CN102433261B - 一种餐厨垃圾除油复合菌及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种餐厨垃圾除油复合菌及其制备方法，制备方法包括以下步骤：分别将绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、解脂假丝酵母、地衣芽孢杆菌、亚硝化毛杆菌和维氏硝酸细菌的菌种进行高密度培养后制备成休眠体微生物干粉，然后按照绿色木霉15～20份、枯草芽孢杆菌10～15份、黑根霉25～40份、光合细菌5～10份、解脂假丝酵母5～10份、地衣芽孢杆菌10～15份、亚硝化毛杆菌5～15份和维氏硝酸细菌5～15份的重量比，混合得到餐厨垃圾除油复合菌。本发明用于处理餐厨垃圾，可迅速降解餐厨垃圾中的脂类成分，相比现有技术，生产投资小，生产成本低，使用方便。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程微生物发酵技术领域，尤其涉及一种餐厨垃圾除油复合菌及其制备方法。
背景技术
餐厨垃圾中有机质含量可达90%以上，其中粗脂肪含量为25%左右，由于粗脂肪的存在，餐厨垃圾粘度较大，影响通气性，因此堆放的垃圾内部会产生厌氧环境，不利于有机成分的发酵分解。常规的餐厨垃圾脂类物质处理方式为物理和化学法，从垃圾中再次提炼出工业用脂类，这种处理方式投资大，处理成本高，而且对于与普通垃圾混合的居民垃圾无法通过物理化学方法进行分离。目前，由于人们的环保意识问题，城市中的餐厨垃圾大都未经分拣直接随普通垃圾一起投放到垃圾场，只有较大规模的饭店和食堂才会由专门的餐厨垃圾处理机构统一处理。因此，这种现状不仅加剧了垃圾处理场的负担，而且由于有机成分在厌氧条件下微生物分解还会产生臭味，带来空气污染。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种投资小、处理成本低、使用方便的餐厨垃圾除油复合菌。
本发明所要解决的第二个技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种投资小、处理成本低、使用方便的餐厨垃圾除油复合菌的制备方法。
为解决上述第一个技术问题，本发明的技术方案是：
一种餐厨垃圾除油复合菌，主要由以下重量份的原料混合制备而成：
绿色木霉(Trichoderma viride) 15～20份，
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 0～15份，
黑根霉（Black Rhizopus） 25～40份，
光合细菌（photosynthetic bacteria） 5-10份，
解脂假丝酵母（C.lipolytica） 5-10份，
地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis） 10-15份，
亚硝化毛杆菌 (Nitrosomonas europaea) 5-15份，
维氏硝酸细菌(Nitrobacter winogradskyi) 5-15份。
为解决上述第二个技术问题，本发明的技术方案是：
一种餐厨垃圾除油复合菌的制备方法，包括以下步骤：
分别将绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、解脂假丝酵母、地衣芽孢杆菌、亚硝化毛杆菌和维氏硝酸细菌的菌种进行高密度培养，首先接种至装有体积比为15～30%的培养基的摇瓶中活化培养，将培养好的菌种接种到发酵罐内进行发酵扩大培养，将扩大培养得到的各种单菌脱水干燥，制备成休眠体微生物干粉，然后按照绿色木霉15～20份、枯草芽孢杆菌10～15份、黑根霉25～40份、光合细菌5～10份、解脂假丝酵母5～10份、地衣芽孢杆菌10～15份、亚硝化毛杆菌5～15份和维氏硝酸细菌5～15份的重量比，混合得到餐厨垃圾除油复合菌。
其中，所述绿色木霉休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为28～30℃、摇瓶转速140～180rpm，活化培养32～48h；
将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，接种量为体积比1～3%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖8～12g/l、玉米芯5～6g/l、氯化钙0.2～0.6g/l、硫酸镁0.1～0.5g/l、磷酸二氢钾18～22g/l、酵母膏8～12g/l、硫酸亚铁3～7mg/l、硫酸锌1.0～1.8mg/l、氯化钴3.5～4.0mg/l和硫酸锰1.2～1.8mg/l，在培养温度为28～30℃,发酵罐搅拌转速140～180rpm，扩大培养68～84h，至发酵罐中绿色木霉含量≥108个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
所述枯草芽孢杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖18～22g/l、蛋白胨12～18g/l、氯化钠3～7g/l和牛肉膏0.2～0.8g/l，在培养温度为36～40℃,摇瓶转速180～220rpm培养20～32h；
将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，所述发酵培养基的配方为玉米粉10～15g/l、葡萄糖3～8g/l、豆饼粉18～22g/l、鱼粉3～8g/l、碳酸钙5～9g/l、硫酸铵0.8～1.2g/l、磷酸氢二钾0.1～0.5g/l、硫酸镁0.1～0.3g/l和硫酸锰0.1～0.3g/l，在培养温度为36～40℃,发酵罐搅拌转速200～220rpm培养20～32h，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
所述黑根霉的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的黑根霉菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为20wt%的马铃薯汁18～22g/l、葡萄糖1～5g/l、磷酸氢二钾1～5g/l、硫酸镁1～2g/l、硫胺素0.01～0.05g/l，在培养温度为28～30℃,摇瓶转速140～180rpm培养32～42h；
