CN102397285A - 金丝桃苷在制备抗血管性痴呆的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了天然产物金丝桃苷在制备抗血管性痴呆的药物中的应用。本发明经在体动物试验验证，金丝桃苷可以有效抑制血管性痴呆大鼠神经组织形态学改变，提高血管性痴呆大鼠的认知、学习和记忆能力，明显减轻血管性痴呆症状。
Description
技术领域
本发明涉及金丝桃苷的应用，具体地说，涉及金丝桃苷在制备抗血管性痴呆的药物中的应用。
背景技术
血管性痴呆（Vascular Dementia，VD）是指因各种损伤因素导致脑内血管病变或因脑外血管病变间接导致脑内血管病变，从而引起大脑供血不足而致脑组织缺血、缺氧性改变，最终使大脑功能全面衰退的一组临床综合症。以记忆、认知功能缺损为主，可伴有言语、运动、视空间及人格障碍为主要临床表现的一组神智异常症候群，是老年期痴呆的主要类型之一。
研究表明，脑组织缺血、缺氧引起的迟发性神经元损伤以细胞凋亡为主。多数学者认为，凋亡的发生既是凋亡相关基因表达的结果，又受许多内外因素的调节。可能与以下几个因素有关：① 缺血缺氧本身激活了凋亡发生基因；② 脑缺血再灌注后产生大量自由基对神经细胞造成严重损伤的同时，也诱导了凋亡的发生；③ Ca2+超载激活一系列钙依赖性酶促反应，促进了凋亡的发生。大脑皮质和海马神经元凋亡与学习记忆密切相关，是导致学习、记忆障碍的重要因素，这也是目前研究血管性痴呆发病机制的热点之一。
目前，对于血管性痴呆尚无特效的治疗药物，临床上的药物治疗以改善痴呆症状为主。常见药物包括：① 脑代谢赋活剂如辅酶Q10、胞二磷胆碱，主要通过促进葡萄糖吸收、代谢，继发扩张脑血管，改善营养代谢，间接抑制痴呆的发展；② 脑循环促进剂如氢化麦角碱、氟桂嗪，通过直接扩张脑血管增加大脑供血、供氧；③ 治疗神经传递阻滞的药物，如金刚烷胺能促进多巴胺释放，抑制其重摄取；高泛酸钙可促进葡萄糖的脑内吸收和代谢，增加脑组织内5-羟色胺浓度和脑血流量，明显改善神经症状；乙酰胆碱前体药（卵磷脂、氯化胆碱）和胆碱脂酶抑制剂（毒扁豆碱、四氢胺基吡啶）通过增加乙酰胆碱系统的功能，改善神经症状；神经肽能够提高老年人认识、记忆能力，减轻抑郁和无力症状；④ 对症治疗，常用安定改善血管性痴呆患者焦虑症状；常用利他林、氯酯酰改善血管性痴呆患者抑郁症状；常用甲硫达嗪、氟奋乃静、氟呱丁醇等控制血管性痴呆患者急躁和过激行为。
金丝桃苷提取自金丝桃科植物贯叶金丝桃[Hypericum perforatum L.]全草；豆科植物黑木相思树[Aaacia melanoxylin R.Br.] 的茎与叶；杜鹃花科植物黄花杜鹃[Rhododen dron anthopogonides Maxim.]及照白杜鹃[R.micranthum Turcz.]的叶；卫矛科植物毛脉卫矛[Euonymus sacrosanta Loicz.]全草。分子式：C21H20O12，分子量：464.37，CAS登录号：482-36-0，化学名称：2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-3-(β-D- galactopyranosyloxy)-5,7-dihydroxy-4H-1-benzopyran-4-one。我们研究发现，金丝桃苷可以有效抑制血管性痴呆大鼠神经组织形态学改变，提高血管性痴呆大鼠的认知、学习和记忆能力，明显减轻血管性痴呆症状，治疗效果优于麦角新碱、胞二磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、毒扁豆碱。
发明内容
本发明的目的在于提供金丝桃苷在制备抗血管性痴呆的药物方面的新用途。
具体地说，本发明涉及金丝桃苷在制备抗血管性痴呆的药物中的应用。
其中，所述血管性痴呆，其特征在于，因各种损伤因素导致脑内血管病变或因脑外血管病变间接导致脑内血管病变，从而引起大脑供血不足而致脑组织缺血、缺氧性改变，最终使大脑功能全面衰退、以记忆、认知功能缺损为主，可伴有言语、运动、视空间及人格障碍的一组临床综合症。
本发明所述金丝桃苷提取自金丝桃科植物贯叶金丝桃[Hypericum perforatum L.]全草；豆科植物黑木相思树[Aaacia melanoxylin R.Br.] 的茎与叶；杜鹃花科植物黄花杜鹃[Rhododen dron anthopogonides Maxim.]及照白杜鹃[R.micranthum Turcz.]的叶；卫矛科植物毛脉卫矛[Euonymus sacrosanta Loicz.]全草。
本发明所述药物是指以金丝桃苷为主要活性成分，与可药用载体制成的医疗上可接受的制剂，如片剂、丸剂或胶囊剂等。
