CN102421762A

CN102421762A - 用于治疗癌症的取代的嘧啶

Info

Publication number: CN102421762A
Application number: CN2010800203078A
Authority: CN
Inventors: I.萨旁特齐斯; D.库恩; H.斯塔特米勒
Original assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date: 2009-03-18
Filing date: 2010-03-17
Publication date: 2012-04-18
Also published as: EP2408752A1; CA2755759A1; EA201101330A1; CL2011002300A1; JP5628281B2; KR20110128927A; ZA201105986B; EP2408752B1; IL214746A0; JP2012520850A; US20140051674A1; WO2010106097A1; AU2010224881A1; UY32494A; AR076134A1; US20110071158A1; MX2011009780A; TW201043611A; BRPI1013618A2

Abstract

本发明涉及适于治疗特征在于过度或异常细胞增殖的疾病的通式(1)化合物，其中B、R¹至R⁵、R^x、m及n如权利要求1中所定义，及其在该治疗中的用途。

Description

用于治疗癌症的取代的嘧啶

本发明涉及一种新的通式(1)的2，4-二氨基嘧啶，

其中基团B、R¹至R⁵、R^x、m及n具有权利要求及说明书中给出的含义，其异构体、制备这些嘧啶的方法及其作为药物的用途。

发明背景

获得侵入及转移特性的肿瘤细胞需要特定存活信号。这些信号使其能克服尤其通过细胞失去粘着触发的特殊的细胞凋亡机制(失巢凋亡(anoikis))。在该过程中，粘着斑激酶(FAK/PTK2)为主要信号分子之一，其一方面通过所谓的“粘着斑(focal adhesion)”控制细胞-基质作用，另一方面赋予失巢凋亡抗性。通过抑制PTK2干涉这些机制可导致肿瘤细胞的凋亡性细胞死亡，并限制肿瘤的侵入性及转移性生长。此外，粘着斑激酶对与肿瘤有关的内皮细胞的生长、迁移及存活具有重要意义。因此，抗血管生成活性还可通过抑制PTK2达成。

众所周知嘧啶为激酶抑制剂。因此，例如，在国际专利申请WO2005/118544、WO 2007/003596及WO 2007/132010中公开了在4-位上被非芳香基团取代的嘧啶为具有抗癌活性的活性组份，而这些专利说明书中的大多数化合物带有酰胺取代基[-C(O)NH-]。

本发明的目的在于指出新的二氨基嘧啶作为活性物质，其可用于预防和/或治疗特征在于过度或异常细胞增殖的疾病。本发明的另一目的在于指出在体外和/或体内对酶PTK2具有抑制作用且具有能够用作药物的适宜药理学和/或药代动力学特性的二氨基嘧啶。这些特性尤其包括与已知的细胞周期激酶有关的PTK2的选择性抑制作用，优选与Aurora B有关的PTK2的选择性抑制作用。

发明详述

已经出乎意料地发现，通式(1)化合物可用作PTK2的特异性抑制剂，其中基团B、R¹至R⁵、R^x、m及n具有下文给出的含义。因此，本发明化合物可用于例如治疗与PTK2活性有关且特征在于过度或异常细胞增殖的疾病。

本发明涉及通式(1)化合物

其中

B为任选被一个或多个R⁴取代的选自C_3-10环烷基及3-8元杂环烷基的基团；

R¹、R²及R⁴各自独立地表示选自R^a、R^b以及被一个或多个相同或不同的R^c和/或R^b取代的R^a的基团；

R^x表示氢或选自R^a、R^b以及被一个或多个相同或不同的R^c和/或R^b取代的R^a的基团；

R³为选自以下的基团：-NR^cR^c、-N(OR^c)R^c、-N(R^g)NR^cR^c、-N(R^g)C(O)R^c、-N[C(O)R^c]₂、-N(OR^g)C(O)R^c、-N(R^g)C(NR^g)R^c、-N(R^g)N(R^g)C(O)R^c、-N[C(O)R^c]NR^cR^c、-N(R^g)C(S)R^c、-N(R^g)S(O)R^c、-N(R^g)S(O)OR^c、-N(R^g)S(O)₂R^c、-N[S(O)₂R^c]₂、-N(R^g)S(O)₂OR^c、-N(R^g)S(O)₂NR^cR^c、-N(R^g)[S(O)₂]₂R^c、-N(R^g)C(O)OR^c、-N(R^g)C(O)SR^c、-N(R^g)C(O)NR^cR^c、-N(R^g)C(O)NR^gNR^cR^c 、-N(R^g)N(R^g)C(O)NR^cR^c 、-N(R^g)C(S)NR^cR^c、-[N(R^g)C(O)]₂R^c、-N(R^g)[C(O)]₂R^c、-N{[C(O)]₂R^c}₂、-N(R^g)[C(O)]₂OR^c、-N(R^g)[C(O)]₂NR^cR^c 、-N{[C(O)]₂OR^c}₂、-N{[C(O)]₂NR^cR^c}₂、-[N(R^g)C(O)]₂OR^c、-N(R^g)C(NR^g)OR^c、-N(R^g)C(NOH)R^c、-N(R^g)C(NR^g)SR^c及-N(R^g)C(NR^g)NR^cR^c，

或任选被R^c和/或R^d取代的N-连接的3-8元杂环烷基；

R⁵为选自卤素、-CN、-NO₂、-OR^c、-C(O)R^c、-NR^cR^c、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-10环烷基、C_4-16环烷基烷基及3-8元杂环烷基的基团；

m等于1、2或3；

n等于0、1、2、3或4；

各R^a彼此独立地选自C_1-6烷基、C_3-10环烷基、C_4-16环烷基烷基、C_6-10芳基、C_7-16芳基烷基、2-6元杂烷基、3-8元杂环烷基、4-14元杂环烷基烷基、5-12元杂芳基及6-18元杂芳基烷基；

各R^b为适宜基团且在各情况下彼此独立地选自＝O、-OR^c、C_1-3卤代烷氧基、-OCF₃、＝S、-SR^c、＝NR^c、＝NOR^c、＝NNR^cR^c、＝NN(R^g)C(O)NR^cR^c、-NR^cR^c、-ONR^cR^c、-N(OR^c)R^c、-N(R^g)NR^cR^c、卤素、-CF₃、-CN、-NC、-OCN、-SCN、-NO、-NO₂、＝N₂、-N₃、-S(O)R^c、-S(O)OR^c、-S(O)₂R^c、-S(O)₂OR^c、-S(O)NR^cR^c、-S(O)₂NR^cR^c、-OS(O)R^c、-OS(O)₂R^c、-OS(O)₂OR^c、-OS(O)NR^cR^c、-O S(O)₂NR^cR^c、-C(O)R^c、-C(O)OR^c、-C(O)SR^c、-C(O)NR^cR^c、-C(O)N(R^g)NR^cR^c、-C(O)N(R^g)OR^c、-C(NR^g)NR^cR^c、-C(NOH)R^c、-C(NOH)NR^cR^c、-OC(O)R^c、-OC(O)OR^c、-OC(O)SR^c、-OC(O)NR^cR^c、-OC(NR^g)NR^cR^c、-SC(O)R^c、-SC(O)OR^c、-SC(O)NR^cR^c、-SC(NR^g)NR^cR^c、-N(R^g)C(O)R^c、-N[C(O)R^c]₂、-N(OR^g)C(O)R^c、-N(R^g)C(NR^g)R^c、-N(R^g)N(R^g)C(O)R^c、-N[C(O)R^c]NR^cR^c、-N(R^g)C(S)R^c、-N(R^g)S(O)R^c、-N(R^g)S(O)OR^c、-N(R^g)S(O)₂R^c、-N[S(O)₂R^c]₂、-N(R^g)S(O)₂OR^c、-N(R_g)S(O)₂NR^cR^c、-N(R^g)[S(O)₂]₂R^c、-N(R^g)C(O)OR^c、-N(R^g)C(O)SR^c、-N(R^g)C(O)NR^cR^c、-N(R^g)C(O)NR^gNR^cR^c、-N(R^g)N(R^g)C(O)NR^cR^c、-N(R^g)C(S)NR^cR^c、-[N(R^g)C(O)]₂R^c、-N(R^g)[C(O)]₂R^c、-N{[C(O)]₂R^c}₂、-N(R^g)[C(O)]₂OR^c、-N(R^g)[C(O)]₂NR^cR^c、-N{[C(O)]₂OR^c}₂、-N{[C(O)]₂NR^cR^c}₂、-[N(R^g)C(O)]₂OR^c、-N(R^g)C(NR^g)OR^c、-N(R^g)C(NOH)R^c、-N(R^g)C(NR^g)SR^c及-N(R^g)C(NR^g)NR^cR^c；

各R^c彼此独立地表示氢或任选被一个或多个相同或不同的R^d和/或R^e取代的选自以下的基团：C_1-6烷基、C_3-10环烷基、C_4-11环烷基烷基、C_6-10芳基、C_7-16芳基烷基、2-6元杂烷基、3-8元杂环烷基、4-14元杂环烷基烷基、5-12元杂芳基及6-18元杂芳基烷基；

各R^d表示适宜基团且在各情况下彼此独立地选自＝O、-OR^e、C_1-3卤代烷氧基、-OCF₃、＝S、-SR^e、＝NR^e、＝NOR^e、＝NNR^eR^e、＝NN(R^g)C(O)NR^eR^e、-NR^eR^e、-ONR^eR^e、-N(R^g)NR^eR^e、卤素、-CF₃、-CN、-NC、-OCN、-SCN、-NO、-NO₂、＝N₂、-N₃、-S(O)R^e、-S(O)OR^e、-S(O)₂R^e、-S(O)₂OR^e、-S(O)NR^eR^e、-S(O)₂NR^eR^e、-OS(O)R^e、-OS(O)₂R^e、-OS(O)₂OR^e、-OS(O)NR^eR^e、-OS(O)₂NR^eR^e、-C(O)R^e、-C(O)OR^e、-C(O)SR^e、-C(O)NR^eR^e、-C(O)N(R^g)NR^eR^e、-C(O)N(R^g)OR^e、-C(NR^g)NR^eR^e、-C(NOH)R^e、-C(NOH)NR^eR^e、-OC(O)R^e、-OC(O)OR^e、-OC(O)SR^e、-OC(O)NR^eR^e、-OC(NR^g)NR^eR^e、-SC(O)R^e、-SC(O)OR^e、-SC(O)NR^eR^e、-SC(NR^g)NR^eR^e、-N(R^g)C(O)R^e、-N[C(O)R^e]₂、-N(OR^g)C(O)R^e、-N(R^g)C(NR^g)R^e、-N(R^g)N(R^g)C(O)R^e、-N[C(O)R^e]NR^eR^e、-N(R^g)C(S)R^e、-N(R^g)S(O)R^e、-N(R^g)S(O)OR^e、-N(R^g)S(O)₂R^e、-N[S(O)₂R^e]₂、-N(R^g)S(O)₂OR^e、-N(R^g)S(O)₂NR^eR^e、-N(R^g)[S(O)₂]₂R^e、-N(R^g)C(O)OR^e、-N(R^g)C(O)SR^e、-N(R^g)C(O)NR^eR^e、-N(R^g)C(O)NR^gNR^eR^e、-N(R^g)N(R^g)C(O)NR^eR^e、-N(R^g)C(S)NR^eR^e、-[N(R^g)C(O)]₂R^e、-N(R^g)[C(O)]₂R^e、-N{[C(O)]₂R^e}₂、-N(R^g)[C(O)]₂OR^e、-N(R^g)[C(O)]₂NR^eR^e、-N{[C(O)]₂OR^e}₂、-N{[C(O)]₂NR^eR^e}₂、-[N(R^g)C(O)]₂OR^e、-N(R^g)C(NR^g)OR^e、-N(R^g)C(NOH)R^e、-N(R^g)C(NR^g)SR^e及-N(R^g)C(NR^g)NR^eR^e；

各R^e彼此独立地表示氢或任选被一个或多个相同或不同的R^f和/或R^g取代的选自以下的基团：C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_4-11环烷基烷基、C_6-10芳基、C_7-16芳基烷基、2-6元杂烷基、3-8元杂环烷基、4-14元杂环烷基烷基、5-12元杂芳基及6-18元杂芳基烷基；

各R^f表示适宜基团且在各情况下彼此独立地选自卤素、-OR^g及-CF₃，且

各R^g彼此独立地表示氢、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_4-11环烷基烷基、C_6-10芳基、C_7-16芳基烷基、2-6元杂烷基、3-8元杂环烷基、4-14元杂环烷基、5-12元杂芳基或6-18元杂芳基烷基；

条件是苯环A不同时带有两个氯取代基；

任选为其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及混合物形式，以及任选为其药理学上可接受的酸加成盐。

在一优选实施方式(A1)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R^x为氢。

在另一优选实施方式(B1)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中B为C_3-8环烷基。

在另一优选实施方式(B2)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中B为环己基。

在另一优选实施方式(B3)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中B为环戊基。

在另一优选实施方式(B4)中，本发明涉及优选实施方式(B2)和/或(B3)的化合物，

其中基团R³及基团

相对于环系B呈反式构型。

在另一优选实施方式(C1)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R⁵为选自卤素、-CF₃及C_1-4卤代烷基的基团。

在另一优选实施方式(C2)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R⁵选自溴、氯及-CF₃。

在另一优选实施方式(C3)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R⁵为-CF₃。

在另一优选实施方式(C4)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R⁵为氯。

在另一优选实施方式(C5)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R⁵为溴。

在另一优选实施方式(D1)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R³选自-NR^cR^c、-N(OR^c)R^c、-N(R^g)C(O)R^c、-N(OR^g)C(O)R^c、-N(R^g)S(O)₂R^c、-N(R^g)C(O)OR^c及-N(R^g)C(O)NR^cR^c，