将活化培养好的黑根霉菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，所述发酵培养基的配方为玉米浆25～35g/l、蔗糖20～40g/l、尿素4～8g/l、磷酸氢二钾0.8～1.2g/l、硫酸镁0.3～0.8g/l、氯化钾0.3～0.8g/l和橄榄油8～12g/l，在培养温度为28～30℃,发酵罐搅拌转速140～180rpm培养42～54h，发酵罐中黑根霉含量≥108个/ml，然后将发酵得到的黑根霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
所述光合细菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的光合细菌菌种接种至装有体积比为15～30%的培养基的摇瓶中，在培养温度为28～30℃,摇瓶每隔24小时搅拌一次，培养64～84h；将活化培养好的光合细菌菌种接种到装有体积比为50～70%培养基的发酵罐内，体积接种量为6～10%，在培养温度为28～30℃, 每隔24小时搅拌半小时，搅拌转速140～180rpm，培养100～150h，至发酵罐中光合细菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的光合细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为氯化铵1～3ｇ/l、磷酸氢二钾0.1～0.3ｇ/l、乙酸钠2～6ｇ/l、碳酸氢钠1～3ｇ/l、氯化钠0.5～1.5ｇ/l、酵母膏0.1～0.2ｇ/l和硫酸镁0.1～0.3ｇ/l。
所述解脂假丝酵母休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的解脂假丝酵母菌种接种至装有体积比为15～30%的培养基的摇瓶中，在培养温度为28～30℃、摇瓶转速140～180rpm，活化培养32～48h；将活化培养好的解脂假丝酵母菌种接种到装有体积比为50～70%培养基的发酵罐内，接种量为体积比1～3%，所述活化培养和发酵时的培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为28～30℃,发酵罐搅拌转速140～180rpm，扩大培养68～84h，至发酵罐中解脂假丝酵母含量≥109个/ml，然后将发酵得到的解脂假丝酵母单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
所述地衣芽孢杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨8～12g/l、牛肉膏1～5g/l和氯化钠3～7g/l，在培养温度为36～40℃,摇瓶转速180～220rpm培养20～32h；
将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉13～17g/l、玉米粉13～17g/l、磷酸氢二钾0.05～0.15g/l、磷酸二氢钾0.05～0.15g/l和氯化钙2～6g/l，在培养温度为36～40℃,发酵罐搅拌转速200～220rpm培养20～32h，发酵罐中地衣芽孢杆菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
所述亚硝化毛杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的亚硝化毛杆菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为24～28℃,摇瓶转速120～140rpm培养90～120h；将活化培养好的亚硝化毛杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，在培养温度为24～28℃,发酵罐搅拌转速120～140rpm培养150～180h，发酵罐中亚硝化毛杆菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的亚硝化毛杆菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为硫酸铵1～3g/l、磷酸二氢钠0.2～0.3g/l、硫酸锰0.005～0.015g/l、磷酸氢二钾0.5～1.0g/l、硫酸镁0.02～0.04g/l和碳酸钙3～7g/l。
所述维氏硝酸细菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的维氏硝酸细菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为24～28℃,摇瓶转速120～140rpm培养68～78h；将活化培养好的维氏硝酸细菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，在培养温度为24～28℃,发酵罐搅拌转速120～140rpm培养180～220h，发酵罐中维氏硝酸细菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的维氏硝酸细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为亚硝酸钠0.5～1.5g/l、硫酸镁0.01～0.05g/l、硫酸锰0.005～0.015g/l、磷酸氢二钾0.5～1.0g/l、碳酸钠0.5～1.5g/l、磷酸二氢钠0.2～0.3g/l和碳酸钙0.5～1.5g/l。
本发明中的绿色木霉能产生多种具有生物活性的酶系，如：纤维素酶、几丁质酶、木聚糖酶等。绿色木霉是所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好，又是一种资源丰富的拮抗微生物，在植物病理生物防治中具有重要的作用，具有保护和治疗双重功效，可有效防治土传性病害。
