CN102423314A - 一种治疗免疫性肝损伤或免疫性肝纤维化的药物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了四氢嘧啶及其衍生物的一种新用途，即四氢嘧啶及其衍生物在制备免疫性肝损伤或免疫性肝纤维化治疗药物中的应用。其中四氢嘧啶衍生物包括1，4，5，6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸。其口服给药效果较好，剂量为0.01～100mg/kg均具有良好的安全性和有效性。

Description

一种治疗免疫性肝损伤或免疫性肝纤维化的药物

技术领域

本发明涉及四氢嘧啶及其衍生物在制备免疫性肝损伤或免疫性肝纤维化治疗药物中的应用。

背景技术

免疫性肝损伤是由免疫反应引起的肝脏慢性疾病。其病因，目前认为是患者本身存在先天性基因遗传缺陷等原因造成的。机体免疫系统将自身肝组织细胞识别为外来抗原性异物，从而刺激机体产生相应的抗体，错误的对肝细胞产生免疫攻击，从而破坏肝组织。肝组织细胞的长期大量损伤导致肝功能损伤，进而会导致肝纤维化甚至肝硬化。

目前，对免疫性肝损伤及免疫性肝纤维化的病因，尚未研究清楚。其治疗方案目前仅能以药物（熊去氧胆酸、糖皮质激素等）等延缓病情的发展，尚无法彻底根治的方法，且现有药物的治疗效果有限。

近年研究报道，异噁唑类免疫调节药来氟米特对免疫性肝损伤、免疫性肝纤维化等也有一定的疗效，但实验侧重来氟米特对某些生化指标的影响，而对病理损伤的影响却未提供足够的证据。而生化指标改善与病理损伤程度之间的关系往往错综复杂，很难通过少数指标推断肝组织病理损伤的程度。

四氢嘧啶，化学名为1,4,5,6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸或2-Methyl-1,4,5,6-tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid或(S)-2-methyl-1, 4, 5, 6-tetra-hydro pyrimidine-4-carboxylic acid或1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidine carbonic acid，CAS号为96702-03-3，是1985年从海洋生物体内发现的氨基酸衍生物，具有保湿作用，近年来，已被用于化妆品。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供四氢嘧啶及其衍生物的一种新的用途，具体的说是四氢嘧啶及其衍生物在制备免疫性肝损伤或免疫性肝纤维化治疗药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

四氢嘧啶及其衍生物在制备免疫性肝损伤或免疫性肝纤维化治疗药物中的应用。

所述四氢嘧啶衍生物为1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸。

所述四氢嘧啶及其衍生物的有效治疗剂量为为(0.1～100)mg/kg。 

所述四氢嘧啶及其衍生物的有效治疗剂量为为(1～8)mg/kg。

本发明的技术方案中所述的四氢嘧啶，化学名为2-Methyl-1,4,5,6-tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid或(S)-2-methyl-1, 4, 5, 6-tetra-hydro pyrimidine-4-carboxylic acid或1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidine carbonic acid。1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸俗称羟基四氢嘧啶，CAS号为96702-03-3，这是本领域技术人员所周知的。

其药物剂型可有多种。由于四氢嘧啶理想的理化性质，其制剂范围极广，可被制成口服制剂如片剂、胶囊等；外用制剂如乳膏、软膏等；注射制剂如注射液、冻干粉等。这在本领域技术人员而言是显而易见的，而各种制剂的制备技术也是本领域技术人员所周知的。

本发明人在实验研究中惊奇的发现，四氢嘧啶及其衍生物，如羟基四氢嘧啶，对免疫性肝损伤或免疫性肝纤维化等免疫性肝病具有出乎意料的治疗作用。

附图说明

图1：免疫性肝损伤实验各组小鼠肝组织病理图片。

图2：免疫性肝纤维化实验各组大鼠肝组织病理图片。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的解释。应当理解的是，以下实施例仅用于解释本发明，而不是限制本发明的保护范围。

