CN102429876B

CN102429876B - 利拉鲁肽缓释微球制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN102429876B
Application number: CN201110417193.7A
Authority: CN
Inventors: 颜携国; 潘俊锋; 马亚平; 袁建成
Original assignee: Hybio Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Hybio Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2011-12-14
Filing date: 2011-12-14
Publication date: 2014-12-24
Anticipated expiration: 2031-12-14
Also published as: CN102429876A

Abstract

一种利拉鲁肽缓释微球制剂的配方，主要由5-60份利拉鲁肽，50-200份生物可降解基质材料组成，生物可降解基质材料是：聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物,乙交酯-丙交酯共聚物，聚乙醇酸、聚己内酯、聚乳酸-羟基乙酸-聚己内酯共聚物或PLCG-聚己内酯，或其中任意两种或两种以上的混合物。优选聚乳酸-羟基乙酸-聚己内酯共聚物。本发明的缓释微球包封率高、缓释效果好。

Description

利拉鲁肽缓释微球制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及利拉鲁肽药物组合物及其制备方法，尤其涉及一种利拉鲁肽缓释微球制剂及其制备方法。

背景技术

随着生物技术的高速发展，越来越多的多肽、蛋白质类药物被研制出来，并在临床应用中表现出许多独特的疗效，例如利拉鲁肽、特立帕肽、丙氨瑞林等。但由于多肽和蛋白类药物生物半衰期短，稳定性差，易被体内酶代谢，且难以在胃肠道内吸收，所以需要长期、频繁地注射给药，阻碍了其在临床上方便、广泛和有效的使用。

利拉鲁肽(Liraglutide)是由诺和诺德公司研发的人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物，由31肽个氨基酸残基构成，其分子的结构如下:

H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε-(N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH

利拉鲁肽与天然GLP-1分子结构相比有一个赖氨酸被精氨酸取代，一个赖氨酸上连接谷氨酸并增加了一个16碳棕榈酰脂肪酸侧链，与天然人GLP-1有97％同源性，使其在保留天然功效的同时延长其酰化产物与蛋白结合时间, 克服GLP-1易降解的缺点。

利拉鲁肽作为GLP-1类似物通过以下途径改善2型糖尿病患者的代谢紊乱：

①葡萄糖浓度依赖性促胰岛素分泌；②抑制餐后胰高血糖素的分泌，减少肝糖的释放；③增强胰岛素的敏感性；④减慢胃的排空；⑤抑制食欲, 减轻体重。GLP-1的促胰岛素分泌和抑制胰高血糖素分泌作用具有血糖浓度依赖性，当血糖浓度恢复正常时，GLP-1的促胰岛素分泌作用减弱，因此，长期接受外源性GLP-1治疗，不会引起低血糖的发生。

诺和诺德公司研发的利拉鲁肽注射液，商品名：VICTOZA®，皮下注射给药每日一次。在海外，2009年6月在欧洲27个国家首次获得批准， 2008年7月在韩国获得批准， 2010年1月在美国和日本被批准上市，在我国2011年3月已获得SFDA批准上市。该制剂己被证实在改善血糖控制及减轻体重方面具有良好效果，为平稳控制血糖，需每日皮下注射给药，频繁的注射使患者顺应性较差，患者苦不堪言。

常规方法制备利拉鲁肽微球存在突释、包封率和载药量不理想的缺点，而且医疗应用中给药次数频繁。本发明要解决的技术问题是提供一种能有效延长利拉鲁肽在体内作用时间的缓释微球制剂，降低利拉鲁肽的给药频率。

发明内容

本发明提供一种利拉鲁肽缓释微球制剂的配方，包括：

利拉鲁肽	5-60份
		生物可降解基质材料	50-200份

其中活性成分为利拉鲁肽，通用英文名：Liraglutide，化学名：Arg³⁴Lys²⁶- (N-ε-(N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-GLP-1[7-37]，由化学合成，包括固相合成或液相合成；生物可降解基质材料选自聚乳酸(DL-PLA)、聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA),乙交酯-丙交酯共聚物（PLCG），聚乙醇酸（PGA )、聚己内酯（PCL）、聚乳酸-羟基乙酸-聚己内酯共聚物（PLGA- PCL）、PLCG-聚己内酯（PLCG- PCL），或其中任意两种或两种以上的混合物。其中PLGA-聚己内酯共聚物（PLGA- PCL）分子量为10, 000-200, 000道尔顿，PLGA和PCL的比例1:2-1:4，PLGA中乳酸和羟基乙酸的比例为90:10到50:50,分子量为6, 000-100, 000道尔顿，属于羧基末端。组成缓释微球的高分子辅料为上述中的一种或两种及两种以上的混合物或共聚物。