本发明中的枯草芽孢杆菌是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌，枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用；枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类；枯草芽孢杆菌对弧菌、大肠杆菌和杆状病毒等有害细菌有很强的抑制作用，分泌大量几丁质酶的功能，几丁质酶可分解病原真菌的细胞壁而抑制真菌病害、分解有毒有害物质、净化水质、分解池中残饵、粪便、有机物等,具有很强的清理水中垃圾小颗粒的作用。
本发明中的黑根霉在自然界分布很广，用途广泛，其淀粉酶活性很强，是酿造工业中常用的糖化菌，而且具有极强的脂肪分解功能。
本发明中的光合细菌是以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。在自然界淡、海水中通常每毫升含有近百个PSB菌，光合细菌的菌体以有机酸、氨基酸、氨和醣类等有机物和硫化氢作为供氧体，通过光合磷酸化获得能量，在水中光照条件下可直接利用降解有机质和硫化氢并使自身得以增殖，同进净化了水体。
本发明中的地衣芽孢杆菌能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖，能分解环境中的有毒有害物质，具有较强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，能分解环境中的淀粉、蛋白质和脂类。
本发明中的亚硝化毛杆菌和维氏硝酸细菌，这两类菌通常生活在一起，避免了亚硝酸盐在土壤中的积累，有利于机体正常生长。土壤中的氨或铵盐必需在以上两类细菌的共同作用下才能转变为硝酸盐，从而增加植物可利用的氮素营养。
本发明中的解脂假丝酵母能利用的糖类很少，但它们分解脂肪和蛋白质的能力很强。
由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
本发明将绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、解脂假丝酵母、地衣芽孢杆菌、亚硝化毛杆菌和维氏硝酸细菌的菌种进行高密度培养后制备成的休眠体微生物干粉，根据其用途采用合理配比，混合得到餐厨垃圾除油复合菌，用于处理餐厨垃圾，可迅速降解餐厨垃圾中的脂类成分，而且由于是微生物产品，不需要额外的能源辅助分解脂类，相比现有技术，生产投资小，生产成本低，使用方便。混杂了餐厨垃圾的普通垃圾经过本发明的分解作用，垃圾会变得疏松，提高了垃圾内部的通气性，有利于有机成分的降解，相应的也减少了垃圾的臭味，减轻了垃圾处理场的负担。
具体实施方式
下面结合具体的实施例，进一步阐述本发明。
实施例 1
分别对绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、解脂假丝酵母、地衣芽孢杆菌、亚硝化毛杆菌和维氏硝酸细菌的菌种进行高密度培养：
（1）绿色木霉：将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为15%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为30℃、摇瓶转速180rpm，活化培养32h；将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为50%发酵培养基的发酵罐内，接种量为体积比1%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖8g/l、玉米芯5g/l、氯化钙0.2g/l、硫酸镁0.1g/l、磷酸二氢钾18g/l、酵母膏8g/l、硫酸亚铁3mg/l、硫酸锌1.0mg/l、氯化钴3.5mg/l和硫酸锰1.2mg/l，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速140rpm，扩大培养68h，至发酵罐中绿色木霉含量≥108个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
（2）枯草芽孢杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖18g/l、蛋白胨12g/l、氯化钠3g/l和牛肉膏0.2g/l，在培养温度为37℃,摇瓶转速180rpm培养20h；将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1%，所述发酵培养基的配方为玉米粉10g/l、葡萄糖3g/l、豆饼粉18g/l、鱼粉3g/l、碳酸钙5g/l、硫酸铵0.8g/l、磷酸氢二钾0.1g/l、硫酸镁0.1g/l和硫酸锰0.1g/l，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速220rpm培养20h，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
（3）黑根霉：将纯化培养的斜面培养基上的黑根霉菌种接种至装有体积比为15%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为20wt%的马铃薯汁18g/l、葡萄糖1g/l、磷酸氢二钾1g/l、硫酸镁1g/l、硫胺素0.01g/l，在培养温度为28℃,摇瓶转速180rpm培养32h；将活化培养好的黑根霉菌种接种到装有体积比为50%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1%，所述发酵培养基的配方为玉米浆25g/l、蔗糖20g/l、尿素4g/l、磷酸氢二钾0.8g/l、硫酸镁0.3g/l、氯化钾0.3g/l和橄榄油8g/l，在培养温度为28℃,发酵罐搅拌转速140rpm培养42h，发酵罐中黑根霉含量≥108个/ml，然后将发酵得到的黑根霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