或任选被R^c和/或R^d取代的N-连接的4-6元杂环烷基，且

R^c、R^d及R^g如上文所定义。

在另一优选实施方式(D2)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R³选自-NR^cR^c、-N(R^g)C(O)R^c及-N(R^g)S(O)₂R^c，且

R^c及R^g如上文所定义。

在另一优选实施方式(D3)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R³选自-N(R^g)C(O)R^c1及-N(R^g)S(O)₂R^c1；

R^c1对应于基团R^c，且

R^c及R^g如上文所定义。

在另一优选实施方式(D4)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R³选自-NHC(O)R^c1、-N(C_1-4烷基)C(O)R^c1、-NHS(O)₂R^c1及-N(C_1-4烷基)S(O)₂R^c1；

R^c1对应于基团R^c，且

R^c如上文所定义。

在另一优选实施方式(D5)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R³选自-NHC(O)R^c1、-N(Me)C(O)R^c1、-N(Et)C(O)R^c1、-N(iPr)C(O)R^c1、-N(nPr)C(O)R^c1、-NHS(O)₂R^c1、-N(Me)S(O)₂R^c1、-N(Et)S(O)₂R^c1、-N(iPr)S(O)₂R^c1及-N(nPr)S(O)₂R^c1；

R^c1对应于基团R^c，且

R^c如上文所定义。

在另一优选实施方式(D6)中，本发明涉及优选实施方式(D3)和/或(D4)和/或(D5)的化合物，

其中R^c1选自C_1-4烷基、C_3-5环烷基、C_1-4烷氧基甲基、(C_1-4烷基)NH-CH₂-及(C_1-4烷基)₂N-CH₂-。

在另一优选实施方式(D7)中，本发明涉及优选实施方式(D3)和/或(D4)和/或(D5)的化合物，

其中R^c1选自甲基及乙基。

在另一优选实施方式(D8)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R³选自-NHS(O)₂Me及-N(Me)S(O)₂Me。

在另一优选实施方式(E1)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中n值为0。

在另一优选实施方式(F1)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中m值为1或2；

各R²在各情况下彼此独立地选自卤素、C_1-6烷基及C_1-6烷氧基，且

R¹如上文所定义。

在另一优选实施方式(F2)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中苯环A具有局部结构(partial structure)

R^2a及R^2c各自独立地表示C_1-6烷氧基；

R^2b选自卤素及C_1-6烷基；且

R¹如上文所定义。

在另一优选实施方式(F3)中，本发明涉及优选实施方式(F2)的化合物，

其中R^2a及R^2c表示甲氧基；

R^2b选自氟、氯、甲基及乙基；且

R¹如上文所定义。

在另一优选实施方式(F4)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中苯环A具有局部结构

R^2d及R^2e各自独立地表示C_1-6烷氧基；

R^2f选自卤素及C_1-6烷基；且

R¹如上文所定义。

在另一优选实施方式(F5)中，本发明涉及优选实施方式(F4)的化合物，

其中R^2d及R^2e表示甲氧基；

R^2f选自氟及甲基；且

R¹如上文所定义。

在另一优选实施方式(G1)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R¹选自R^a2、R^b2以及被一个或多个相同或不同的R^b2和/或R^c2取代的R^a2；

各R^a2在各情况下彼此独立地选自C_1-6烷基及3-7元杂环烷基；

各R^b2表示适宜取代基且在各情况下彼此独立地选自-OR^c2、-NR^c2R^c2、-C(O)R^c2、-C(O)OR^c2、-C(O)NR^c2R^c2、-C(O)N(R^g2)OR^c2、-N(R^g2)C(O)R^c2、-N(R^g2)C(O)OR^c2及-N(R^g2)C(O)NR^c2Rw，

各R^c2独立地表示氢或任选被一个或多个相同或不同的R^d2和/或R^e2取代的选自以下的基团：C_1-6烷基、C_3-6环烷基及3-7元杂环烷基；

各R^d2表示适宜取代基且在各情况下彼此独立地选自-OR^e2、-NR^e2R^e2及-C(O)NR^e2R^e2；

各R^e2独立地表示氢或任选被一个或多个相同或不同的R^f2和/或R^g2取代的选自以下的基团：C_1-6烷基及C_3-6环烷基；

各R^f2独立地表示-OR^g2，且

各R^g2独立地表示氢或C_1-6烷基。

在另一优选实施方式(G2)中，本发明涉及优选实施方式(G1)的化合物，

其中各R^b2表示适宜基团且在各情况下彼此独立地选自-OR^c2、-NR^c2R^c2、-C(O)OR^c2、-C(O)NR^c2R^c2、-C(O)N(R^g2)OR^c2及-N(R^g2)C(O)R^c2；且

R^c2及R^g2如上文所定义。

在另一优选实施方式(G3)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R¹表示-C(O)NR^c2R^c2，且

R^c2如上文所定义。

在另一优选实施方式(G4)中，本发明涉及优选实施方式(G1)和/或(G2)和/或(G3)的化合物，

其中杂环烷基R^a2和/或R^c2为选自哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、四氢吡喃基及吗啉基的杂环烷基。

在另一优选实施方式(G5)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R¹选自以下：

在另一优选实施方式(G6)中，本发明涉及通式(1)化合物，

其中R¹选自以下：

尤其优选的通式(1)化合物为：

上述就根据本发明化合物(1)的不同分子部分而言提及的所有优选实施方式可以以任一所需方式彼此组合，得到优选的本发明化合物(1)或优选的本发明化合物(1)的通用部分(generic partial amounts)。本发明还明确包括此组合确定的各个单独实施方式或部分(partial quantity)且为本发明的目标。

本发明还涉及本发明化合物与无机酸或有机酸形成的药理学上可接受的盐。

在另一方面中，本发明涉及通式(1)化合物或其药理学上可接受的盐，其用作药物。

在另一方面中，本发明涉及通式(1)化合物或其药理学上可接受的盐，其用于治疗和/或预防癌症、感染、炎症及自身免疫性疾病。

在另一方面中，本发明涉及通式(1)化合物或其药理学上可接受的盐，其用于治疗和/或预防癌症。

在另一方面中，本发明涉及通式(1)化合物或其药理学上可接受的盐，其用于治疗和/或预防前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌及非小细胞支气管癌。

在另一方面中，本发明涉及含有一种或多种通式(1)化合物或其药理学上可接受的盐作为活性物质，任选与常规赋形剂和/或载体组合的药物制剂。

本发明另外涉及一种包含通式(1)化合物及至少一种不同于式(1)的其它细胞生长抑制性或细胞毒性活性物质的药物制剂，其中化合物(1)还任选以互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式存在，或以所有上述形式的药理学上可接受的盐的形式存在。

定义

除非另有说明，否则适用本文所用的下列定义：

烷基由饱和烃链与不饱和烃链的亚群组成，其中后者可进一步细分为含双键的烃链(烯基)及含叁键的烃链(炔基)。烯基含有至少一个双键，炔基含有至少一个叁键。若烃链同时含有至少一个双键以及至少一个叁键，则根据定义其属于炔基亚群。所有上述亚群可进一步细分为直链(非支链)及支链的。若烷基被取代，则在各情况下该取代可在所有具有氢的碳原子上相互独立地单取代或多取代。

个别亚群的代表性实例列举如下：

直链(非支链)或支链的饱和烃链：

甲基、乙基、正-丙基、异丙基(1-甲基乙基)、正-丁基、1-甲基丙基、异丁基(2-甲基丙基)、仲-丁基(1-甲基丙基)、叔-丁基(1，1-二甲基乙基)、正-戊基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、异戊基(3-甲基丁基)、新戊基(2，2-二甲基-丙基)、正-己基、2，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、3，3-二甲基丁基、2-甲基-戊基、3-甲基戊基、正-庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、2，2-二甲基戊基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2，2，3-三甲基丁基、3-乙基戊基、正-辛基、正-壬基、正-癸基等。

直链(非支链)或支链的烯基：

乙烯基(vinyl)(乙烯基(ethenyl))、丙-1-烯基、烯丙基(丙-2-烯基)、异丙烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、2-甲基-丙-2-烯基、2-甲基-丙-1-烯基、1-甲基-丙-2-烯基、1-甲基-丙-1-烯基、1-亚甲基丙基(1-methylidenepropyl)、戊-1-烯基、戊-2-烯基、戊-3-烯基、戊-4-烯基、3-甲基-丁-3-烯基、3-甲基-丁-2-烯基、3-甲基-丁-1-烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基、己-5-烯基、2，3-二甲基-丁-3-烯基、2，3-二甲基-丁-2-烯基、2-亚甲基-3-甲基丁基、2，3-二甲基-丁-1-烯基、己-1，3-二烯基、己-1，4-二烯基、戊-1，4-二烯基、戊-1，3-二烯基、丁-1，3-二烯基、2，3-二甲基丁-1，3-二烯基等。

直链(非支链)或支链的炔基：

乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、1-甲基-丙-2-炔基等。

术语丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等在无任何其它定义时是指含有相应碳原子数的饱和烃基，包括所有异构体形式。

术语丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等在无任何其它定义时是指含有相应碳原子数及一个双键的不饱和烃基，适用时包括所有异构体形式即(Z)/(E)异构体。

术语丁二烯基、戊二烯基、己二烯基、庚二烯基、辛二烯基、壬二烯基、癸二烯基等在无任何其它定义时是指含有相应碳原子数及两个双键的不饱和烃基，适用时包括所有异构体形式即(Z)/(E)异构体。

术语丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基等在无任何其它定义时是指含有相应碳原子数及一个叁键的不饱和烃基，包括所有异构体形式。

术语杂烷基是指来自上文以其最广泛意义所定义的烷基衍生的基团，其烃链中一个或多个基团-CH₃相互独立地被基团-OH、-SH或-NH₂替换、一个或多个基团-CH₂-相互独立地被基团-O-、-S-或-NH-替换、一个或多个基团

被以下基团替换：

一个或多个基团＝CH-经基团＝N-替换、一个或多个基团＝CH₂经基团＝NH取代或一个或多个基团≡CH经基团≡N替换，同时在杂烷基中可仅存在总数最多3个的杂原子，在两个氧原子之间及两个硫原子之间或一个氧原子与一个硫原子之间必须含有至少一个碳原子且该基团作为整体必须具有化学稳定性。

由烷基的间接定义/来源可立即明了，杂烷基由含杂原子的饱和烃链、杂烯基及杂炔基的亚群构成，且其可进一步细分为直链(非支链)及支链的。若杂烷基被取代，则在各情况下该取代可在所有具有氢的氧、硫、氮和/或碳原子上相互独立地单取代或多取代。杂烷基自身作为取代基可经碳原子及经杂原子二者与分子连接。

典型实例列举如下：

二甲氨基甲基；二甲氨基乙基(1-二甲氨基乙基；2-二甲氨基乙基)；二甲氨基丙基(1-二甲氨基丙基，2-二甲氨基丙基，3-二甲氨基丙基)；二乙氨基甲基；二乙氨基乙基(1-二乙氨基乙基，2-二乙氨基乙基)；二乙氨基丙基(1-二乙氨基丙基，2-二乙氨基丙基，3-二乙氨基丙基)；二异丙氨基乙基(1-二异丙氨基乙基，2-二异丙氨基乙基)；双-2-甲氧基乙氨基；[2-(二甲氨基-乙基)-乙基-氨基]-甲基；3-[2-(二甲氨基-乙基)-乙基-氨基]-丙基；羟甲基；2-羟基-乙基；3-羟丙基；甲氧基；乙氧基；丙氧基；甲氧基甲基；2-甲氧基乙基等。

卤素表示氟、氯、溴和/或碘原子。

卤代烷基衍生自上文以其最广泛意义所定义的烷基，其烃链的一个或多个氢原子相互独立地经可相同或不同的卤素原子取代。由烷基的间接定义/来源可立即明了，卤代烷基由饱和卤代烃链、卤代烯基及卤代炔基亚群构成，且其可进一步细分为直链(非支链)及支链的。若卤代烷基被取代，则在各情况下该取代可在所有具有氢的碳原子上相互独立地单取代或多取代。

典型实例包含-CF₃；-CHF₂；-CH₂F；-CF₂CF₃；-CHFCF₃；-CH₂CF₃；-CF₂CH₃；-CHFCH₃；-CF₂CF₂CF₃；-CF₂CH₂CH₃；-CF＝CF₂；-CCl＝CH₂；-CBr＝CH₂；-CI＝CH₂；-C≡C-CF₃；-CHFCH₂CH₃；及-CHFCH₂CF₃。

环烷基由单环烃环、双环烃环及螺烃环亚群构成，同时各亚群可进一步细分为饱和的与不饱和的(环烯基)。术语不饱和是指在所述环体系中含有至少一个双键但并不形成芳香体系。在双环烃环中，两个环相连接使得其共用至少两个碳原子。在螺烃环中，一个碳原子(螺原子)由两个环共享。若环烷基被取代，则在各情况下该取代可在所有具有氢的碳原子上相互独立地单取代或多取代。环烷基自身可作为取代基经环体系的任一适宜位置与分子连接。

个别亚群的典型实例列举如下。

单环饱和烃环：

环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。

单环不饱和烃环：

环丙-1-烯基、环丙-2-烯基、环丁-1-烯基、环丁-2-烯基、环戊-1-烯基、环戊-2-烯基、环戊-3-烯基、环己-1-烯基、环己-2-烯基、环己-3-烯基、环庚-1-烯基、环庚-2-烯基、环庚-3-烯基、环庚-4-烯基、环丁-1，3-二烯基、环戊-1，4-二烯基、环戊-1，3-二烯基、环戊-2，4-二烯基、环己-1，3-二烯基、环己-1，5-二烯基、环己-2，4-二烯基、环己-1，4-二烯基、环己-2，5-二烯基等。

