CN102424661A - 一种偶氮类色素半抗原与人工抗原的合成方法 - Google Patents

一种偶氮类色素半抗原与人工抗原的合成方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102424661A
CN102424661A CN2011103215711A CN201110321571A CN102424661A CN 102424661 A CN102424661 A CN 102424661A CN 2011103215711 A CN2011103215711 A CN 2011103215711A CN 201110321571 A CN201110321571 A CN 201110321571A CN 102424661 A CN102424661 A CN 102424661A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pigment
azo class
haptenic
iii
sulphonamide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2011103215711A
Other languages
English (en)
Inventor
王文虎
刘亭亭
任新霞
宋英俊
周秀秀
赵秀杰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu Nantong Weilike Chemical Co., Ltd.
Nankai University
Original Assignee
Nankai University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nankai University filed Critical Nankai University
Priority to CN2011103215711A priority Critical patent/CN102424661A/zh
Publication of CN102424661A publication Critical patent/CN102424661A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Abstract

一种偶氮类色素半抗原与人工抗原的合成方法，一种偶氮类色素半抗原及其抗原的合成方法，属于有机化学领域。本发明首先将偶氮类色素转化为磺酰氯II，将其与不同的铵盐反应制得磺酰胺III，再与4，4’-二硫二苯甲酰氯反应制得IV，断开二硫键即得偶氮类色素半抗原V。再用GMBS将其与载体蛋白BSA偶联得到日落黄完全抗原，可用以制备相应的抗体，为相关的酶免疫分析方法的建立提供技术基础。