（4）光合细菌：将纯化培养的斜面培养基上的光合细菌菌种接种至装有体积比为15%的培养基的摇瓶中，在培养温度为28℃,摇瓶每隔24小时搅拌一次，培养64h；将活化培养好的光合细菌菌种接种到装有体积比为50%培养基的发酵罐内，体积接种量为6%，在培养温度为28℃, 每隔24小时搅拌半小时，搅拌转速140rpm，培养100h，至发酵罐中光合细菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的光合细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为氯化铵1ｇ/l、磷酸氢二钾0.1ｇ/l、乙酸钠2ｇ/l、碳酸氢钠1ｇ/l、氯化钠0.5ｇ/l、酵母膏0.1ｇ/l和硫酸镁0.1ｇ/l。
（5）解脂假丝酵母：将纯化培养的斜面培养基上的解脂假丝酵母菌种接种至装有体积比为15%的培养基的摇瓶中，在培养温度为28℃、摇瓶转速140rpm，活化培养32h；将活化培养好的解脂假丝酵母菌种接种到装有体积比为50%培养基的发酵罐内，接种量为体积比1%，所述活化培养和发酵时的培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速140rpm，扩大培养68h，至发酵罐中解脂假丝酵母含量≥109个/ml，然后将发酵得到的解脂假丝酵母单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
（6）地衣芽孢杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨8g/l、牛肉膏1g/l和氯化钠3g/l，在培养温度为37℃,摇瓶转速180rpm培养20h；将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉13g/l、玉米粉13g/l、磷酸氢二钾0.05g/l、磷酸二氢钾0.05g/l和氯化钙2g/l，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速200rpm培养20h，发酵罐中地衣芽孢杆菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
（7）亚硝化毛杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的亚硝化毛杆菌菌种接种至装有体积比为15%的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为26℃,摇瓶转速120rpm培养90h；将活化培养好的亚硝化毛杆菌菌种接种到装有体积比为50%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1%，在培养温度为28℃,发酵罐搅拌转速120rpm培养150h，发酵罐中亚硝化毛杆菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的亚硝化毛杆菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为硫酸铵1g/l、磷酸二氢钠0.2g/l、硫酸锰0.005g/l、磷酸氢二钾0.5g/l、硫酸镁0.02g/l和碳酸钙3g/l。
（8）维氏硝酸细菌：将纯化培养的斜面培养基上的维氏硝酸细菌菌种接种至装有体积比为15%的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为26℃,摇瓶转速120rpm培养78h；将活化培养好的维氏硝酸细菌菌种接种到装有体积比为50%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1%，在培养温度为28℃,发酵罐搅拌转速120rpm培养180h，发酵罐中维氏硝酸细菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的维氏硝酸细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为亚硝酸钠0.5g/l、硫酸镁0.01g/l、硫酸锰0.005g/l、磷酸氢二钾0.5g/l、碳酸钠0.5g/l、磷酸二氢钠0.2g/l和碳酸钙0.5g/l。
将高密度培养得到的各种休眠体微生物干粉，按照绿色木霉15份、枯草芽孢杆菌10份、黑根霉25份、光合细菌5份、解脂假丝酵母5份、地衣芽孢杆菌10份、亚硝化毛杆菌5份和维氏硝酸细菌5份的重量比，混合得到餐厨垃圾除油复合菌。
实施例 2
分别对绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、解脂假丝酵母、地衣芽孢杆菌、亚硝化毛杆菌和维氏硝酸细菌的菌种进行高密度培养：
（1）绿色木霉：将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为28℃、摇瓶转速140rpm，活化培养48h；将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为70%发酵培养基的发酵罐内，接种量为体积比3%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖12g/l、玉米芯6g/l、氯化钙0.6g/l、硫酸镁0.5g/l、磷酸二氢钾22g/l、酵母膏12g/l、硫酸亚铁7mg/l、硫酸锌1.8mg/l、氯化钴4.0mg/l和硫酸锰1.8mg/l，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速180rpm，扩大培养68h，至发酵罐中绿色木霉含量≥108个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