优选的，利拉鲁肽缓释微球制剂可以包含50-400份的保护剂，该保护剂选自碳酸锌、人血清白蛋白、明胶、海藻糖、蔗糖或甘露醇中的一种或其混合物。保护剂可以保护蛋白多肽类物质在制备微球的过程中不降解。

优选的生物可降解基质材料是聚乳酸-羟基乙酸-聚己内酯共聚物。

本发明缓释微球制剂的制备方法有以下三种

1、S/0/W复乳化-溶剂挥发法:

（1）取PLGA-PCL溶于有机溶剂中，浓度为lO-1OOmg/ml，得油相；其中有机溶剂为二氯甲烷或者乙酸乙酯；

（2）将利拉鲁肽与油相混合，利拉鲁肽浓度为15-60mg/mL；

（3）将与步骤（2）利拉鲁肽与油相混合物迅速滴加至0.1%-2%聚乙烯醇（PVA)水溶液中，搅拌充分匀化；水溶液中还可加入0-5%氯化钠、0-2%磷酸盐或者0-5%蔗糖。其中搅拌速度为5，000-20，000rpm（转/分），室温下减压低速搅拌6小时以挥发有机溶剂，搅拌速度为200-1,000rpm，即得缓释微球，洗涤，收集，冷冻干燥即得。

2、喷雾干燥法:

（1）将PLGA-PLA溶于由弱极性有机溶剂与强极性有机溶剂组成的混合溶剂中形成有机相；其中弱极性有机溶剂包括二氯甲烷、乙酸乙酯或乙酸甲酯，强极性有机溶剂包括甲醇、乙腈、丙二醇或二甲亚砜。PLGA-PLA的浓度为10-100mg/mL；

（2）将利拉鲁肽加入到水中，使药物完全溶解；可以采用涡旋混合使药物溶解。

（3）将利拉鲁肽溶液加入有机相中，高速搅拌，形成W/0乳液；其中高速搅拌的条件为：5，000-20，000 rpm，搅拌1-10分钟；

（4）采用低温气流进行微球固化，即得缓释微球。

3、W/O₁/O₂乳化-液中干燥法

（1）将利拉鲁肽加入到注射用水中，涡旋混合使药物完全溶解；

（2）利拉鲁肽水溶液与乳化剂的二氯甲烷混合；其中所用乳化剂为HLB值范围在1.8-12.4之间的非离子型表面活性剂，其中非离子型表面活性剂为司盘80 (Span80)或司盘60 (Span60)，在连续相中的浓度为0.05%-2%；

（3）称取PLGA-PCL溶解在有机溶媒中作为有机相；其中有机溶媒为氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸甲酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氢呋喃、乙腈的单一溶剂或任意两种以及以上的混合溶剂；PLGA-PCL优选PLGA：PCL比例是1:2-1:4，PCL分子量2,000-20,000。

（4）将步骤2）和步骤3）溶液混合，两相混合后超声，形成W/O初乳。超声可以选择探头式超声仪，于50-200瓦，超声5-30秒。

（5）将W/O初乳与含10%的 PVP的甲醇混合，搅拌下乳匀制成W/O₁/O₂型复乳，减压，乳液固化成微球；其中搅拌可以在5，000-20，000 rpm搅拌，乳匀2-10分钟。在减压条件下，随着二氯甲烷不断地被甲醇抽提出后，乳液固化成微球。初乳与含10%PVP的甲醇溶液体积比为1:40-1:10。

（6）过滤收集得到的微球，依次用非极性溶剂洗去微球表面吸附的油性惰性介质，用强极性溶剂洗去微球表面吸附的游离药物，冷冻干燥即可。用于洗去微球表面吸附的油性惰性介质的非极性溶剂为正己烷、己烷或石油醚；用于洗去微球表面吸附的游离药物的强极性溶剂为水、甲醇或乙醇。

