CN102391949B - 一种餐厨垃圾发酵复合菌及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种餐厨垃圾发酵复合菌及其制备方法，制备方法包括以下步骤：分别将绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的菌种进行高密度培养，将高密度培养得到的各种单菌脱水干燥，制备成休眠体微生物干粉，然后按照绿色木霉20～45份、枯草芽孢杆菌10～15份、黑根霉20～30份、光合细菌5～10份、酿酒酵母7～15份和地衣芽孢杆菌10～15份的重量比，混合得到餐厨垃圾发酵复合菌。本发明用于处理餐厨垃圾发酵效果好、除臭效果显著，使用复合菌发酵处理后的餐厨垃圾可以作为有机肥料使用，变废为宝，而且避免了对水源、土地和空气的污染，以及对人体产生的危害。

Description

一种餐厨垃圾发酵复合菌及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物工程微生物发酵技术领域，尤其涉及一种餐厨垃圾发酵复合菌及其制备方法。

背景技术

餐厨垃圾与普通垃圾相比其特点为：1、餐厨垃圾油脂含量高，粘性大；2、餐厨垃圾盐分含量高，微生物不易存活；3、餐厨垃圾堆放密度大，不易通风；4、含水率高；5、有机质含量高。因此，餐厨垃圾较难发酵，国内尚无成功餐厨垃圾处理产品规模化使用。

目前，对餐厨垃圾的处理主要有饲喂牲畜、提取油脂、焚烧、填埋等几种方式，但以上几种处理方式具有以下危害：1、餐厨垃圾直接饲喂鸡、猪等牲畜，容易引起动物患病，并且形成生物链最终会影响到人体健康，现在国家已禁止用餐厨垃圾饲喂牲畜；2、餐厨垃圾提取油脂，即地沟油，经过简单提取的地沟油极有可能会流向餐桌，最终影响人体健康，现在国家已非常重视这个问题，相关的国家标准也正在制定中；3、当做普通垃圾投放到垃圾处理场，采取常规的焚烧、填埋等处理方式，但餐厨垃圾含水率可达70wt%以上，有机质含量高达90wt%（干基），因此造成垃圾场臭味较重，污水遍地，污染了土地、空气和水源。而且利用像焚烧、填埋或饲喂动物的处理方式会造成水源、土地、空气污染，对人体产生危害。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种投资小、处理成本低、使用方便的餐厨垃圾发酵复合菌。

本发明所要解决的第二个技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种投资小、处理成本低、使用方便的餐厨垃圾发酵复合菌的制备方法。

为解决上述第一个技术问题，本发明的技术方案是：

一种餐厨垃圾发酵复合菌，主要由以下重量份的原料混合制备而成：

绿色木霉(Trichoderma viride)           20～45份，

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）      10～15份，

黑根霉（Black Rhizopus）               20～30份，

光合细菌（photosynthetic bacteria）    5～10份，

酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）   7～15份，

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis） 10～15份。

为解决上述第二个技术问题，本发明的技术方案是：

一种餐厨垃圾发酵复合菌的制备方法，包括以下步骤：

分别将绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、酿酒酵母、地衣芽孢杆菌、亚硝化毛杆菌和维氏硝酸杆菌的菌种进行高密度培养，首先接种至装有体积比为15～30%的培养基的摇瓶中活化培养，将培养好的菌种接种到发酵罐内进行发酵扩大培养，将扩大培养得到的各种单菌脱水干燥，制备成休眠体微生物干粉，然后按照绿色木霉20～45份、枯草芽孢杆菌10～15份、黑根霉20～30份、光合细菌5～10份、酿酒酵母7～15份和地衣芽孢杆菌10～15份的重量比，混合得到餐厨垃圾发酵复合菌。

其中，所述绿色木霉休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：

将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为28～30℃、摇瓶转速140～180rpm，活化培养32～48h；