饱和及不饱和的双环烃环：

双环[2.2.0]己基、双环[3.2.0]庚基、双环[3.2.1]辛基、双环[2.2.2]辛基、双环[4.3.0]壬基(八氢茚基)、双环[4.4.0]癸基(十氢萘)、双环[2.2.1]庚基(降冰片烷基)、双环[2.2.1]庚-2，5-二烯基(降冰片-2，5-二烯基)、双环[2.2.1]庚-2-烯基(降冰片烯基)、双环[4.1.0]庚基(降蒈基)、双环[3.1.1]庚基(蒎基)等。

饱和及不饱和的螺烃环：

螺[2.5]辛基、螺[3.3]庚基、螺[4.5]癸-2-烯基等。

环烷基烷基表示上文在各情况下以其最广泛意义所定义的基团烷基与环烷基的组合。烷基作为取代基直接与分子连接且其又被环烷基取代。两个基团中的烷基与环烷基可经适用于此目的的任一碳原子连接。烷基与环烷基的相应亚群还纳入两基团的组合中。

芳基表示具有至少一个芳香环的单、二或三环碳环。若芳基被取代，则在各情况下该取代可在所有具有氢的碳原子上相互独立地单取代或多取代。芳基自身可作为取代基经环体系的任一适宜位置与分子连接。

典型实例包含苯基、萘基、茚满基(2，3-二氢茚基)、1，2，3，4-四氢萘基及芴基。

芳基烷基表示如上文在各情况下以其最广泛意义所定义的基团烷基与芳基的组合。烷基作为取代基直接与分子连接且其又被芳基取代。两个基团中的烷基与芳基可经适用于此目的的任一碳原子连接。烷基与芳基的相应亚群还纳入两基团的组合中。

典型实例包含苄基；1-苯乙基；2-苯乙基；苯乙烯基；苯基烯丙基等。

杂芳基表示单环芳香环或含有至少一个芳香环的多环，其与相应芳基或环烷基相比，除了含一个或多个碳原子，还含有一个或多个相互独立地选自氮、硫及氧的相同或不同的杂原子，同时所得基团必须在化学上稳定。若杂芳基被取代，则在各情况下该取代可在所有具有氢的碳原子和/或氮原子上相互独立地单取代或多取代。杂芳基自身作为取代基可经环体系的任一适宜位置(碳及氮二者)与分子相连接。

典型实例列举如下。

单环杂芳基：

呋喃基、噻吩基、吡咯基、

唑基、噻唑基、异

唑基、异噻唑基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、

二唑基、噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、吡啶基-N-氧化物、吡咯基-N-氧化物、嘧啶基-N-氧化物、哒嗪基-N-氧化物、吡嗪基-N-氧化物、咪唑基-N-氧化物、异

唑基-N-氧化物、

唑基-N-氧化物、噻唑基-N-氧化物、

二唑基-N-氧化物、噻二唑基-N-氧化物、三唑基-N-氧化物、四唑基-N-氧化物等。

多环杂芳基：

吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并

唑基、苯并噻唑基、苯并异

唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑基、吲唑基、异喹啉基、喹啉基、喹喔啉基、噌啉基(cinnolinyl)、酞嗪基(phthalazinyl)、喹唑啉基、苯并三嗪基、吲嗪基、

唑并吡啶基、咪唑并吡啶基、二氮杂萘基、二氢吲哚基、异色满基、色满基、四氢异喹啉基、异二氢吲哚基、异苯并四氢呋喃基、异苯并四氢噻吩基、异苯并噻吩基、苯并

唑基、吡啶并吡啶基、苯并四氢呋喃基、苯并四氢-噻吩基、嘌呤基、苯并二氧杂环戊烯基(benzodioxolyl)、吩

嗪基、吩噻嗪基、蝶啶基(pteridinyl)、苯并噻唑基、咪唑并吡啶基、咪唑并噻唑基、二氢苯并异

嗪基、苯并异

嗪基、苯并

嗪基、二氢苯并异噻嗪基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、香豆素基、异香豆素基、色酮基(chromonyl)、色满酮基、四氢喹啉基、二氢喹啉基、二氢喹啉酮基、二氢异喹啉酮基、二氢香豆素基、二氢异香豆素基、异吲哚酮基、苯并二氧杂环己烯基、苯并

唑酮基、喹啉基-N-氧化物、吲哚基-N-氧化物、二氢吲哚基-N-氧化物、异喹啉基-N-氧化物、喹唑啉基-N-氧化物、喹喔啉基-N-氧化物、酞嗪基-N-氧化物、吲嗪基-N-氧化物、吲唑基-N-氧化物、苯并噻唑基-N-氧化物、苯并咪唑基-N-氧化物、苯并噻喃基-S-氧化物及苯并噻喃基-S，S-二氧化物等。

杂芳基烷基表示如上文所定义的所述烷基与杂芳基的组合，其均具有其最广泛的含义。烷基作为取代基直接与分子连接且其又被杂芳基取代。烷基与杂芳基的连接可在烷基侧经适合此目的的任何碳原子来达成，且可在杂芳基侧经适合此目的的任何碳或氮原子来达成。烷基与杂芳基的各自亚群还可纳入该两基团的组合中。

术语杂环烷基是指衍生自上文所定义的环烷基的基团，若烃环中一个或多个-CH₂-基团彼此独立地被-O-、-S-或-NH-基团替代，或一个或多个＝CH-基团经＝N-基团替代，且总共不超过5个杂原子可能存在，在两个氧原子之间及在两个硫原子之间或在一个氧原子与一个硫原子之间必须存在至少一个碳原子且整个基团必须在化学上稳定。杂原子可同时以所有可能的氧化阶段(硫→亚砜-SO-、砜-SO₂-；氮→N-氧化物)存在。根据其由环烷基间接定义/衍生即可明了，杂环烷基由单环杂环、双环杂环及螺杂环等亚群所组成，其中各亚群还可进一步细分为饱和及不饱和(杂环烯基)。术语不饱和是指在所述环体系中存在至少一个双键，但无芳香体系形成。在双环杂环中，两个环的连接方式使得其共有至少两个原子。在螺杂环中，两个环共享一个碳原子(螺原子)。若杂环烷基被取代，则在各情况下该取代可为所有含氢的碳原子和/或氮原子上彼此独立地单取代或多取代。自身作为取代基的杂环烷基可经环体系的任一适合位置与分子连接。

个别亚群的典型实例列举如下。

单环杂环(饱和及不饱和)：

四氢呋喃基、吡咯烷基、吡咯啉基、咪唑烷基、噻唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌啶基、哌嗪基、氧杂环丙烷基(oxiranyl)、氮杂环丙烷基(aziridinyl)、氮杂环丁烷基、1，4-二氧杂环己烷基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、吗啉基、硫吗啉基(thiomorpholinyl)、高吗啉基、高哌啶基、高哌嗪基、高硫吗啉基、硫吗啉基-S-氧化物、硫吗啉基-S，S-二氧化物、1，3-二氧杂环戊烷基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、[1，4]-氧氮杂环庚烷基、四氢噻吩基、高硫吗啉基-S，S-二氧化物、

唑烷酮基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、二氢吡嗪基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、四氢噻吩基-S-氧化物、四氢噻吩基-S，S-二氧化物、高硫吗啉基-S-氧化物、2，3-二氢氮杂环丁二烯(dihydroazet)、2H-吡咯基、4H-吡喃基、1，4-二氢吡啶基等。

双环杂环(饱和及不饱和)：

8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[5.1.0]辛基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚基、8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基、3，8-二氮杂-双环[3.2.1]辛基、2，5-二氮杂-双环-[2.2.1]庚基、1-氮杂-双环[2.2.2]辛基、3，8-二氮杂-双环[3.2.1]辛基、3，9-二氮杂-双环[4.2.1]壬基、2，6-二氮杂-双环[3.2.2]壬基、六氢-呋喃并[3，2-b]呋喃基等。

螺杂环(饱和及不饱和)：

1，4-二氧杂-螺[4.5]癸基、1-氧杂-3，8-二氮杂-螺[4.5]癸基、2，6-二氮杂-螺[3.3]庚基、2，7-二氮杂-螺[4.4]壬基、2，6-二氮杂-螺[3.4]辛基、3，9-二氮杂-螺[5.5]十一烷基、2，8-二氮杂-螺[4.5]癸基等。

杂环烷基烷基表示上文在各情况下以其最广泛意义所定义的烷基与杂环烷基的组合。烷基作为取代基直接与分子连接且其又被杂环烷基取代。烷基与杂环烷基的连接可经适合于该目的的任何碳原子在烷基侧达成，且可经适合于该目的的任何碳或氮原子在杂环烷基侧达成。烷基与杂环烷基的相应亚群还可纳入两基团的组合中。

术语“适宜取代基”是指一方面化合价适合且另一方面使得体系在化学上稳定的取代基。

“前药”是指呈其前体代谢物形式的活性物质。部分多部分载体-前药系统与生物转化系统之间有区别。后者包括呈需要化学或生物代谢过程的形式的活性物质。熟练技术人员应熟悉此类前药系统(Sloan，Kenneth B.；Wasdo，Scott C.The role of prodrugs in penetration enhancement，PercutaneousPenetration Enhancers(第2版)(2006).51-64；Lloyd，Andrew W.Prodrugs.Smith及William.Introduction to the Principles of Drug Design and Action (第4版)(2006)，211-232；Neervannan，Seshadri.Strategies to impact solubility anddissolution rate during drug lead optimization：salt selection and prodrug designapproaches.American Pharmaceutical review(2004)，7(5)，108.110-113)。适宜前药包括例如经可酶切的连结基(例如氨基甲酸酯、磷酸酯、N-糖苷或二硫化物基团)以及促溶解物质(例如四乙二醇、糖类、氨基酸)连接的通式的物质。载体-前药系统包括例如结合至掩蔽基团的活性物质，该掩蔽基团可以最简单可控的机制脱除。在本发明化合物中，本发明的掩蔽基团的作用为中和电荷以改良细胞摄取。若本发明化合物使用掩蔽基团，则其还可额外影响其它药理学参数，例如口服生物利用度、组织分布、药代动力学及对抗非特异性磷酸酶的稳定性。活性物质的延迟释放还可包括持续释放的效果。而且，可产生改良的代谢过程，因此达成活性物质的更高效力或器官特异性。在前药制剂情况下，选择掩蔽基团或将掩蔽基团结合至活性物质的连结基，以使该前药具有足够亲水性从而溶解于血清中，具有足够化学及酶稳定性从而抵达活性位点，以及具有足够亲水性从而确保其适用于扩散-控制膜转运系统。而且，在合理时间段内应可化学或酶促诱导释放活性物质，且不言而喻，所释放的辅助组份应无毒。然而，在本发明范围内，可将无掩蔽剂或连结基的化合物及掩蔽剂视为前药，首要条件是其必须在细胞内自所消化化合物通过酶促及生化过程制备。

缩写列表

本发明的特征及优点将自以下详述实施例显而易见，这些实例以实例方式说明本发明的基本原理，但不限制其范围：

本发明化合物的制备

通用

除非另外说明，否则所有反应均在市售设备中使用化学实验室中常规的的方法进行。

对空气和/或湿度敏感的起始原料储存在保护气体中，且在保护气体(氮气或氩气)中使用其进行相应反应及操作。

在密封容器(优选为2、5或20mL)中，在Biotage制造的Initiator或CEM制造的Explorer中，优选在搅拌下进行微波反应。

色谱

对于制备型中压色谱(MPLC，正相)，使用Millipore制造的硅胶(名称：Granula Silica Si-60A 35-70μm)或Macherey Nagel制造的C-18RP-硅胶(RP相)(名称：Polygoprep 100-50C18)。

在Merck制造的预制硅胶60TLC玻璃板(含有荧光指示剂F-254)上进行薄层色谱。

使用Waters(名称：XTerra Prep.MS C18，5μM，30×100mm，或XTerraPrep.MS C18，5μm，50×100mm OBD，或Symmetrie C18，5μm，19×100mm，或Sunfire C18OBD，19×100mm，5μm或Sunfire Prep C 10μm OBD 50×150mm，或X-Bridge Prep C185μm OBD 19×50mm)、Agilent(名称：ZorbaxSB-C8 5μm PrepHT 21.2×50mm)及Phenomenex(名称：Gemini C18 5μmAXIA 21.2×50mm或Gemini C18 10μm 50×150mm)制造的色谱柱进行制备型高压色谱(HPLC)，使用Agilent(名称：Zorbax SB-C8，5μm，21.2×50mm或Zorbax SB-C8 3.5μm 2.1×50mm)及Phenomenex(名称：Gemini C18 3μm2×30mm)制造的色谱柱进行分析型HPLC(反应控制)。

HPLC质谱法/UV光谱法

使用Agilent制造的HPLC-MS设备(具有质量检测器的高效液相色谱)获得表征实例的保留时间/MS-ESI⁺。指定与进样峰一起洗脱的化合物的保留时间t_Ret.＝0.00。

方法A：

方法B：

方法C：

方法D：

方法E：

方法F：

由下文所述的合成方法制备本发明化合物，其中通式的取代基具有上文指定的含义。这些方法旨在例示本发明，而非将本发明限于这些方法的内容中，或将所要求保护的化合物的范围限于这些实施例中。在未描述起始化合物的制备的情况下，其可购得或可类似于本文所述的已知化合物或方法制备。根据公开的合成方法制备文献中公开的物质。

通过使用一种或多种胺R^yNH₂及R^zNH₂进行亲核芳香取代，由5位上被R⁵取代的2，4-二氯嘧啶A-1制备I型实施例化合物。取代顺序在很大程度上根据所用的胺、反应条件(酸性或碱性反应条件及路易斯酸(Lewis acid)的加入)及取代基R⁵而定。R^y及R^z为各情况下适于获得本发明的实施例化合物的基团。

