乙腈、CCl₄等)，0-25℃下反应至原料消失，旋干过柱得中间体2。

(2)式I-1化合物的制备

于反应瓶中加入中间体2、Pd催化剂(如Pd(PPh₃)₄、Pd(dppf)Cl₂等)、溶剂(如乙醇、甲苯、水等)、碱(K₂CO₃，K₃PO₄等)，于60-180℃下反应至原料消失，降温加入水，然后用乙酸乙酯萃取，经硅胶柱分离得式I-1化合物。

当X为O时，中间体1可以根据以下工艺制备。

(1)中间体A-1的制备

于反应瓶中加入原料A-1、甲氧甲基氯、强碱(如NaH、KOH等)和溶剂(如DMF、THF等)，室温搅拌反应至原料消失后，降温加入水淬灭，然后用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干溶剂得中间体A-1。

(2)中间体A-2的制备

于反应瓶中，在-40--100℃，加入中间体A-1和溶剂(如乙醚、THF等)，氮气保护下于-40--100℃反应0.5-2小时，然后再加入卤代试剂(如I₂、1，2-二碘乙烷等)，然后继续于-40--100℃反应至原料消失后，加入稀盐酸淬灭，然后用乙酸乙酯萃取，经硅胶柱分离得中间体A-2。

(3)中间体A-3的制备

于反应瓶中，加入中间体A-2、强酸(如浓盐酸、浓硫酸等)和醋酸，室温反应至原料消失后，加入饱和NaHCO₃溶液，然后用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，旋干得中间体A-3。

(4)中间体A-4的制备

于反应瓶中加入中间体A-3、原料A-2、Pd催化剂(如Pd(PPh₃)₂Cl₂、Pd(PPh₃)₄等)、一价铜盐(如CuI等)、有机碱(如三乙胺等)和溶剂(如DMF等)，氮气保护下于50-150℃反应至原料消失后，降温加入水，然后用乙酸乙酯萃取，经硅胶柱分离得中间体A-4。

(5)中间体I-1的制备

于封管中加入中间体A-4、氨水，反应液于80-180℃搅拌至原料消失，降温加入乙酸乙酯，分离有机相干燥，旋干得中间体I-1。

上述反应中的R¹、R²、R³、M、L、Q、X、Y、Z如前文所述；优选X¹为卤素原子；R⁷为氢原子或C_1-6烷基；R⁸为C_1-6烷基。

本发明上述任一化合物药学上可接受的盐是指由药学上可接受的、非毒性碱或酸制备的盐，包括有机酸盐、无机酸盐、有机碱盐、无机碱盐。有机酸盐包括甲酸、乙酸、苯磺酸、苯甲酸、对甲苯磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、丙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、粘酸、双羟萘酸、泛酸、琥珀酸、酒石酸等的盐。无机酸盐包括氢溴酸、氢氯酸、硝酸、硫酸、磷酸等的盐。

有机碱盐包括伯、仲和叔胺，被取代胺包括天然存在的取代胺、环胺和碱离子交换树脂，选自甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙胺基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-吗啉、N-乙基哌啶、葡甲胺、氨基葡萄糖、海巴明、异丙基胺、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等的盐。天然氨基酸盐如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、正亮氨酸、酪氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、组氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、精氨酸、丝氨酸等的盐。无机碱盐包括铵以及锂、钠、钾、钙、镁、锌、钡、铝、铁、酮、亚铁、锰、二价锰等的盐。

本发明式(I)化合物或其药学上可接受的盐由于存在不对称碳原子，可以以一种旋光异构体形式存在，因此，本发明还包括这些旋光异构体及其混合物。

本发明进一步要求保护包括上述任一化合物或其药学上可接受的盐，可以用本领域已知的方式配制成临床上或药学上可接受的任一剂型。以口服、肠胃外、直肠或经肺给药等方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服给药时，可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。用于肠胃外给药时，可制成注射剂，包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，配制注射剂时，可以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂。用于直肠给药时，可制成栓剂等。用于经肺给药时，可制成吸入剂或喷雾剂等。每一单位制剂中含有生理有效量的式(I)所示的化合物0.01g～10g，可以为0.01g、0.05g、0.1g、0.125g、0.2g、0.25g、0.3g、0.4g、0.5g、0.6g、0.75g、1g、1.25g、1.5g、1.75g、2g、2.5g、3g、4g、5g、10g等。

