CN102406758A

CN102406758A - 茶叶提取物在制备治疗肝损伤药物中应用

Info

Publication number: CN102406758A
Application number: CN2011103697822A
Authority: CN
Inventors: 张岳梅; 孙玮
Original assignee: SHANGHAI MUNICIPAL SECOND MIDDLE SCHOOL
Current assignee: SHANGHAI MUNICIPAL SECOND MIDDLE SCHOOL
Priority date: 2011-11-18
Filing date: 2011-11-18
Publication date: 2012-04-11

Abstract

本发明属于药学领域，本发明提供了茶叶提取物在制备治疗肝损伤药物中应用，解决了现有技术中的药物在治疗肝损伤疾病中效果不佳的技术问题，所述的茶叶提取物中多酚的重量百分比大于>95%，所述的EGCG重量百分比在70%-99%之间。本发明通过试验发现茶叶提取物能够显著促进小鼠肝脏SOD活性，降低机体本身积累的脂质过氧化物有害物质，茶叶提取物含有多个酚羟基，极易被氧化成为醌类而提供质子H+，具有较强的供氢能力，能够显著地清除体内的有害自由基并抑制原来的自由基连锁反应，其中茶叶提取物30—300mg/kg均能明显降低损伤肝组织MDA含量。

Description

茶叶提取物在制备治疗肝损伤药物中应用

技术领域

本发明属于药学领域，尤其涉及一种药物的新的用途，具体来说是茶叶提取物在制备治疗肝损伤药物中应用。

背景技术

现代社会，人和人的交往离不开酒，虽说“无酒不成席”，但不可否认的是，酒也是“穿肠毒药”。北京大学精神卫生研究所的一项统计资料表明，近年来我国饮酒人数一直呈上升趋势，目前，男女饮酒率分别为84.1％和29.3％，近几年来，青少年饮酒的人数增加了，有些研究报告指出，大约有27％的青少年在滥用酒精。在我国，由于饮酒导致酒精性肝病的发生率呈明显上升趋势，已成为不容忽视的隐性杀手。从原理上说，肝脏是分解代谢酒精的器官。但有研究显示，如果你喝50度的白酒，连续5年每天2两，就会造成肝损伤。

肝脏是人体新陈代谢重要的器官，像人体的化工厂，能够解毒同时参与凝血因子的生成，参与糖类蛋白质和脂肪的代谢。肝脏一旦受到损害，其功能即受到抑制。

目前护肝产品参差不齐，护肝效果也不明显，天然护肝产品的开发相对滞后。

发明内容

针对上述现有技术中存在的缺陷，本发明提供了茶叶提取物在制备治疗肝损伤药物中应用。

本发明提供了茶叶提取物在制备治疗肝损伤药物中应用，所述的茶叶提取物中多酚的重量百分比大于＞95％，所述的EGCG重量百分比在70％-99％之间。

进一步的，所述的茶叶为绿茶。

上述的茶叶提取物是将茶叶经纯水提取(加热沸腾、消除氧气)后，过滤杂质提取并加热浓缩，通过超滤膜截留，超滤时压力控制在0.2～0.5MPa间，将经超滤后的物料用旋转蒸发仪旋转蒸发处理，便制得茶叶提取物。

本发明和已有技术相比，其技术进步是显著的。本发明通过试验发现茶叶提取物能够显著促进小鼠肝脏SOD活性，降低机体本身积累的脂质过氧化物有害物质，茶叶提取物含有多个酚羟基，极易被氧化成为醌类而提供质子H+，具有较强的供氢能力，能够显著地清除体内的有害自由基并抑制原来的自由基连锁反应。其中茶叶提取物30-300mg/kg均能明显降低损伤肝组织MDA含量。

附图说明

图1是乙醇中毒肝损伤模型组小鼠耳及尾部出现出血斑点的照片。

图2是正常肝组织的照片。

图3是病变肝组织的照片。

具体实施方式

实施例1本发明采用的试验方法是：乙醇致小鼠肝损伤，建立乙醇急性中毒模型，饲喂茶叶提取物物后观察小鼠机体及肝组织变化同时测定肝组织中MDA含量及SOD活性变化，与正常对照组、模型组比较是否存在差异。

1.材料：

1.1药品与试剂

茶叶提取物(聚辰生物工程研究所)、56度二锅头白酒(用时加蒸馏水稀释，配制成35％体积比浓度)、MDA、SOD测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)、0.86％NaCL、0.9％NaCL