根据文献已知的方法，在例如THF、DCM、NMP、EtOH、MeOH、DMSO或DMF的常用溶剂中，使用例如DIPEA或K₂CO₃的碱或例如HCl的酸，进行A-1、A-2及A-3上的亲核芳香取代。所用的胺R^yNH₂及R^zNH₂可购得或根据文献已知的方法合成。然后通过这些方法直接获得的I型二氨基嘧啶可以以文献已知或与文献类似的方式在R^y及R^z处进一步修饰，得到其他的I型二氨基嘧啶。因此，例如，可直接获得的I型二氨基嘧啶的基团R^y及R^z(由羧酸-、磺酸-、卤素-或氨基-取代的芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基组成)可通过取代(在杂芳基本身处)、烷基化、酰化、酰胺化或加成反应来修饰。

起始化合物的制备

除非另外说明，否则所有起始原料均购自商品供应商且直接用于合成中。通过公开的合成方法制备文献中所述的物质。

a)2，4-二氯-5-三氟甲基-嘧啶(A-1a)

将5-三氟甲基尿嘧啶(48.0g，267mmol)悬浮于210mL三氯氧磷(POCl₃)中，同时除去湿气。缓慢滴加二乙基苯胺(47.7g，320mmol)至此悬浮液中，使得温度保持在25℃至30℃之间。添加结束后，又在水浴中搅拌混合物5-10分钟，且在80-90℃加热混合物5-6小时，且除去湿气。通过在约1200g与冰水混合的硫酸中搅拌来消除过量POCl₃，且立即用每次500mL乙醚或叔丁基甲基醚萃取水相3次。用300mL与冰水混合的硫酸(约0.1M)洗涤合并的醚性萃取物2次，且以冷盐水溶液洗涤，且立即用硫酸钠干燥。滤除干燥剂，且真空除去溶剂。经短柱(20cm)(头温：65-70℃)真空(10毫巴(mbar))蒸馏残余物，获得无色液体，将其装入瓶中且储存在氩气下。

TLC：R_f＝0.83(cHex∶EE＝3∶1)

类似于此操作，自相应中间物/离析物或相应市售离析物获得其它嘧啶A-1。

b)4-(4-氯-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯甲酸苄酯(A-3a)

将4-氨基-3-甲氧基苯甲酸苄酯(1.92g，6.8mmol)及K₂CO₃(2.38g，17mmol)悬浮于4mL二

烷中，且接着与2，4-二氯-5-三氟甲基嘧啶(1.48mL，6.8mmol)混合。接着在油浴(约130℃)中在搅拌下使悬浮液回流100分钟。一旦反应结束，便滤出反应混合物，通过旋转蒸发来浓缩滤液，且通过正相柱色谱来纯化。合并A-3a的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝1.94分钟；MS(M-H)⁺＝436)且通过旋转蒸发来浓缩。

c)4-(4-氯-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯甲酸(A-4a)

在氢化高压釜中将化合物A-3a(1.3g，3mmol)悬浮于50mL THF中，且与Pd(OH)₂/碳(180mg，装填20％，约50％水)混合。接着，施加4.5巴H₂，且搅拌反应混合物24小时。反应结束后，滤出反应混合物，蒸发滤液且粗产物A-4a(HPLC-MS：t_Ret.＝1.24分钟；MS(M-H)⁺＝346)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

d)4-(4-氯-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(A-5a)

将化合物A-4a(2.0g，5.6mmol)悬浮于70mL甲苯中，与亚硫酰氯(840μL，11.5mmol)混合且在搅拌下加热至120℃，持续2小时。反应混合物冷却至室温，且使用旋转蒸发仪除去溶剂。将残余物悬浮于50mL THF中，冷却至0℃且逐滴与4-氨基-1-甲基哌啶(657mg，5.75mmol)及DIPEA(1.97mL，11.5mmol)溶解于20mL THF中的溶液混合。反应混合物缓慢达至室温，且在室温再搅拌12小时。使反应混合物冷却至0℃，滤出产物A-5a(HPLC-MS：t_Ret.＝2.06分钟；MS(M+H)⁺＝444)且未经任何进一步纯化即使用。

e)4-[4-((1R，2R)-2-氨基-环己基氨基)-5-三氟-甲基-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(A-6a)

将化合物A-5a(1.5g，3.38mmol)及(1R，2R)-环己烷-1，2-二胺(463mg，4.06mmol)悬浮于15mL EtOH中，与DIPEA(4.9mL，26.5mmol)混合且在70℃搅拌过夜。反应混合物冷却至室温，且使用旋转蒸发仪除去溶剂。将残余物溶解于DMF中且通过制备型HPLC纯化。冷冻干燥A-6a的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝0.56分钟；MS(M+H)⁺＝522)。

f)3-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-4-[4-((1R，2R)-2-丙酰基氨基-环己基氨基)-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酰胺I-1

将丙酸(12mg，0.15mmol)及HATU(58mg，0.15mmol)悬浮于DMF(500μL)中，与DIPEA(80μL，0.48mmol)合并，且在室温搅拌反应混合物15分钟。接着添加A-6a(50mg，0.1mmol)，且搅拌反应混合物过夜。过滤反应混合物，且通过制备型HPLC纯化。冷冻干燥I-1的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝1.82分钟；MS(M+H)⁺＝578)。

g)4-[4-(2-氨基-环己基氨基)-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯甲酸苄酯(A-7a)

将化合物A-3a(1.0g，2.28mmol)及反式-环己烷-1，2-二胺(313mg，2.74mmol)悬浮于10mL EtOH中，与DIPEA(3.3mL，17.3mmol)混合且在70℃搅拌过夜。反应结束后，蒸发反应混合物，且粗产物A-7a(HPLC-MS：t_Ret.＝1.11分钟；MS(M-H)⁺＝516)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

h)4-[4-(2-乙酰基氨基-环己基氨基)-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯甲酸苄酯(A-8a)

将化合物A-7a(500mg，0.97mmol)悬浮于DCM中，冷却至0℃且接着与三乙胺(161μL，1.16mmol)及乙酸酐(100mg，0.97mmol)混合。在0℃搅拌反应混合物1小时，与水混合且用DCM萃取。有机相经MgSO₄干燥，过滤，蒸发滤液且粗产物A-8a(HPLC-MS：t_Ret.＝1.78分钟；MS(M-H)⁺＝558)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

i)4-[4-(2-乙酰基氨基-环己基氨基)-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯甲酸(A-9a)

在氢化高压釜中将化合物A-8a(510mg，0.92mmol)悬浮于10mL THF中，且与钯/碳(50mg，装填10％)混合。接着施加5巴H₂，且搅拌反应混合物24小时。反应结束后，滤出反应混合物，蒸发滤液且粗产物A-9a(HPLC-MS：t_Ret.＝1.27分钟；MS(M-H)⁺＝468)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

j)4-[4-(2-乙酰基氨基-环己基氨基)-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基]-N-异丙基-3-甲氧基-苯甲酰胺(I-2)

将嘧啶A-9a(50mg，0.11mmol)及TBTU(38mg，0.12mmol)悬浮于DMF(400μL)中，与DIPEA(110μL，0.64mmol)混合且在室温搅拌反应混合物15分钟。接着添加异丙胺(27mg，0.46mmol)，且搅拌反应混合物过夜。过滤反应混合物，且通过制备型HPLC纯化。冷冻干燥I-2的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝1.85分钟；MS(M+H)⁺＝509)。

k)4-{4-[苄基-((1R，2R)-2-苄基氨基-环己基)-氨基]-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基}-3-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(A-10a)

将化合物A-5a(500mg，1.13mmol)及(1R，2R)-N，N′-二苄基-环己烷-1，2-二胺(364mg，1.24mmol)(S.E.Denmark，J.E.Marlin J.Org.Chem.1991，56，5063-5079.H.Tye，C.Eldred，M.Wills Tetrahedron Lett.2002，43，155-158)悬浮于5mL EtOH中，与DIPEA(570μL，3.36mmol)混合且在70℃搅拌。反应结束后，反应混合物冷却至室温，且使用旋转蒸发仪除去溶剂。粗产物A-10a(HPLC-MS：t_Ret.＝0.91分钟；MS(M-H)⁺＝702)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

l)4-(4-{苄基-[(1R，2R)-2-(苄基-甲基-氨基)-环己基]-氨基}-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(A-11a)

化合物A-10a(750mg，1.07mmol)及甲醛(164μL，2.36mmol，37％w/w)悬浮于25mL THF中，与乙酸(370μL，6.42mmol)混合且在室温搅拌10分钟。接着使反应混合物冷却至0℃，且与三乙酰氧基硼氢化钠(2.05g，9.66mmol)混合。反应结束后，将反应混合物与水混合，用1M NaOH调至微碱性pH值且用EtOAc萃取。有机相经硫酸镁干燥且真空蒸发。粗产物A-11a(HPLC-MS：t_Ret.＝1.09分钟；MS(M-H)⁺＝716)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

m)3-甲氧基-4-[4-((1R，2R)-2-甲基氨基-环己基氨基)-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基]-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(A-12a)

在氢化高压釜中将化合物A-11a(850mg，1.09mmol)悬浮于20mL THF中，且与Pd(OH)₂/碳(180mg，装填10％，约50％水)混合。接着施加7巴H₂，且在70℃搅拌反应混合物72小时。反应结束后，滤出反应混合物，蒸发滤液且粗产物A-12a(HPLC-MS：t_Ret.＝0.66分钟；MS(M-H)⁺＝536)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

n)3-甲氧基-4-(4-{(1R，2R)-2-[(2-甲氧基-乙酰基)-甲基-氨基]-环己基氨基}-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(I-3)

将甲氧基乙酸(15mg，0.17mmol)及HATU(64mg，0.17mmol)悬浮于DMF(600μL)中，与DIPEA(58μL，0.34mmol)混合，且在室温搅拌反应混合物15分钟。接着添加溶解于DMF(200μL)中的A-12a(60mg，0.11mmol)且在室温搅拌反应混合物3小时。过滤反应混合物，且通过制备型HPLC纯化。冷冻干燥I-3的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝1.78分钟；MS(M+H)⁺＝608)。

o)(1R，2R)-N-(2，5-二氯-嘧啶-4-基)-环己烷-1，2-二胺(A-2b)

将2，4，5-三氯嘧啶(1.0g，5.45mmol)悬浮于65mL iso-PrOH中且与K₂CO₃(10.55g，76.33mmol)混合。接着添加(1R，2R)-环己烷-1，2-二胺(685mg，5.99mmol)，且在55℃搅拌反应混合物3小时。蒸发反应混合物，与水混合且用DCM萃取。有机相经硫酸镁干燥且真空蒸发。滤出粗产物且通过制备型HPLC纯化，且冷冻干燥A-2b的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝0.61分钟；MS(M+H)⁺＝261/263)。

p)N-[(1R，2R)-2-(2，5-二氯-嘧啶-4-基氨基)-环己基]-乙酰胺(A-3b)

将化合物A-2b(500mg，1.92mmol)悬浮于5mL DCM中，且使反应混合物冷却至0℃。接着添加DIPEA(408μL，2.3mmol)及乙酸酐(195mg，1.95mmol)，且在0℃搅拌混合物1小时。用DCM稀释反应混合物，与水混合且用DCM萃取。有机相经硫酸镁干燥且真空蒸发。粗产物A-13a(HPLC-MS：t_Ret.＝1.19分钟；MS(M+H)⁺＝303/305)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

q)N-{(1R，2R)-2-[5-氯-2-(2-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-环己基}-乙酰胺(I-4)

嘧啶A-13a(70mg，0.23mmol)及2-甲氧基苯胺(57mg，0.46mmol)悬浮于MeOH(1.8mL)中，与HCl的二

烷溶液(75μL，0.3mmol，4M)混合，且在微波反应器中将反应混合物加热至130℃，持续30分钟。反应结束后，真空除去所有挥发性组份，将反应混合物与DMF混合且通过制备型HPLC纯化。冷冻干燥I-4的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝1.92分钟；MS(M+H)⁺＝390/392)。

类似于上文合成实施例I-1至I-4所述的反应方法a)至q)，可自相应前体获得其它实施例I-5至I-123(表1)或其它相当实施例，这些前体可购得或可通过文献已知的方法制备。

表1：实施例I-1至I-123

其中：“chiral”表示“手性”

N-((1R，2R)-2-氨基-环戊基)-N-甲基-甲磺酰胺(B-4a)的合成

步骤1：甲磺酸(1S，2R)-2-甲磺酰基氨基-环戊酯(B-1a)

将(1S，2R)-2-氨基-环戊醇(10g，72.67mmol)置于300mL DCM中，冷却至0℃，且相继与三乙胺(60.7mL，436mmol)及甲磺酰氯(17mL，218mmol)混合。在0℃搅拌混合物1小时。混合物与水及NaHCO₃饱和溶液混合且萃取。分离出有机相，用水/1N HCl洗涤1次，经MgSO₄干燥，滤出且通过旋转蒸发来浓缩。产物B-1a(HPLC-MS：t_Ret.＝0.77分钟；MS(M-H)^-＝256)未经任何进一步纯化即使用。

步骤2：N-((1R，2R)-2-叠氮基-环戊基)-甲磺酰胺(B-2a)

将化合物B-1a(17.8g，69.17mmol)置于450mL DMF中，与NaN₃(13.5g，207.5mmol)混合，加热至60℃且搅拌过夜。反应混合物冷却至室温，且添加7倍的水。搅拌混合物30分钟，且接着用乙酸乙酯萃取产物。有机相经MgSO₄干燥，滤出且通过旋转蒸发来浓缩。将通过旋转蒸发而浓缩的残余物与水及乙醚混合，分离出有机相，经MgSO₄干燥，滤出且通过旋转蒸发来浓缩。产物B-2a(HPLC-MS：t_Ret.＝0.97分钟；MS(M-H)^-＝203)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