（2）枯草芽孢杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖22g/l、蛋白胨18g/l、氯化钠7g/l和牛肉膏0.8g/l，在培养温度为37℃,摇瓶转速220rpm培养20h；将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为3%，所述发酵培养基的配方为玉米粉15g/l、葡萄糖8g/l、豆饼粉22g/l、鱼粉8g/l、碳酸钙9g/l、硫酸铵1.2g/l、磷酸氢二钾0.5g/l、硫酸镁0.3g/l和硫酸锰0.3g/l，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速220rpm培养32h，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
（3）黑根霉：将纯化培养的斜面培养基上的黑根霉菌种接种至装有体积比为30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为20wt%的马铃薯汁22g/l、葡萄糖5g/l、磷酸氢二钾5g/l、硫酸镁2g/l、硫胺素0.05g/l，在培养温度为30℃,摇瓶转速180rpm培养42h；将活化培养好的黑根霉菌种接种到装有体积比为70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为3%，所述发酵培养基的配方为玉米浆35g/l、蔗糖20g/l、尿素8g/l、磷酸氢二钾1.2g/l、硫酸镁0.8g/l、氯化钾0.8g/l和橄榄油12g/l，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速180rpm培养54h，发酵罐中黑根霉含量≥108个/ml，然后将发酵得到的黑根霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
（4）光合细菌：将纯化培养的斜面培养基上的光合细菌菌种接种至装有体积比为30%的培养基的摇瓶中，在培养温度为30℃,摇瓶每隔24小时搅拌一次，培养84h；将活化培养好的光合细菌菌种接种到装有体积比为70%培养基的发酵罐内，体积接种量为10%，在培养温度为30℃, 每隔24小时搅拌半小时，搅拌转速180rpm，培养150h，至发酵罐中光合细菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的光合细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为氯化铵3ｇ/l、磷酸氢二钾0.3ｇ/l、乙酸钠6ｇ/l、碳酸氢钠3ｇ/l、氯化钠1.5ｇ/l、酵母膏0.2ｇ/l和硫酸镁0.3ｇ/l。
（5）解脂假丝酵母：将纯化培养的斜面培养基上的解脂假丝酵母菌种接种至装有体积比为30%的培养基的摇瓶中，在培养温度为30℃、摇瓶转速180rpm，活化培养48h；将活化培养好的解脂假丝酵母菌种接种到装有体积比为70%培养基的发酵罐内，接种量为体积比3%，所述活化培养和发酵时的培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速180rpm，扩大培养84h，至发酵罐中解脂假丝酵母含量≥109个/ml，然后将发酵得到的解脂假丝酵母单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
（6）地衣芽孢杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨12g/l、牛肉膏5g/l和氯化钠7g/l，在培养温度为37℃,摇瓶转速220rpm培养32h；将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为3%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉17g/l、玉米粉17g/l、磷酸氢二钾0.15g/l、磷酸二氢钾0.15g/l和氯化钙6g/l，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速220rpm培养32h，发酵罐中地衣芽孢杆菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
（7）亚硝化毛杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的亚硝化毛杆菌菌种接种至装有体积比为30%的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为28℃,摇瓶转速140rpm培养120h；将活化培养好的亚硝化毛杆菌菌种接种到装有体积比为70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为3%，在培养温度为28℃,发酵罐搅拌转速140rpm培养180h，发酵罐中亚硝化毛杆菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的亚硝化毛杆菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为硫酸铵3g/l、磷酸二氢钠0.3g/l、硫酸锰0.015g/l、磷酸氢二钾1.0g/l、硫酸镁0.04g/l和碳酸钙7g/l。
（8）维氏硝酸细菌：将纯化培养的斜面培养基上的维氏硝酸细菌菌种接种至装有体积比为30%的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为28℃,摇瓶转速140rpm培养78h；将活化培养好的维氏硝酸细菌菌种接种到装有体积比为70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为3%，在培养温度为28℃,发酵罐搅拌转速140rpm培养220h，发酵罐中维氏硝酸细菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的维氏硝酸细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为亚硝酸钠1.5g/l、硫酸镁0.05g/l、硫酸锰0.015g/l、磷酸氢二钾1.0g/l、碳酸钠1.5g/l、磷酸二氢钠0.3g/l和碳酸钙1.5g/l。
