CN102397453B

CN102397453B - 一种鼻炎灵片的制备方法

Info

Publication number: CN102397453B
Application number: CN 201110381357
Authority: CN
Inventors: 王峰; 王琳; 张发成
Original assignee: Suzhou Paiteng Biomedical Technology Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Kangheng Chemical Co., Ltd.
Priority date: 2011-11-26
Filing date: 2011-11-26
Publication date: 2013-08-21
Anticipated expiration: 2031-11-26
Also published as: CN102397453A

Abstract

本发明涉及一种鼻炎灵片的制备方法，由下列步骤组成：取苍耳子（炒黄）、白芷，微波萃取，大孔吸附树脂纯化，丙酮-乙酸乙酯混合溶液进行6级逆流萃取，得苍白提取物；取辛夷、细辛、黄芩、川贝母、淡豆豉，CO₂超临界萃取，得超临界萃取物；将上述苍白提取物、超临界萃取物混合，加入薄荷脑，混匀，压片。采用本发明制备的鼻炎灵片便于服用。

Description

一种鼻炎灵片的制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物的制备方法，尤其是一种中药的制备方法。

背景技术

鼻炎灵片是由苍耳子（炒黄）、辛夷、白芷、细辛、黄芩、川贝母、淡豆豉、薄荷脑作为原料药制成，收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第二册，透窍消肿，祛风退热。用于慢性鼻窦炎、鼻炎及鼻塞头痛，浊涕臭气，嗅觉失灵等。

现有技术中，尚未有鼻炎灵片在利胆方面的报道。

现有技术中，鼻炎灵片的制备采用水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者日用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供一种鼻炎灵片的制备方法，使其安全有效，方便服用。

为了解决上述技术问题，本发明提出了下述技术方案。

取苍耳子（炒黄）200g、白芷30g，粉碎，混合，加入2L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，用比例为1:5的丙酮-乙酸乙酯混合溶液进行6级逆流萃取，收集萃取液，减压回收溶剂并浓缩，干燥，得苍白提取物，备用；取辛夷150g、细辛30g、黄芩30g、川贝母40g、淡豆豉40g，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1-3%，萃取压力20-30MPa，温度40-60℃, CO₂流量1-3ml/g生药·min，萃取时间100-130min，得超临界萃取物，备用；将上述苍白提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，70%乙醇制颗粒，加入薄荷脑3.2g，加入硬酯酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，制成250片，每片0.3g。

苍耳子（炒黄）、白芷微波萃取功率500W，每次萃取6分钟。

CO₂超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为2%。

CO₂超临界萃取的萃取压力25MPa，温度50℃, CO₂流量2ml/g生药·min，萃取时间120min。

采用上述技术方案制备的鼻炎灵片，其作为制备利胆药物的应用。

现有技术中，鼻炎灵片每次需服用4片（相当于2.1g药材），而采用本发明制备而成的鼻炎灵片每次仅需服用1片（相当于2.1g药材），在抗鼻炎药理活性相似的情况下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。

试验一不同方法制备的鼻炎灵片中欧前胡素含量的比较。

1、仪器及试药

鼻炎灵片（超临界法，以下简称B-LJ，下同）：按实施例3方法制备。

鼻炎灵片（传统法B-CT，下同），按《卫生部药品标准中药成方制剂》第二册方法制备，包薄膜衣。

Agilent 1200高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平。

欧前胡素对照品（中国药品生物制品检定所）。

2、方法

色谱条件 Kromasi C18色谱柱(4.6mm×200mm，5μm)；甲醇-0.3%磷酸溶液(60:40)流动相；流速1.0mL·min^－1，检测波长248nm。精密量取对照品溶液、供试品溶液各10μL。

溶液的制备取欧前胡素对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含50μg的对照品溶液。分别取供品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取0.7g，置索氏提取器中，加甲醇适量，回流提取3 h，提取液蒸干，残渣加甲醇使溶解,并转移至25 mL量瓶中,加甲醇至刻度，摇匀。用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