本发明所制各的缓释微球，粒径为1-100微米。

本发明所制备的缓释微球，表面光滑圆整，无粘连。

本发明制备的缓释微球，体外释放实验表明能缓慢持续释放四周，并且无明显的突释效应。

本发明成功制备了具有载药量高、包封率高、无明显突释、释放持续缓慢等特点的包裹利拉鲁肽的缓释微球制剂。

附图说明

附图1：本发明实施例3制备的利拉鲁肽缓释微球的扫描电镜图片；

附图2：本发明实施例1所制备的利拉鲁肽缓释微球制剂的体外累积释放曲线，纵坐标:累积释放释放百分率(%) ，横坐标:时间(天)；

附图3：本发明实施例2所制备的利拉鲁肽缓释微球制剂的体外累积释放曲线，纵坐标:累积释放释放百分率(%) ，横坐标:时间(天)；

附图4：本发明实施例3所制备的利拉鲁肽缓释微球制剂的体外累积释放曲线，纵坐标:累积释放释放百分率(%) ，横坐标:时间(天)；

附图5：本发明实施例3制备方法与W₁/0/W₂的利拉鲁肽缓释微球表面扫描电镜图片；

附图6：本发明采用PLGA-PCL与PLGA、PLA制备的利拉鲁肽缓释微球体外释放度比较；

附图7：本发明实施例1所制备的利拉鲁肽缓释微球制剂给药后第1天血糖浓度-时间曲线，纵坐标: 血糖浓度（mmol），横坐标:时间(min)；

附图8：本发明实施例3所制备的利拉鲁肽缓释微球制剂给药后第7天血糖浓度-时间曲线，纵坐标: 血糖浓度（mmol），横坐标:时间(min)；

附图9：本发明实施例3所制备的利拉鲁肽缓释微球制剂给药后第14天血糖浓度-时间曲线，纵坐标: 血糖浓度（mmol），横坐标:时间(min)；

附图10：本发明实施例3所制备的利拉鲁肽缓释微球制剂给药后第21天血糖浓度-时间曲线，纵坐标: 血糖浓度（mmol），横坐标:时间(min)；

附图11：本发明实施例3所制备的利拉鲁肽缓释微球制剂给药后第28天血糖浓度-时间曲线，纵坐标: 血糖浓度（mmol），横坐标:时间(min)；

具体实施方式

实施例1 S/0/W复乳化-溶剂挥发法制备利拉鲁肽缓释微球制剂

PLGA -PCL(聚乳酸：羟基乙酸的比例为60:40, Mw=10，000, 聚乳酸-羟基乙酸共聚物：聚已内酯比例为1:2) 200mg溶于4.0ml有机溶剂（二氯甲烷：乙酸乙酯比例为2：1）制成油相，将利拉鲁肽20mg分散加入油相的初乳，分散，形成S/0，将含2%PVA的溶液50m1置于搅拌容器中，将初乳在高速搅拌(5,000rpm)下快速加入外水相中充分匀化，三分钟后，将转速下调至30Orpm，加入0.75%聚乙烯醇溶液，室温减压下搅拌6小时，微球硬化后离心分离并洗涤，冷冻干燥即可。利拉鲁肽微球的包封率为87%，粒径<100um。

实施例2 S/O/W₂复乳化-溶剂挥发法制备利拉鲁肽缓释微球制剂

PLGA -PCL(聚乳酸：羟基乙酸的比例为50:50, Mw=15，000, 聚乳酸-羟基乙酸共聚物：聚已内酯比例为1:4) 250mg溶于2.5m1二氯甲烷制成油相，将利拉鲁肽50mg加入上述油相，分散，形成S/O的初乳，将含1%聚乙烯醇（PVA）的溶液50m1置于搅拌容器中，将初乳在高速搅拌(10，000rpm)下快速加入外水相中充分匀化，一分钟后，将转速下调至600rpm，加入0.5%聚乙烯醇溶液，室温减压下搅拌6小时，微球硬化后离心分离并洗涤，冷冻干燥即可。利拉鲁肽微球的包封率为92%，粒径<80um。

实施例3 喷雾干燥法制备利拉鲁肽缓释微球制剂

将100mg PLGA（聚乳酸：羟基乙酸的比例为75:25, Mw=10，000)溶解于5.0ml有机溶剂（二氯甲烷：甲醇比例为3：1）。将20mg利拉鲁肽及海藻糖2.0mg分散到2.0ml注射用水中，涡旋混合使药物完全溶解。将利拉鲁肽溶液加入到有机相中，15，000 rpm搅拌下高速搅拌三分钟，形成W/0乳液，经喷雾干燥器以雾化状态喷入表面覆盖液氮的低温乙醇中；乙醇挥发萃取出PLGA液滴中的二氯甲烷；冷冻条件下挥去液氮，冷冻干燥得到微球。利拉鲁肽微球的包封率为85%,粒径<80um。

