CN102391353B

CN102391353B - 割舌树内酰胺a及其制备方法和在药物上的应用

Info

Publication number: CN102391353B
Application number: CN 201110266941
Authority: CN
Inventors: 高原; 魏国柱; 姜先俊; 李艳; 刘吉开; 王飞
Original assignee: BIOBIOPHA CO LTD; Kunming Institute of Botany of CAS
Current assignee: YUNNAN BIOBIAOPHA TECHNOLOGY CO., LTD.; Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date: 2011-09-09
Filing date: 2011-09-09
Publication date: 2012-12-26
Anticipated expiration: 2031-09-09
Also published as: CN102391353A

Abstract

本发明提供一种新的具有药用价值的割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)(式I化合物)，从云南割舌树(Walsura yunnanensis)植物体中提取本发明化合物的方法，同时提供一种以式I化合物为活性成分的用于治疗和预防肿瘤的药物组合物及这些化合物及其药物组合物在制备治疗和预防肿瘤的药物方面的应用。

Description

割舌树内酰胺A及其制备方法和在药物上的应用

技术领域

本发明涉及割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)，其制备方法，以该化合物为活性成分的药物组合物，以及该化合物在制备治疗和预防肿瘤的药物方面的应用。

背景技术

肿瘤是机体在各种致瘤因素作用下，局部组织的细胞异常增生而形成的新生物，常表现为局部肿块。它生长旺盛，常呈持续性生长。肿瘤的发生发展与多种致病因素有关，基因突变、疾病引发、环境污染、吸烟等不良生活习惯，都能诱发肿瘤的发生发展。肿瘤是严重威胁人类生命的常见病和多发病之一，世界卫生组织根据世界各地区癌症发病率、死亡率和世界人口资料估计，肿瘤是仅次于心血管疾病的第二大致死疾病。而肿瘤的治疗在很大程度上依赖于抗肿瘤药物的研究开发。

迄今，现有技术中没有含有式(I)化合物割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)作为有效成分在治疗肿瘤方面的报道，也没有该化合物具有抗肿瘤活性的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的具有药用价值的割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)。

本发明的另一目的是提供一种从云南割舌树(Walsura yunnanensis)植物体中提取本发明化合物的方法。

本发明的进一步目的是提供一种以式(I)化合物为活性成分的用于治疗和预防肿瘤的药物组合物，及该化合物和组合物在制备治疗和预防肿瘤的药物方面的应用。

为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

用于治疗和预防肿瘤的药物，其中含有治疗和预防肿瘤有效量的式(I)化合物及可药用载体和/或赋形剂。

本发明化合物割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)可以转化药学上可接受的盐和衍生物，如酯、醚和其它衍生物。酯和醚的形成可采用文献中的方法(用羧酸或氨基酸，氨基酸中的氨基可以保护，酯化后去保护)。双键可以采用文献方法还原，也可进行氢卤化。环氧基团可在酸或碱催化下与ROH或RNH₂(R＝H或1～4个碳的烷基)等反应得到相应的醇、醚或胺。α，β-不饱和酮可通过麦克尔加成(Michael reaction)引入含4～10个碳的链。

本发明化合物用作药物上时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0.1～99％，优选为0.5～90％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的盐，或对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将所述的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经口服和注射(静注、肌注)两种形式给药。

口服可用其固体或液体制剂，如粉剂、片剂、糖衣剂、胶囊、溶液、糖浆、滴丸剂等。

注射可用其固体或液体制剂，如粉针剂、溶液形注射剂等。

为了更好地理解本发明的实质，下面将用本发明的式(I)化合物与药物载体或赋形剂组成的药物的生物活性结果来说明它在医药领域中的应用。

MTT法细胞活性检测：

MTT全称为3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide，是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素C的作用下，生成蓝色(或蓝紫色)不溶于水的甲臜(Formazan)，甲臜的含量可以用酶标仪在570nm处进行测定。在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度OD值推测出活细胞的数目。

实验方法：

1.接种细胞：用含10％胎牛血清的培养液(DMEM或者RMPI1640)配成单个细胞悬液，以每孔10000-20000个细胞接种到96孔板，每孔体积100μl，贴壁细胞提前12小时接种培养。

2.加入待测化合物溶液(固定浓度40μM初筛，在该浓度对肿瘤细胞生长抑制在50％附近的化合物设5个浓度进入梯度复筛)，每孔终体积200μl，每种处理均设3个复孔。

3.显色：37摄氏度培养48小时后，每孔加MTT溶液20μl。继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液100μl以避免细胞丢失，每孔加20％的SDS 100μl，过夜孵育(温度37℃)，使结晶物充分融解。

4.比色：选择595nm波长，酶联免疫检测仪(Bio-Rad 680)读取各孔光吸收值，记录结果，以浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，应用两点法(Reed and Muench 法)计算化合物的IC50值。

实验结果：

化合物对不同肿瘤细胞株的半数生长抑制浓度IC50(μM)：

白血病：2.47肝癌：4.14肺癌：4.34

乳腺癌：8.45结肠癌：9.47

上述试验结果表明割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)具有显著抗肿瘤活性，具有十分重要的意义。