将高密度培养得到的各种休眠体微生物干粉，按照绿色木霉20份、枯草芽孢杆菌15份、黑根霉40份、光合细菌10份、解脂假丝酵母10份、地衣芽孢杆菌15份、亚硝化毛杆菌15份和维氏硝酸细菌15份的重量比，混合得到餐厨垃圾除油复合菌。
实施例 3
分别对绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、解脂假丝酵母、地衣芽孢杆菌、亚硝化毛杆菌和维氏硝酸细菌的菌种进行高密度培养：
（1）绿色木霉：将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为20%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为30℃、摇瓶转速160rpm，活化培养36h；将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，接种量为体积比2%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖10g/l、玉米芯5.5g/l、氯化钙0.4g/l、硫酸镁0.3g/l、磷酸二氢钾20g/l、酵母膏10g/l、硫酸亚铁5mg/l、硫酸锌1.5mg/l、氯化钴3.7mg/l和硫酸锰1.6mg/l，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速160rpm，扩大培养72h，至发酵罐中绿色木霉含量≥108个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
（2）枯草芽孢杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为20%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖20g/l、蛋白胨16g/l、氯化钠5g/l和牛肉膏0.6g/l，在培养温度为37℃,摇瓶转速200rpm培养24h；将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为2%，所述发酵培养基的配方为玉米粉12g/l、葡萄糖5g/l、豆饼粉20g/l、鱼粉5g/l、碳酸钙7g/l、硫酸铵1.0g/l、磷酸氢二钾0.3g/l、硫酸镁0.2g/l和硫酸锰0.2g/l，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速210rpm培养24h，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
（3）黑根霉：将纯化培养的斜面培养基上的黑根霉菌种接种至装有体积比为20%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为20wt%的马铃薯汁20g/l、葡萄糖3g/l、磷酸氢二钾3g/l、硫酸镁1.5g/l、硫胺素0.02g/l，在培养温度为30℃,摇瓶转速160rpm培养36h；将活化培养好的黑根霉菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为2%，所述发酵培养基的配方为玉米浆30g/l、蔗糖20g/l、尿素6g/l、磷酸氢二钾1.0g/l、硫酸镁0.5g/l、氯化钾0.5g/l和橄榄油10g/l，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速160rpm培养48h，发酵罐中黑根霉含量≥108个/ml，然后将发酵得到的黑根霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
（4）光合细菌：将纯化培养的斜面培养基上的光合细菌菌种接种至装有体积比为20%的培养基的摇瓶中，在培养温度为30℃,摇瓶每隔24小时搅拌一次，培养72h；将活化培养好的光合细菌菌种接种到装有体积比为60%培养基的发酵罐内，体积接种量为8%，在培养温度为30℃, 每隔24小时搅拌半小时，搅拌转速160rpm，培养120h，至发酵罐中光合细菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的光合细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为氯化铵2ｇ/l、磷酸氢二钾0.2ｇ/l、乙酸钠4ｇ/l、碳酸氢钠2ｇ/l、氯化钠1.0ｇ/l、酵母膏0.15ｇ/l和硫酸镁0.2ｇ/l。
（5）解脂假丝酵母：将纯化培养的斜面培养基上的解脂假丝酵母菌种接种至装有体积比为20%的培养基的摇瓶中，在培养温度为30℃、摇瓶转速160rpm，活化培养38h；将活化培养好的解脂假丝酵母菌种接种到装有体积比为60%培养基的发酵罐内，接种量为体积比2%，所述活化培养和发酵时的培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速160rpm，扩大培养72h，至发酵罐中解脂假丝酵母含量≥109个/ml，然后将发酵得到的解脂假丝酵母单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
（6）地衣芽孢杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为20%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨10g/l、牛肉膏3g/l和氯化钠5g/l，在培养温度为37℃,摇瓶转速200rpm培养24h；将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为2%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉15g/l、玉米粉15g/l、磷酸氢二钾0.1g/l、磷酸二氢钾0.1g/l和氯化钙4g/l，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速210rpm培养24h，发酵罐中地衣芽孢杆菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