Description

一种偶氮类色素半抗原与人工抗原的合成方法
【技术领域】
本发明涉及偶氮类色素衍生物，尤其涉及一种偶氮类色素半抗原及其人工抗原通用的制备方法，属于有机合成领域。
【背景技术】
为了改善食品的色泽，在加工食品的过程中，常常要使用色素类物质，即食用色素。食用色素使用较多的是食用合成色素，且大多为偶氮类色素。一般情况下，偶氮类色素本身不会对人体产生有害影响，但是水溶性的偶氮染料会被肠道菌分解成芳香胺，非水溶性的偶氮染料则会被肝内的酶分解还原成芳香胺，有些芳香胺是诱变剂或致癌剂，或有其他生物毒性，这些化合物被人体再次吸收，经过活化作用，会使人体细胞发生结构与功能的改变，转变成人体病变诱发因素，从而增加致癌的可能性。偶氮色素已被确定为不安全的，它具有潜在的致癌性。
由于其致癌性和致突变性，世界上很多国家都对偶氮类染料的使用实施了严格的规定。瑞典、芬兰、挪威、印度、丹麦、法国等早已禁止使用偶氮类色素，其中挪威等一些国家还完全禁止使用任何化学合成色素。我国对偶氮类色素物质在食品中的应用做了严格的规定，但是由于多种原因，在食品中违法使用色素的现象屡有发生，成为引发食品安全问题的因素之一，对广大人民群众的身体健康造成严重威胁。“苏丹红”事件既是典型事例之一。另外，由于不法厂商在出口食品中违法添加偶氮类色素物质，造成多起我国出口欧美日的食品被检出含有偶氮类色素物质，到岸后被就地销毁，在造成经济损失的同时，也严重损害了我国出口商品的信誉。因此加强偶氮类色素检测方法的研究具有重要的意义。
目前偶氮类色素的检测方法仅限于高效液相法、质谱法等仪器方法，虽准确、稳定、可靠，可作为标准方法，但价格昂贵，费时较长，需要大型仪器设备，并且需要专门的技术人员，所以难于用于现场操作。而酶联免疫检测法(ELISA)具有灵敏、快速、简便、特异性好、样品需求量少、对昂贵仪器以及专业操作人员的依赖程度较低等优点，非常适于现场监控和样品的批量检测。但目前见诸报道的仅限于少数几种偶氮类色素物质的酶联免疫检测法。其他大多素偶氮类色素物质的酶联免疫检测方法在国内外尚未见报道。为弥补这一空白，有必要研究偶氮类色素半抗原以及人工抗原通用的合成路线，在此基础上建立相关的酶联免疫检测方法。
【发明内容】
本发明的目的在于提供一种偶氮类色素半抗原及人工抗原通用的合成方法。
本发明的技术方案如下：
(1)将偶氮类色素I与二氯亚砜以1∶6-1∶7的摩尔比溶在甲苯中，加热回流反应2h后停止。旋蒸除去剩余的二氯亚砜与甲苯，得到磺酰氯II。
(2)将磺酰氯II与二甲胺盐酸盐以1∶3的摩尔比溶于丙酮中，与6倍量碱(三乙胺、吡啶、氢氧化钠、碳酸钾)及DMAP室温反应1h，蒸除丙酮，柱色谱分离，得到偶氮类色素磺酰胺III。
(3)将偶氮类色素磺酰胺III与4，4’-二硫二苯甲酰氯以2∶1的摩尔比溶于二氯甲烷中，与4倍量碱(三乙胺、吡啶、氢氧化钠、碳酸钾)及DMAP室温反应1h，柱色谱分离，得到偶氮类色素衍生物IV。
(4)将IV与硼氢化钠以1∶2的摩尔比溶于乙醇中，氮气保护下室温反应1h，柱色谱分离，得到偶氮类色素半抗原V。
(5)将偶氮类色素半抗原V(a-e)与双功能偶联剂GMBS(N-[γ-马来酰亚胺丁酰氧]琥珀酰亚胺酯)以1∶1的摩尔比溶于二氯甲烷中，4℃反应24h，蒸除二氯甲烷，得到活化酯VI。
(6)将偶氮类色素活化酯VI与牛血清蛋白BSA以15∶1-30∶1的摩尔比溶于磷酸生理盐水(PBS)缓冲溶液中，4℃下搅拌反应6-7h。透析，高速离心，冻干上清液，得到偶氮类色素免疫抗原。
通过本研究，我们形成了制备偶氮类色素半抗原及其抗原的通用路线，为制备此类色素的相关抗体以及进一步发展快速检测方法奠定了基础。
【附图说明】
图1是偶氮类色素抗原VII(a-e)的合成路线。
【具体实施方式】
下面结合实施例进一步描述本发明，但不以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
100ml的圆底烧瓶中加入2.0g(4.4mmol)酸性橙II，25ml无水甲苯，电磁搅拌下缓慢加入2.0ml(28.1mmol)二氯亚砜，再滴入几滴无水DMF，回流2h后停止反应。旋蒸除去剩余的二氯亚砜与甲苯，水洗，抽滤，红外灯下烘干，得酸性橙II酰氯IIb。
