CN102428086A

CN102428086A - Cdk抑制剂的盐类

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Publication number: CN102428086A
Application number: CN2010800188650A
Authority: CN
Inventors: M·赞姆皮里; A·艾罗尔迪; M·G·弗纳雷托; M·G·布拉斯卡
Original assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Current assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Priority date: 2009-04-29
Filing date: 2010-04-23
Publication date: 2012-04-25
Anticipated expiration: 2030-04-23
Also published as: HK1169408A1; CN102428086B; TW201043631A; EP2424868B1; AR076433A1; ES2660146T3; US8586598B2; JP2012525345A; JP5801285B2; US20120041007A1; WO2010125004A1; EP2424868A1

Abstract

本发明涉及cdk抑制剂的水溶性盐类及游离碱的新晶型。这些结晶盐类是，例如，富马酸盐、L-苹果酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、己二酸盐、丙二酸盐、羟基乙酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、L-乳酸盐、盐酸盐、二盐酸盐、三盐酸盐。本申请中还要求保护并记载了这些新盐形式的水合物及多晶型物，其制备方法，其在治疗中的用途以及包含它们的药物组合物。

Description

CDK抑制剂的盐类

本发明涉及新的结晶、cdk抑制剂的水溶性盐类、其制备方法、该新的盐形式的水合物与多晶型物、其在治疗中的应用及包含它们的药物组合物。

众所周知，细胞周期的进程受到一系列检查点的控制，这些检查点也被称为限制点，其受到称为细胞周期蛋白-依赖性激酶(cdk)的酶家族的调节。继而，cdk本身在许多水平上受到调节，例如与细胞周期蛋白结合。

不同的细胞周期蛋白/cdk复合物的协调活化及失活是细胞周期正常进程所必需的。关键的G1-S及G2-M转变都受到不同的细胞周期蛋白/cdk活性活化的控制。在G1中，细胞周期蛋白D/cdk4及细胞周期蛋白E/cdk2均被认为介导S-期的开始。S-期的进程需要细胞周期蛋白A/cdk2的活性，而有丝分裂的开始需要细胞周期蛋白A/cdc2(cdk1)及细胞周期蛋白B/cdc2的活化。关于细胞周期蛋白及细胞周期蛋白-依赖性激酶的一般参考文献可以参见例如：Kevin R.Webster等，Exp.Opin.Inves t.Drugs，1998，Vol.7(6)，865-887。

肿瘤细胞中检查点控制是有缺陷的，其可以部分归因于cdk活性的失调。例如，在肿瘤细胞中已经观察到细胞周期蛋白E及cdk的表达改变，并且小鼠中cdk抑制剂p27KIP基因的缺失已经显示会导致较高的癌症发生率。

有不断增加的证据支持如下观点，即cdk是细胞周期进程中的限速酶，因此代表了治疗性干预的靶分子。特别是cdk/细胞周期蛋白激酶活性的直接抑制应当有助于限制肿瘤细胞的失调增生。

已经证实一些吡唑并喹唑啉类化合物是细胞周期蛋白依赖性激酶酶(尤其是cdk2)的强效抑制剂。这些化合物中的一种化合物目前正被开发作为一种抗癌剂。cdk抑制剂被认为可阻断来自细胞周期的G2/M相的细胞的传代。

在第一个方面，本发明的一个目的是提供一种具有下式的化合物125的盐：

在本说明书中，除非另外指明，否则化合物125是8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-1，4，4-三甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-羧酸甲基酰胺。其可如2004年12月2日公开的国际专利申请WO2004104007中记载的制备，且具有蛋白质激酶抑制活性，并因此在治疗中用作抗肿瘤剂。特别是上述国际专利申请中的实施例58记载了化合物125的优选的制备。

2007年8月16日公开的国际专利申请WO2007090794记载并要求保护该化合物与其他抗肿瘤剂的特定增效组合物。

化合物125是一种难溶于水的化合物，其在水中的溶解度低于0.1mg/ml。化合物125在5％葡萄糖溶液中的溶解度低于0.1mg/ml，在10％聚山梨酯80水溶液中约为0.8mg/ml，在50％聚乙二醇400水溶液中约为8mg/ml，并且当原位配制为HCl盐时约为10mg/ml或更高。

此外，游离碱会轻度的吸湿，由于其在25℃下90％相对湿度(RH)时呈现约2％的最大吸水量。

将最先得到的游离碱转变为三盐酸盐，以提高该化合物的溶解性，同时可以使药物配制为水溶液(在5％葡萄糖溶液中的溶解度约为10mg/ml)，以供早期药理及毒理评估使用(如上述国际专利申请中的实施例59所记载)。

通过解决早期调配方法的问题，所得到的三盐酸盐是无定形的吸湿固体，因此不适于开发为口服制剂。

湿气吸收对药粉来说是一种严重的顾虑。例如湿气对药物、赋形剂和制剂的物理、化学和制造性质都具有显著的影响。其也是决定包装、储存、处理及保存期限的一项关键因素，因而成功的开发需要对吸湿性质有一个彻底的了解。

举例来说，当相对湿度超过一个临界水平且固体中的含水量快速增加时，可观察到自无水至水合物形式的转变。这不仅会影响药物本身的物理及药学性质，并且也会影响其生物药剂学方面。此外，已经熟知，水合物形式通常相对于相应的无水形式的溶解性更差，其对活性化合物本身的溶解速率性质及其通过胃肠道的吸收特性也具有潜在的不利影响。以相同的方式，在存在湿度时可观察到自结晶至无定形形式的转变，在物理稳定性方面存在潜在缺点。例如无定形活性药物若溶解的话，可自大气吸收相对大量的水，直至其溶解为止，同时其化学稳定性也会受到影响，因为经热力学活化的无定形结构更易化学降解及与其他化学物种发生化学相互作用。因而，制剂及活性成分两者的性能及效力皆可显著改变。