本发明进一步提供了本发明通式(I)化合物用于治疗与激酶相关的疾病，特别是ALK和/或c-Met介导的病症或病况。

本发明还提供了本发明化合物在制备治疗和/或预防由ALK和/或c-Met介导的癌症相关疾病或非癌症相关疾病的药物中的应用。本发明所述癌症相关疾病包括但不仅限于：脑瘤、肺癌、非小细胞性肺癌、鳞状上皮细胞、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、直肠癌、肝癌、肾癌、食管腺癌、食管鳞状细胞癌、实体瘤、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经系统肿瘤(神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质肉瘤)、前列腺癌、甲状腺癌、雌性生殖道癌、原位癌、淋巴瘤、组织细胞淋巴瘤、神经纤维瘤病、甲状腺癌、骨癌、皮肤癌、脑癌、结肠癌、睾丸癌、小细胞肺癌、胃肠道间质瘤、前列腺肿瘤、肥大细胞肿瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、神经母细胞瘤、肉瘤等。非癌性疾病包括但不仅限于皮肤或前列腺的良性增生等。

本发明化合物具有以下优点：

(1)本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体对ALK激酶有优异的抑制活性，有显著的临床意义；

(2)本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体显示出良好的生物稳定性，作用更持久，生物利用度高；

(3)本发明化合物制备工艺简单，药品纯度高、收率高、质量稳定，易于进行大规模工业生产。

以下通过体外酶学抑制活性实验进一步阐述本发明化合物有益效果，但不应将此理解为本发明化合物仅具有下列有益效果。

实验例本发明化合物的体外酶学活性实验

供试品：本发明部分化合物，其化学名称和制备方法见各化合物的制备实施例。

实验方法：

1.10mM化合物的100％DMSO储备液，用100％DMSO稀释至50μM，用DMSO将上述母液逐级稀释至12.5μM，3.13μM，0.78μM，0.20μM，49nM，12nM，3nM，0.7nM，0.19nM，然后每个浓度用水10×稀释为5×化合物溶液；1.25×激酶缓冲液(不含MnCl2)：62.5mM HEPES，pH 7.5；0.001875％Brij-35；12.5mM MgCl2；2.5mM DTT；1.25×激酶缓冲液(含MnCl2)；终止液：100mM HEPES，pH 7.5；0.015％Brij-35；0.2％Coating Reagent#3；50mMEDTA；2.5×酶溶液：ALK酶加入1.25×激酶缓冲液；2.5×肽溶液：FAM标记多肽和ATP加入1.25×激酶缓冲液；

2.将5×化合物溶液加入384孔板；然后加入含有ATP的2.5×酶溶液孵育10min；加入2.5×肽溶液，28℃，反应1h；最后加入终止液终止反应，Caliper读取数据。

3.然后加入含有ATP的2.5×酶溶液孵育10min；加入2.5×肽溶液，28℃，反应1h；最后加入终止液终止反应，Caliper读取数据。

4.IC50。计算抑制率(％)＝(最大转换率-转换率)/(最大转换率-最小转换率)×100，采用XL fit软件进行曲线拟合，得出IC50值。

实验结果和结论：

表1本发明化合物的体外酶学抑制活性

由表1可见，本发明化合物对ALK激酶有较强的抑制活性，可用于治疗与激酶相关的疾病，特别是ALK激酶介导的病症或病况，具有显著的临床意义。

4、具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例12-(2，6-二氯-3-氟苯基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]呋喃[2，3-c]并吡啶-7-胺 (化合物1)的制备

(1)3-(甲氧基甲氧基)-2-氯吡啶

于反应瓶中加入2-氯-3-羟基吡啶(1.40g，10.8mmol)，甲氧甲基氯(0.89g，11mmol)，NaH(0.41g，11mmol)和DMF(10mL)，室温搅拌反应至原料消失后，降温加入水(10mL)，然后用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干溶剂得粗产物1.2g，不经提纯直接用于下一步。

(2)2-氯-3-(甲氧基甲氧基)-4-碘吡啶

于反应瓶中，在-78℃，加入3-(甲氧基甲氧基)-2-氯吡啶(1.74g，10mmol)，二异丙基胺基锂(2M的THF/正己烷/乙苯溶液(6mL，12mmol))，和THF(50mL)，氮气保护下于-78℃反应至原料消失后，加入水淬灭，然后用乙酸乙酯萃取，经硅胶柱分离得产物1.5g，收率50％。