步骤3：N-((1R，2R)-2-叠氮基-环戊基)-N-甲基-甲磺酰胺(B-3a)

将化合物B-2a(9.8g，47.98mmol)置于600mL DME中，且接着与碳酸钾(13.3g，95.96mmol)及碘甲烷(12mL，191.92mmol)混合。将混合物加热至85℃且搅拌过夜。反应混合物冷却至室温，与水及乙醚混合，且分离出有机相。再用乙酸乙酯萃取水相，且合并有机相。这些有机相经MgSO₄干燥，滤出且通过旋转蒸发来浓缩。粗产物B-3a未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

步骤4：N-((1R，2R)-2-氨基-环戊基)-N-甲基-甲磺酰胺(B-4a)

在氢化高压釜中将化合物B-3a(9.8g，44.90mmol)悬浮于100mL EtOH中，且与钯/碳(1g，装填5％)混合。接着施加6巴H₂，且在室温搅拌反应混合物3小时。反应结束后，滤出反应混合物，蒸发滤液且粗产物B-4a (HPLC-MS：t_Ret.＝0.45分钟；MS(M+H)⁺＝193)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

N-((1R，2R)-2-氨基-环己基)-N-甲基-甲磺酰胺(B-8a)的合成

步骤1：2-((1R，2R)-2-氨基-环己基)-异吲哚-1，3-二酮(B-5a)

将(1R，2R)-环己烷-1，2-二胺(12.70g，111.21mmol)置于90mL EtOH中，冷却至0℃且与邻苯二甲酰亚胺试剂(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-甲酸乙酯；24.38g，111.21mmol)混合。在短暂反应时间后，自溶液沉淀出产物。在0℃搅拌混合物1小时。接着使其再冷却至0℃，再搅拌30分钟，且滤出产物。干燥粗产物B-5a(HPLC-M S：t_Ret.＝1.40分钟；MS(M+H)⁺＝245)，且未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

步骤2：N-[(1R，2R)-2-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-环己基]-甲磺酰胺(B-6a)

将化合物B-5a(15g，61.4mmol)置于105mL DCM中，与三乙胺(25.7mL，184.2mmol)混合，且接着滴加溶解于45mL DCM中的甲磺酰氯(4.8mL，61.4mmol)。在室温搅拌混合物1小时。将混合物与水混合，分离各相，且用DCM再萃取水相2次。合并的有机相经MgSO₄干燥且蒸发。所获得的固体B-6a未经任何进一步纯化即用于随后反应中(HPLC-MS：t_Ret.＝1.22分钟；MS(M+H)⁺＝323)。

步骤3：N-[(1R，2R)-2-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-环己基]-N-甲基-甲磺酰胺(B-7a)

将化合物B-6a(20.1g，62.38mmol)置于200mL DME中，且接着与碳酸钾(17.2g，124.7mmol)及碘甲烷(11.65mL，187.1mmol)混合。加热混合物至85℃且搅拌过夜。反应混合物冷却至室温，与水及乙酸乙酯混合，且分离出有机相。合并的有机相经MgSO₄干燥且蒸发。粗产物B-7a(HPLC-MS：t_Ret.＝1.34分钟；MS(M+H)⁺＝337)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

步骤4：N-((1R，2R)-2-氨基-环己基)-N-甲基-甲磺酰胺(B-8a)

将化合物B-7a(19.6g，58.38mmol)置于505mL EtOH中，与35％肼水溶液(15.9mL，175.1mmol)混合且在搅拌下回流3小时。反应混合物冷却至室温，滤出所得固体，以少量EtOH洗涤且通过旋转蒸发来浓缩。残余物与DCM一起搅拌，滤出，用DCM洗涤且合并的有机相经MgSO₄干燥，滤出且通过旋转蒸发来浓缩。油性残余物与乙醚混合，此时产物开始结晶析出。回流且搅拌30分钟。接着使其冷却至0℃，再搅拌30分钟，且滤出固体。固体B-8a(HPLC-MS：t_Ret.＝1.81分钟；MS(M+H)⁺＝207)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

r)4-{4-[(1R，2R)-2-(甲磺酰基-甲基-氨基)-环戊基氨基]-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基}-3-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(I-124)

将化合物A-5a(50mg，0.113mmol)及化合物B-4a(43.3mg，0.225mmol)悬浮于500μL EtOH中，与DIPEA(75μL，0.451mmol)混合且在75℃搅拌过夜。反应混合物冷却至室温，且使用旋转蒸发仪除去溶剂。将残余物溶解于DMF中且通过制备型HPLC纯化。冷冻干燥I-124的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝1.77分钟；MS(M+H)⁺＝600)。

s)4-{4-[(1R，2R)-2-(甲磺酰基-甲基-氨基)-环己基氨基]-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基}-3-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(I-90)

将化合物A-5a(129mg，0.291mmol)及化合物B-8a(60mg，0.291mmol)与DIPEA(193μL，1.16mmol)一起置于1.2mL EtOH中且在70℃搅拌2小时。反应混合物冷却至室温，且使用旋转蒸发仪除去溶剂。残余物溶解于DMF中且通过制备型HPLC纯化。冷冻干燥I-90的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝1.85分钟；MS(M+H)⁺＝614)。

t)4-[4-((1R，2R)-2-甲磺酰基氨基-环己基氨基)-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(I-125)

将化合物A-6a溶解于DCM中，且用10％K₂CO₃溶液萃取，干燥且蒸发。将A-6a(50mg，0.096mmol)悬浮于1mL DCM中，且与40μL三乙胺(0.288mmol)混合。接着缓慢滴加8μL(0.105mmol)甲磺酰氯，且在室温搅拌混合物过夜。蒸发反应混合物，将残余物溶解于DMF中，且直接通过制备型HPLC进行色谱纯化。冷冻干燥I-125的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝1.78分钟；MS(M+H)⁺＝600)。

u)4-[4-((1R，2R)-2-氨基-环戊基氨基)-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(A-6b)

将化合物A-5a(300mg，0.676mmol)及(1R，2R)-反式-1，2-环戊二胺二盐酸盐(117mg，0.676mmol)悬浮于4mL EtOH中，与DIPEA(447μL，2.71mmol)混合且在80℃搅拌过夜。反应混合物冷却至室温，且使用旋转蒸发仪除去溶剂。将残余物溶解于DMF中且通过制备型HPLC纯化。冷冻干燥A-6b的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝0.60分钟；MS(M+H)⁺＝508)。

v)4-[4-((1R，2R)-2-甲磺酰基氨基-环戊基氨基)-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(I-126)

将化合物A-6b溶解于DCM中，且用10％K₂CO₃溶液萃取，干燥且蒸发。将A-6b(65mg，0.128mmol)悬浮于700μLDCM中，且与72μL三乙胺(0.512mmol)混合。接着在0℃缓慢滴加10μL(0.134mmol)甲磺酰氯，且在室温搅拌混合物1小时。蒸发反应混合物，将残余物溶解于DMF中，且直接通过使用制备型HPLC进行色谱纯化。冷冻干燥I-126的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝1.83分钟；MS(M+H)⁺＝586)。

w)2，5-二氯-4-甲基硫基-嘧啶(A-14a)

将2，4，5-三氯嘧啶(10.9g，59.4mmol)置于110mL THF中，冷却至0℃且接着与甲硫醇钠(5g，71.3mmol)混合。温度缓慢增至室温且在室温搅拌反应混合物过夜。反应结束后，反应混合物通过旋转蒸发来浓缩，与100mL水混合且用DCM萃取2次。分离出有机相，经MgSO₄干燥，滤出且通过旋转蒸发来浓缩。产物A-14a未经任何进一步纯化即使用。

x)4-(5-氯-4-甲基硫基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯甲酸苄酯(A-15a)

将化合物A-14a(2g，10.3mmol)及4-氨基-2-氟-5-甲氧基-苯甲酸苄酯(3.4g，12.3mmol)置于3mL NMP中，且与HCl的二烷溶液(2.8mL，11.3mmol，4Mol/L)混合。在100℃搅拌混合物过夜。反应混合物冷却至室温，且与乙腈混合。再搅拌15分钟，将反应混合物倒入水中且再搅拌30分钟。过滤沉淀物A-15a(HPLC-MS：t_Ret.＝2.05分钟；MS(M+H)⁺＝434)，干燥且未经任何进一步纯化即使用。

y)4-(5-氯-4-甲磺酰基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯甲酸苄酯(A-16a)

将化合物A-15a(11.1g，23.0mmol)悬浮于350mL DCM中，与3-氯-过氧苯甲酸(mCPBA)(13g，52.9mmol)缓慢混合且搅拌反应混合物过夜。用水及1M NaOH萃取反应混合物2次，且用DCM再次萃取合并的水相。有机相经MgSO₄干燥且蒸发。粗产物A-16a(HPLC-MS：t_Ret.＝1.69分钟；MS(M+H)⁺＝466)未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

z)4-(5-氯-4-羟基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯甲酸(A-17a)

将化合物A-16a(5g，10.7mmo1)置于10mL THF中，且接着与8N NaOH溶液(8mL，64.4mmol)混合。首先在室温搅拌混合物1小时，且接着在65℃搅拌过夜。反应混合物冷却至室温，与水混合，分离出有机相，且用8N HCl酸化水相。产物经细玻璃纤维滤器过滤。干燥产物A-17a(HPLC-MS：t_Ret.＝1分钟；MS(M-H)^-＝312)，且未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

aa)4-(4，5-二氯-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯甲酸(A-18a)

将化合物A-17a(3.3g，10.5mmol)悬浮于48mL磷酰氯中，且在搅拌下回流2小时。通过旋转蒸发，除去磷酰氯，且残余物与水一起搅拌。在室温搅拌混合物30分钟，且滤出固体。用水洗涤，将残余物悬浮于THF中，与水及Na₂CO₃饱和溶液混合且搅拌过夜。通过旋转蒸发，除去THF，且水溶液用8N HCl调至pH 2。搅拌30分钟，滤出且用水洗涤。干燥产物A-18a (HPLC-MS：t_Ret.＝1.52分钟；MS(M-H)^-＝330)，且未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

ab)4-(4，5-二氯-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(A-19a)

将化合物A-18a(3.4g，10.1mmol)悬浮于100mL甲苯中，与亚硫酰氯(2.2mL，30.4mmol)混合且在搅拌下加热至120℃，持续2小时。反应混合物冷却至室温，且使用旋转蒸发仪除去溶剂。将残余物悬浮于130mL THF中，冷却至0℃且向其中滴加4-氨基-1-甲基哌啶(1.2g，10.1mmol)及DIPEA(5.2mL，30.4mmol)溶解于50mL THF中的溶液。反应混合物缓慢达至室温，且在室温搅拌12小时。产物A-19a(HPLC-MS：t_Ret.＝0.87分钟；MS(M+H)⁺＝428)沉淀，滤出，干燥且未经任何进一步纯化即用于随后反应中。

ac)4-{5-氯-4-[(1R，2R)-2-(甲磺酰基-甲基-氨基)-环戊基氨基]-嘧啶-2-基氨基}-2-氟-5-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺(I-127)

将化合物A-19a(3.7g，8.6mmol)及化合物B-4a(2.2g，11.2mmol)悬浮于40mL EtOH中，与DIPEA(5.9mL，34.5mmol)混合且在75℃搅拌过夜。反应混合物冷却至室温，且使用旋转蒸发仪除去溶剂。将残余物溶解于DMF中且通过制备型HPLC纯化。冷冻干燥I-127的含产物级分(HPLC-MS：t_Ret.＝1.99分钟；MS(M+H)⁺＝584)。

类似于本文合成实施例I-124至I-127以及I-90所述的反应方法a)至ac)，可自相应前体获得其它实施例I-128至I-195(表2)及其它相当实施例，这些前体可购得或可通过文献已知的方法制备。

表2：实施例I-124至I-195

其中：“chiral”表示“手性”

以下实施例描述本发明化合物的生物活性，但本发明不限于这些实施例。

PTK2酶测试

测定1

此测试使用活性PTK2酶(Invitrogen代号为PV3832)，且使用聚-Glu-Tyr(4∶1，Sigma P-0275)作为激酶底物。在DELFIA^TMμ测定中通过底物的磷酸化来检测激酶活性。用铕标记的磷酸化酪氨酸抗体PT60(Perkin Elmer，编号：AD00400)检测磷酸化的底物。