因此，在治疗中需要一种具有较低吸湿性及良好且可再现的生物药剂学性质的化合物125的水溶性盐，所述盐可实现较安全且有效的口服给药。

本发明人已经通过提供具有改良物理化学性质的化合物125的新的盐类以及盐类的新晶型，从而解决了上述技术问题。事实上，该新盐类是具有高水溶性的结晶的、较低吸湿性的、可快速溶解的固体，并且除了具备所有其他优点特别是如无定型游离碱和三盐酸盐的已知形式所展现出的治疗优点外，在实质上还引入了处理、储存及制剂等的重要优点。

意外地，化合物125的新盐及游离碱形式被发现并证实为晶体。结晶粉末的性质使得此类形式特别适用于药物开发。

附图说明

参照下述附图对发明进行说明。

图1显示化合物125游离碱及其结晶盐类的X-射线衍射图，其中2θ角度(度)记录于x轴，而强度(CPS)记录于y轴。特别地，光谱是关于化合物125游离碱I型(A)及以下盐类：三盐酸盐I型(B)、L-苹果酸盐I型(C)、羟基乙酸盐I型(D)、丙二酸盐I型(E)盐类。

图2显示化合物125游离碱I型(A)及以下盐类的X-射线衍射图：马来酸盐II型(B)、琥珀酸盐I型(C)、己二酸盐I型(D)盐类。

图3显示化合物125游离碱I型(A)及以下盐类的X-射线衍射图：二盐酸盐I型(B)、L-乳酸盐I型(C)、甲磺酸盐I型(D)、磷酸盐I型(E)、富马酸盐半结晶I型(F)盐类。

图4显示化合物125游离碱I型(A)及以下盐类的X-射线衍射图：三盐酸盐I型(B)、二盐酸盐I型(C)、盐酸盐I型(D)盐类。

图5显示游离碱与平衡离子间摩尔比为0.5∶1的化合物125马来酸盐I型(A)、游离碱与平衡离子间摩尔比为2∶1的化合物125马来酸盐II型(B)、游离碱与平衡离子间摩尔比为2∶1的化合物125马来酸盐I型(C)、及游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125马来酸盐III型(D)的X-射线衍射图。

图6显示化合物125羟基乙酸盐I型的X-射线衍射图。

图7显示化合物125丙二酸盐I型的X-射线衍射图。

图8显示化合物125三盐酸盐I型的X-射线衍射图。

图9显示化合物125二盐酸盐I型的X-射线衍射图。

图10显示化合物125盐酸盐I型的X-射线衍射图。

图11显示游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125马来酸盐I型的X-射线衍射图。

图12显示游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125马来酸盐II型的X-射线衍射图。

图13显示游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125马来酸盐III型的X-射线衍射图。

图14显示化合物125游离碱I型的X-射线衍射图。

图15显示通过使溶解于pH 6.8缓冲溶液中的化合物125的盐沉淀，而得到的化合物125游离碱II型的X-射线衍射图。

图16显示化合物125游离碱I型(A)及以下盐类的DSC温谱图：丙二酸盐I型(B)、磷酸盐I型(C)、甲磺酸盐I型(D)、富马酸盐半结晶I型(E)、L-苹果酸盐I型(F)。温谱图将温度(℃)记录于x轴，同时将热流量(mW)记录于y轴。

图17显示化合物125游离碱I型(A)及以下盐类的DSC温谱图：羟基乙酸盐I型(B)、己二酸盐I型(C)、L-乳酸盐I型(D)、琥珀酸盐I型(E)及马来酸盐II型(F)盐类。

图18显示化合物125三盐酸盐I型(A)、二盐酸盐I型(B)及盐酸盐I型(C)的DSC温谱图。

图19记录如实施例6所述经过额外干燥的化合物125L-乳酸盐I型(A)、琥珀酸盐I型(B)及己二酸盐I型(C)盐类的DSC温谱图。

图20记录化合物125马来酸盐的典型DSC温谱图。

图21记录化合物125马来酸盐(A)的TGA温谱图，及例如通过例如类似于实施例8中所述方法的吸湿性试验(DVS)受到平衡的化合物125马来酸盐的TGA温谱图。TGA温谱图将温度(℃)记录于x轴，同时将重量百分比(％)记录于y轴。

在第一个方面，本发明涉及化合物125的新的盐类及其晶型，其选自富马酸盐、L-苹果酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、己二酸盐、丙二酸盐、羟基乙酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐及L-乳酸盐。

在另一个方面，本发明涉及化合物125的新晶型，其选自盐酸盐、二盐酸盐及三盐酸盐。

发现此类盐为晶体，从而使得该形式特别适用于药物开发。

这些化合物125的盐类可通过已知的类似方法获得，即将所需摩尔数的溶剂或平衡离子的水溶液，添加至溶解于适当溶剂中的游离碱中。该溶剂优选为有机(尤其是无水)溶剂，更优选为甲醇、乙醇、二氯甲烷及其混合物。如果需要，可通过在无水非极性溶剂(例如乙醚、正己烷或环己烷)中添加或再处理，从而利于所得盐的沉淀或结晶。

根据本发明，盐类的定义还包括其水合物及多晶型物。

本发明特别涉及化合物125马来酸盐的新晶型及水合物。

文中所用的术语“水合物”是指经过溶剂化形成的化合物，其中溶剂是水。

接着，在另一个方面，本发明涉及作为游离碱的化合物125的稳定晶型。

本发明的另一目的是提供一种药物组合物，其包括作为活性成分的任何如上所定义的化合物125的盐、化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或者为游离碱形式的化合物125的晶型以及药学上可接受的赋形剂和/或载体。