将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，接种量为体积比1～3%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖8～12g/l、玉米芯5～6g/l、氯化钙0.2～0.6g/l、硫酸镁0.1～0.5g/l、磷酸二氢钾18～22g/l、酵母膏8～12g/l、硫酸亚铁3～7mg/l、硫酸锌1.0～1.8mg/l、氯化钴3.5～4.0mg/l和硫酸锰1.2～1.8mg/l，在培养温度为28～30℃,发酵罐搅拌转速140～180rpm，扩大培养68～84h，至发酵罐中绿色木霉含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

所述枯草芽孢杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：

将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖18～22g/l、蛋白胨12～18g/l、氯化钠3～7g/l和牛肉膏0.2～0.8g/l，在培养温度为36～40℃,摇瓶转速180～220rpm培养20～32h；

将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，所述发酵培养基的配方为玉米粉10～15g/l、葡萄糖3～8g/l、豆饼粉18～22g/l、鱼粉3～8g/l、碳酸钙5～9g/l、硫酸铵0.8～1.2g/l、磷酸氢二钾0.1～0.5g/l、硫酸镁0.1～0.3g/l和硫酸锰0.1～0.3g/l，在培养温度为36～40℃,发酵罐搅拌转速200～220rpm培养20～32h，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。

所述黑根霉的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：

将纯化培养的斜面培养基上的黑根霉菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为20wt%的马铃薯汁18～22g/l、葡萄糖1～5g/l、磷酸氢二钾1～5g/l、硫酸镁1～2g/l、硫胺素0.01～0.05g/l，在培养温度为28～30℃,摇瓶转速140～180rpm培养32～42h；

将活化培养好的黑根霉菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，所述发酵培养基的配方为玉米浆25～35g/l、蔗糖20～40g/l、尿素4～8g/l、磷酸氢二钾0.8～1.2g/l、硫酸镁0.3～0.8g/l、氯化钾0.3～0.8g/l和橄榄油8～12g/l，在培养温度为28～30℃,发酵罐搅拌转速140～180rpm培养42～54h，发酵罐中黑根霉含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的黑根霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

所述光合细菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：

将纯化培养的斜面培养基上的光合细菌菌种接种至装有体积比为15～30%的培养基的摇瓶中，在培养温度为28～30℃,摇瓶每隔24小时搅拌一次，培养64～84h；将活化培养好的光合细菌菌种接种到装有体积比为50～70%培养基的发酵罐内，体积接种量为6～10%，在培养温度为28～30℃, 每隔24小时搅拌半小时，搅拌转速140～180rpm，培养100～150h，至发酵罐中光合细菌含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的光合细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为氯化铵1～3ｇ/l、磷酸氢二钾0.1～0.3ｇ/l、乙酸钠2～6ｇ/l、碳酸氢钠1～3ｇ/l、氯化钠0.5～1.5ｇ/l、酵母膏0.1～0.2ｇ/l和硫酸镁0.1～0.3ｇ/l。

所述酿酒酵母休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：

将纯化培养的斜面培养基上的酿酒酵母菌种接种至装有体积比为15～30%的培养基的摇瓶中，在培养温度为28～30℃、摇瓶转速140～180rpm，活化培养32～48h；将活化培养好的酿酒酵母菌种接种到装有体积比为50～70%培养基的发酵罐内，接种量为体积比1～3%，所述活化培养和发酵时的培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为28～30℃,发酵罐搅拌转速140～180rpm，扩大培养68～84h，至发酵罐中酿酒酵母含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的酿酒酵母单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

所述地衣芽孢杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：

将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨8～12g/l、牛肉膏1～5g/l和氯化钠3～7g/l，在培养温度为36～40℃,摇瓶转速180～220rpm培养20～32h；

将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉13～17g/l、玉米粉13～17g/l、磷酸氢二钾0.05～0.15g/l、磷酸二氢钾0.05～0.15g/l和氯化钙2～6g/l，在培养温度为36～40℃,发酵罐搅拌转速200～220rpm培养20～32h，发酵罐中地衣芽孢杆菌含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。