（7）亚硝化毛杆菌：将纯化培养的斜面培养基上的亚硝化毛杆菌菌种接种至装有体积比为20%的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为28℃,摇瓶转速130rpm培养100h；将活化培养好的亚硝化毛杆菌菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为2%，在培养温度为28℃,发酵罐搅拌转速130rpm培养160h，发酵罐中亚硝化毛杆菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的亚硝化毛杆菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为硫酸铵2g/l、磷酸二氢钠0.25g/l、硫酸锰0.01g/l、磷酸氢二钾0.8g/l、硫酸镁0.03g/l和碳酸钙5g/l。
（8）维氏硝酸细菌：将纯化培养的斜面培养基上的维氏硝酸细菌菌种接种至装有体积比为20%的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为28℃,摇瓶转速130rpm培养72h；将活化培养好的维氏硝酸细菌菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为2%，在培养温度为28℃,发酵罐搅拌转速130rpm培养200h，发酵罐中维氏硝酸细菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的维氏硝酸细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为亚硝酸钠1.0g/l、硫酸镁0.03g/l、硫酸锰0.01g/l、磷酸氢二钾0.8g/l、碳酸钠1.0g/l、磷酸二氢钠0.25g/l和碳酸钙1.0g/l。
将高密度培养得到的各种休眠体微生物干粉，按照绿色木霉15～20份、枯草芽孢杆菌12份、黑根霉32份、光合细菌8份、解脂假丝酵母8份、地衣芽孢杆菌12份、亚硝化毛杆菌10份和维氏硝酸细菌10份的重量比，混合得到餐厨垃圾除油复合菌。
Claims (10)
1.一种餐厨垃圾除油复合菌，其特征在于主要由以下重量份的原料混合制备而成：
绿色木霉 15～20份，
枯草芽孢杆菌 10～15份，
黑根霉 25～40份，
光合细菌 5～10份，
解脂假丝酵母 5～10份，
地衣芽孢杆菌 10～15份，
亚硝化毛杆菌 5～15份，
维氏硝酸细菌 5～15份。
2.如权利要求1所述的餐厨垃圾除油复合菌的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
分别将绿色木霉、枯草芽孢杆菌、黑根霉、光合细菌、解脂假丝酵母、地衣芽孢杆菌、亚硝化毛杆菌和维氏硝酸细菌的菌种进行高密度培养，首先接种至装有体积比为15～30%的培养基的摇瓶中活化培养，将培养好的菌种接种到发酵罐内进行发酵扩大培养，将扩大培养得到的各种单菌脱水干燥，制备成休眠体微生物干粉，然后按照绿色木霉15～20份、枯草芽孢杆菌10～15份、黑根霉25～40份、光合细菌5～10份、解脂假丝酵母5～10份、地衣芽孢杆菌10～15份、亚硝化毛杆菌5～15份和维氏硝酸细菌5～15份的重量份，混合得到餐厨垃圾除油复合菌。
3.如权利要求2所述的餐厨垃圾除油复合菌的制备方法，其特征在于所述绿色木霉休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为28～30℃、摇瓶转速140～180rpm，活化培养32～48h；
将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，接种量为体积比1～3%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖8～12g/l、玉米芯5～6g/l、氯化钙0.2～0.6g/l、硫酸镁0.1～0.5g/l、磷酸二氢钾18～22g/l、酵母膏8～12g/l、硫酸亚铁3～7mg/l、硫酸锌1.0～1.8mg/l、氯化钴3.5～4.0mg/l和硫酸锰1.2～1.8mg/l，在培养温度为28～30℃,发酵罐搅拌转速140～180rpm，扩大培养68～84h，至发酵罐中绿色木霉含量≥108个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
4.如权利要求2所述的餐厨垃圾除油复合菌的制备方法，其特征在于所述枯草芽孢杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖18～22g/l、蛋白胨12～18g/l、氯化钠3～7g/l和牛肉膏0.2～0.8g/l，在培养温度为36～40℃,摇瓶转速180～220rpm培养20～32h；
将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，所述发酵培养基的配方为玉米粉10～15g/l、葡萄糖3～8g/l、豆饼粉18～22g/l、鱼粉3～8g/l、碳酸钙5～9g/l、硫酸铵0.8～1.2g/l、磷酸氢二钾0.1～0.5g/l、硫酸镁0.1～0.3g/l和硫酸锰0.1～0.3g/l，在培养温度为36～40℃,发酵罐搅拌转速200～220rpm培养20～32h，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
5.如权利要求2所述的餐厨垃圾除油复合菌的制备方法，其特征在于：所述黑根霉的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的黑根霉菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为20wt%的马铃薯汁18～22g/l、葡萄糖1～5g/l、磷酸氢二钾1～5g/l、硫酸镁1～2g/l、硫胺素0.01～0.05g/l，在培养温度为28～30℃,摇瓶转速140～180rpm培养32～42h；