实施例2
50ml圆底烧瓶中加入0.14g(1.72mmol)二甲胺盐酸盐，20ml无水丙酮，0.35g(3.44mmol)三乙胺，10mgDMAP，搅拌溶解，加入0.4g(1.15mmol)酸性橙II磺酰氯IIb，室温搅拌2h，蒸除丙酮，柱色谱分离，得到酸性橙II磺酰胺IIIb。
1H NMR(CDCl3，400M)δ16.18(s，1H，-OH)，8.44(d，1H，J＝8.4Hz，Ar-H6)，7.86(d，2H，J＝8.8Hz，Ar-H7，7’)，7.76(d，2H，J＝8.4Hz，Ar-H8，8’)，7.70(d，1H，J＝9.6Hz，Ar-H2)，7.55(d，2H，J＝7.6Hz，Ar-H3，4)，7.44(d，1H，J＝7.6Hz，Ar-H5)，6.74(d，1H，J＝9.6Hz，Ar-H1)，2.75(s，6H，-NCH3×2).
HRMS(ESR)：m/z＝378.0876(caled.for 378.0883[M+Na]+)。
实施例3
50ml圆底烧瓶中加入0.18g(2.16mmol)二甲胺盐酸盐，30ml无水丙酮，0.44g(4.32mmol)三乙胺，10mgDMAP，搅拌溶解，加入0.4g(0.90mmol)日落黄磺酰氯IId，室温搅拌2h，蒸除丙酮，柱色谱分离，得到产物IIId。
1H NMR(CDCl3，400M)δ16.30(s，1H，-OH)，8.64(d，1H，J＝8.8Hz，Ar-H5)，8.05(s，1H，Ar-H3)，7.91(d，3H，J＝8.8Hz，Ar-H2，6，6’)，7.84(d，2H，J＝8.8Hz，Ar-H7，7’)，7.82(d，1H，J＝6.4Hz，Ar-H4)，6.95(d，1H，J＝9.6Hz，Ar-H1)，2.78(s，6H，-NCH3×2)，2.77(s，6H，-NCH3×2).
HRMS(ESR)：m/z＝485.0931(caled.for 485.0924[M+Na]+)。
实施例4
50ml圆底烧瓶中加入0.1g(0.28mmol)酸性橙II磺酰胺IIIb，20ml二氯甲烷，搅拌溶解，加入0.05g(0.14mmol)4，4’-二硫二苯甲酰氯，0.03g(0.28mmol)三乙胺，10mgDMAP，室温反应1h，柱色谱分离，得到酸性橙II衍生物IVb。
1HNMR(CDCl3，400M)δ8.79(d，1H，J＝8.0Hz，Ar-H6)，8.17(d，2H，J＝7.6Hz，Ar-Horthoto-COO)，8.04(d，1H，J＝8.8Hz，Ar-H2)，7.96(d，1H，J＝7.6Hz，Ar-H3)，7.80(d，2H，J＝8.4Hz，Ar-H7，7’)，7.73(d，2H，J＝8.4Hz，Ar-H8，8’)，7.67(d，2H，J＝7.6Hz，Ar-H ortho to-S-S-)，7.63(d，1H，J＝7.6Hz，Ar-H4)，7.54(d，1H，J＝7.6Hz，Ar-H5)，7.44(d，1H，J＝8.8Hz，Ar-H1)，2.72(s，6H，-NCH3×2).
HRMS(ESR)：m/z＝981.1865(caled.for 981.1863[M+H]+)。
实施例5
50ml圆底烧瓶中加入0.1g(0.11mmol)酸性橙II衍生物IVb，15ml无水乙醇，搅拌溶解，加入0.008g(0.22mmol)硼氢化钠，氮气保护下室温反应1h，柱色谱分离，得到酸性橙II半抗原Vb。
实施例6
50ml圆底烧瓶中加入0.1g(0.11mmol)酸性橙II半抗原Vb，15ml二氯甲烷，搅拌下加入0.03g(0.11mmol)双功能偶联剂GMBS(或MBS)，4℃反应24h，蒸除二氯甲烷，得到酸性橙II活化酯VIb。
实施例7
10ml圆底烧瓶中加入227mg BSA(3.34umol)，5ml PBS缓冲液，搅拌溶解，4℃下滴加40mg实施例5所得产物VI(50.1umol)的1ml DMF溶液，保持4℃下搅拌反应6-7h。将产物溶液用PBS(pH＝7.44，0.01M)缓冲液透析三天，每12小时更换一次透析液。高速离心30分钟。冻干上清液，即为酸性橙II免疫原VIIb。