本发明的另一目的是提供任何如上所定义的化合物125的盐、化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或者为游离碱形式的化合物125的晶型作为药物、特别是作为CDK抑制剂的用途。

本发明的另一目的是提供治疗需要CDK抑制的哺乳动物包括人类的方法，所述方法包括对所述哺乳动物给予治疗有效量的任何如上所定义的化合物125的盐、化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或者为游离碱形式的化合物125的晶型。

另外，本发明涉及任何如上所定义的化合物125的盐、化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或者为游离碱形式的化合物125的晶型在治疗患有通过CDK抑制而可治疗的疾病状态(其意指细胞增生障碍如癌症、病毒感染、自体免疫疾病及神经变性障碍)的哺乳动物包括人类的方法中的用途。

因此，任何如上所定义的化合物125的盐、化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或者为游离碱形式的化合物125的晶型能够单独或与其他治疗药剂联用，适用于治疗患有通过CDK抑制而可治疗的疾病状态的哺乳动物包括人类，或用于制备这种治疗所需的药物。

因此，本发明还提供任何如上所定义的化合物125的盐、化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或者为游离碱形式的化合物125的晶型用于制备药物的用途，所述药物用于治疗通过CDK抑制而可治疗的疾病状态。

术语“可治疗的疾病状态”是指根据本发明的治疗能使疾病状态缓解，或至少使接受治疗的哺乳动物的状况及生活品质得到改善。

该疾病状态的实例特别是指不同的癌症，其可包括所有类型的癌、髓系或淋巴系的造血系统癌、间质来源的肿瘤、中枢及周围神经系统的肿瘤、黑色素瘤、间皮瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤及卡波西氏肉瘤，其还包括细胞增生疾病诸如良性前列腺肥大、家族性腺瘤病、息肉病、神经纤维瘤病、牛皮癣、与动脉粥样硬化相关的血管平滑细胞增生、肺纤维化、关节炎、肾小球性肾炎、手术后狭窄及再狭窄、器官移植排斥及宿主对抗移植体疾病。

化合物125的盐类的有效剂量可根据疾病、病症的严重度及接受治疗的病人的状况而改变。因此，医生始终需对每一位病人设定最佳剂量。无论如何，有效剂量的范围可从约20mg/天至约300mg/天，优选从约50mg/天至约150mg/天(以游离碱计算)，其是作为一次使用或多次分开使用的日剂量。

如上所定义的化合物125的盐、化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或者为游离碱形式的化合物125的晶型口服容易吸收，因此优选将其口服给药。

毋庸置疑，本发明的化合物可经由任何给药途径给予，例如通过非肠胃、局部、直肠及鼻腔途径。

因此，在第一个方面，本发明是关于化合物125的富马酸盐、L-苹果酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、己二酸盐、丙二酸盐、羟基乙酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐及L-乳酸盐。

本发明优选的盐类是化合物125的L-苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、羟基乙酸盐、磷酸盐及L-乳酸盐。

更优选的化合物125的盐类是马来酸盐、丙二酸盐及羟基乙酸盐。

如前所述，本发明还涉及化合物125盐的新晶型及水合物。

另一方面，本发明涉及游离碱形式的化合物125新晶型。

再一方面，发现化合物125马来酸盐可以以结晶固体的形式获得，该结晶固体具有称为I型、II型和III型的三种不同晶型。

I型是一种化合物125马来酸盐的高熔点晶型，其特征在于为水合物形式，在室内条件(例如25℃/60％RH)下具有约1摩尔水的可逆吸收，并且在暴露在温度和/或湿度的应激(stressed)条件(例如储存在40℃/75％RH)下的作用下，其可以转变为III型。

在25℃及90％相对湿度(RH)下的约3.0-3.5％的总吸收可通过在相同温度下将RH降至约20％而逆转。

II型是化合物125的高熔点晶型，其显示出在晶格中残留非化学计量的量的溶剂(例如醇类，如乙醇、丁醇、丙醇)的性质，且在干燥条件或暴露在温度和湿度的应激条件(例如储存在40℃/75％RH)下的作用下，其可以转变为I或III型。

III型是一种化合物125马来酸盐的高熔点晶型，其特征在于为水合物形式，在室内条件(例如25℃/60％RH)下具有约1摩尔水的可逆吸收。在25℃及90％相对湿度(RH)下的约3.0-3.5％的吸收可通过在相同温度下将RH降至约20％而逆转。

再一方面，发现化合物125马来酸盐可以以0.5∶1、1∶1及2∶1的摩尔比以结晶固体形式获得。

化合物125羟基乙酸盐和化合物125丙二酸盐会轻微吸湿，两者在25℃/90％RH下都具有约2.5％的可逆吸水。

化合物125盐具有良好的溶解度，特别是马来酸盐、丙二酸盐、羟基乙酸盐在0.5％葡萄糖溶液中的溶解度为约10mg/mL或更高。

除了具有高水溶性的优点外，化合物125盐，尤其是马来酸盐、丙二酸盐、羟基乙酸盐，还特别适合以明确的酸/碱比进行可重复的生产。

此发现使得这类盐特别适合使用在口服用的液体制剂中，也同样适合静脉注射剂型。

表1-化合物125的盐及游离碱形式的固态性质描述

注(*)：若无不同说明，所述盐类是指游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1。

注(**)：所记录的PXRD峰是根据完整数据组中的它们的较高强度而选择的。

在一优选的实施方案中，游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125的基本上纯的马来酸盐I型具有图11所示的X-射线衍射图。