将活化培养好的黑根霉菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，所述发酵培养基的配方为玉米浆25～35g/l、蔗糖20～40g/l、尿素4～8g/l、磷酸氢二钾0.8～1.2g/l、硫酸镁0.3～0.8g/l、氯化钾0.3～0.8g/l和橄榄油8～12g/l，在培养温度为28～30℃,发酵罐搅拌转速140～180rpm培养42～54h，发酵罐中黑根霉含量≥108个/ml，然后将发酵得到的黑根霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
6.如权利要求2所述的餐厨垃圾除油复合菌的制备方法，其特征在于：所述光合细菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的光合细菌菌种接种至装有体积比为15～30%的培养基的摇瓶中，在培养温度为28～30℃,摇瓶每隔24小时搅拌一次，培养64～84h；将活化培养好的光合细菌菌种接种到装有体积比为50～70%培养基的发酵罐内，体积接种量为6～10%，在培养温度为28～30℃,每隔24小时搅拌半小时，搅拌转速140～180rpm，培养100～150h，至发酵罐中光合细菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的光合细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为氯化铵1～3ｇ/l、磷酸氢二钾0.1～0.3ｇ/l、乙酸钠2～6ｇ/l、碳酸氢钠1～3ｇ/l、氯化钠0.5～1.5ｇ/l、酵母膏0.1～0.2ｇ/l和硫酸镁0.1～0.3ｇ/l。
7.如权利要求2所述的餐厨垃圾除油复合菌的制备方法，其特征在于所述解脂假丝酵母休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的解脂假丝酵母菌种接种至装有体积比为15～30%的培养基的摇瓶中，在培养温度为28～30℃、摇瓶转速140～180rpm，活化培养32～48h；将活化培养好的解脂假丝酵母菌种接种到装有体积比为50～70%培养基的发酵罐内，接种量为体积比1～3%，所述活化培养和发酵时的培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为28～30℃,发酵罐搅拌转速140～180rpm，扩大培养68～84h，至发酵罐中解脂假丝酵母含量≥109个/ml，然后将发酵得到的解脂假丝酵母单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉。
8.如权利要求2所述的餐厨垃圾除油复合菌的制备方法，其特征在于所述地衣芽孢杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨8～12g/l、牛肉膏1～5g/l和氯化钠3～7g/l，在培养温度为36～40℃,摇瓶转速180～220rpm培养20～32h；
将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉13～17g/l、玉米粉13～17g/l、磷酸氢二钾0.05～0.15g/l、磷酸二氢钾0.05～0.15g/l和氯化钙2～6g/l，在培养温度为36～40℃,发酵罐搅拌转速200～220rpm培养20～32h，发酵罐中地衣芽孢杆菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
9.如权利要求2所述的餐厨垃圾除油复合菌的制备方法，其特征在于：所述亚硝化毛杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的亚硝化毛杆菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为24～28℃,摇瓶转速120～140rpm培养90～120h；将活化培养好的亚硝化毛杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，在培养温度为24～28℃,发酵罐搅拌转速120～140rpm培养150～180h，发酵罐中亚硝化毛杆菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的亚硝化毛杆菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为硫酸铵1～3g/l、磷酸二氢钠0.2～0.3g/l、硫酸锰0.005～0.015g/l、磷酸氢二钾0.5～1.0g/l、硫酸镁0.02～0.04g/l和碳酸钙3～7g/l。
10.如权利要求2所述的餐厨垃圾除油复合菌的制备方法，其特征在于：所述维氏硝酸细菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的维氏硝酸细菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为24～28℃,摇瓶转速120～140rpm培养68～78h；将活化培养好的维氏硝酸细菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3%，在培养温度为24～28℃,发酵罐搅拌转速120～140rpm培养180～220h，发酵罐中维氏硝酸细菌含量≥108个/ml，然后将发酵得到的维氏硝酸细菌单菌经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，所述活化培养和发酵时的培养基的配方为亚硝酸钠0.5～1.5g/l、硫酸镁0.01～0.05g/l、硫酸锰0.005～0.015g/l、磷酸氢二钾0.5～1.0g/l、碳酸钠0.5～1.5g/l、磷酸二氢钠0.2～0.3g/l和碳酸钙0.5～1.5g/l。
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