1.2仪器

721型分光光度计、TGL-16C型高速离心机、TDL-4型低速离心机、电热恒温水温箱、电子天平

1.3动物

昆明种小鼠，体重20±2g，雌雄各半

1.4统计学处理

肝脏病理学检查数据以x²检验进行统计学处理；其他数据均以

表示，采用单因素方差分析进行统计处理；以上均采用spss10.0软件。

2试验方法

2.1试验分组

将小鼠随机分成7组(每组8只)，生理盐水对照组、乙醇急性中毒模型组、给药对照组(茶叶提取物浓度为300mg/kg)、试验给药组(茶叶提取物组按照不同浓度分为4组即茶试验组I、茶试验组II、茶试验组III和茶试验组IV)

2.2试验方法

生理盐水对照组和乙醇急性中毒模型组ig(灌胃给药)16ml/kg生理盐水；给药对照组将浓度300mg/kg茶叶提取物溶解于16ml/kg生理盐水中灌胃给药；试验给药组分别ig给药30、75、150、300mg/kg(即试验组I、试验组II、试验组III和试验组IV)，每天一次，连续给药10d。每次给药后1h，除生理盐水对照组外，其余各组均用酒精度为35％二锅头白酒灌胃，用量16ml/kg，每日1次，至给药结束。在饲养过程中观察小鼠机体变化并作记录，末次给酒后禁食16h后将小鼠脱颈椎处死，解剖观察肝组织变化(包括颜色、大小、光滑度和肝组织韧性)并取肝脏(于液氮中保存备用)，用时匀浆制备肝脏匀浆液(制备方法：用生理盐水充分洗去小鼠肝脏表面残血，滤纸吸干。取适量肝组织称重，置玻璃匀浆器中，加冰冷的0.86％NaCL溶液制成10％肝匀浆。)。

按试剂盒说明书介绍测定MDA含量及SOD活性。

3.结果

3.1观察小鼠机体变化记录

乙醇中毒肝损伤模型组小鼠耳及尾部出现出血斑点，见图1。

3.2观察茶叶提取物对乙醇中毒小鼠肝组织实质器官影响

肉眼观察：被损害肝脏表面呈淡淡白色雾状、肿胀、变脆、易碎(用镊子轻碰便破碎)、出血，表面不光滑、腹腔有多量淡黄色清朗的渗出液体(见图3)。正常肝脏组织色泽红润，弹性较好(见图2)。肝脏病变检查见表1：

表1 乙醇中毒对小鼠肝脏的影响(n＝8)例数

(注：与生理盐水对照组比较**P＜0.001)

由肝脏病理学观察数据可以看出乙醇模型对照组肉眼观察异常例数与正常对照组比较均差异非常显著(p＜0.001)，而其他各组无显著差异。这说明茶叶提取物30-300mg/kg浓度给药各组均显著抑制肝脏病变。下面试验从抗自由基方面试图寻找肝脏病变发生机制。

3.3茶叶提取物对乙醇中毒小鼠肝组织内MDA含量的影响(x±s)表2

注：与生理盐水对照组比较差异显著#p＜0.001；与乙醇中毒模型组比较有显著差异**p＜0.001；茶叶提取物+乙醇组II、组III与茶叶提取物+乙醇组I、IV分别比较有显著差异·p＜0.001。

由MDA试验结果经方差分析得出：

(1)茶叶提取物给药对照组MDA含量较生理盐水对照组为低且差异显著，说明茶叶提取物本身确实能够降低脂质过氧化物含量减少对脂质过氧化物对肝脏损害。

(2)乙醇中毒模型组MDA含量较生理盐水对照组明显升高(p＜0.001)，说明急性乙醇中毒小鼠模型建立；

(3)茶叶提取物给药各实验组(给药剂量30mg/kg-300mg/kg)与乙醇中毒模型组比较MDA呈显著性差异p＜0.001，而与生理盐水对照组无差异，说明茶叶提取物给药组能有效降低脂质过氧化物MDA的产生；

(4)茶叶提取物各实验组内比较发现：茶叶提取物+乙醇组II、组III与茶叶提取物+乙醇组I、IV比较有显著差异p＜0.001，组II、组IIIMDA含量降低较明显，从以上结果得出茶叶提取物药效也有一定的浓度关系。