游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125马来酸盐I型也是高度优选的，其具有图11所示类型的X-射线衍射图，并且大约在表1所述的2θ值(度)处具有显著的峰强度。

在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表7中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125的基本上纯的马来酸盐II型具有图12所示的X-射线衍射图。

游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125马来酸盐II型也是高度优选的，其具有图12所示类型的X-射线衍射图，并且在表1所述的2θ值(度)处具有峰强度。

在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表8中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125的基本上纯的马来酸盐III型具有图13所示的X-射线衍射图。

游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125马来酸盐III型也是高度优选的，其具有图13所示类型的X-射线衍射图，并且在表1所述的2θ值(度)处具有峰强度。

在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表9中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125的基本上纯的羟基乙酸盐I型具有图6所示的X-射线衍射图。

游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125羟基乙酸盐I型也是高度优选的，其具有图6所示类型的X-射线衍射图，并且在表1所述的2θ值(度)处具有峰强度。

在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表2中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125的基本上纯的丙二酸盐I型具有图7所示的X-射线衍射图。

游离碱与平衡离子间摩尔比为1∶1的化合物125丙二酸盐I型也是高度优选的，其具有图7所示类型的X-射线衍射图，并且在表1所述的2θ值(度)处具有峰强度。

在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表3中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，化合物125的基本上纯的三盐酸盐I型具有图8所示的X-射线衍射图。

具有图8所示类型的X-射线衍射图的化合物125三盐酸盐I型也是高度优选的，其在表1所述的2θ值(度)处具有峰强度。

在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表4中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，化合物125的基本上纯的二盐酸盐I型具有图9所示的X-射线衍射图。

具有图9所示类型的X-射线衍射图的化合物125二盐酸盐I型也是高度优选的，其在表1所述的2θ值(度)处具有峰强度。

在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在下表5中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，化合物125的基本上纯的盐酸盐I型具有图10所示的X-射线衍射图。

具有图10所示类型的X-射线衍射图的化合物125盐酸盐I型也是高度优选的，其在表1所述的2θ值(度)处具有峰强度。

在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在下面表6中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，基本上纯的化合物125游离碱I型具有图14所示的X-射线衍射图。

具有图14所示类型的X-射线衍射图的化合物125游离碱I型也是高度优选的，其在表1所述的2θ值(度)处具有峰强度。

在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在下面表10中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，基本上纯的化合物125游离碱II型具有图15所示的X-射线衍射图。

具有图15所示类型的X-射线衍射图的化合物125游离碱I型也是高度优选的，其在表1所述的2θ值(度)处具有峰强度。

在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在下面表11中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

再一方面，发现化合物125马来酸盐可以在游离碱与平衡离子间摩尔比为0.5∶1的情况下制成结晶固体。

在另一优选的实施方案中，游离碱与平衡离子间摩尔比为0.5∶1的化合物125的基本上纯的马来酸盐I型具有图5中代码A的X-射线衍射图。

再一方面，发现化合物125马来酸盐可以在游离碱与平衡离子间摩尔比为2∶1的情况下制成结晶固体。

游离碱与平衡离子间摩尔比为2∶1的化合物125的基本上纯的马来酸盐I型也是高度优选的，其具有图5中代码C的X-射线衍射图。

在另一优选的实施方案中，游离碱与平衡离子间摩尔比为2∶1的化合物125的基本上纯的马来酸盐II型，具有图5中代码B的X-射线衍射图。

基本上纯指的是本发明的晶型具有至少90％的纯度。更优选为本发明的晶型具有至少95％的纯度，最优选为至少99％重量的化合物125的酸加成盐或游离碱的晶体是以本发明所述的晶型存在。

再一方面，涉及通过DSC的固态表征，发现由PXRD表征为结晶物质的化合物125琥珀酸盐、L-乳酸盐、己二酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、富马酸盐及L-苹果酸盐呈现出复杂的DSC曲线。这些盐经历涉及去溶剂化/脱水过程的热转变，及经过了以其DSC熔融峰温度为特征的去溶剂化的/脱水形式的随后熔融。当发生例如降解的时候，可伴随进一步的热转变。

再一方面，涉及通过DSC的固态表征，发现化合物125三盐酸盐、二盐酸盐及盐酸盐也呈现出复杂的DSC曲线。这些盐经历涉及去溶剂化/脱水过程的热转变，及涉及降解熔融的后续特征以及以其DSC熔融峰温度为特征的HCl失去。

再一方面，涉及通过DSC的固态表征，发现化合物125丙二酸盐也呈现出复杂的DSC曲线。此盐经历热转变，所述热转变涉及熔融及随后降解及平衡离子的蒸发，可能还接着游离碱的结晶和其随后熔融，这些特征是由其DSC熔融峰温度所表征。

应当理解，DSC的开始和/或峰值温度值可在不同机器、不同方法或不同样品间有些微小变化，因此不应将本文引用的值视为绝对。事实上，观察到的温度取决于温度变化速率及样品制备技术以及所使用的特定仪器。应用这些不同条件所得的温度值可能在正负约4℃范围内改变，应将该情况估计并考虑在内。结果进一步描述于表1及实施例6中。

根据本发明的另一个方面，可根据现有技术中的已知方法及现有技术中已知的任何药物形式，配制用于对哺乳动物包括人类给药的药物组合物。

例如，药物组合物包含如文中所定义的化合物125的盐，其与药学上可接受的稀释剂或载体结合。本发明的组合物可以为适用于口服使用(例如为片剂、锭剂、硬或软胶囊、水性或油性悬浮液、乳剂、可分散粉末或颗粒、糖浆或酏剂)、局部使用(例如为乳膏、软膏、凝胶或水性或油性溶液或悬浮液)、经由吸入给药(例如为细分散粉末或液态气溶胶)、经由吹入法给药(例如为细分散粉末)或经由肠胃外给药(例如为用于静脉内、皮下、肌肉内的无菌水性或油性溶液、或为直肠给药的栓剂)的形式。