Claims (7)

1.一种偶氮类色素半抗原的通用合成方法，其特征在于使权利要求1所述偶氮类色素转化成磺酰氯II，与铵盐反应制得磺酰胺III。所述磺酰胺III与4，4’-二硫二苯甲酰氯反应制得IV，断裂IV中的二硫键制得偶氮类色素半抗原V。
2.权利要求1所述偶氮类色素半抗原的通用合成方法，其特征在于偶氮类色素是通式为I的化合物：
Figure FSA00000591608700011
a R1＝H，R2＝H，R3＝H，R4＝H
b R1＝H，R2＝SO3Na，R3＝H，R4＝H
c R1＝SO3Na，R2＝H，R3＝H，R4＝H
d R1＝SO3Na，R2＝SO3Na，R3＝H，R4＝H
e R1＝SO3Na，R2＝SO3Na，R3＝OCH3，R4＝CH3
3.根据权利要求1所述偶氮类色素半抗原的通用合成方法，其特征在于制备磺酰胺III以及IV须在有机溶剂和缚酸剂存在下反应。
4.根据权利要求3所述偶氮类色素半抗原的通用合成方法，其特征在于制备磺酰胺III以及IV所用溶剂为丙酮、二氯甲烷、四氢呋喃、三氯甲烷中的一种。
5.根据权利要求3所述偶氮类色素半抗原的通用合成方法，其特征在于制备磺酰胺III以及IV所用缚酸剂为无机碱碳酸钾，有机碱三乙胺、吡啶等其他三级胺。
6.根据权利1所述日落黄色素半抗原的合成方法，所用催化剂为DMAP。
7.根据权利1所述日落黄色素半抗原的合成方法，合成的半抗原为如下结构的化合物：
Figure FSA00000591608700021
a R5＝H，R6＝H，R3＝H，R4＝H
b R5＝H，R6＝SO2Cl，R3＝H，R4＝H
c R5＝SO2Cl，R6＝H，R3＝H，R4＝H
d R5＝SO2Cl，R6＝SO2Cl，R3＝H，R4＝H
e R5＝SO2Cl，R6＝SO2Cl，R3＝OCH3，R4＝CH3
CN2011103215711A 2011-10-21 2011-10-21 一种偶氮类色素半抗原与人工抗原的合成方法 Pending CN102424661A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2011103215711A CN102424661A (zh) 2011-10-21 2011-10-21 一种偶氮类色素半抗原与人工抗原的合成方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2011103215711A CN102424661A (zh) 2011-10-21 2011-10-21 一种偶氮类色素半抗原与人工抗原的合成方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102424661A true CN102424661A (zh) 2012-04-25

Family

ID=45958698

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2011103215711A Pending CN102424661A (zh) 2011-10-21 2011-10-21 一种偶氮类色素半抗原与人工抗原的合成方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102424661A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103360489A (zh) * 2013-08-07 2013-10-23 西北农林科技大学 酸性橙Ⅱ人工抗原合成及酸性橙Ⅱ-IgY抗体制备方法
CN113754568A (zh) * 2021-09-22 2021-12-07 江南大学 酸性橙i半抗原、人工抗原及其合成和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020055637A1 (en) * 2001-12-21 2002-05-09 Song Liu Methods for synthesis of amino-tetrahydroisoquinoline-carboxylic acids
US20020058815A1 (en) * 2001-12-21 2002-05-16 Song Liu Methods for synthesis of amino-tertahydroisoquinoline-sulfonamide hydroxamic acids
CN1502597A (zh) * 1999-05-24 2004-06-09 �Ʒ� 用于制备顺式-1-{2-[4-（6-甲氧基-2-苯基-1，2，3，4-四氢化萘-1-基）苯氧基]乙基}吡咯烷的中间体
CN1775805A (zh) * 2005-11-30 2006-05-24 东华大学 2,4－二氯酚人工抗原、制备方法及其用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1502597A (zh) * 1999-05-24 2004-06-09 �Ʒ� 用于制备顺式-1-{2-[4-（6-甲氧基-2-苯基-1，2，3，4-四氢化萘-1-基）苯氧基]乙基}吡咯烷的中间体
US20020055637A1 (en) * 2001-12-21 2002-05-09 Song Liu Methods for synthesis of amino-tetrahydroisoquinoline-carboxylic acids
US20020058815A1 (en) * 2001-12-21 2002-05-16 Song Liu Methods for synthesis of amino-tertahydroisoquinoline-sulfonamide hydroxamic acids
CN1775805A (zh) * 2005-11-30 2006-05-24 东华大学 2,4－二氯酚人工抗原、制备方法及其用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
赵秀杰: "偶氮类色素酸性橙Ⅱ、栀子黄色素单钠盐半抗原与人工抗原的合成、鉴定及相应抗体的制备", 《万方数据库》, 15 February 2011 (2011-02-15), pages 3 - 3 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103360489A (zh) * 2013-08-07 2013-10-23 西北农林科技大学 酸性橙Ⅱ人工抗原合成及酸性橙Ⅱ-IgY抗体制备方法
CN103360489B (zh) * 2013-08-07 2015-07-08 西北农林科技大学 酸性橙Ⅱ人工抗原合成及酸性橙Ⅱ-IgY抗体制备方法
CN113754568A (zh) * 2021-09-22 2021-12-07 江南大学 酸性橙i半抗原、人工抗原及其合成和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Niu et al. Water‐Soluble Red‐Emitting Distyryl‐Borondipyrromethene (BODIPY) Dyes for Biolabeling
US5877310A (en) Glycoconjugated fluorescent labeling reagents
RU2018137690A (ru) Ультраяркие димерные или полимерные красители
WO2004085539A2 (en) Cyanine dye labelling reagents with meso-substitution
JPS62174066A (ja) レゾルフイン誘導体並びにその製法
EP3341377B1 (en) Polyfluoreno[4,5-cde]oxepine conjugates and their use in methods of analyte detection
CN104945322A (zh) 检测肿瘤乏氧的化合物及其制备方法
CN102796102B (zh) 咖啡因半抗原、偶联物及应用、咖啡因检测或测定方法
DE19937024A1 (de) Verwendung von Acylsulfonamido substituierten Polymethin-Farbstoffen als Fluoreszenz-Farbstoffe und/oder Marker
CA2178304A1 (en) Rigidized monomethine cyanine dyes
CN102154003B (zh) 咔唑桥基新型荧光菁染料探针及其制备方法
CN101671345B (zh) 一种莪术醇半抗原和人工抗原及其制备方法
CN102424661A (zh) 一种偶氮类色素半抗原与人工抗原的合成方法
CN104230813A (zh) 一类peg功能化的双咪唑阳离子温控离子液体及其制备方法和应用
CN109824565A (zh) 一种光响应性多功能化学交联剂及其制备方法与应用
CN104710977A (zh) 一种双功能探针及其制备方法和在检测正平行构象g-四链体中的应用
CN102924590B (zh) 一种适用于柠檬黄的人工抗原的制备方法
CN105085458B (zh) 一种香豆素类衍生物的合成方法
US5650512A (en) Fluorescent labeling reagents
CN104387790B (zh) 一种含噻吩基团的苯并吲哚盐染料及其制备方法和用途
CN113150575B (zh) 一种近红外的萘酰亚胺染料及其制备方法与应用
CN102504572A (zh) 一种日落黄色素半抗原与人工抗原的合成方法
WO2023097820A1 (zh) 黄酮醇类化合物及制备方法与其在检测生物硫醇中的应用
CN104530221B (zh) 一种邻苯二甲酸酯类化合物通用人工抗原的合成方法
Jiang et al. An efficient approach to the synthesis of water-soluble cyanine dyes using poly (ethylene glycol) as a soluble support