本发明中的绿色木霉能产生多种具有生物活性的酶系，如：纤维素酶、几丁质酶、木聚糖酶等。绿色木霉是所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好，又是一种资源丰富的拮抗微生物，在植物病理生物防治中具有重要的作用，具有保护和治疗双重功效，可有效防治土传性病害。

本发明中的枯草芽孢杆菌是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌，枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用；枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类；枯草芽孢杆菌对弧菌、大肠杆菌和杆状病毒等有害细菌有很强的抑制作用，分泌大量几丁质酶的功能，几丁质酶可分解病原真菌的细胞壁而抑制真菌病害、分解有毒有害物质、净化水质、分解池中残饵、粪便、有机物等,具有很强的清理水中垃圾小颗粒的作用。

本发明中的黑根霉在自然界分布很广，用途广泛，其淀粉酶活性很强，是酿造工业中常用的糖化菌，而且具有极强的脂肪分解功能。

本发明中的光合细菌是以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。在自然界淡、海水中通常每毫升含有近百个PSB菌，光合细菌的菌体以有机酸、氨基酸、氨和醣类等有机物和硫化氢作为供氧体，通过光合磷酸化获得能量，在水中光照条件下可直接利用降解有机质和硫化氢并使自身得以增殖，同进净化了水体。

本发明中的酿酒酵母能分解利用环境中的糖类、硫化氢、氨气等，代谢工程中产生酸性物质，可有效抑制致病菌生长，并且酵母菌体可作为其他配合菌的营养物质，有利于复合菌群的快速增殖。

本发明中的地衣芽孢杆菌能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖，能分解环境中的有毒有害物质，具有较强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，能分解环境中的淀粉、蛋白质和脂类。

由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

本发明将绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的菌种进行高密度培养后制备成的休眠体微生物干粉，针对餐厨垃圾的主要成分，根据其用途采用合理配比，混合得到餐厨垃圾发酵复合菌，用于处理餐厨垃圾具有以下优点：（1）对餐厨垃圾发酵效果好，可以迅速降解餐厨垃圾中的有机成分，使用7-10天垃圾可减量40%；（2）由于有机成分被迅速分解，除臭效果显著，使用1天后垃圾场周围臭味显著减轻；（3）降低餐厨垃圾渗滤液水色和CODCr；（4）使用复合菌发酵处理后的餐厨垃圾可以作为有机肥料使用，而且肥料中富含多种有益菌，利于作物生长；（5）本发明含有的多种菌体都具有固定重金属的作用，可以有效避免垃圾中的重金属污染土地资源。本发明用于垃圾发酵处理，生产投资小，生产成本低，使用方便，使用本发明发酵处理过的餐厨垃圾可以作为有机肥料使用，变废为宝，而且避免了对水源、土地和空气的污染，以及对人体产生的危害。

具体实施方式

下面结合具体的实施例，进一步阐述本发明。

实施例 1

分别对绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的菌种进行高密度培养：

（1）绿色木霉：将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为15%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为30℃、摇瓶转速180rpm，活化培养32h；将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为50%发酵培养基的发酵罐内，接种量为体积比1%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖8g/l、玉米芯5g/l、氯化钙0.2g/l、硫酸镁0.1g/l、磷酸二氢钾18g/l、酵母膏8g/l、硫酸亚铁3mg/l、硫酸锌1.0mg/l、氯化钴3.5mg/l和硫酸锰1.2mg/l，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速140rpm，扩大培养68h，至发酵罐中绿色木霉含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

（2）枯草芽孢杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖18g/l、蛋白胨12g/l、氯化钠3g/l和牛肉膏0.2g/l，在培养温度为37℃,摇瓶转速180rpm培养20h；将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1%，所述发酵培养基的配方为玉米粉10g/l、葡萄糖3g/l、豆饼粉18g/l、鱼粉3g/l、碳酸钙5g/l、硫酸铵0.8g/l、磷酸氢二钾0.1g/l、硫酸镁0.1g/l和硫酸锰0.1g/l，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速220rpm培养20h，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。