3、结果

试验结果见表1，结果表明采用本发明制备的鼻炎灵片中欧前胡素的含量(139.8μg/片 )是采用传统法(32.5μg/片)的4.3倍。

表1 不同方法制备的鼻炎灵片中欧前胡素的含量

样品	含量（μg/片）
		B-LJ	139.8
B-CT	32.5

试验二不同方法制备的鼻炎灵片药效学比较。

1、试验材料。

1.1 动物

昆明种小鼠；SD大鼠；豚鼠。由上海斯莱克实验动物有限公司提供。

1.2 药品

鼻炎灵片（超临界法，以下简称B-LJ）：按实施例3方法制备。

鼻炎灵片（传统法，简称B-CT），按《卫生部药品标准中药成方制剂》第二册方法制备，包薄膜衣。

1.3 数据及统计

数据以mean±s表示，用SPSS11.0软件进行分析。记量资料用单因素方差分析进行统计学显著性分析，计数资料用卡方检验。

2、方法和结果

2.1 对豚鼠鼻粘膜过敏的影响　

豚鼠50只，体重200-220g，随机分5组：模型对照组；B-CT组（0.22g/Kg，相当于人临床剂量，即每日6.3g生药）；B-LJ低、中、高剂量组（0.03g/Kg、0.05g/Kg、0.10g/Kg，其中中剂量组相当于人临床剂量，即每日6.3g生药）。腹腔注射卵蛋白福氏不全佐剂(10mg/ml)0.5ml/只致敏，同时灌胃给药，每天1次，连续14天。末次给药后60分钟，静脉注射1%伊文思兰生理盐水0.5ml/100g体重，随后立即以1mg/ml卵蛋白溶液从双侧鼻孔注入(0.05ml/侧)。20分钟后，将动物处死，沿双眼内眦连线，剪下鼻部，用滤纸吸干血液，剥去皮肤后，将鼻甲及粘膜一起剪碎，浸入5ml 70%丙酮生理盐水中48小时，然后2500rpm离心10min，取上清液于600nm波长测定光密度，以光密度值表示过敏反应程度。

结果（见表2）表明，B-CT组、B-LJ各剂量组均能显著抑制卵蛋白福氏不全佐剂致豚鼠鼻粘膜的过敏反应（p<0.05、0.01）。B-CT组、B-LJ中剂量相比无显著性差异，表明在相应剂量下（相当于人临床剂量，即每日6.3g生药），两者抑制鼻黏膜的药理活性相当（p>0.05）。

表2不同方法制备的鼻炎灵片对卵蛋白致鼻黏膜过敏的影响(n=12)

组别	剂量（g/Kg）	光密度
			模型对照	-	0.65±0.23
B-CT组	0.22	0.34±0.19**
			B-LJ低剂量	0.03	0.42±0.21*
B-LJ中剂量	0.05	0.33±0.14**
			B-LJ高剂量	0.10	0.31±0.15**

注：与模型对照组相比，*p<0.05，**p<0.01。

2.2 对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响

昆明小鼠，雌雄各半，体重18-22g，随机分为5组：空白对照组；B-CT组（0.58g/Kg，相当于人临床剂量，即每日6.3g生药）；B-LJ低、中、高剂量组（0.07g/Kg、0.14g/Kg、0.28g/Kg，其中中剂量组相当于人临床剂量，即每日6.3g生药）。灌胃给药。药后1h，将小鼠左耳涂2%巴豆油液50μl，4h后拉颈处死，剪下两耳，以直径8mm不锈钢铳子冲下耳片，称重，两耳片重量之差为肿胀度，与对照组比较，计算肿胀抑制率。

结果（见表3）表明，B-CT组、B-LJ各剂量组均能显著减少巴豆油致小鼠耳廓肿胀的程度（p<0.05、0.01），B-CT组、B-LJ中、高剂量组肿胀抑制率均大于50%。B-CT组、B-LJ中剂量相比无显著性差异，表明在相应剂量下（相当于人临床剂量，即每日6.3g生药），两者抗炎的药理活性相当（p>0.05）。

表3不同方法制备的鼻炎灵片对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响(n=12)

组别	剂量（g/Kg）	耳廓肿胀度（mg）	抑制率（%）
				空白对照	-	22.2±8.7
B-CT组	0.58	8.9±4.4**	59.9
				B-LJ低剂量	0.07	12.7±5.1*	42.8
B-LJ中剂量	0.14	8.5±5.1**	61.7
				B-LJ高剂量	0.28	7.6±4.3**	66.8

注：与空白对照组相比，*p<0.05，**p<0.01。

2.3 对腹腔注射醋酸小鼠毛细血管通透性的影响　

昆明小鼠，雌雄各半，体重18-22g，分组给药剂量及方法同2.2。药后1小时小鼠均尾静脉注射伊文思蓝生理盐水液(0.2mg/0.1ml·10g)，随即腹腔注射1%醋酸0.2ml/10g，半小时后将小鼠脱颈处死，用定量生理盐水冲洗腹腔，用721型分光光度计(590nm)测吸光度，制作伊文思蓝标准曲线，由此得出动物腹腔渗出染料量。