本发明的组合物可使用现有技术中已经熟知的常规药物赋形剂并通过常规的方法获得。

因此，用于口服使用的组合物可包含，例如，一种或多种着色剂、甜味剂、芳香剂和/或防腐剂。

片剂制剂的适合制剂药学上可接受的赋形剂包括，例如，填充剂诸如乳糖、甘露糖醇、微晶纤维素、碳酸钠、预糊化淀粉、磷酸钙或碳酸钙；制粒剂及崩解剂诸如交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉、交联聚维酮或羟基乙酸淀粉钠；粘合剂诸如淀粉、微晶纤维素、聚维酮、蔗糖；润滑剂诸如硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酸反丁烯二酸钠、聚乙二醇或滑石；助流剂诸如胶态二氧化硅；防腐剂诸如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯；以及抗氧化剂诸如抗坏血酸。

片剂制剂可不包衣或包衣，用以改变其崩解性质以及随后活性成分在胃肠道内的吸收性质，或改良其稳定性和/或外观，在任一情况中，使用常规的包衣剂及现有技术中熟知的方法。

供口服使用的组合物可为硬胶囊的形式，其中活性成分是与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，并且包括上述供片剂制剂使用的赋形剂；或为软胶囊的形式，其中活性成分是与水或诸如花生油、液态石蜡、大豆油、椰子油的油类，或优选为橄榄油，或任何其他可接受的赋形剂混合。供口服使用的组合物也可为硬胶囊的形式，其中活性成分是经配制为稳定药物固体或半固体分散物，其包含活性成分及例如亲水性载体、作为抗氧化剂的水溶性维生素E衍生物及可选的其他赋形剂。水悬浮液一般包含呈细粉形式的活性成分以及一种或多种悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、黄芪胶及金合欢胶；分散或湿润剂诸如卵磷脂或环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、或环氧乙烷与长链脂族醇(例如十七乙烯基氧鲸蜡醇)的缩合产物、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸及己糖醇的偏酯(诸如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)的缩合产物、或环氧乙烷与长链脂族醇(例如十七乙烯基氧鲸蜡醇)的缩合产物、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸及己糖醇的偏酯(诸如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)的缩合产物、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸及己糖醇酐的偏酯(诸如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)的缩合产物。

水性悬浮液还可以包含一种或多种防腐剂(诸如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯)、抗氧化剂(诸如抗坏血酸)、着色剂、芳香剂、和/或甜味剂(诸如蔗糖、糖精或阿斯巴甜)。油性悬浮液可通过使活性成分悬浮于植物油(诸如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(诸如液态石蜡)中而进行调配。油性悬浮液还可以包含增稠剂诸如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。

可添加如上所述的甜味剂及芳香剂，以提供适口的口服制剂。

这些组合物可通过添加诸如抗坏血酸的抗氧化剂而保存。

适于通过添加水而制备水悬浮液或溶液的可分散或冻干粉末及颗粒，其一般包含活性成分以及分散或湿润剂、悬浮剂及一种或多种防腐剂。

适合的分散或湿润剂及悬浮剂以如上述提及的物质为例。

还可以存在额外的赋形剂诸如甜味剂、芳香剂及着色剂。

本发明的药物组合物还可以为水包油乳剂的形式。

该油相可为植物油，诸如橄榄油或花生油；或为矿物油，诸如液态石蜡或任何此类物质的混合物。

适合的乳化剂可为，例如，天然存在的胶诸如金合欢胶或黄芪胶，天然存在的磷脂诸如大豆、卵磷脂、衍生自脂肪酸及己糖醇酐的酯或偏酯(例如脱水山梨糖醇单油酸酯)及该偏酯与环氧乙烷的缩合产物诸如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。

该乳剂还可以包含甜味剂、芳香剂及防腐剂。

糖浆及酏剂可以用甜味剂诸如甘油、丙二醇、山梨糖醇、阿斯巴甜或蔗糖制备，并且也可以包含缓和剂、防腐剂、芳香剂和/或着色剂。

药物组合物还可以为无菌可注射的水性或油性悬浮液、溶液、乳剂或特殊体系的形式，其可以使用以上已经提到的一种或多种适当的分散或湿润剂及悬浮剂，并根据已知的方法配制。

无菌可注射制剂还可以为无菌可注射溶液或悬浮液，其在无毒性肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中，例如在聚乙二醇中的溶液。

栓剂可通过将活性成分与适宜的非刺激性赋形剂混合而制备得到，该赋形剂在常温下为固体但在直肠温度下为液体，因此其可于直肠中熔化并释放药物。

适宜的赋形剂包括，例如，可可脂及聚乙二醇。

局部制剂，诸如乳膏、软膏、凝胶及水性或油性溶液或悬浮液，一般可通过使用现有技术中熟知的常规方法，将活性成分与常规的局部可接受赋形剂或稀释剂进行调配而得到。

用于经由吹入法给药的组合物可呈现细分散粉末形式，其含有平均直径为，例如，30μm或更小，优选为5μm或更小，及更优选为介于μm与1μm之间的颗粒，粉末本身仅包含活性成分或被一种或多种生理学上可接受的载体诸如乳糖稀释。

供吹入法使用的粉末随后被便捷地容纳在含有(例如)1至50mg活性成分的胶囊中，并配有涡轮吸入装置以供使用。用于经由吸入给药的组合物可以为常规的加压气溶胶形式，其将活性成分制成含有细分散固体或液滴的气溶胶。