（3）黑根霉：将纯化培养的斜面培养基上的黑根霉菌种接种至装有体积比为15%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为20wt%的马铃薯汁18g/l、葡萄糖1g/l、磷酸氢二钾1g/l、硫酸镁1g/l、硫胺素0.01g/l，在培养温度为30℃,摇瓶转速180rpm培养32h；将活化培养好的黑根霉菌种接种到装有体积比为50%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1%，所述发酵培养基的配方为玉米浆25g/l、蔗糖30g/l、尿素4g/l、磷酸氢二钾0.8g/l、硫酸镁0.3g/l、氯化钾0.3g/l和橄榄油8g/l，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速140rpm培养42h，发酵罐中黑根霉含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的黑根霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

（4）光合细菌：将纯化培养的斜面培养基上的光合细菌菌种接种至装有体积比为15%的培养基的摇瓶中，在培养温度为28℃,摇瓶每隔24小时搅拌一次，培养64h；将活化培养好的光合细菌菌种接种到装有体积比为50%培养基的发酵罐内，体积接种量为6%，在培养温度为28℃, 每隔24小时搅拌半小时，搅拌转速140rpm，培养100h，至发酵罐中光合细菌含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的光合细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为氯化铵1ｇ/l、磷酸氢二钾0.1ｇ/l、乙酸钠2ｇ/l、碳酸氢钠1ｇ/l、氯化钠0.5ｇ/l、酵母膏0.1ｇ/l和硫酸镁0.1ｇ/l。

（5）酿酒酵母：将纯化培养的斜面培养基上的酿酒酵母菌种接种至装有体积比为15%的培养基的摇瓶中，在培养温度为30℃、摇瓶转速140rpm，活化培养32h；将活化培养好的酿酒酵母菌种接种到装有体积比为50%培养基的发酵罐内，接种量为体积比1%，所述活化培养和发酵时的培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速140rpm，扩大培养68h，至发酵罐中酿酒酵母含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的酿酒酵母单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

（6）地衣芽孢杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨8g/l、牛肉膏1g/l和氯化钠3g/l，在培养温度为37℃,摇瓶转速180rpm培养20h；将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉13g/l、玉米粉13g/l、磷酸氢二钾0.05g/l、磷酸二氢钾0.05g/l和氯化钙2g/l，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速200rpm培养20h，发酵罐中地衣芽孢杆菌含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。

将高密度培养得到的各种休眠体微生物干粉，按照绿色木霉20份、枯草芽孢杆菌10份、黑根霉20份、光合细菌5份、酿酒酵母7份和地衣芽孢杆菌10份的重量比，混合得到餐厨垃圾发酵复合菌。

实施例 2

分别对绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的菌种进行高密度培养：

（1）绿色木霉：将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为30℃、摇瓶转速140rpm，活化培养48h；将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为70%发酵培养基的发酵罐内，接种量为体积比3%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖12g/l、玉米芯6g/l、氯化钙0.6g/l、硫酸镁0.5g/l、磷酸二氢钾22g/l、酵母膏12g/l、硫酸亚铁7mg/l、硫酸锌1.8mg/l、氯化钴4.0mg/l和硫酸锰1.8mg/l，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速180rpm，扩大培养68h，至发酵罐中绿色木霉含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

（2）枯草芽孢杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖22g/l、蛋白胨18g/l、氯化钠7g/l和牛肉膏0.8g/l，在培养温度为37℃,摇瓶转速220rpm培养20h；将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为3%，所述发酵培养基的配方为玉米粉15g/l、葡萄糖8g/l、豆饼粉22g/l、鱼粉8g/l、碳酸钙9g/l、硫酸铵1.2g/l、磷酸氢二钾0.5g/l、硫酸镁0.3g/l和硫酸锰0.3g/l，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速220rpm培养32h，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。