本发明所述药物，其服用量以金丝桃苷计：成人，5~10mg/次，3次/日；儿童，0.05~0.10mg/kg·次，3次/日，即可达到抑制血管性痴呆临床症状的效果，特别地，孕妇等特殊人群服用时需遵医嘱。
本发明所述金丝桃苷可以直接通过市售得到，也可以通过植物提取得到。
本发明通过大鼠跳台试验、大鼠避暗试验证明了金丝桃苷可以有效提高血管性痴呆大鼠的认知、学习、记忆能力，治疗效果优于麦角新碱、胞二磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、毒扁豆碱。
本发明通过光镜观察发现，金丝桃苷明显抑制血管性痴呆大鼠海马CA1区三层锥体细胞排列紊乱、锥体细胞肿胀、炎细胞浸润、星形胶质细胞增生、部分锥体细胞胞体变小或呈三角形、顶树突延长、核固缩和破裂、胞浆嗜伊红色、基质疏松伴微空泡形成、血管周围有红细胞渗出等形态学改变。
本发明的有益效果在于：
1、本发明提供了金丝桃苷的新用途，其对血管性痴呆症状有很好的抑制作用。金丝桃苷明显抑制血管性痴呆大鼠海马CA1区三层锥体细胞形态学的改变，有效提高血管性痴呆大鼠的认知、学习、记忆能力，治疗效果优于氢化麦角碱、胞二磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、毒扁豆碱。
2、本发明采用的金丝桃苷提取来自纯天然原料，化学结构和分子量明确，质量可控，符合国际市场第三代中药产品的要求，有广阔的市场前景。如果研究成功，将提高我国传统中药的国际地位，对保障人类健康及提高老年人生活质量做出贡献。
附图说明
图 1 金丝桃苷对血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验潜伏期的影响（ 
±s）（与血管性痴呆模型组比较，*P<0.05；与高剂量金丝桃苷组比较，#<0.05）。试验结果显示，金丝桃苷明显提高血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验潜伏期，并且具有显著的剂量依赖性；与氢化麦角碱、胞二磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、毒扁豆碱对照组比较，有明显差异（P＜0.05）。
图 2 金丝桃苷对血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验错误次数的影响（
±s）（与血管性痴呆模型组比较，*P<0.05；与高剂量金丝桃苷组比较，#<0.05）。试验结果显示，金丝桃苷明显减少血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验错误次数，并且具有显著的剂量依赖性；与氢化麦角碱、胞二磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、毒扁豆碱对照组比较，有明显差异（P＜0.05）。
图 3 金丝桃苷对血管性痴呆大鼠海马CA1区皮层锥体细胞形态学的影响（光镜0.4K×）。血管性痴呆模型组海马CA1区三层锥体细胞排列紊乱；部分锥体细胞肿胀，并有炎细胞浸润，星形胶质细胞增生；部分锥体细胞胞体变小或呈三角形，顶树突延长，有核固缩和破裂现象，胞浆呈均匀嗜伊红色；部分锥体细胞胞核变浅，基质疏松伴微空泡形成；血管周围有红细胞渗出，个别可见小血管增生。高剂量金丝桃苷明显抑制海马CA1锥体细胞形态学改变，细胞形态基本正常，可见典型的三层细胞排列。
具体实施方式
以下通过实施例及试验例来进一步阐述本发明的金丝桃苷的新用途及其有益效果，但不用来限制本发明的范围。
试验例1：检测金丝桃苷对大鼠跳台、避暗试验的影响。
1、药物：金丝桃苷（美国Sigma公司）、氢化麦角碱（上海华太药业股份有限公司）、胞二磷胆碱（苏州天马精细化学品股份有限公司）、高泛酸钙（上海佳伦生物科技有限公司）、金刚烷胺（石家庄市三和药业有限公司）、毒扁豆碱（上海研生生物技术科技有限公司）。
2、仪器：大鼠跳台记录系统（淮北正华生物仪器设备有限公司）、大鼠避暗仪（淮北正华生物仪器设备有限公司）。
3、动物：Sprague-Dawley（SD）大鼠，6周龄、雄性、180~220g、清洁级（河南省实验动物中心）。