(3)2-氯-3-羟基-4-碘吡啶

于反应瓶中，加入2-氯-3-(甲氧基甲氧基)-4-碘吡啶(2.99g，10mmol)，浓HCl(3mL，36mmol)和HOAc(10mL)，室温反应至原料消失后，加入饱和NaHCO₃溶液，然后用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，旋干得粗产物1.6g，收率62.7％。

(4)2-(2，6-二氯-3-氟苯基)-7-氯呋喃[2，3-c]并吡啶

于反应瓶中加入2-氯3-羟基-4-碘吡啶(2.55g，10mmol)，1，3-二氯-2-乙炔基-4-氟苯(1.89g，10mmol)，Pd(PPh₃)₂Cl₂(0.21g，0.3mmol)，CuI(0.12g，0.6mmol)，三乙胺(4.04g，40mmol)和DMF(100mL)，N₂保护下于100℃反应至原料消失后，降温加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯萃取，经硅胶柱分离得产物1.2g，收率38％。

(5)2-(2，6-二氯-3-氟苯基)-7-氨基呋喃[2，3-c]并吡啶

于封管中加入2-(2，6-二氯-3-氟苯基)-7-氯呋喃[2，3-c]并吡啶(3.16g，10mmol)，氨水(10mL，14.8M水溶液，148mmol)，反应液于150℃搅拌至原料消失，降温加入乙酸乙酯(100mL)，分离有机相干燥，旋干得粗产品2.1g，粗品收率70.8％，不经提纯直接用于下一步。

(6)2-(2，6-二氯-3-氟苯基)-4-溴-7-氨基呋喃[2，3-c]并吡啶

于反应瓶中加入2-(2，6-二氯-3-氟苯基)-7-氨基呋喃[2，3-c]并吡啶(2.1g，7.1mmol)，NBS(1.26g，7.1mmol)，乙腈(100mL)，0℃下反应至原料消失，旋干过柱得产品1.5g，收率56.6％。

(7)4-[4-[7-氨基-2-(2，6-二氯-3-氟苯基)呋喃[2，3-c]并吡啶-4-基]-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯

于反应瓶中加入2-(2，6-二氯-3-氟苯基)-4-溴-7-氨基呋喃[2，3-c]并吡啶(1.5g，4.0mmol)，4-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼酸-2-基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.51g，4.0mmol)，Pd(PPh₃)₄(0.347g，0.3mmol)和乙醇(5mL)及甲苯(50mL)，水(5mL)，80℃下反应至原料消失，降温加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯萃取，经硅胶柱分离得产物1.1g，收率50.5％。

(8)2-(2，6-二氯-3-氟苯基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]呋喃[2，3-c]并吡啶-7-胺

于反应瓶中加入4-[4-[7-氨基-2-(2，6-二氯-3-氟苯基)呋喃[2，3-c]并吡啶-4-基]-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.546g，1mmol)和CH₂Cl₂(5mL)及二氧六环(20mL)，通入盐酸气至反应至原料消失，饱和NaHCO₃溶液中和后用乙酸乙酯萃取，纯化得产品221mg，收率49.6％。

另一种合成方法如下：

(1)3-(甲氧基甲氧基)-2-硝基吡啶2的制备

于反应瓶中加入2-硝基-3-羟基吡啶1(1mmol)，NaH(1.5mmol)，DMF(10mL)室温搅拌反应0.5h，然后加入甲氧甲基氯(1.5mmol)继续搅拌反应至原料消失后，降温加入水(10mL)，然后用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干溶剂得粗产物2，不经提纯直接用于下一步。

(2)3-(甲氧基甲氧基)-2-胺基吡啶3的制备

于反应瓶中加入2(1mmol)，Pd/C(0.0184g)，MeOH(5mL)，加H₂室温搅拌反应至原料消失后，然后用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干溶剂得粗产物3，不经提纯直接用于下一步。

(3)4的制备

于反应瓶中加入3(1mmol)，DMAP(2.0mmol)，(BocO)₂O(1mmol)溶于DMF中，N₂保护下，室温搅拌反应至原料消失，然后用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干溶剂得粗产物4，不经提纯直接用于下一步。