（3）黑根霉：将纯化培养的斜面培养基上的黑根霉菌种接种至装有体积比为30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为20wt%的马铃薯汁22g/l、葡萄糖5g/l、磷酸氢二钾5g/l、硫酸镁2g/l、硫胺素0.05g/l，在培养温度为30℃,摇瓶转速180rpm培养42h；将活化培养好的黑根霉菌种接种到装有体积比为70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为3%，所述发酵培养基的配方为玉米浆35g/l、蔗糖20g/l、尿素8g/l、磷酸氢二钾1.2g/l、硫酸镁0.8g/l、氯化钾0.8g/l和橄榄油12g/l，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速180rpm培养54h，发酵罐中黑根霉含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的黑根霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

（4）光合细菌：将纯化培养的斜面培养基上的光合细菌菌种接种至装有体积比为30%的培养基的摇瓶中，在培养温度为30℃,摇瓶每隔24小时搅拌一次，培养84h；将活化培养好的光合细菌菌种接种到装有体积比为70%培养基的发酵罐内，体积接种量为10%，在培养温度为30℃, 每隔24小时搅拌半小时，搅拌转速180rpm，培养150h，至发酵罐中光合细菌含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的光合细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为氯化铵3ｇ/l、磷酸氢二钾0.3ｇ/l、乙酸钠6ｇ/l、碳酸氢钠3ｇ/l、氯化钠1.5ｇ/l、酵母膏0.2ｇ/l和硫酸镁0.3ｇ/l。

（5）酿酒酵母：将纯化培养的斜面培养基上的酿酒酵母菌种接种至装有体积比为30%的培养基的摇瓶中，在培养温度为30℃、摇瓶转速180rpm，活化培养48h；将活化培养好的酿酒酵母菌种接种到装有体积比为70%培养基的发酵罐内，接种量为体积比3%，所述活化培养和发酵时的培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速180rpm，扩大培养84h，至发酵罐中酿酒酵母含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的酿酒酵母单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

（6）地衣芽孢杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨12g/l、牛肉膏5g/l和氯化钠7g/l，在培养温度为37℃,摇瓶转速220rpm培养32h；将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为3%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉17g/l、玉米粉17g/l、磷酸氢二钾0.15g/l、磷酸二氢钾0.15g/l和氯化钙6g/l，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速220rpm培养32h，发酵罐中地衣芽孢杆菌含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。

将高密度培养得到的各种休眠体微生物干粉，按照绿色木霉45份、枯草芽孢杆菌15份、黑根霉30份、光合细菌10份、酿酒酵母15份和地衣芽孢杆菌15份的重量比，混合得到餐厨垃圾发酵复合菌。

实施例 3

分别对绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的菌种进行高密度培养：

（1）绿色木霉：将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为20%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为30℃、摇瓶转速160rpm，活化培养36h；将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，接种量为体积比2%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖10g/l、玉米芯5.5g/l、氯化钙0.4g/l、硫酸镁0.3g/l、磷酸二氢钾20g/l、酵母膏10g/l、硫酸亚铁5mg/l、硫酸锌1.5mg/l、氯化钴3.7mg/l和硫酸锰1.6mg/l，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速160rpm，扩大培养72h，至发酵罐中绿色木霉含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

（2）枯草芽孢杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为20%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖20g/l、蛋白胨16g/l、氯化钠5g/l和牛肉膏0.6g/l，在培养温度为37℃,摇瓶转速200rpm培养24h；将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为2%，所述发酵培养基的配方为玉米粉12g/l、葡萄糖5g/l、豆饼粉20g/l、鱼粉5g/l、碳酸钙7g/l、硫酸铵1.0g/l、磷酸氢二钾0.3g/l、硫酸镁0.2g/l和硫酸锰0.2g/l，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速210rpm培养24h，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。

（3）黑根霉：将纯化培养的斜面培养基上的黑根霉菌种接种至装有体积比为20%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为20wt%的马铃薯汁20g/l、葡萄糖3g/l、磷酸氢二钾3g/l、硫酸镁1.5g/l、硫胺素0.02g/l，在培养温度为30℃,摇瓶转速160rpm培养36h；将活化培养好的黑根霉菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为2%，所述发酵培养基的配方为玉米浆30g/l、蔗糖20g/l、尿素6g/l、磷酸氢二钾1.0g/l、硫酸镁0.5g/l、氯化钾0.5g/l和橄榄油10g/l，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速160rpm培养48h，发酵罐中黑根霉含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的黑根霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