4、实验分组：（1）空白对照组：健康SD大鼠15只，每天清晨空腹三蒸水灌胃（灌胃容量为10ml/kg），连续灌胃8周；（2） 血管性痴呆模型组：2VO法制备血管性痴呆大鼠模型15只；（3）低剂量金丝桃苷组：血管性痴呆模型大鼠15只，每天清晨空腹金丝桃苷溶液灌胃（灌胃浓度0.1mg/kg，灌胃容量为10ml/kg）给药，连续灌胃8周；（4）中剂量金丝桃苷组：血管性痴呆模型大鼠15只，每天清晨空腹金丝桃苷溶液灌胃（灌胃浓度0.5mg/kg，灌胃容量为10ml/kg）给药，连续灌胃8周；（5）高剂量金丝桃苷组：血管性痴呆模型大鼠15只，每天清晨空腹金丝桃苷溶液灌胃（灌胃浓度1.0mg/kg，灌胃容量为10ml/kg）给药，连续灌胃8周；（6）氢化麦角碱组：血管性痴呆模型大鼠15只，每天清晨空腹氢化麦角碱溶液灌胃（灌胃浓度2.0mg/kg，灌胃容量为10ml/kg）给药，连续灌胃8周；（7）胞二磷胆碱组：血管性痴呆模型大鼠15只，每天清晨空腹胞二磷胆碱溶液灌胃（灌胃浓度1.0mg/kg，灌胃容量为10ml/kg）给药，连续灌胃8周；（8）高泛酸钙组：血管性痴呆模型大鼠15只，每天清晨空腹高泛酸钙溶液灌胃（灌胃浓度2mg/kg，灌胃容量为10ml/kg）给药，连续灌胃8周；（9）金刚烷胺组：血管性痴呆模型大鼠15只，每天清晨空腹金刚烷胺溶液灌胃（灌胃浓度0.5mg/kg，灌胃容量为10ml/kg）给药，连续灌胃8周；（10）毒扁豆碱：血管性痴呆模型大鼠15只，每天清晨空腹毒扁豆碱溶液灌胃（灌胃浓度0.2mg/kg，灌胃容量为10ml/kg）给药，连续灌胃8周。
5、实验内容：大鼠跳台试验、大鼠避暗试验。
6、统计学方法：所有数据以均数±标准差（
±s）表示。组间差异比较用ANOVA及Newman-Student多重比较；t检验分析，由SPSS 13.0统计软件完成，双侧P＜0.05认为差异有显著性。
7、结果
7.1 金丝桃苷对血管性痴呆大鼠跳台试验的影响：试验结果显示，金丝桃苷明显提高血管性痴呆大鼠跳台试验潜伏期、减少错误次数，并且具有显著的剂量依赖性；与氢化麦角碱、胞二磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、毒扁豆碱对照组比较，存在明显的差异（P＜0.05）。（结果见表1）
表1 金丝桃苷对血管性痴呆大鼠跳台试验的影响（
±s）
| 分组 | n | 潜伏期（秒） | 错误次数/5分钟（次） |
| 空白对照组 | 15 | 167.87±31.23*# | 0.28±0.08*# |
| 血管性痴呆模型组 | 15 | 55.26±21.25# | 2.84±0.67# |
| 低剂量金丝桃苷组 | 15 | 56.64±11.77# | 2.66±0.61# |
| 中剂量金丝桃苷组 | 15 | 87.48±22.38*# | 1.38±0.41*# |
| 高剂量金丝桃苷组 | 15 | 137.87±25.75* | 0.79±0.21* |
| 氢化麦角碱组 | 15 | 114.45±23.56*# | 1.37±0.68*# |
| 胞二磷胆碱组 | 15 | 111.58±43.35*# | 1.66±0.46*# |
| 高泛酸钙组 | 15 | 96.77±25.86*# | 1.59±0.48*# |
| 金刚烷胺组 | 15 | 99.87±21.33*# | 1.41±0.32*# |
| 毒扁豆碱组 | 15 | 84.46±23.37*# | 0.98±0.28*# |
注: 与血管性痴呆模型组比较，*P<0.05；与高剂量金丝桃苷组比较，#<0.05。
7.2 金丝桃苷对血管性痴呆大鼠避暗试验的影响：试验结果显示，金丝桃苷明显提高血管性痴呆大鼠避暗试验潜伏期，减少错误次数，并且具有显著的剂量依赖性；与氢化麦角碱、胞二磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、毒扁豆碱对照组比较，存在明显的差异（P＜0.05）。（结果见表2）
表2 金丝桃苷对血管性痴呆大鼠避暗试验的影响（
±s）
| 分组 | n | 潜伏期（秒） | 错误次数/5分钟（次） |
| 空白对照组 | 15 | 185.53±31.04*# | 0.44±0.13*# |
| 血管性痴呆模型组 | 15 | 27.64±12.75# | 3.55±1.06# |
| 低剂量金丝桃苷组 | 15 | 28.83±14.47# | 3.33±1.14# |
| 中剂量金丝桃苷组 | 15 | 124.35±24.28*# | 1.25±0.33*# |
| 高剂量金丝桃苷组 | 15 | 156.86±25.69* | 0.94±0.11* |
| 氢化麦角碱组 | 15 | 122.82±42.53*# | 1.22±0.23*# |
| 胞二磷胆碱组 | 15 | 112.29±21.42*# | 1.31±0.26*# |
| 高泛酸钙组 | 15 | 120.51±32.54*# | 1.53±0.35*# |
| 金刚烷胺组 | 15 | 99.42±43.22*# | 1.46±0.24*# |