为了确定PTK2抑制剂的浓度-活性曲线，将化合物用10％DMSO/H₂O连续稀释，且放置10μL各稀释液于96孔微量滴定板(具有U形底的透明培养板，Greiner编号：650101)(抑制剂以一式两份测试)的各孔中，且与每孔10μLPTK2激酶(每孔0.01μg)混合。相应地，预先用激酶稀释缓冲液(20mMTRIS/HCl pH 7.5、0.1mM EDTA、0.1mM EGTA、0.286mM原钒酸钠、10％甘油、添加新鲜制备的BSA(Fraction V，1mg/mL)和DTT(1mM))稀释PTK2激酶。在环境温度预培育测试化合物及PTK2激酶1小时，且以每分钟500转振荡。通过每孔添加10μL聚(Glu，Tyr)底物(溶解于250mM TRIS/HCl pH 7.5，9mM DTT中的每孔25μg聚(Glu，Tyr)、每孔0.05μg生物素标记的聚(Glu，Tyr))，使反应开始，DMSO的最终浓度为2％。接着添加20μLATP Mix(30mM TRIS/HCl pH 7.5、0.02％Brij、0.2mM原钒酸钠、10mM乙酸镁、0.1mMEGTA、1x磷酸酶抑制剂混合液1(Sigma，编号：P2850)、50μMATP(Sigma，编号：A3377；15mM储备溶液))。激酶反应1小时(以500rpm振荡培养板)后，通过每孔添加12μL 100mM EDTA(pH 8.0)使反应停止，且在环境温度再振荡5分钟(500rpm)。将55μL反应混合物转移至链亲和素培养板(Roche制造的Strepta Well High Bind(透明，96孔)，编号：11989685001)中，且在环境温度培育1小时(以500rpm振荡)。接着用每孔200μL D-PBS(Invitrogen，编号14190)洗涤微量滴定板3次。接着添加100μL含有DELFIA Eu-N1的抗磷酸化酪氨酸PT60抗体(Perkin Elmer，编号：AD0040，用DELFIA测试缓冲液(PerkinElmer，编号：1244-111)稀释1∶2000)的溶液，且在环境温度培育混合物1小时(以500rpm振荡)。接着用每孔200μL DELFIA洗涤缓冲液(Perkin Elmer，编号：1244-114)洗涤培养板3次，添加每孔200μL浓度增强溶液(Perkin Elmer，编号：1244-105)，且在环境温度培育混合物10分钟(以300rpm振荡)。

接着在微量滴定板读取器(VICTOR³，Perkin Elmer)中测量时间延迟(time-delayed)的铕荧光。所用阳性对照组为含有溶剂对照(于测试缓冲液中的2％DMSO)且显示未受抑制的激酶活性的孔。含有测试缓冲液而非酶的孔用作背景激酶活性对照组。

通过S型曲线分析算法(FIFTY，基于GraphPAD Prism第3.03版)以可变希尔系数(Hill coefficient)进行迭代计算，自浓度活性分析测得IC₅₀值。

测定2

此测试使用活性PTK2酶(Invitrogen代号为PV3832)，且使用聚-Glu-Tyr(4∶1，Sigma P-0275)作为激酶底物。在DELFIA^TM测定中通过底物的磷酸化来检测激酶活性。用铕标记的磷酸化酪氨酸抗体PT66(Perkin Elmer，编号：AD0040)检测磷酸化的底物。

为了确定PTK2抑制剂的浓度-活性曲线，首先用10％DMSO/H2O连续稀释化合物，且接着用激酶稀释缓冲液(20mM TRIS/HCl pH 7.5、0.1mMEDTA、0.1mM EGTA、0.286mM原钒酸钠、10％甘油、添加新鲜制备的BSA(Fraction V，1mg/mL)和DTT(1mM))稀释，且将每孔10μL各稀释液分配于96孔微量滴定板(透明U形底的培养板，Greiner编号650101)(抑制剂以一式两份测试)中，且与每孔10μL PTK2激酶(每孔0.01μg)混合。相应地，预先用激酶稀释缓冲液稀释PTK2激酶。在环境温度预培育经稀释的PTK2抑制剂及PTK2激酶1小时，且以每分钟500转振荡。接着添加每孔10μL聚-Glu-Tyr底物(溶解于250mM TRIS/HCl pH 7.5、9mM DTT中的每孔25μg聚-Glu-Tyr、每孔0.05μg生物素标记聚-Glu-Tyr)。通过添加20μL ATP Mix(30mMTRIS/HCl pH 7.5、0.02％Brij、0.2mM原钒酸钠、10mM乙酸镁、0.1mMEGTA、1x磷酸酶抑制剂混合液1(Sigma，编号：P2850)、50μMATP(Sigma，编号：A3377；15mM储备溶液))，使反应开始，DMSO最终浓度为0.5％。激酶反应1小时(以500rpm振荡培养板)后，通过添加每孔12μL 100mMEDTA(pH 8)使反应停止，且在环境温度再振荡5分钟(500U/分钟)。将55μL反应混合物转移至链亲和素培养板(Roche制造的Strepta Well High Bind(透明，96孔)，编号：11989685001)中，且在环境温度培育1小时(以500rpm振荡)。接着用每孔200μL D-PBS(Invitrogen，编号14190)洗涤微量滴定板5次。接着添加100μL含有DELFIA Eu-N1的抗磷酸化酪氨酸PT66抗体(PerkinElmer，编号：AD0040，用DELFIA测试缓冲液(Perkin Elmer，编号：1244-111)稀释1∶9000)的溶液，且将其在环境温度培育1小时(以500rpm振荡)。接着用每孔200μL DELFIA洗涤缓冲液(Perkin Elmer，编号：1244-114)洗涤培养板5次，添加每孔200μL浓度增强溶液(Perkin Elmer，编号：1244-105)，且整体在环境温度培育10分钟(以300rpm振荡)。

接着在微量滴定板读取器(Victor，Perkin Elmer)中测量时间延迟的铕荧光。阳性对照组由含有溶剂(于测试缓冲液中的0.5％DMSO)且显示未受抑制的激酶活性的孔组成。含有测试缓冲液而非酶的孔用作背景激酶活性对照组。

通过使用S型曲线分析算法(FIFTY，基于GraphPAD Prism第3.03版)以可变希尔系数进行迭代计算，自浓度-活性分析测得IC₅₀值。

下表3给出如自测定1或测定2(^*)测定所获得的几乎所有实施例化合物I-1至I-195的IC₅₀值。因此充分证明了本发明化合物的抑制活性。

表3

软琼脂测定

使用此细胞测试来确定PTK2抑制剂对PC-3前列腺癌细胞在软琼脂中生长(“锚定不依赖性生长(anchorage-independent growth)”)的影响。在2周培育时间后，通过Alamar Blue(刃天青(resazurin))染色证实细胞活力。

PC-3细胞(ATCC CRL-1435)在含有补充有10％胎牛血清(Invitrogen，编号：16000-044)的F12Kaighn培养基(Gibco，编号：21127)的细胞培养瓶(175cm²)中生长。在培育箱中于37℃及5％CO₂下培育培养物，且每周进行2次。测试I在96孔微量滴定板(Greiner，编号：655185)中进行，且由以下组成：由90μL含有1.2％琼脂糖(Invitrogen，4％琼脂糖胶1x液体40mL，编号：18300-012)的培养基组成的下层，然后于60μL培养基及0.3％琼脂糖中的细胞层，及最后包含30μL含有稀测试化合物的培养基(未添加琼脂糖)的顶层。为了制备下层，将4％琼脂糖与10x D-PBS(Gibco，编号：14200)及H₂O一起煎煮，且因此预稀释为1x D-PBS中的3％琼脂糖。后者用培养基(F12 Kaighn培养基/10％FCS)及FCS调至在F12 Kaighn培养基中琼脂糖的1.2％最终稀释液(含有10％FCS)。向微量滴定板的各孔提供90μL下层悬浮液且冷却至环境温度，持续1小时。对于细胞层，使用胰蛋白酶(Gibco，0.05％；编号：25300)分离PC-3细胞，计数，且在各情况下每孔接种400个细胞于60μL添加有0.3％琼脂糖的F12 Kaighn培养基(10％FCS)中(37℃)。在经2小时冷却至环境温度后，添加测试化合物(30μL连续稀释液)以一式三份测量。测试化合物的浓度通常覆盖1μM至0.06nM的测试范围。化合物(储备溶液：10mM的100％DMSO)首先用100％DMSO连续稀释，且接着用F12 Kaighn培养基预稀释，以获得0.8％DMSO的最终浓度。在37℃及5％CO₂下在蒸汽饱和氛围中培育细胞14天。接着用染料Alamar Blue(AbD Serotec，编号：BUF012B)证明存活细胞的代谢活性。为此，添加每孔25μL Alamar Blue悬浮液，且整体在培育箱中于37℃培育约8小时。阳性对照组由填有25μL经热压处理还原的Alamar Blue与175μL F12 Kaighn培养基(10％FCS)的混合物的空孔组成。所用的阴性对照组为含有不含细胞的琼脂糖层及培养基顶层两者的孔。通过荧光分光计(SpectraMAX GeminiXS，Molecular Devices)确定荧光强度。激发波长为530nm，发射波长为590nm。

通过使用S型曲线分析算法(FIFTY，基于GraphPAD Prism第3.03版)以可变希尔系数进行迭代计算，自浓度-活性分析测得EC₅₀值。

磷酸化PTK2(pY397)测定

使用此细胞测试来确定PTK2抑制剂对酪氨酸397位PTK2磷酸化(pY397)状态的影响。

PC-3细胞(前列腺癌，ATCC CRL-1435)在含有添加有10％胎牛血清(Invitrogen，编号：16000-044)的F12 Kaighn培养基(Gibco，编号：21127)的细胞培养瓶(175cm²)中生长。在培育箱中于37℃及5％CO₂下培育培养物，且每周进行2次。

测试时，将每孔2×10⁴个细胞/180μL培养基涂于96孔微量滴定板(Costar，编号：3598)中，且在培育箱中于37℃及5％CO₂下培育过夜。第二天，添加测试化合物(20μL来自连续稀释液)。测试化合物的浓度通常涵盖10μM至5fM的范围。测试化合物(储备溶液：10mM的100％DMSO溶液)首先用100％DMSO连续稀释，且接着用培养基稀释，使最终浓度为0.5％DMSO。接着在培育箱中于37℃及5％CO₂下培育细胞2小时。接着移除培养物上清液，且在环境温度用100μL 4％甲醛的D-PBS溶液固定细胞，持续20分钟。在移除甲醛溶液后，用300μl洗涤缓冲液(0.1％Triton X-100的D-PBS溶液)洗涤细胞一次，持续5分钟。接着在环境温度在每孔100μl终止溶液(在洗涤缓冲液中含30％过氧化氢、10％叠氮化钠)中培育20分钟。再用300μl洗涤缓冲液洗涤细胞坪(cell lawn)1次，持续5分钟，且接着用每孔100μl阻断缓冲液(于TBST(25mM Tris/HCl pH 8.0、150mMNaCl、0.05％Tween 20)中含5％脱脂奶粉(MaresiFixmilch))洗涤1小时。用50μL经阻断缓冲液稀释1∶1000倍的抗磷酸化PTK2[pY397]兔单克隆一抗(Invitrogen/Biosource，编号：44-625G)替换阻断缓冲液。为对照目的，改用经阻断缓冲液稀释1∶400倍的PTK2[总]抗体(克隆4.47小鼠单克隆，Upstate，编号：05-537)。在4℃培育过夜。接着用300μL洗涤缓冲液洗涤细胞坪一次，持续5分钟，且添加每孔50μL二抗。为检测已结合的磷酸化PTK2[pY397]抗体，使用与辣根过氧化酶偶联的山羊-抗-兔抗体(Dako，编号：P0448；用阻断缓冲液稀释1∶750倍)。为检测已结合的PTK2[总]抗体，使用也与辣根过氧化酶偶联的兔-抗-小鼠抗体(Dako，编号：PO161；用阻断缓冲液稀释1∶1000倍)。在温和振荡下，在环境温度培育1小时。接着再用300μL洗涤缓冲液洗涤细胞坪一次，持续5分钟，且接着用300μl PBS洗涤。通过吸滤来移除PBS，通过添加100μL染色溶液(TMB过氧化酶底物(KPL，编号：50-76-02)与过氧化酶溶液B(H₂O₂)(KPL，编号：50-65-02)的1∶1混合物)进行过氧化酶染色。染色剂在暗处经10-30分钟显色。通过添加每孔100μL 1M磷酸溶液停止反应。在450nm下使用吸光测量装置(VICTOR³PerkinElmer)确定吸光度。使用抗磷酸化PTK2[pY397]免疫染色的抑制性来确定EC₅₀值。抗-PTK2[总]抗体的染色用于对照目的，且在抑制剂影响下应保持恒定。通过S型曲线分析算法(FIFTY，基于GraphPAD Prism第3.03版)，采用可变希尔系数进行迭代计算，自浓度-活性分析测得EC₅₀值。

在上文所述的磷酸化PTK2(pY397)测定中，表3中所列的所有实施例化合物的EC₅₀值(PC-3)均小于或等于10μM，一般小于1μM。

Aurora-B激酶测定

使用由大肠杆菌表达的在N末端位置具有GST标记的重组非洲爪蟾(Xenopus laevis)Aurora B野生型蛋白(氨基酸60-361)与自细菌获得且经纯化的非洲爪蟾INCENP(氨基酸790-847)的复合物进行放射性酶抑制测定。以同等方式，还可使用非洲爪蟾Aurora B突变体(G96V)与非洲爪蟾INCENP^790-847的复合物。

表达及纯化

来自非洲爪蟾的Aurora-B^60-361的编码序列经BamHI及SalI切割位点克隆至修饰型式的pGEX-6T(Amersham Biotech)中。载体含有两个由核糖体结合位点隔开的克隆盒(cloning cassette)，允许双顺反子表达。在此构型中，非洲爪蟾Aurora B由第一盒表达，且非洲爪蟾INCENP^790-847由第二盒表达。所得载体为pAUB-IN⁸⁴⁷。

首先，用pUBS520辅助质粒及pAUB-IN⁸⁴⁷使大肠杆菌菌株BL21(DE3)共转型(co-transform)，此后使用OD₆₀₀为0.45-0.7的0.3mM IPTG诱发蛋白表达。在23-25℃，在搅动下，继续表达约12-16小时。