结果（见表4）表明，B-CT组、B-LJ各剂量组均能显著降低腹腔注射醋酸小鼠毛细血管通透性（p<0.05、0.01）。B-CT组、B-LJ中剂量相比无显著性差异，表明在相应剂量下（相当于人临床剂量，即每日6.3g生药），两者抗炎的药理活性相当（p>0.05）。

表4不同方法制备的鼻炎灵片对腹腔注射醋酸小鼠毛细血管通透性的影响(n=10)

组别	剂量（g/Kg）	腹腔渗液染料量（μg/只）
			空白对照	-	6.27±1.23
B-CT组	0.58	3.14±1.12**
			B-LJ低剂量	0.07	3.92±1.19*
B-LJ中剂量	0.14	3.13±1.10**
			B-LJ高剂量	0.28	3.04±0.96**

注：与空白对照组相比，*p<0.05，**p<0.01。

2.4 对醋酸诱导小鼠扭体反应的影响。

取雌性昆明小鼠，体重18-22g，分组、给药方法同2.2，于末次给药后30min，每鼠腹腔注射0.6%冰醋酸0.2mL，观察15min内出现的扭体次数，及计算扭体反应抑制率，抑制率大于50%认为有镇痛作用。

结果（见表5）表明，各给药组均可显著减少醋酸诱导小鼠的扭体次数，与空白对照组相比p<0.05、0.01。其中，B-CT组、B-LJ中、高剂量组的抑制率均大于50%，镇痛作用明显。B-LJ中剂量组与B-CT组相比未见显著性差异，表明在相应的剂量下（均相当于人临床剂量），两者生物活性相似（p>0.05）。

表5 不同方法制备的鼻炎灵片对醋酸诱导小鼠扭体反应的影响（n=12）

组别	剂量（g/Kg）	扭体次数（次/15min）	抑制率（%）
				空白对照	-	45.7±16.4	——
B-CT	0.58	18.9±13.5**	58.6
				B-LJ低剂量	0.07	26.7±14.6*	41.6
B-LJ中剂量	0.14	19.1±12.4**	58.2
				B-LJ高剂量	0.28	15.9±11.2**	65.2

注：与空白对照组相比，* p<0.05，** p<0.01。

2.5抑菌作用　

选择金黄色葡萄球菌、甲型链球菌、乙型链球菌、大肠杆菌、变形杆菌。细菌培养基采用MH肉汤。药物做信比法稀释,药物用MH肉汤稀释5例,每例10管。前8管用信比稀释法将药物稀释。后2管分别做肉汤对照,测试管对照,测试管分别加入以上各菌0·1 mL,置37℃孵箱培养24 h后观察结果。

结果（见表6、7）表明，采用不同方法制备的鼻炎灵片对实验菌均具有较强的体外抑制作用，其中采用传统方法制备之鼻炎灵片的MIC是采用本发明者的2倍，表明减少服用量即可取得类似的药理活性。

表6 B-LJ的体外抑菌作用

表7 B-CT的体外抑菌作用。

2.6对大鼠胆汁分泌及胆红素的影响

雄性SD大鼠，体重180-220克, 随机均分为5组：空白对照组；B-CT组（给药剂量0.29g/kg，相当于人临床用量，即6.3g生药/日）；B-LJ低、中、高剂量组（给药剂量分别是0.04g/kg、0.07g/kg 、0.14g/kg。其中中剂量组相当于人临床用量，即6.3g生药/日）。禁食12小时(自由饮水)后，腹腔注射乌坦(1g/kg)麻醉，背位固定，于剑突下3cm开腹，分离胆总管，结扎近十二指肠端，在胆总管上作V形剪口，插入胆汁引流管见淡黄色胆汁流出后，固定引流管，关闭腹腔，稳定0.5小时后先收集0.5小时胆汁为药前对照。尔后各组分别经十二指肠给予不同药物，分别收集药后30、60、120、180分钟内胆汁流量。收集的各动物各时段胆汁合并，测定胆红素含量。