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: NANKAI UNIVERSITY

Effective date: 20120425

Owner name: JIANGSU NANTONG WEILIKE CHEMICAL CO., LTD.

Free format text: FORMER OWNER: NANKAI UNIVERSITY

Effective date: 20120425

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
C53 Correction of patent of invention or patent application
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Wang Wenhu

Inventor after: Xu Fengbo

Inventor after: Liu Tingting

Inventor after: Ren Xinxia

Inventor after: Zhou Xiuxiu

Inventor after: Zhao Xiujie

Inventor after: Song Yingjun

Inventor after: Li Keqing

Inventor after: Zhang Fengliang

Inventor before: Wang Wenhu

Inventor before: Liu Tingting

Inventor before: Ren Xinxia

Inventor before: Song Yingjun

Inventor before: Zhou Xiuxiu

Inventor before: Zhao Xiujie

COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: WANG WENHU LIU TINGTING REN XINXIA SONG YINGJUN ZHOU XIUXIU ZHAO XIUJIE TO: WANG WENHU XU FENGBO LIU TINGTING REN XINXIA ZHOU XIUXIU ZHAO XIUJIE SONG YINGJUN LI KEQING ZHANG FENGLIANG

Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 300071 NANKAI, TIANJIN TO: 226407 NANTONG, JIANGSU PROVINCE

TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20120425

Address after: 226407, Nantong, Jiangsu Province, Rudong County foreign chemical industry park, 4 mouth

Applicant after: Jiangsu Nantong Weilike Chemical Co., Ltd.

Co-applicant after: Nankai University

Address before: 300071 Tianjin City, Nankai District Wei Jin Road No. 94

Applicant before: Nankai University

C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20120425