实施例 1  四氢嘧啶和1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸的急性毒性实验

SPF级KM小鼠，雌雄各半，体重18g-22g，给药前禁食8小时，称重，单次给药（灌胃或静脉注射），给药剂量为120mg/kg，给药后连续观察14天。观察项目包括毒性反应、体重和组织病理学。

结果表明，小鼠单次灌胃给药或静脉注射给药120mg/kg后，未见明显毒性反应，给药前后及实验结束时体重无明显差异，组织病理学观察，未发现显著异常。说明四氢嘧啶和1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸单次大剂量给药（120mg/kg）无显著的毒性反应。

实施例 2  四氢嘧啶和1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸的长期毒性实验

食蟹猴，雌雄各半，随机分组，分别给予生理盐水（对照组）；高中低三个剂量的四氢嘧啶和高中低三个剂量的1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸，其中高剂量组均为80mg/kg，中剂量组为40mg/kg，低剂量组为10mg/kg。每日给药1次，连续给药30天，对照组及各剂量组药物均设灌胃给药组和静脉注射给药组两组。给药前及给药后进行大体观察，记录猴的一般症状、记录给药前及给药后猴的体重，并定期进行血液学、尿液学和血生化检查，记录给药前及给药后猴的心电图。

结果显示，各剂量组动物体重与对照组无显著差异，大体观察未发现异常。实验组动物的血液学、尿液学和血生化数据与对照组无显著差异。说明四氢嘧啶和1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸长期给药的安全性良好，耐受性符合要求。

实施例 3  四氢嘧啶和1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸对小鼠免疫性肝损伤的药效学研究

SPF级KM小鼠，雌雄各半,18～22g。留一组小鼠作为正常对照，其余小鼠采用卡介苗加脂多糖(BCG+LPS)法造模。造模小鼠第一天尾静脉注射给予卡介苗，剂量为2.5mg/只，然后于第十天尾静脉注射给予脂多糖，剂量为10μg/只。然后，禁食12小时，检查肝功能指标。

造模成功后，将免疫性肝损伤小鼠随机分组。第一组为模型对照组，灌胃给予生理盐水；第二组为阳性对照组，灌胃给予糖皮质激素，给药剂量为1.5mg/kg；第三组为给药组，灌胃给予四氢嘧啶，给药剂量为98mg/kg；第四组为给药组，灌胃给予四氢嘧啶80mg/kg；第五组为给药组，灌胃给予四氢嘧啶，剂量为70mg/kg；第六组为给药组，灌胃给予四氢嘧啶，剂量为60mg/kg；第七组为给药组，灌胃给予1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸40mg/kg；第八组为给药组，灌胃给予1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸3mg/kg。第九组为给药组，尾静脉注射给予1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸5mg/kg。

给药结束后，处死小鼠,在鼠肝脏同一部位取部分组织, 用10%的甲醛固定, 常规石蜡包埋，HE染色染色后光镜下观察肝组织病理改变。结果见图1。

正常小鼠肝细胞胞浆疏松化；模型组小鼠肝细胞水肿，水样变性，空泡变性，大片坏死，肝组织大面积淤血，大量炎细胞浸润；来氟米特治疗组小鼠肝细胞水肿，水样变性，空泡变性，片状坏死，肝组织淤血，中央静脉周围肝细胞水肿，坏死，炎细胞浸润；四氢嘧啶和1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸治疗组小鼠未见明显异常。

由图1可见，四氢嘧啶和1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸对免疫性肝损伤有显著的治疗作用，且在较宽的剂量范围内，治疗效果均显著优于糖皮质激素。

实施例 4  四氢嘧啶和1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸对大鼠免疫性肝纤维化的药效学研究