| 毒扁豆碱组 | 15 | 115.24±21.24*# | 1.37±0.33*# |
注: 与血管性痴呆模型组比较，*P<0.05；与高剂量金丝桃苷组比较，#<0.05。
7.3 金丝桃苷对血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验潜伏期的影响：试验结果显示，金丝桃苷明显提高血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验潜伏期，并且具有显著的剂量依赖性；与氢化麦角碱、胞二磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、毒扁豆碱对照组比较，存在明显的差异（P＜0.05）。（结果见图 1）
7.4 金丝桃苷对血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验错误次数的影响：试验结果显示，金丝桃苷明显减少血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验错误次数，并且具有显著的剂量依赖性；与氢化麦角碱、胞二磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、毒扁豆碱对照组比较，存在明显的差异（P＜0.05）。（结果见图 2）
试验例2：检测金丝桃苷对大鼠海马CA1区锥体细胞形态学影响。
1、药物：金丝桃苷（美国Sigma公司）。
2、仪器：TS1000尼康显微镜，HT7700日立透射电子显。
3、动物：SD大鼠，6周龄、雄性、180~220g、清洁级（河南省实验动物中心）。
4、实验分组：（1）空白对照组：健康SD大鼠15只，每天清晨空腹三蒸水灌胃（灌胃容量为10ml/kg），连续灌胃8周；（2） 血管性痴呆模型组：2VO法制备血管性痴呆大鼠模型15只；（3）低剂量金丝桃苷组：血管性痴呆模型大鼠15只，每天清晨空腹金丝桃苷溶液灌胃（灌胃浓度0.1mg/kg，灌胃容量为10ml/kg）给药，连续灌胃8周；（4）中剂量金丝桃苷组：血管性痴呆模型大鼠15只，每天清晨空腹金丝桃苷溶液灌胃（灌胃浓度0.5mg/kg，灌胃容量为10ml/kg）给药，连续灌胃8周；（5）高剂量金丝桃苷组：血管性痴呆模型大鼠15只，每天清晨空腹金丝桃苷溶液灌胃（灌胃浓度1.0mg/kg，灌胃容量为10ml/kg）给药，连续灌胃8周。
5、实验内容：光镜下形态学观察。
6、结果
6.1 金丝桃苷对血管性痴呆大鼠海马CA1区皮层锥体细胞形态学的影响（光镜0.4K×）。血管性痴呆模型组大鼠海马CA1区三层锥体细胞排列紊乱；部分锥体细胞肿胀，并有炎细胞浸润，星形胶质细胞增生；部分锥体细胞胞体变小或呈三角形，顶树突延长，有核固缩和破裂现象，胞浆呈均匀嗜伊红色；部分锥体细胞胞核变浅，基质疏松伴微空泡形成；血管周围有红细胞渗出，个别可见小血管增生。高剂量金丝桃苷明显抑制海马CA1锥体细胞形态学改变，细胞形态基本正常，可见典型的三层细胞排列。（结果见图3）。
Claims (4)
1.金丝桃苷在制备抗血管性痴呆的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的金丝桃苷，其特征在于，提取自金丝桃科植物贯叶金丝桃[Hypericum perforatum L.]全草；豆科植物黑木相思树[Aaacia melanoxylin R.Br.] 的茎与叶；杜鹃花科植物黄花杜鹃[Rhododen dron anthopogonides Maxim.]及照白杜鹃[R.micranthum Turcz.]的叶；卫矛科植物毛脉卫矛[Euonymus sacrosanta Loicz.]全草。
3.根据权利要求1所述的金丝桃苷，其特征在于，分子式：C21H20O12，分子量：464.37，CAS登录号：482-36-0，化学名称：2-(3, 4-Dihydroxyphenyl)-3-(β-D-galactopyranosyloxy)-5,7-dihydroxy-4H-1- benzopyran-4-one，结构式：
4. 根据权利要求1所述的血管性痴呆，其特征在于，因各种损伤因素导致脑内血管病变或因脑外血管病变间接导致脑内血管病变，从而引起大脑供血不足而致脑组织缺血、缺氧性改变，最终使大脑功能全面衰退、以记忆、认知功能缺损为主，可伴有言语、运动、视空间及人格障碍的一组临床综合症。
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| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20120404 |