接着通过离心来移除细菌，且使用超声将离心块溶解于溶菌缓冲液(50mM Tris/Cl pH 7.6、300mM NaCl、1mM DTT、1mM EDTA、5％甘油、Roche完全蛋白酶抑制剂片剂)中，每升大肠杆菌培养物使用20-30mL溶菌缓冲液。通过离心(12000rpm，45-60分钟，JA20转子)使溶解的物质脱除碎片。在4℃，以每升大肠杆菌培养物300μL平衡的GST Sepharose Fast Flow(AmershamBiosciences)培育上清液4-5小时。接着用30体积溶菌缓冲液洗涤柱材料，且接着用30体积裂解缓冲液(50mM Tris/Cl pH 7.6、150mM NaCl、1mM DTT、1mM EDTA)平衡。为从Aurora B裂解GST标记，每毫克底物使用10单位前切割蛋白酶(prescission protease)(Amersham Biosciences)，且在4℃培育混合物16小时。将含有裂解产物的上清液装载至用离子交换缓冲液(50mM Tris/ClpH 7.6、150mM NaCl、1mM DTT、1mM EDTA)平衡的6mL Resource Q柱(Amersham Biosciences)上。当Aurora B/INCENP复合物流过时被捕捉，接着浓缩且装载至用SEC缓冲液(10mM Tris/Cl pH 7.6、150mM NaCl、1mMDTT、1mM EDTA)平衡的Superdex 200尺寸排阻色谱(SEC)柱上。收集含有AuroraB/INCENP复合物的级分且使用Vivaspin浓缩器(分子量排除3000-5000Da)浓缩至12mg/mL的最终浓度。将用于激酶测定的等分样品(例如240ng/μL)自此储备溶液转移至冷冻缓冲液(50mM Tris/Cl pH 8.0、150mMNaCl、0.1mM EDTA、0.03％Brij-35、10％甘油、1mM DTT)中，且储存在-80℃。

激酶测定

将测试物质置于聚丙烯培养皿(96孔，Greiner#655201)中以覆盖10μM-0.0001μM的浓度范围。测定中DMSO的最终浓度为5％。将30μL蛋白混合物(于冷冻缓冲液中的50mM Tris/Cl pH 7.5、25mM MgCl₂、25mM NaCl、167μM ATP、10ng非洲爪蟾Aurora B/INCENP复合物)吸取至10μl提供于25％DMSO中的测试物质中，且在环境温度培育15分钟。接着添加10μL肽混合物(100mM Tris/Cl pH 7.5、50mM MgCl₂、50mM NaCl、5μM NaF、5μM DTT、1μCiγ-P33-ATP[Amersham]、50μM底物肽[生物素-EPLERRLSLVPDS或其多聚体，或生物素-EPLERRLSLVPKM或其多聚体，或生物素-LRRWSLGLRRWSLGLRRWSLGLRRWSLG])。培育反应物75分钟(环境温度)，且通过添加180μL 6.4％三氯乙酸使反应停止，且在冰上培育20分钟。首先用100μL70％乙醇平衡多孔滤板(Millipore，MAIP NOB10)，且接着用180μL三氯乙酸平衡，且使用适合抽吸设备除去液体。接着施用反应停止的激酶反应物。在各情况下使用180μL1％三氯乙酸进行5次洗涤步骤后，干燥培养皿下部(在55℃10-20分钟)，且添加25μL闪烁混合液(Microscint，Packard#6013611)。使用Wallac 1450Microbeta液体闪烁计数器定量掺入的γ-磷酸酯。不含测试物质或不含底物肽的样品用作对照组。使用Graph Pad Prism软件获得IC₅₀值。

在下表4中，比较代表性选择的本发明化合物(1)对PTK2的抑制常数与对Aurora B的抑制常数，以证明化合物的选择性。

表4

本发明物质为PTK2激酶抑制剂。鉴于通式(1)的新的化合物、其同分异构体及其生理上可接受的盐的生物学特性，其适于治疗特征在于过度或异常细胞增殖的疾病。

所述疾病包括例如：病毒感染(例如，HIV及卡波西肉瘤)；炎症及自身免疫性疾病(例如，结肠炎、关节炎、阿尔兹海默氏病、肾小球肾炎及伤口愈合)；细菌、真菌和/或寄生感染；白血病、淋巴瘤及实体瘤(例如，癌及肉瘤)、皮肤疾病(例如牛皮癣)；与细胞(例如成纤维细胞、肝细胞、骨及骨髓细胞、软骨或平滑肌细胞或上皮细胞(例如子宫内膜增生))数量增加有关的增生疾病；骨病及心血管疾病(例如再狭窄及肥大)。

例如，以下癌症可用本发明化合物治疗，但不限于这些癌症：脑瘤(例如听神经鞘瘤(acoustic neurinoma))、星形细胞瘤(例如纤维性星形细胞瘤、原浆性星形细胞瘤、饲肥星形细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、毛细胞性星形细胞瘤、神经胶质母细胞瘤、神经胶质肉瘤、多形性黄色星形细胞瘤、室管膜下巨细胞星形细胞瘤及促纤维增生性婴儿型星形细胞瘤(desmoplasticinfantile astrocytoma))；脑淋巴瘤、脑转移瘤、垂体肿瘤(例如催乳素瘤、垂体偶发瘤(hypophyseal incidentaloma)、HGH(人类生长激素)产生的腺瘤及促肾上腺皮质素腺瘤)、颅咽管瘤、神经管胚细胞瘤、脑膜瘤及少突神经胶质瘤；神经肿瘤(例如植物神经系统的肿瘤，例如神经胚细胞瘤、神经节瘤、副神经节瘤(亲铬性细胞瘤、嗜铬细胞瘤)及颈动脉球肿瘤，末梢神经系统上的肿瘤(例如截肢性神经瘤、神经纤维瘤、神经细胞瘤(neurinoma)(神经鞘瘤(neurilemmoma)、神经鞘瘤(Schwannoma))及恶性神经鞘瘤)，以及中枢神经系统的肿瘤(例如脑瘤及骨髓肿瘤)；肠癌(例如直肠、结肠、肛门及十二指肠的癌)；眼睑肿瘤(眼睑器官的基底细胞癌或腺癌)；视网膜母细胞瘤；胰腺癌；膀胱癌；肺肿瘤(支气管癌-小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)例如梭形细胞板上皮癌、腺癌(腺泡癌、乳突癌、细支气管-肺泡癌)及大细胞支气管癌(巨细胞癌、透明细胞癌))；乳腺癌(例如导管、小叶、粘液或小管癌、佩吉特氏癌(Paget′s carcinoma))；非霍奇金淋巴瘤(B-淋巴或T-淋巴NHL)(例如毛细胞白血病、伯基特淋巴瘤(Burkitt′s lymphoma)或蕈状肉芽肿病(mucosisfungoides))；霍奇金病；子宫癌(子宫体癌或子宫内膜癌)；CUP综合征(未知原发性癌症)；卵巢癌(卵巢癌-粘液或浆液性囊瘤、子宫内膜肿瘤、透明细胞肿瘤、布伦纳氏肿瘤(Brenner′s tumour))；胆囊癌；胆管癌(例如肝门胆管肿瘤(Klatskin tumor))；睾丸癌(生殖或非生殖细胞肿瘤)；喉癌(例如声带的声门上、声门及声门下肿瘤)；骨癌(例如骨软骨瘤、软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液性纤维瘤、软骨肉瘤、骨瘤、骨样骨瘤、骨胚细胞瘤、骨肉瘤、非骨化性骨纤维瘤、纤维骨瘤、促纤维化骨纤维瘤、骨纤维肉瘤、恶性纤维性组织细胞瘤、破骨细胞瘤或巨细胞肿瘤、尤因氏肉瘤(Ewing′s sarcoma)、及浆细胞瘤)，头颈肿瘤(HNO肿瘤)(例如唇及口腔的肿瘤(唇、舌、口腔的癌)、鼻咽癌(鼻的肿瘤、淋巴上皮瘤)、咽癌、口咽癌、扁桃腺癌(扁桃体恶性黑色素瘤(tonsil malignoma))及舌(底)的癌、下咽癌、喉癌(喉头癌)、副鼻窦及鼻腔的肿瘤、唾液腺及耳的肿瘤)；肝细胞癌(liver cell carcinoma)(肝细胞瘤(hepatocellular carcinoma)(HCC))；白血病(例如急性白血病(例如急性淋巴/淋巴母细胞白血病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML))；慢性淋巴性白血病(CLL)、慢性髓细胞性白血病(CML))；胃癌(乳突、小管或粘液腺癌、腺鳞状细胞癌、鳞状或未分化癌；恶性黑色素瘤(例如浅表播散性(SSM)、结节性(NMM)、恶性雀斑性(LMM)、肢端性(ALM)或无黑色素性恶性黑素瘤(AMM))；肾癌(例如肾细胞癌(肾上腺瘤或格拉维茨氏肿瘤(Grawitz′stumour)))；食道癌；阴茎癌；前列腺癌；阴道癌或阴道癌；甲状腺癌(例如乳突、滤泡、髓或未分化性甲状腺癌)；胸腺癌(胸腺瘤)；尿道癌(尿道癌、尿道上皮癌)及外阴癌。

这些新的化合物还任选与放射疗法或其它“本领域水平”的化合物(例如抑制细胞生长或细胞毒性物质、细胞增殖抑制剂、抗血管生成物质、甾体或抗体)组合用于预防、短期或长期治疗上述疾病。

通式(1)化合物可单独使用或与本发明其它活性物质组合使用，还任选与其它药理活性物质组合使用。

可与本发明化合物组合给药的化学治疗药剂包括(但不限于)激素、激素类似物及抗激素药(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、氟维司群、乙酸甲地孕酮、氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、氨鲁米特、醋酸环丙孕酮、非那雄胺、醋酸布舍瑞林、氟氢可的松、氟甲睾酮、甲羟孕酮、奥曲肽)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、利阿唑、伏氯唑、依西美坦、阿他美坦)、LHRH激动剂及拮抗剂(例如醋酸性瑞林、亮丙瑞林(luprolide))、生长因子抑制剂(生长因子为例如“血小板衍生生长因子”及“肝细胞生长因子”，抑制剂为例如“生长因子”抗体、“生长因子受体”抗体及酪氨酸激酶抑制剂，例如吉非替尼、拉帕替尼及曲妥珠单抗)；信号转导抑制剂(例如伊马替尼和索拉非尼(sorafenib))；抗代谢药(例如抗叶酸剂，例如胺甲喋呤、培美曲塞(premetrexed)和雷替曲塞；嘧啶类似物，例如5-氟尿嘧啶、卡培他滨及吉西他滨；嘌呤及腺苷类似物，例如巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、克拉屈滨及喷司他丁、阿糖胞苷、氟达拉滨)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环抗生素，例如多柔比星、柔红霉素、表柔比星及伊达比星、丝裂霉素-C、博莱霉素、放线菌素D、普卡霉素、链佐星)；铂衍生物(例如顺铂、奥沙利铂、卡铂)；烷基化试剂(例如雌莫司汀、双氯乙基甲胺(meclorethamine)、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、达卡巴嗪、环磷酰胺、异环磷酰胺、替莫唑胺、亚硝基脲(例如卡莫司汀及洛莫司汀、噻替哌)；抗有丝分裂试剂(例如长春花生物碱例如长春碱、长春地辛(vindesin)、长春瑞滨(vinorelbin)及长春新碱；及紫杉烷，例如紫杉醇、多西紫杉醇)；拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，例如依托泊苷及凡毕复、替尼泊苷、安吖啶、拓扑替康、伊立替康、米托蒽醌)及各种化学治疗药剂，例如胺磷汀、阿那格雷、氯膦酸盐、非尔司亭、干扰素α、亚叶酸钙、利妥昔单抗、丙卡巴肼、左旋咪唑、美司钠、米托坦、帕米膦酸盐及卟菲尔钠。

适宜制剂包括例如片剂、胶囊、栓剂、溶液(特别是注射(皮下注射、静脉注射、肌内注射)及输注用溶液)酏剂、乳液或可分散粉剂。药物活性化合物的含量应占全部组合物的0.1-90重量％、优选0.5-50重量％，即足以达成下述剂量范围的量。若需要，每天可分若干次给予指定剂量。

可通过将活性物质与已知赋形剂混合来获得适宜片剂，所述赋形剂例如惰性稀释剂，例如碳酸钙、磷酸钙或乳糖；崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉或明胶；润滑剂，例如硬脂酸镁或滑石粉，和/或延迟释放剂，例如羧甲基纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素或聚乙酸乙烯酯。片剂还可包含若干层。

因此，可通过用常用于片剂包衣的物质(例如可力酮(collidone)或虫胶、阿拉伯胶、滑石粉、二氧化钛或糖)对以类似于片剂的方式得到的片芯进行包衣以制备包衣片剂。为达成延时释放或防止出现不相容性，片芯还可由多层组成。同样，片剂包衣可由多层组成以达成延迟释放，其中可使用上述用于片剂的赋形剂。

含有本发明活性物质或其组合的糖浆或酏剂可另外含有甜味剂(例如糖精、环氨酸盐、甘油或糖)及增味剂，例如调味剂(例如香草醛或柑橘提取物)。其还可含有悬浮液佐剂或增稠剂(例如羧甲基纤维素钠)，润湿剂(例如脂肪醇与环氧乙烷的缩合产物)或防腐剂(例如对羟基苯甲酸酯)。

注射及输注用溶液按常规方式通过例如加入等渗剂、防腐剂(例如对羟基苯甲酸酯)或稳定剂(例如乙二胺四乙酸的碱金属盐)来制备，其中任选使用乳化剂和/或分散剂，其中例如若使用水作为稀释剂，则可任选使用有机溶剂作为助溶剂(solvating agent)或溶解助剂，并将所述溶液转移至注射瓶或安瓿或输注瓶中。