实施例4 喷雾干燥法制备利拉鲁肽缓释微球制剂

将150mg PLGA（聚乳酸：羟基乙酸的比例为90:10, Mw=15，000)溶解于2.0ml有机溶剂（二氯甲烷：丙二醇比例为4：1）。将20mg利拉鲁肽及海藻糖2.0mg分散到2.0ml注射用水中，涡旋混合使药物完全溶解。将利拉鲁肽溶液加入到有机相中，12，000 rpm搅拌下高速搅拌三分钟，形成W/0乳液，经喷雾干燥器以雾化状态喷入表面覆盖液氮的低温乙醇中；乙醇挥发萃取出PLGA液滴中的二氯甲烷；冷冻条件下挥去液氮，冷冻干燥得到微球。利拉鲁肽微球的包封率为90%,粒径<70um。

实施例5 W/O₁/O₂乳化-液中干燥法制备利拉鲁肽缓释微球制剂

利拉鲁肽60mg溶于1m1的注射用水中，利拉鲁肽水溶液与0.05%司盘60 (Span60)的二氯甲烷混合，形成水相。将PLGA-PCL比例是1:4 (其中PLGA的聚乳酸-羟基乙酸的比例为90:10, Mw=10，000；PCL分子量15，000)300mg溶于3m1二氯甲烷制成油相。将水相加入油相，两相混合后置探头式超声仪，于50瓦，30秒超声，形成W/O初乳。将40.0ml甲醇(含10%的 PVP)缓缓加入到W/O初乳中，5，000rpm搅拌下乳匀十分钟制成W/O₁/O₂型复乳，随着二氯甲烷不断地被甲醇抽提出后，乳液固化成微球。过滤收集得到的微球，依次用石油醚洗去微球表面吸附的油性惰性介质，用适量注射用水洗去微球表面吸附的游离药物，冷冻干燥即可。利拉鲁

肽微球的包封率为95%，粒径<100um。

实施例6 W/O₁/O₂乳化-液中干燥法制备利拉鲁肽缓释微球制剂

利拉鲁肽50mg溶于1m1的注射用水中，利拉鲁肽水溶液与0.1%司盘60 (Span60)的二氯甲烷混合，形成水相。将PLGA-PCL比例是1:1.5 (其中PLGA的聚乳酸-羟基乙酸的比例为75:25, Mw=10，000；PCL分子量10，000) 300mg溶于3m1二氯甲烷制成油相，将水相加入上述油相，两相混合后置探头式超声仪，于100瓦，20秒超声，形成W/O初乳。将80.0ml甲醇(含10%的 PVP)缓缓加入到W/O初乳中，10，000rpm搅拌下乳匀五分钟制成W/O₁/O₂型复乳，随着二氯甲烷不断地被甲醇抽提出后，乳液固化成微球。过滤收集得到的微球，依次用石油醚：正己烷比例为1：1有机溶液洗去微球表面吸附的油性惰性介质，用适量注射用水洗去微球表面吸附的游离药物，冷冻干燥即可。利拉鲁肽微球的包封率为92%，粒径<90um。

实施例7 W/O₁/O₂乳化-液中干燥法制备利拉鲁肽缓释微球制剂

利拉鲁肽30mg溶于1m1的注射用水中，利拉鲁肽水溶液与0.2%司盘80 (Span80)的二氯甲烷混合，形成水相。将PLGA-PCL比例是1:3(其中PLGA的聚乳酸-羟基乙酸的比例为50:50, Mw=15，000；PCL分子量10，000)300mg溶于3m1二氯甲烷制成油相，将水相加入上述油相，两相混合后置探头式超声仪，于200瓦，10秒超声，形成W/O初乳。将120.0ml甲醇(含10%的 PVP)缓缓加入到W/O初乳中，15，000rpm搅拌下乳匀三分钟制成W/O₁/O₂型复乳，随着二氯甲烷不断地被甲醇抽提出后，乳液固化成微球。过滤收集得到的微球，依次用石油醚：正己烷比例为1：1有机溶液洗去微球表面吸附的油性惰性介质，用适量50%的乙醇水溶液洗去微球表面吸附的游离药物，冷冻干燥即可。利拉鲁肽微球的包封率为91%，粒径<90um。

实施例8 冷冻干燥工艺

放入制品，设板层温度为0℃，保持120min，再设板温-40℃180min，板温-40℃保持90min。对后箱制冷，在限量泄露为8±2pa条件下，对制品加热，至8小时后制品完全抽白。设定板层温度为25℃，待制品温度越过-25～-20℃温度段后，打开有限量泄漏25±5，使制品温度迅速上升到20℃后，关闭有限量泄漏，恒温干燥10小时。充氮，压塞，出箱。