（4）光合细菌：将纯化培养的斜面培养基上的光合细菌菌种接种至装有体积比为20%的培养基的摇瓶中，在培养温度为30℃,摇瓶每隔24小时搅拌一次，培养72h；将活化培养好的光合细菌菌种接种到装有体积比为60%培养基的发酵罐内，体积接种量为8%，在培养温度为30℃, 每隔24小时搅拌半小时，搅拌转速160rpm，培养120h，至发酵罐中光合细菌含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的光合细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为氯化铵2ｇ/l、磷酸氢二钾0.2ｇ/l、乙酸钠4ｇ/l、碳酸氢钠2ｇ/l、氯化钠1.0ｇ/l、酵母膏0.15ｇ/l和硫酸镁0.2ｇ/l。

（5）酿酒酵母：将纯化培养的斜面培养基上的酿酒酵母菌种接种至装有体积比为20%的培养基的摇瓶中，在培养温度为30℃、摇瓶转速160rpm，活化培养38h；将活化培养好的酿酒酵母菌种接种到装有体积比为60%培养基的发酵罐内，接种量为体积比2%，所述活化培养和发酵时的培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速160rpm，扩大培养72h，至发酵罐中酿酒酵母含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的酿酒酵母单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

（6）地衣芽孢杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为20%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨10g/l、牛肉膏3g/l和氯化钠5g/l，在培养温度为37℃,摇瓶转速200rpm培养24h；将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为2%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉15g/l、玉米粉15g/l、磷酸氢二钾0.1g/l、磷酸二氢钾0.1g/l和氯化钙4g/l，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速210rpm培养24h，发酵罐中地衣芽孢杆菌含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。

将高密度培养得到的各种休眠体微生物干粉，按照绿色木霉32份、枯草芽孢杆菌12份、黑根霉25份、光合细菌8份、酿酒酵母11份和地衣芽孢杆菌12份的重量比，混合得到餐厨垃圾发酵复合菌。

Claims (9)

1.一种餐厨垃圾发酵复合菌，其特征在于主要由以下重量份的原料混合制备而成：

绿色木霉            20～45份，

枯草芽孢杆菌        10～15份，

黑根霉              20～30份，

光合细菌            5～10份，

酿酒酵母            7～15份，

地衣芽孢杆菌        10～15份。

2.如权利要求1所述的餐厨垃圾发酵复合菌的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

分别将绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的菌种进行高密度培养，首先接种至装有体积比为15～30%的培养基的摇瓶中活化培养，将培养好的菌种接种到发酵罐内进行发酵扩大培养，将扩大培养得到的各种单菌脱水干燥，制备成休眠体微生物干粉，然后按照绿色木霉20～45份、枯草芽孢杆菌10～15份、黑根霉20～30份、光合细菌5～10份、酿酒酵母7～15份和地衣芽孢杆菌10～15份的重量比，混合得到餐厨垃圾发酵复合菌。

3.如权利要求2所述的餐厨垃圾发酵复合菌的制备方法，其特征在于所述绿色木霉休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：

将纯化培养的固体培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为28～30℃、摇瓶转速140～180rpm，活化培养32～48h；

将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，接种量为体积比1～3%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖8～12g/l、玉米芯5～6g/l、氯化钙0.2～0.6g/l、硫酸镁0.1～0.5g/l、磷酸二氢钾18～22g/l、酵母膏8～12g/l、硫酸亚铁3～7mg/l、硫酸锌1.0～1.8mg/l、氯化钴3.5～4.0mg/l和硫酸锰1.2～1.8mg/l，在培养温度为28～30℃,发酵罐搅拌转速140～180rpm，扩大培养68～84h，至发酵罐中绿色木霉含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

4.如权利要求2所述的餐厨垃圾发酵复合菌的制备方法，其特征在于所述枯草芽孢杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：