常规的气溶胶推进剂诸如挥发性的氟代烃类或烃类可以在制备中使用，而气溶胶装置可方便地配送计量的活性成分。呈硬胶囊形式的供口服使用的组合物的实例在实施例10中给予了描述。

实施例

以下实施例说明本发明。

温度是以摄氏度(℃)测量的。

除非另外指明，否则反应或实验是在室温下进行的。

简称：

RT：室温

RH：相对湿度

PXRD：粉末X-射线衍射

DSC：示差扫描量热法

DVS：动态蒸汽吸附

TGA：热重分析

实施例1：化合物125盐形成实验

在室温(RT)下将一份化合物125(约500mg)溶解于10mL的甲醇和二氯甲烷的1∶1混合物中，得到约50mg/mL的标称浓度。

然后通过在室温(RT)下将1∶1摩尔量的平衡离子添加至0.7mL所述化合物125游离碱的溶液中，由此进行若干盐形成的实验。

在-30℃下进行冷却结晶实验，静置时间约为24-36小时。

经由真空过滤收集所得的沉淀物，于40℃下在真空中干燥。

当未发生结晶时，通过在室温(RT)下于温和氮气流中蒸发使溶液浓缩，进而使之沉淀。

在一些情况中，需要进一步的重结晶步骤(例如，于乙醚中研磨化合物)，以从胶状残留物中分离结晶或至少是粉末状的样品。

在40℃真空条件下进行干燥。

通过¹H NMR(说明见实施例9)进行化合物125及酸性平衡离子的化学鉴别。

实施例2：化合物125羟基乙酸盐、马来酸盐及丙二酸盐的克规模制备

当制备羟基乙酸盐及马来酸盐时，回流下将游离碱溶解于无水乙醇中，而在回流条件下制备丙二酸盐时使用甲醇。

在游离碱完全溶解后，添加1当量的酸性平衡离子。

在反应容器中经过适当时间的回流处理之后，中断加热以自发冷却至室温(RT)。其间羟基乙酸盐会沉淀，而沉淀马来酸盐及丙二酸盐则需要分别低至0℃及-20℃的进一步冷却步骤。然后将沉淀物质过滤，于40℃下在真空中干燥至少24小时。

实施例3：化合物125马来酸盐的放大制备

一定量的化合物125游离碱在无水乙醇中回流搅拌下加热30分钟，使起始物料完全溶解(浓度约25g/L)。

之后将1当量的马来酸溶解于乙醇中(浓度约315g/L)，并将其添加至游离碱溶液中。

回流30分钟使盐化完全后，减缓搅拌并中断加热。

混合物自发返回至室温(RT)，过夜，使之沉淀。

次日，将悬浮液冷却至0℃，在此温度下搅拌30分钟，然后使用玻璃纤维过滤器进行过滤。

然后用母液洗涤反应器，将所得的悬浮液在现有的板上过滤。

然后将所得物质于50℃下干燥48小时。

实施例4：化合物125盐及游离碱的溶解度

若未指定其他条件的话，通过以下程序进行化合物125盐的溶解度测定：为了得到10mg/mL或20mg/mL的目标浓度，在96孔板中向蒸发DMSO储备溶液所得已知量的化合物125盐或游离碱中添加以下所述的介质。所得制剂在室温(RT)下摇动30分钟，过滤并进行HPLC分析。

结果记录如下；目标值(10mg/ml或20mg/ml)的达到是通过“或更高”的指示来表示的。

测定化合物125羟基乙酸盐在不同水性介质中的溶解度值，测得的结果如下：

5％葡萄糖溶液中为6.2mg/mL；pH1.2缓冲溶液(氯化物缓冲液)及pH4.5缓冲溶液(醋酸盐缓冲液)中为10.0mg/mL或更高；pH6.8缓冲溶液(磷酸盐缓冲液)中为0.2mg/mL。

化合物125丙二酸盐在5％葡萄糖溶液中的溶解度值为18.4mg/mL。

化合物125三盐酸盐I型在5％葡萄糖溶液中的溶解度值为10mg/mL或更高。

化合物125二盐酸盐在5％葡萄糖溶液中的溶解度值为20mg/mL或更高。

测定化合物125马来酸盐III型在不同水性介质中的溶解度值，测得的结果如下：

5％葡萄糖溶液中为10.0mg/mL或更高；pH4.5缓冲溶液(醋酸盐缓冲液)中约为40.0mg/mL；pH6.8缓冲溶液(磷酸盐缓冲液)中＜0.1mg/mL。

化合物125马来酸盐III型在缓冲溶液中的溶解度测定是通过向40mg的化合物125中添加10mL的介质而进行的。将小玻璃瓶在37℃下机械震荡并避光。16小时后，取出样品并通过特定的HPLC检测法分析溶解度。

测定化合物125游离碱在不同水性介质中的溶解度值，测得的结果如下：

溶解在5％葡萄糖溶液中为＜0.1mg/mL；50％聚乙二醇400的5％葡萄糖溶液中为7.2mg/mL；10％聚山梨醇酯80的5％葡萄糖溶液中为0.8mg/mL；经调配成为盐酸原位盐时为10mg/mL。

实施例5：粉末X-射线衍射(PXRD)的分析结果

通过粉末X-射线衍射(PXRD)表征化合物125盐，其过程是在室温下使用Thermo/ARL XTRA装置，利用CuKα源(45kV，40mA，1.8kW-Kα1辐射，波长λ＝1.54060埃)在5°与34°2θ之间照射粉末样品而进行。