对比实施例1 微球的常规制备方法

将利拉鲁肽50mg以10ml注射用水溶解，使药物完全溶解，作为内水相。称取4gPLGA，加入5ml二氯甲烷中，使PLGA完全溶解，作为有机相。将有机相加入到内水相中，混合均匀，加热，探头式超声乳化，冷却至18℃得初乳，将初乳加入到已冷却至18℃的2.5%聚乙烯醇溶液中，高速搅拌得复乳，复乳投入到2%磷酸盐溶液中，以400rpm低速搅拌，挥干有机溶剂，离心收集微球，用注射用水洗涤5次，得微球。将300mg甘露醇和溶于1000ml 0.25%PVA注射用水中，与上述微球混悬均匀，得微球混悬液。然后将微球混悬液冷冻干燥，真空干燥，分装于lOml西林瓶中。

对比实施例2 微球的常规制备方法

将利拉鲁肽100mg以40ml注射用水溶解，使药物完全溶解，作为内水相。称取8gPLGA，加入10ml二氯甲烷中，使PLGA完全溶解，作为有机相。将有机相加入到内水相中，混合均匀，加热，均质机乳化，冷却至12℃得初乳，将初乳加入到已冷却至12℃的10%聚乙烯醇溶液中，高速搅拌得复乳，复乳投入到5%氯化钠溶液中，以600rpm低速搅拌，挥干有机溶剂，离心收集微球，用注射用水洗涤5次，得微球。将1g甘露醇和溶于1000ml 0.5%PVA注射用水中，与上述微球混悬均匀，得微球混悬液。然后将微球混悬液冷冻干燥，真空干燥，分装于2Oml西林瓶中。

对比实施例3 微球的常规制备方法

将利拉鲁肽60mg以12ml注射用水溶解，使药物完全溶解，作为内水相。称取4gPLGA，加入6ml二氯甲烷中，使PLGA完全溶解，作为有机相。将有机相加入到内水相中，混合均匀，加热，均质机乳化，冷却至15℃得初乳，将初乳加入到已冷却至15℃的7%聚乙烯醇溶液中，高速搅拌得复乳，复乳投入到注射用水中，以1000rpm低速搅拌，挥干有机溶剂，离心收集微球，用注射用水洗涤5次，得微球。将800mg甘露醇和溶于1000ml 0.5%PVA注射用水中，与上述微球混悬均匀，得微球混悬液。然后将微球混悬液冷冻干燥，真空干燥，分装于1Oml西林瓶中。

对比实施例4 W/O₁/O₂乳化-液中干燥法制备利拉鲁肽缓释微球制剂

利拉鲁肽30mg溶于1m1的注射用水中，利拉鲁肽水溶液与0.2%司盘80 (Span80)的二氯甲烷混合，形成水相。将PLGA (PLGA的聚乳酸-羟基乙酸的比例为50:50, Mw=15，000)300mg溶于3m1二氯甲烷制成油相，将水相加入上述油相，两相混合后置探头式超声仪，于200瓦，10秒超声，形成W/O初乳。将120.0ml甲醇(含10%的 PVP)缓缓加入到W/O初乳中，15，000rpm搅拌下乳匀三分钟制成W/O₁/O₂型复乳，随着二氯甲烷不断地被甲醇抽提出后，乳液固化成微球。过滤收集得到的微球，依次用石油醚：正己烷比例为1：1有机溶液洗去微球表面吸附的油性惰性介质，用适量50%的乙醇水溶液洗去微球表面吸附的游离药物，冷冻干燥即可。

对比实施例5 W/O₁/O₂乳化-液中干燥法制备利拉鲁肽缓释微球制剂

利拉鲁肽30mg溶于1m1的注射用水中，利拉鲁肽水溶液与0.2%司盘80 (Span80)的二氯甲烷混合，形成水相。将PLA (PLA的聚丙交酯, Mw=15，000)300mg溶于3m1二氯甲烷制成油相，将水相加入上述油相，两相混合后置探头式超声仪，于200瓦，10秒超声，形成W/O初乳。将120.0ml甲醇(含10%的 PVP)缓缓加入到W/O初乳中，15，000rpm搅拌下乳匀三分钟制成W/O₁/O₂型复乳，随着二氯甲烷不断地被甲醇抽提出后，乳液固化成微球。过滤收集得到的微球，依次用石油醚：正己烷比例为1：1有机溶液洗去微球表面吸附的油性惰性介质，用适量50%的乙醇水溶液洗去微球表面吸附的游离药物，冷冻干燥即可。