含有一种或多种活性物质或活性物质组合的胶囊可通过例如将活性物质与惰性载体(例如乳糖或山梨醇)混合，并将其装入明胶胶囊中来制备。

适宜栓剂可通过例如将其与出于此目的提供的载体(例如中性脂肪或聚乙二醇或其衍生物)混合来制备。

可用赋形剂包括例如水；可药用有机溶剂，例如石蜡(例如石油馏分)、植物油(例如花生油或芝麻油)、一元或多元醇(例如乙醇或甘油)；载体，例如天然矿物粉末(例如高岭土、粘土、滑石粉、白垩)、合成矿物粉末(例如高分散硅酸及硅酸盐)、糖(例如蔗糖、乳糖及葡萄糖)、乳化剂(例如木素、亚硫酸盐废液(spent sulphite liquors)、甲基纤维素、淀粉及聚乙烯基吡咯烷酮)及润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石粉、硬脂酸及月桂基硫酸钠)。

所述制剂通过常规方法给药，优选通过口服或经皮途径给药，更优选通过口服给药。对于口服给药而言，片剂除上述载体外当然还可含有添加剂，例如柠檬酸钠、碳酸钙及磷酸二钙，以及各种添加剂，例如淀粉(优选马铃薯淀粉)、明胶及如此类。此外，压片制程中可同时使用润滑剂，例如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠及滑石粉。在水性悬浮液的情况下，除上述赋形剂外活性物质可与各种增味剂或着色剂组合。

对于肠胃外使用而言，可使用活性物质与适宜液体载体的溶液。

静脉内使用的剂量介于1至1000mg/小时之间，优选介于5至500mg/小时之间。

然而，根据体重、给药途径、个体对药物的反应、药物制剂的性质及药物给药时间或间隔，有时可能需要偏离指定量。因此，在某些情况下，可能使用低于上述最低剂量的量即已足够，而在其它情况下可能不得不超出上述剂量的上限。当大量给药时，可适当地将其分成许多较小剂量在一天中不同时间给药。

下文的制剂实施例旨在说明本发明而非限制其范围：

药物制剂的实施例：

将精细研磨的活性物质、乳糖及部分玉米淀粉混合在一起。筛分混合物，然后用聚乙烯基吡咯烷酮的水溶液将其润湿，捏合，湿法制粒并干燥。将颗粒、剩余的玉米淀粉及硬脂酸镁过筛并将其混合。压制混合物以产生适宜形状及大小的片剂。

将精细研磨的活性物质、部分玉米淀粉、乳糖、微晶纤维素及聚乙烯基吡咯烷酮混合，将混合物过筛，并将其与剩余玉米淀粉及水一起处理以形成颗粒，干燥并筛分该颗粒。加入羧甲基淀粉钠及硬脂酸镁并将其混合，压制该混合物以形成适宜尺寸的片剂。

C)安瓿溶液

式(1)活性物质 50mg

氯化钠 50mg

注射用水 5mL

将活性物质溶于水中，其pH为水自身的pH或任选为pH 5.5至6.5，并加入氯化钠使其等渗。过滤所获得溶液使其不含致热原，并在无菌条件下将滤液转移至安瓿中，然后将其灭菌并通过熔化将安瓿密封。安瓿含有5mg、25mg及50mg活性物质。

Claims

1.通式(1)化合物，

其中

R³为选自以下的基团：-NR^cR^c、-N(OR^c)R^c、-N(R^g)NR^cR^c、-N(R^g)C(O)R^c、-N[C(O)R^c]₂、-N(OR^g)C(O)R^c、-N(R^g)C(NR^g)R^c、-N(R^g)N(R^g)C(O)R^c、-N[C(O)R^c]NR^cR^c、-N(R^g)C(S)R^c、-N(R^g)S(O)R^c、-N(R^g)S(O)OR^c、-N(R^g)S(O)₂R^c、-N[S(O)₂R^c]₂、-N(R^g)S(O)₂OR^c、-N(R^g)S(O)₂NR^cR^c、-N(R^g)[S(O)₂]₂R^c、-N(R^g)C(O)OR^c、-N(R^g)C(O)SR^c、-N(R^g)C(O)NR^cR^c、-N(R^g)C(O)NR^gNR^cR^c、-N(R^g)N(R^g)C(O)NR^cR^c、-N(R^g)C(S)NR^cR^c、-[N(R^g)C(O)]₂R^c、-N(R^g)[C(O)]₂R^c、-N{[C(O)]₂R^c}₂、-N(R^g)[C(O)]₂OR^c、-N(R^g)[C(O)]₂NR^cR^c、-N{[C(O)]₂OR^c}₂、-N{[C(O)]₂NR^cR^c}₂、-[N(R^g)C(O)]₂OR^c、-N(R^g)C(NR^g)OR^c、-N(R^g)C(NOH)R^c、-N(R^g)C(NR^g)SR^c及-N(R^g)C(NR^g)NR^cR^c，

或任选被R^c和/或R^d取代的N-连接的3-8元杂环烷基；

m等于1、2或3；

n等于0、1、2、3或4；

各R^b为适宜基团且在各情况下彼此独立地选自＝O、-OR^c、C_1-3卤代烷氧基、-OCF₃、＝S、-SR^c、＝NR^c、＝NOR^c、＝NNR^cR^c、＝NN(R^g)C(O)NR^cR^c、-NR^cR^c、-ONR^cR^c、-N(OR^c)R^c、-N(R^g)NR^cR^c、卤素、-CF₃、-CN、-NC、-OCN、-SCN、-NO、-NO₂、＝N₂、-N₃、-S(O)R^c、-S(O)OR^c、-S(O)₂R^c、-S(O)₂OR^c、-S(O)NR^cR^c、-S(O)₂NR^cR^c、-OS(O)R^c、-OS(O)₂R^c、-OS(O)₂OR^c、-OS(O)NR^cR^c、-O S(O)₂NR^cR^c、-C(O)R^c、-C(O)OR^c、-C(O)SR^c、-C(O)NR^cR^c、-C(O)N(R^g)NR^cR^c、-C(O)N(R^g)OR^c、-C(NR^g)NR^cR^c、-C(NOH)R^c、-C(NOH)NR^cR^c、-OC(O)R^c、-OC(O)OR^c、-OC(O)SR^c、-OC(O)NR^cR^c、-OC(NR^g)NR^cR^c、-SC(O)R^c、-SC(O)OR^c、-SC(O)NR^cR^c、-SC(NR^g)NR^cR^c、-N(R^g)C(O)R^c、-N[C(O)R^c]₂、-N(OR^g)C(O)R^c、-N(R^g)C(NR^g)R^c、-N(R^g)N(R^g)C(O)R^c、-N[C(O)R^c]NR^cR^c、-N(R^g)C(S)R^c、-N(R^g)S(O)R^c、-N(R^g)S(O)OR^c、-N(R^g)S(O)₂R^c、-N[S(O)₂R^c]₂、-N(R^g)S(O)₂OR^c、-N(R^g)S(O)₂NR^cR^c、-N(R^g)[S(O)₂]₂R^c、-N(R^g)C(O)OR^c、-N(R^g)C(O)SR^c、-N(R^g)C(O)NR^cR^c、-N(R^g)C(O)NR^gNR^cR^c、-N(R^g)N(R^g)C(O)NR^cR^c、-N(R^g)C(S)NR^cR^c、-[N(R^g)C(O)]₂R^c、-N(R^g)[C(O)]₂R^c、-N{[C(O)]₂R^c}₂、-N(R^g)[C(O)]₂OR^c、-N(R^g)[C(O)]₂NR^cR^c、-N{[C(O)]₂OR^c}₂、-N{[C(O)]₂NR^cR^c}₂、-[N(R^g)C(O)]₂OR^c、-N(R^g)C(NR^g)OR^c、-N(R^g)C(NOH)R^c、-N(R^g)C(NR^g)SR^c及-N(R^g)C(NR^g)NR^cR^c；

各R^d表示适宜基团且在各情况下彼此独立地选自＝O、-OR^e、C_1-3卤代烷氧基、-OCF₃、＝S、-SR^e、＝NR^e、＝NOR^e、＝NNR^eR^e、＝NN(R^g)C(O)NR^eR^e、-NR^eR^e、-ONR^eR^e、-N(R^g)NR^eR^e、卤素、-CF₃、-CN、-NC、-OCN、-SCN、-NO、-NO₂、＝N₂、-N₃、-S(O)R^e、-S(O)OR^e、-S(O)₂R^e、-S(O)₂OR^e、-S(O)NR^eR^e、-S(O)₂NR^eR^e、-OS(O)R^e、-OS(O)₂R^e、-OS(O)₂OR^e、-OS(O)NR^eR^e、-O S(O)₂NR^eR^e、-C(O)R^e、-C(O)OR^e、-C(O)SR^e、-C(O)NR^eR^e、-C(O)N(R^g)NR^eR^e、-C(O)N(R^g)OR^e、-C(NR^g)NR^eR^e、-C(NOH)R^e、-C(NOH)NR^eR^e、-OC(O)R^e、-OC(O)OR^e、-OC(O)SR^e、-OC(O)NR^eR^e、-OC(NR^g)NR^eR^e、-SC(O)R^e、-SC(O)OR^e、-SC(O)NR^eR^e、-SC(NR^g)NR^eR^e、-N(R^g)C(O)R^e、-N[C(O)R^e]₂、-N(OR^g)C(O)R^e、-N(R^g)C(NR^g)R^e、-N(R^g)N(R^g)C(O)R^e、-N[C(O)R^e]NR^eR^e、-N(R^g)C(S)R^e、-N(R^g)S(O)R^e、-N(R^g)S(O)OR^e、-N(R^g)S(O)₂R^e、-N[S(O)₂R^e]₂、-N(R^g)S(O)₂OR^e、-N(R^g)S(O)₂NR^eR^e、-N(R^g)[S(O)₂]₂R^e、-N(R_g)C(O)OR^e、-N(R^g)C(O)SR^e、-N(R^g)C(O)NR^eR^e、-N(R^g)C(O)NR^gNR^eR^e、-N(R^g)N(R^g)C(O)NR^eR^e、-N(R^g)C(S)NR^eR^e、-[N(R^g)C(O)]₂R^e、-N(R^g)[C(O)]₂R^e、-N{[C(O)]₂R^e}₂、-N(R^g)[C(O)]₂OR^e、-N(R^g)[C(O)]₂NR^eR^e、-N{[C(O)]₂OR^e}₂、-N{[C(O)]₂NR^eR^e}₂、-[N(R^g)C(O)]₂OR^e、-N(R^g)C(NR^g)OR^e、-N(R^g)C(NOH)R^e、-N(R^g)C(NR^g)SR^e及-N(R^g)C(NR^g)NR^eR^e；

条件是该苯环A不同时带有两个氯取代基；

2.如权利要求1的化合物，其中R^x为氢。

3.如权利要求1或2的化合物，其中B为C_3-8环烷基。

4.如权利要求1-3中任一项的化合物，其中R⁵为选自卤素、-CF₃及C_1-4卤代烷基的基团。

5.如权利要求1-4中任一项的化合物，其中R³选自-NR^cR^c、-N(OR^c)R^c、-N(R^g)C(O)R^c、-N(OR^g)C(O)R^c、-N(R^g)S(O)₂R^c 、-N(R^g)C(O)OR^c及-N(R^g)C(O)NR^cR^c，

或任选被R^c和/或R^d取代的N-连接的4-6元杂环烷基，且

R^c、R^d及R^g如权利要求1中所定义。

6.如权利要求5的化合物，其中R³选自-NHC(O)R^c1、-N(C_1-4烷基)C(O)R^c1、-NHS(O)₂R^c1及-N(C_1-4烷基)S(O)₂R^c1；

R^c1对应于基团R^c，且

R^c如权利要求1中定义。

7.如权利要求6的化合物，其中R^c1选自C_1-4烷基、C_3-5环烷基、C_1-4烷氧基甲基、(C_1-4烷基)NH-CH₂-及(C_1-4烷基)₂N-CH₂-。

8.如权利要求1-7中任一项的化合物，其中n值为0。

9.如权利要求1-8中任一项的化合物，其中

m值为1或2；

各R²彼此独立地选自卤素、C_1-6烷基及C_1-6烷氧基，且

R¹如权利要求1中定义。

10.如权利要求1-9中任一项的化合物，其中

R¹选自R^a2、R^b2以及被一个或多个相同或不同的R^b2和/或R^c2取代的R^a2；

各R^a2彼此独立地选自C_1-6烷基及3-7元杂环烷基；

各R^b2表示适宜取代基且彼此独立地选自-OR^c2、-NR^c2R^c2、-C(O)R^c2、-C(O)OR^c2、-C(O)NR^c2R^c2、-C(O)N(R^g2)OR^c2、-N(R^g2)C(O)R^c2、-N(R^g2)C(O)OR^c2及-N(R^g2)C(O)NR^c2R^c2，

各R^c2彼此独立地表示氢或任选被一个或多个相同或不同的R^d2和/或R^e2取代的选自以下的基团：C_1-6烷基、C_3-6环烷基及3-7元杂环烷基；

各R^e2彼此独立地表示氢或任选被一个或多个相同或不同的R^f2和/或R^g2取代的选自以下的基团：C_1-6烷基及C_3-6环烷基；

各R^f2独立地表示-OR^g2，且

各R^g2彼此独立地表示氢或C_1-6烷基。

11.如权利要求1的化合物，其选自

12.如权利要求1-11中任一项的通式(1)化合物或其药理学上可接受的盐，其用作药物。

13.如权利要求1-11中任一项的通式(1)化合物或其药理学上可接受的盐，其用于治疗和/或预防癌症、感染、炎症及自身免疫性疾病。

14.药物制剂，其含有一种或多种如权利要求1-11中任一项的通式(1)化合物或其药理学上可接受的盐作为活性物质，任选组合常规赋形剂和/或载体。

15.药物制剂，其包含如权利要求1-11中任一项的通式(1)化合物及至少一种不同于式(1)的另一种细胞生长抑制性或细胞毒性活性物质，其中该化合物(1)还任选以互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式存在，或还以所有这些上述形式的各自药理学上可接受的盐形式存在。