扫描速率为1.20°/分钟(0.020°步进，每步计数时间为1秒)。

在X-射线衍射图中，将衍射2θ的角度描绘在水平轴(x轴)，将线强度描绘在垂直轴(y轴)。

在定义化合物125盐及游离碱晶型的X-射线粉末衍射峰的段落中，表述“…大约在表中所述的2θ角度处…”中使用了术语“大约在”来指示峰的精确位置(即所引述的2θ角度值)，不应将其解释为绝对值，因为本领域技术人员应当明白，在不同机器、不同样品之间，或由于所利用的测量条件有细微的变化，都会使得峰的精确位置稍微改变。

在先前段落中还陈述化合物125盐及游离碱的晶型具有“实质上”与图1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、及15中所示的X-射线粉末衍射图相同的X-射线粉末衍射图，并且在表1、2、3、4、5、6、7、8、9、10及11中所示的2θ角度值处具有实质上最显著的峰。应当明确在本文中使用术语“实质上”也是指X-射线粉末衍射图的2θ角度值在不同机器、不同样品之间，或由于所利用的测量条件有细微的变化都会稍微改变，因此图中所示或表中所引述的峰位置同样不应解释为绝对值。

就此而论，现有技术中已知取决于测量条件(诸如设备、样品制备或所用机器)而可获得具有一个或多个测量误差的X-射线粉末衍射图。特定而言，一般知晓X-射线粉末衍射图中的强度可根据测量条件及样品制备而波动。

举例来说，熟悉X-射线粉末衍射的本领域技术人员应当明了峰的相对强度可受到例如尺寸大于30微米及长宽比(aspect ratio)不均一的颗粒的影响，其会影响样品的分析。

本领域技术人员还应明了反射的位置可受样品位于衍射仪中的精确高度及衍射仪的零校准的影响。

样品的表面平坦度也会具有微小的影响。

因此，本领域技术人员应当明了不应将文中所呈现的衍射图数据解释为绝对(关于更多的信息，参见Fundamentals of Powder Diffraction andStructural Characterization，Pecharsky and Zavalij，Kluwer AcademicPublishers，2003)。因此，应当明了本发明中所述的化合物125的盐及游离碱的晶型并不限于具有与图1中所示的X-射线粉末衍射图相同的X-射线粉末衍射图的晶体，并且任何实质上与图1所示者相同的X-射线粉末衍射图的晶体都属于本发明的范畴之内。

熟悉X-射线粉末衍射的本领域技术人员可判定X-射线粉末衍射图的实质同一性。

一般而言，X-射线粉末衍射图中衍射角度的测量误差约为2θ＝0.5度或更小(或更适宜的，约2θ＝0.2度或更小)，并且在考虑图1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14及15中的x-射线粉末衍射图，以及在诠释文中及表1、2、3、4、5、6、7、8、9、10及11中所提及的峰位置时，应当将此测量误差程度列入考虑。

因此，当陈述例如化合物125的盐及游离碱具有至少一个特定峰在约2θ＝22.8度(或其他任一提及的角度)的X-射线粉末衍射图时，则可解释为2θ＝15.2度加减0.5度，或2θ＝15.2度加减0.2度。

图1至5记录了如实施例1中所述以小规模分离的化合物125的盐及游离碱的粉末X-射线衍射图。

化合物125羟基乙酸盐(I型)、丙二酸盐(I型)、马来酸盐(I型、II型及III型)的主要X-射线衍射峰记录在图7、8、9、10、11、12及13中，其记录根据实施例2、3及4(羟基乙酸盐、丙二酸盐及马来酸盐)以较大规模获得的化合物125盐的粉末X-射线衍射图的实例。

化合物125羟基乙酸盐(I型)、丙二酸盐(I型)、三盐酸盐(I型)、二盐酸盐(I型)、盐酸盐(I型)、马来酸盐(I型、II型及III型)、化合物125游离碱(I型及II型)的主要X-射线衍射峰2θ角度概述于以下表2、3、4、5、6、7、8、9、10及11中。

表2-化合物125羟基乙酸盐

表3-化合物125丙二酸盐

表4-化合物125三盐酸盐，I型

表5-化合物125二盐酸盐

表6-化合物125盐酸盐

表7-化合物125马来酸盐I型

表8-化合物125马来酸盐II型

表9-化合物125马来酸盐III型

表10-化合物125游离碱I型

表11-化合物125游离碱，II型

实施例6：差示扫描量热法(DSC)的分析结果

DSC分析是利用Perkin-Elmer DSC-7装置进行的。将DSC铝盘装入约2mg的样品，分析温度范围在30℃与最大值300℃之间。在氮气流中，在10℃/分钟的加热速率下分析样品。

图16、17、18记录如实施例1所述以小规模分离的化合物125的盐及游离碱及以不同比例获得的盐酸盐的DSC温谱图。

图19记录如实施例1所述以小规模分离及在65℃下于真空中进一步干燥处理后的化合物125的L-乳酸盐I型(A)、琥珀酸盐I型(B)及己二酸盐I型(C)盐类的DSC温谱图。与原始DSC温谱图(记录于图17)进行的比较显示出水合形式的性质。事实上，可以观察到L-乳酸盐及己二酸盐DSC曲线维持起始热行为，该热行为包括跟去溶剂化和/或固态转变相关的热特征。另一方面，通过新的热转变带来的干燥，琥珀酸盐DSC曲线出现显著的变化。

经观察，L-乳酸盐及己二酸盐经过DSC实验中的热处理操作，这些盐转变为无水形式并显示出单一熔融峰。

图20记录根据实施例1获得的且表征为I及III型的化合物125马来酸盐的典型DSC温谱图。关于化合物125马来酸盐，观察到的熔融吸热大约在183℃(峰值温度)，显示大约65焦耳/克的ΔHf。在DSC温谱图的起始部分中通常检测到的脱水吸热取决于物质吸水量的平衡。