SPF级Wistar大鼠, 雌雄各半, 体重158～176g。留一组大鼠作为正常对照，其余大鼠采用猪血清造模,每周腹腔注射2次猪血清(0.5 ml/鼠)。造模成功后，随机分组，第一组为模型对照组尾静脉注射给予生理盐水；第二组为阳性对照组，尾静脉注射给予熊去氧胆酸，给药剂量为20mg/kg；第三组为给药组，尾静脉注射给予四氢嘧啶，给药剂量为93mg/kg；第四组为给药组，尾静脉注射给予四氢嘧啶50mg/kg；第五组为给药组，尾静脉注射给予四氢嘧啶，剂量为20mg/kg；第六组为给药组，尾静脉注射给予四氢嘧啶，剂量为5mg/kg；第七组为给药组，尾静脉注射给予1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸30mg/kg；第八组为给药组，尾静脉注射给予1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸2mg/kg。第九组为给药组，尾静脉注射给予1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸7mg/kg。

实验结束，采血(采血前禁食14小时)分离血清, 备用。采血后处死大鼠,在鼠肝脏同一部位取部分组织, 用10%的甲醛固定, 常规石蜡包埋，HE染色染色后光镜下观察组织改变；观察指标包括: 动物血清指标（HA、 LN、 PCIII）和肝组织病理改变。动物血清指标见表1。

 

   表1 

	HA（μg/L）	LN（μg/L）	PCIII（μg/L）
				第一组	3461.8±2.4	2172.3±3.0	2670.4±7.3
第二组	2257.3±9.6	1635.2±7.5	2005.6±3.7
				第三组	1794.7±5.2	98.6±4.7	91.4±1.3
第四组	1829.1±7.9	102.4±4.2	86.7±9.0
				第五组	1720.4±5.3	99.7±9.5	93.5±7.2
第六组	1708.2±3.4	96.3±7.6	95.2±10.1
				第七组	1787.9±6.7	98.1±9.4	97.3±2.4
第八组	1772.7±3.9	96.8±5.7	93.2±9.3
				第九组	1705.2±5.0	97.3±7.8	95.8±3.5

光镜下观察各组大鼠肝组织发现，正常大鼠肝组织未见异常；模型组大鼠纤维组织包裹肝小叶， 汇管区呈中度纤维化，汇管区结缔组织增生；熊去氧胆酸组肝细胞脂肪变性，点片状坏死，炎细胞浸润；给药组大鼠存在轻微细胞水肿；肝组织病理改变见图2。

由表1和图2可见，四氢嘧啶和1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸对免疫性肝纤维化有显著的治疗作用，且在2mg/kg至93mg/kg剂量范围内，治疗效果均显著优于熊去氧胆酸。

施例 5  四氢嘧啶口服片剂的组方及其制备

四氢嘧啶                   200g

柠檬黄                     0.03g

    微晶纤维素                 500g

    微粉硅胶                   4g

    硬脂酸镁                   15g

    聚乙烯吡咯烷酮             20 g

将四氢嘧啶、微晶纤维素、柠檬黄、聚乙烯吡咯烷酮混合均匀，过80目筛

网，加入微粉硅胶、硬脂酸镁，混合3 min，压片即得。

实施例 6  1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸胶囊的组方及其制备

1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸                   200g

微晶纤维素                                              50g

羧甲基淀粉钠                                            60g

十二烷基硫酸钠                                          18g

二氧化硅                                                12g

1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸过100目筛，其余辅料过80目筛，混合均

匀，采用辊压法进行干法制粒，填充入胶囊即可。

实施例 7  1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸注射溶的组方及其制备

1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸                    200g

聚乙二醇400                                             50ml

苯甲酸钠                                                 2.5g

加水至                                                   1000ml

称取1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸，加水适量，按处方量加聚乙二醇400，搅拌使之溶解，加入苯甲酸钠和900ml水，混匀，加水至1000ml，过滤，灭菌，分装即得。

Claims (4)

1.四氢嘧啶及其衍生物在制备免疫性肝损伤或免疫性肝纤维化治疗药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述四氢嘧啶衍生物为1,4,5,6-四氢-2-甲基-5-羟基-4-嘧啶羧酸。

3.根据权利要求1-2所述的应用，其特征在于：所述四氢嘧啶及其衍生物的有效治疗剂量为为(0.1～100)mg/kg。

4. 根据权利要求1-2所述的应用，其特征在于：所述四氢嘧啶及其衍生物的有效治疗剂量为为(1～8)mg/kg。

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