(4)5的制备

N₂保护下，-78℃下，物质4(0.354g，1mmol)的THF溶液中加入t-BuLi(1.5mmol)，保持温度搅拌反应0.5h，然后加入I₂(1.5mmol)，反应至原料消失，然后用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干溶剂得粗产物5，不经提纯直接用于下一步。

(5)7的制备

N₂保护下，物质5(1mmol)的THF溶液中加入CuI(0.2mmol)，PdP(Ph)₃Cl(0.1mmol)，(Et)₃N(3mmol)，室温搅拌反应0.5h，然后逐滴加入1，3-二氯-2-乙炔基-4-氟苯6(1.5mmol)搅拌反应1h，至原料消失，然后用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干溶剂得粗产物7，不经提纯直接用于下一步。

(6)8的制备

室温下，物质7(1mmol)的THF溶液中加入CF₃COOH(3mmol)，搅拌反应3h，反应至原料消失，然后用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干溶剂得粗产物8，不经提纯直接用于下一步。

(7)9的制备

于反应瓶中加入8(1mmol)，CuI(0.1mmol)，(Et)₃N(2mmol)溶于DMF中，75℃反应2h至原料消失，然后用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干溶剂得粗产物9，不经提纯直接用于下一步。

(8)10的制备

于反应瓶中加入9(1mmol)，NBS(1.5mmol)溶于CH₃CN中，室温反应2h至原料消失，然后用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干溶剂得粗产物10，不经提纯直接用于下一步。

(9)12的制备

于反应瓶中加入10(1mmol)，11(1.5mmol)，PdP(Ph)₃Cl(0.1mmol)，Na₂CO₃(2mmol)溶于DMF和H₂O混合溶剂中(DMF∶H₂O＝1∶1)，85℃反应5h至原料消失，然后用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干溶剂得粗产物12，不经提纯直接用于下一步。

(10)化合物1的制备

于反应瓶中加入4-[4-[7-氨基-2-(2，6-二氯-3-氟苯基)呋喃[2，3-c]并吡啶-4-基]-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯12(0.546g，1mmol)和CH₂Cl₂(5mL)及1，4-二氧六环(20mL)，通入盐酸气至反应至原料消失，饱和NaHCO₃溶液中和后用乙酸乙酯萃取，纯化得化合物1221mg，收率49.6％。

分子式：C₂₁H₁₈Cl₂FN₅O质谱(m/e)：446.1(M+H)

¹H NMR：(400MHz，MeOD)δ：8.08(s，1H)，7.94(s，1H)，7.46-7.88(m，3H)，7.29(s，1H)，4.39(m，1H)，3.13(m，2H)，2.81(m，2H)，2.00-2.19(m，4H).

参考上述制备方法，还可以制备以下化合物。

Claims

1.通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中，

R¹选自氨基；

R²选自

R³选自氢原子；

X选自O；

Y为CH；

Z为N；

M选自苯基，吡啶基或吡唑基；

L不存在，M与Q直接相连；

Q选自未被取代的哌啶基，吡咯烷基，哌嗪基或吗啉基。

2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，化合物选自：

3.如权利要求1～2任一权利要求所述的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药用载体和／或稀释剂制成的药学上可接受的任一剂型。

4.含有如权利要求1～2任一权利要求所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，可还含有一种或多种药物活性成分。

5.如权利要求1～2任一权利要求所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗和／或预防ALK介导的癌症相关疾病的药物中的应用，所述癌症相关的疾病选自脑瘤，非小细胞性肺癌，鳞状上皮细胞癌，膀胱癌，胃癌，卵巢癌，腹膜癌，胰腺癌，乳腺癌，头颈癌，子宫颈癌，子宫内膜癌，结直肠癌，肝癌，肾癌，食管腺癌，食管鳞状细胞癌，非霍奇金淋巴瘤，神经胶质瘤，甲状腺癌，雌性生殖道癌，原位癌，淋巴瘤，组织细胞淋巴瘤，神经纤维瘤病，骨癌，皮肤癌，脑癌，结肠癌，睾丸癌，小细胞肺癌，胃肠道间质瘤，前列腺肿瘤，肥大细胞肿瘤，多发性骨髓瘤，黑色素瘤，神经母细胞瘤。