应当明了DSC的开始和/或峰值温度值可随不同机器、不同方法或不同样品而发生略微的变化，因此不应将所引述值解释为绝对。事实上，观察到的温度将取决于温度变化速率以及样品制备技术及所使用的特定仪器。应将应用此等不同条件所得的温度值会有正或负约4℃的变化估计并考虑在内。

实施例7：热重分析(TGA)的分析结果

TGA分析是利用Perkin-Elmer TGA-7装置进行的。将DSC铝盘装入约5-10mg的样品。分析温度范围在30℃与最大值约200℃之间。在氮气流中(以消除氧化及热解(pyrolitic)效应)，在2℃/分钟的加热速率下分析样品。

图21记录根据实施例1获得的化合物125马来酸盐的典型TGA温谱图，并表征了当经过脱水(A)和(例如)DVS吸附升温(sorption ramp)(B)之后平衡时，I型及III型的行为。在60℃以内检测到的重量损失步骤，与在DSC温谱图的起始部分中通常检测到的脱水吸热有关，其一般取决于物质吸水量的平衡。

实施例8：动态蒸汽吸附(DVS)的分析结果

化合物125盐及游离碱的样品通过利用DVS 1000(SMS)进行吸湿性试验，从而研究这些物质的吸水量。该装置是“控制大气的微量天平”，其在恒定及受控温度下，将经过称重的样品暴露在程式化变化的相对湿度(RH)下。根据Excel工作表单记录的测量参数(重量、时间及RH)，能够得到在测试RH范围内的吸湿性曲线。

在0％与90％RH之间的吸附/脱附循环可在25℃的受控温度下进行。

RH的渐进变化可为10％及3％；其是通过软件在样品重量的平衡下操作的。此条件可在恒定的重量百分比变化速率(例如，0.005％/分钟)下界定。实验结果是以DVS等温报告及等温图记录的。在DVS吸附升温期间的化合物125马来酸盐的吸水量的实例概述于下表12。

表12-化合物125马来酸盐DVS吸附数据

相对湿度(％)	吸水量(％)
		0.0	0.0
10.0	0.1
		20.0	0.2
30.0	1.9
		40.0	2.5
50.0	2.7
		60.0	2.8
70.0	2.8
		80.0	2.9
90.0	3.1

实施例9：NMR鉴别分析

¹H NMR实验是在28℃的恒温下，在499.8MHZ下操作的Varian Inova 500光谱仪上进行的。将少量的各样品溶解在0.75mL的DMSO-d6中，并转移至5mm的NMR管中供随后分析用。该分析能够确认分子及平衡离子两者的预期化学结构。

实施例10：供口服使用的制剂的组成百分比

成分	范围％
		化合物125	5-70
单水合乳糖	25-95
		硬脂酸镁	0.05-2.5
胶态二氧化硅	0.05-1

本领域技术人员由上述数据及实施例应当明确在本发明中所述的化合物125的新盐类在治疗中是一种新的、经改良的并且有价值的工具。

Claims

1.一种具有以下化学式的化合物125的盐类及其晶型：

选自富马酸盐、L-苹果酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、己二酸盐、丙二酸盐、羟基乙酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐及L-乳酸盐。

2.化合物125的盐类的晶型，其选自盐酸盐、二盐酸盐及三盐酸盐。

3.权利要求1或2中所定义的化合物125的盐类的水合物及多晶型物。

4.化合物125马来酸盐的晶型及水合物。

5.游离碱形式的化合物125的稳定晶型。

6.一种药物组合物，其包含作为活性成分的权利要求1或2中所定义的化合物125的任何盐、权利要求4中所定义的化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或权利要求5中所定义的游离碱形式的化合物125的晶型，以及药学上可接受的赋形剂和/或载体。

7.用作药物的权利要求1或2中所定义的化合物125的任何盐、权利要求4中所定义的化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或权利要求5中所定义的游离碱形式的化合物125的晶型。

8.用于权利要求7所述的用途的权利要求1或2中所定义的化合物125的任何盐、权利要求4中所定义的化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或权利要求5中所定义的游离碱形式的化合物125的晶型，其中所述药物用作CDK抑制剂。

9.一种治疗需要CDK抑制的哺乳动物包括人类的方法，其包括向该哺乳动物给予治疗有效量的权利要求1或2中所定义的化合物125的任何盐、权利要求4中所定义的化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或权利要求5中所定义的游离碱形式的化合物125的晶型。

10.权利要求1或2中所定义的化合物125的任何盐、权利要求4中所定义的化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或权利要求5中所定义的游离碱形式的化合物125的晶型，其是用在治疗患有通过CDK抑制而可治疗的疾病状态的哺乳动物包括人类的方法中。

11.权利要求10所述的化合物125的任何盐、化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或游离碱形式的化合物125的晶型，其特征在于通过CDK抑制而可治疗的疾病状态是细胞增生障碍、病毒感染、自身免疫疾病或神经变性障碍。

12.权利要求11所述的化合物125的任何盐、化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或游离碱形式的化合物125的晶型，其特征在于所述细胞增生障碍是癌症。

13.权利要求12所述的化合物125的任何盐、化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或游离碱形式的化合物125的晶型，其特征在于所述癌症包括所有类型的癌、髓系或淋巴系的造血系统癌、间质来源的肿瘤、中枢及周围神经系统的肿瘤、黑色素瘤、间皮瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤及卡波西氏肉瘤。

14.权利要求1或2中所定义的化合物125的任何盐、权利要求4中所定义的化合物125马来酸盐的晶型或水合物、或权利要求5中所定义的游离碱形式的化合物125的晶型在制备用于治疗通过CDK抑制而可治疗的疾病状态的药物中的用途。