实验例1 W/O₁/O₂乳化-液中干燥法与常规制备方法包封率比较

表1 W/O₁/O₂乳化-液中干燥法与常规制备方法比较

W/O₁/O₂乳化-液中干燥法制备的微球外观圆整，表面和内部骨架光滑坚实，而W₁/O/W₂乳化-液中干燥法制备的微球表面和内部骨架充满着众多微孔，微球的形态对其药物包封率方面特性产生明显的影响，包封率W/O₁/O₂要优于W₁/O/W₂。

实验例2 采用相同方法制备不同高分子材料微球的释放度比较

例子	高分子材料	C_max（%）	C_5d
				实施例7	PLGA-PCL	1.78	9.0
对比实施例4	PLGA	1.70	25.6
				对比实施例5	PLA	1.69	1.5

C_max是最大百分浓度，C_5d是5天时的百分浓度。

实验数据显示，乳酸-羟基乙酸（PLGA)有较高的极性，亲水性较强，降解时间相对较短，以羧基（带负电荷）末端的PLGA易与利拉鲁肽的氨基（带正电荷）发生静电结合，降低了利拉鲁肽的突释，PLGA与PCL聚合对于调节利拉鲁肽的释放更显优势。体外释放度见图6。

Claims

1.一种利拉鲁肽缓释微球制剂，其特征在于：采用S/O/W复乳化-溶剂挥发法制备利拉鲁肽缓释微球制剂，把200mg PLGA–PCL溶于4.0ml有机溶剂制成油相，其中所述PLGA–PCL中的PLGA乳酸：羟基乙酸的比例为60:40，Mw=10,000，聚乳酸-羟基乙酸共聚物：聚己内酯比例为1:2，所述有机溶剂是二氯甲烷：乙酸乙酯比例为2：1；再将利拉鲁肽20mg加入上述油相，分散，形成S/O 的初乳，并将含2%聚乙烯醇的溶液50ml置于搅拌容器中，将初乳在高速搅拌5,000rpm下快速加入外水相中充分匀化，三分钟后，将转速下调至300rpm，加入0.75% 聚乙烯醇溶液，室温减压下搅拌6小时，微球硬化后离心分离并洗涤，冷冻干燥即可。

2.一种利拉鲁肽缓释微球制剂，其特征在于：采用S/O/W₂复乳化-溶剂挥发法制备利拉鲁肽缓释微球制剂，把250mg PLGA -PCL溶于2.5ml二氯甲烷制成油相，其中所述PLGA–PCL中的PLGA乳酸：羟基乙酸的比例为50:50，Mw=15,000，聚乳酸- 羟基乙酸共聚物：聚己内酯比例为1:4；再将利拉鲁肽50mg 加入上述油相，分散，形成S/O 的初乳，并将含1% 聚乙烯醇的溶液50ml置于搅拌容器中，将初乳在高速搅拌10,000rpm下快速加入外水相中充分匀化，一分钟后，将转速下调至600rpm，加入0.5% 聚乙烯醇溶液，室温减压下搅拌6小时，微球硬化后离心分离并洗涤，冷冻干燥即可。

3.一种利拉鲁肽缓释微球制剂，其特征在于：采用W/O₁/O₂乳化-液中干燥法制备利拉鲁肽缓释微球制剂，把利拉鲁肽30mg 溶于1ml 的注射用水中，利拉鲁肽水溶液与0.2% Span80的二氯甲烷混合，形成水相；将300mg PLGA-PCL溶于3ml二氯甲烷制成油相，其中所述PLGA-PCL中PLGA：PCL的比例是1:3，PLGA 的乳酸：羟基乙酸的比例为50:50，Mw=15,000 ，PCL 分子量10,000；再将所述水相加入所述油相，两相混合后置探头式超声仪，于200瓦，10秒超声，形成W/O 初乳；将含10% PVP的120.0ml甲醇缓缓加入到W/O 初乳中，15,000rpm 搅拌下乳匀三分钟制成W/O₁/O₂ 型复乳，随着二氯甲烷不断地被甲醇抽提出后，乳液固化成微球，过滤收集得到的微球，依次用石油醚：正己烷比例为1：1有机溶液洗去微球表面吸附的油性惰性介质，用适量50%的乙醇水溶液洗去微球表面吸附的游离药物，冷冻干燥即可。