将纯化培养的固体培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖18～22g/l、蛋白胨12～18g/l、氯化钠3～7g/l和牛肉膏0.2～0.8g/l，在培养温度为36～40℃,摇瓶转速180～220rpm培养20～32h；

将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，所述发酵培养基的配方为玉米粉10～15g/l、葡萄糖3～8g/l、豆饼粉18～22g/l、鱼粉3～8g/l、碳酸钙5～9g/l、硫酸铵0.8～1.2g/l、磷酸氢二钾0.1～0.5g/l、硫酸镁0.1～0.3g/l和硫酸锰0.1～0.3g/l，在培养温度为36～40℃,发酵罐搅拌转速200～220rpm培养20～32h，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。

5.如权利要求2所述的餐厨垃圾发酵复合菌的制备方法，其特征在于：所述黑根霉的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：

将纯化培养的固体培养基上的黑根霉菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为20wt%的马铃薯汁18～22g/l、葡萄糖1～5g/l、磷酸氢二钾1～5g/l、硫酸镁1～2g/l、硫胺素0.01～0.05g/l，在培养温度为28～30℃,摇瓶转速140～180rpm培养32～42h；

将活化培养好的黑根霉菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，所述发酵培养基的配方为玉米浆25～35g/l、蔗糖20～40g/l、尿素4～8g/l、磷酸氢二钾0.8～1.2g/l、硫酸镁0.3～0.8g/l、氯化钾0.3～0.8g/l和橄榄油8～12g/l，在培养温度为28～30℃,发酵罐搅拌转速140～180rpm培养42～54h，发酵罐中黑根霉含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的黑根霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

6.如权利要求2所述的餐厨垃圾发酵复合菌的制备方法，其特征在于：所述光合细菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：

将纯化培养的固体培养基上的光合细菌菌种接种至装有体积比为15～30%的培养基的摇瓶中，在培养温度为28～30℃,摇瓶每隔24小时搅拌一次，培养64～84h；将活化培养好的光合细菌菌种接种到装有体积比为50～70%培养基的发酵罐内，体积接种量为6～10%，在培养温度为28～30℃, 每隔24小时搅拌半小时，搅拌转速140～180rpm，培养100～150h，至发酵罐中光合细菌含量≥10⁸个/ml，然后将发酵得到的光合细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为氯化铵1～3ｇ/l、磷酸氢二钾0.1～0.3ｇ/l、乙酸钠2～6ｇ/l、碳酸氢钠1～3ｇ/l、氯化钠0.5～1.5ｇ/l、酵母膏0.1～0.2ｇ/l和硫酸镁0.1～0.3ｇ/l。

7.如权利要求2所述的餐厨垃圾发酵复合菌的制备方法，其特征在于所述酿酒酵母休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：

将纯化培养的固体培养基上的酿酒酵母菌种接种至装有体积比为15～30%的培养基的摇瓶中，在培养温度为28～30℃、摇瓶转速140～180rpm，活化培养32～48h；将活化培养好的酿酒酵母菌种接种到装有体积比为50～70%培养基的发酵罐内，接种量为体积比1～3%，所述活化培养和发酵时的培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为28～30℃,发酵罐搅拌转速140～180rpm，扩大培养68～84h，至发酵罐中酿酒酵母含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的酿酒酵母单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。

8.如权利要求2所述的餐厨垃圾发酵复合菌的制备方法，其特征在于所述地衣芽孢杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：

将纯化培养的固体培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨8～12g/l、牛肉膏1～5g/l和氯化钠3～7g/l，在培养温度为36～40℃,摇瓶转速180～220rpm培养20～32h；

将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉13～17g/l、玉米粉13～17g/l、磷酸氢二钾0.05～0.15g/l、磷酸二氢钾0.05～0.15g/l和氯化钙2～6g/l，在培养温度为36～40℃,发酵罐搅拌转速200～220rpm培养20～32h，发酵罐中地衣芽孢杆菌含量≥10⁹个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。

9.如权利要求3至8所述的任一种餐厨垃圾发酵复合菌的制备方法，其特征在于：所述的固体培养基为斜面培养基。