3.4两种提取物对乙醇中毒小鼠肝组织SOD活性的影响

表3

注：与生理盐水对照组比较差异显著#p＜0.001；与乙醇中毒模型组比较有显著差异**p＜0.001；茶叶提取物+乙醇组II、组III与茶叶提取物+乙醇组I、IV比较有显著差异·p＜0.001

由SOD结果经方差分析得出：

(1)茶叶提取物给药对照组肝组织SOD活性升高，与生理盐水对照组比较有显著差异；

(2)乙醇中毒模型组SOD含量较生理盐水对照组明显降低(p＜0.001)，说明急性乙醇中毒小鼠模型建立；

(3)茶叶提取物给药各实验组(给药剂量30mg/kg-300mg/kg)与乙醇中毒模型组比较SOD呈显著性差异p＜0.001，而与生理盐水对照组无差异，说明茶叶提取物给药组能有效提高SOD的活性；

(4)茶叶提取物各实验组内比较发现：茶叶提取物+乙醇组II、组III与茶叶提取物+乙醇组I、IV比较有显著差异p＜0.001，组II、组IIISOD活性升高较明显，从以上结果得出茶叶提取物药效也有一定的浓度关系。

4结论

乙醇中毒小鼠耳及尾部出现血斑点是由于肝脏凝血功能异常造成，机体变化试验结果也与肝损伤结果一致。大多数乙醇(约占98％)在肝脏内代谢，其余则由肾脏、肺及皮肤排泄。因此乙醇中毒与之最相关的脏器即为肝脏。

酒精的代谢对机体的氧化一还原反应有重要影响，可以通过酶或非酶系统产生氧自由基，攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引起脂质过氧化，并形成脂质过氧化物。超氧化物歧化酶(SOD)可清除超氧化阴离子，在平衡机体的氧化和抗氧化关系中起至关重要的作用。丙二醛(MDA)为脂质过氧化反应形成的脂质过氧化物之一，可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映细胞损伤的程度。

肝脏脂质过氧化的程度可通过测定脂质过氧化物等来评价。MDA是不饱和脂肪酸氧化作用的终产物，它在组织中的含量间接反映了自由基反应时组织的破坏程度。SOD是动物机体内的抗氧化酶，其作用是清除自由基，防止自由基对细胞结构的损伤，体内SOD活性越高，自由基清除速度越快。

脂质过氧化广泛存在于人体细胞中，通过对膜脂、蛋白和DNA的损伤，引起细胞或细胞器结构、功能的改变，但由于生物体内同时存在着抗氧化防御体系，在生理状态下二者维持动态平衡，从而保护细胞不被损伤。如果这种平衡被破坏，细胞就会因脂质过氧化作用而受到损伤。我们通过此次试验发现并验证了茶叶提取物能够显著促进小鼠肝脏SOD活性，降低机体本身积累的脂质过氧化物有害物质，茶叶提取物之所以能够作为抗氧化物质，原因是茶叶提取物含有多个酚羟基，极易被氧化成为醌类而提供质子H+，具有较强的供氢能力，能够显著地清除体内的有害自由基并抑制原来的自由基连锁反应。

小鼠机体及肝组织病变结果反应出茶叶提取物能够降低肝损伤；本发明又从自由基产生的原因入手测定SOD与MDA含量变化，从而发现并证实乙醇引起肝损伤是由于自由基酶清除系统SOD活性降低，导致MDA升高造成的结果，通过本次发明研究找到了乙醇中毒以及天然提取物能够改善肝损伤的作用机理。其中茶叶提取物30-300mg/kg均能明显降低损伤肝组织MDA含量，同时提高SOD活性，这充分说明茶叶提取物对肝脏保护作用与清除或抑制自由基有关，两者抗氧化效果显著；经单因素方差分析得出茶叶提取物试验组随着给药剂量加大抗肝损伤氧化作用也加大直至浓度达到300mg/kg有所降低，说明茶叶提取物的抗氧化作用有一定的剂量依赖。

Claims

1.茶叶提取物在制备治疗肝损伤药物中应用，所述的茶叶提取物中多酚的重量百分比大于>95%，所述的EGCG重量百分比在70%-99%之间。

2.如权利要求1所述的茶叶提取物在制备治疗肝损伤药物中应用，所述的茶叶为绿茶。