结果（见表8）表明，与空白对照组相比，B-LJ低、中、高剂量组均能显著促进大鼠胆汁的分泌量（p<0.05、0.01），增加胆红素含量（p<0.05、0.01）。表明利胆素片具有明显的利胆作用。B-CT组与B-LJ中剂量相比，胆汁分泌量、胆红素均有显著性差异（p<0.05），表明在相应剂量下（相当于人临床用量，即6.3g生药/日），采用本发明制备的鼻炎灵片在利胆方面的药理活性优于采用传统方法制备者。

表8不同方法制备的鼻炎灵片对大鼠胆汁分泌及胆红素的影响（n=6）

注：与空白对照组相比，*p<0.05、**p<0.01；与B-LJ中剂量相比，^△p<0.05。

上述研究表明，采用本发明制备的鼻炎灵片，有效成分含量是传统法制备的鼻炎灵片的4.3倍。在服用量减少3/4的情况下，两者在抗炎、镇痛、抑菌方面的药理活性相当。而前者在利胆方面的活性明显优于后者。前者可以在制备利胆药物中应用。

为了更好的说明本发明的技术方案，下文将对其具体实施方式做进一步的表述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

取苍耳子（炒黄）200g、白芷30g，粉碎，混合，加入2L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400W，萃取2次，每次4分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，用比例为1:5的丙酮-乙酸乙酯混合溶液进行6级逆流萃取，收集萃取液，减压回收溶剂并浓缩，干燥，得苍白提取物，备用；取辛夷150g、细辛30g、黄芩30g、川贝母40g、淡豆豉40g，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1%，萃取压力20MPa，温度40℃, CO₂流量1ml/g生药·min，萃取时间100min，得超临界萃取物，备用；将上述苍白提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，70%乙醇制颗粒，加入薄荷脑3.2g，加入硬酯酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，制成250片，每片0.3g。

经检测，成品中欧前胡素的含量132.7μg/片。

成品抗鼻黏膜过敏的药理作用见表9。

表9对卵蛋白致鼻黏膜过敏的影响(n=10)

组别	剂量（g/Kg）	光密度
			模型对照	-	0.65±0.23
实施例1	0.05	0.36±0.14**

注：与模型对照组相比，*p<0.05、**p<0.01。

实施例2

取苍耳子（炒黄）200g、白芷30g，粉碎，混合，加入2L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，用比例为1:5的丙酮-乙酸乙酯混合溶液进行6级逆流萃取，收集萃取液，减压回收溶剂并浓缩，干燥，得苍白提取物，备用；取辛夷150g、细辛30g、黄芩30g、川贝母40g、淡豆豉40g，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3%，萃取压力30MPa，温度60℃, CO₂流量3ml/g生药·min，萃取时间130min，得超临界萃取物，备用；将上述苍白提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，70%乙醇制颗粒，加入薄荷脑3.2g，加入硬酯酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，制成250片，每片0.3g。

经检测，成品中欧前胡素的含量134.5μg/片。

成品抗鼻黏膜过敏的药理作用见表10。

表10对卵蛋白致鼻黏膜过敏的影响(n=10)

组别	剂量（g/Kg）	光密度
			模型对照	-	0.65±0.23
实施例2	0.05	0.37±0.16**

注：与模型对照组相比，*p<0.05、**p<0.01。

实施例3

取苍耳子（炒黄）200g、白芷30g，粉碎，混合，加入2L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，用比例为1:5的丙酮-乙酸乙酯混合溶液进行6级逆流萃取，收集萃取液，减压回收溶剂并浓缩，干燥，得苍白提取物，备用；取辛夷150g、细辛30g、黄芩30g、川贝母40g、淡豆豉40g，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为2%，萃取压力25MPa，温度50℃, CO₂流量2ml/g生药·min，萃取时间120min，得超临界萃取物，备用；将上述苍白提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，70%乙醇制颗粒，加入薄荷脑3.2g，加入硬酯酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，制成250片，每片0.3g。

Claims

1.一种鼻炎灵片的制备方法，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：取炒黄的苍耳子200g、白芷30g，粉碎，混合，加入2L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，用比例为1:5的丙酮-乙酸乙酯混合溶液进行6级逆流萃取，收集萃取液，减压回收溶剂并浓缩，干燥，得苍白提取物，备用；取辛夷150g、细辛30g、黄芩30g、川贝母40g、淡豆豉40g，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为2%，萃取压力25MPa，温度50℃, CO₂流量2ml/g生药·min，萃取时间120min，得超临界萃取物，备用；将上述苍白提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，70%乙醇制颗粒，加入薄荷脑3.2g，加入硬酯酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，制成250片，每片0.3g。