具体实施方式

下面结合实施例进一步对本发明的实质内容进行说明，但本发明的内容并不局限于此。

实施例1：

5.5kg云南割舌树(Walsura yunnanensis)，粉碎，乙醇溶剂室温下各提取三次，溶剂回收至干，称重得468g。进行硅胶柱层析，用石油醚/丙酮梯度洗脱。在石油醚-丙酮(3∶1)洗脱段得一组分。该组分进一步进行硅胶柱层析(氯仿-甲醇50∶1洗脱)和Sephadex LH-20柱层析(CHCl₃/MeOH 1∶1)得割舌树内酰胺A(WalsuralactamA)纯品32mg。

该方法分离出的化合物割舍树内酰胺A(Walsuralactam A)其化学结构式为：

分子量为437；分子式为C₂₆H₃₁NO₅； (c 0.13，MeOH)；白色粉末；易溶于甲醇、吡啶。

割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)的结构是基于它的质谱和核磁共振等波谱数据确定。

紫外光谱数据：UV(MeOH)λ_max：214，279nm.

红外光谱数据：IR v^KBr _max：3424，2969，2936，2873，1680，1628，1449，1414，1383，1357，1252，1032cm^-1.

质谱数据：MS(ESI⁺)：m/z(％)：438(100)[M+1]⁺，460(35)[M+Na]⁺；HR-ESI-MS：m/z：460.2102([M+Na]⁺，460.2099calcd for C₂₆H₃₁NO₅Na).

核磁共振波谱数据：

¹H NMR(C₅D₅N，500MHz)δ：10.46(1H，s，OH-6)，8.98(1H，s，CONH)，6.96(1H，d，J＝9.8Hz，H-1)，6.64(1H，s，H-22)，6.21(1H，d，J＝9.8Hz，H-2)，3.90(1H，s，H-15)，3.84(2H，s，H-23)，3.11(1H，m，H-17)，2.13(1H，dd，J＝13.5，6.6Hz，H-16a)，2.07(1H，m，H-16b)，1.82(3H，s，H-28)，1.79(3H，s，H-29)，1.19(6H，s，H-19and H-30)，0.97(3H，s，H-18).

¹³C NMR(C₅D₅N，125MHz)δ：203.9(s，C-3)，198.5(s，C-7)，174.5(s，C-21)，153.6(d，C-1)，143.9(s，C-6)，140.7(d，C-22)，139.1(s，C-20)，133.5(s，C-5)，127.2(d，C-2)，70.3(s，C-14)，55.4(d，C-15)，49.0(s，C-4)，48.1(s，C-8)，46.7(t，C-23)，43.8(d，C-9)，42.7(s，C-13)，42.5(d，C-17)，40.5(s，C-10)，36.0(t，C-12)，32.1(t，C-16)，27.1(q，C-28)，24.0(q，C-30)，23.6(q，C-18)，21.6(q，C-29)，20.2(q，C-19)，20.0(t，C-11).

HMBC(selected)：From δ_H 8.98(1H，s，CONH)toδ_C 174.5(s，C-21)，140.7(d，C-22)，139.1(s，C-20)and 46.7(t，C-23)；from δ_H 10.46(1H，s，OH-6)toδ_C 198.5(s，C-7)，143.9(s，C-6)，133.5(s，C-5))；from δ_H3.11(1H，m，H-17)toδ_C 174.5(s，C-21)，140.7(d，C-22)，139.1(s，C-20)，23.6(q，C-18)，42.7(s，C-13)and 32.1(t，C-16)；from δ_H 0.97(3H，s，H-18)to δ_C 70.3(s，C-14)，42.7(s，C-13)，36.0(t，C-12)；from δ_H 1.19(3H，s，H-30)to δ_C 198.5(s，C-7)，70.3(s，C-14)；fromδ_H 1.19(3H，s，H-19)toδ_C 153.6(d，C-1)，133.5(s，C-5)and fromδ_H 1.82(3H，s，H-28)toδ_C 21.6(q，C-29)，203.9(s，C-3)，133.5(s，C-5)and 49.0(s，C-4).

实施例2：

按实施例1制得化合物割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)，按化合物晶体与赋形剂重量比1∶1的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例3：

按实施例1制得化合物割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)，按常规胶囊制剂方法制成胶囊。

实施例4：

按实施例1制得化合物割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)，按化合物晶体与赋形剂重量比1∶2的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例5：

按实施例1制得化合物割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)，按化合物晶体与赋形剂重量比1∶3的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例6：

片剂：

实施例7：

胶囊剂：割舌树内酰胺A(Walsuralactam A) 100mg

淀粉 100mg

硬脂酸镁适量

制备方法：将割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)与助剂混合，过筛，在合适的容器中均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊。

实施例8：

安瓿剂：割舌树内酰胺A(Walsuralactam A) 50mg

制备方法：将割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)溶解于2毫升丙二醇中，过滤所得溶液在无菌条件下装入安瓿瓶中。

Claims

1.下述通式(I)代表的化合物：

2.权利要求1所述的式(I)化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：

取云南割舌树(Walsura yunnanensis)植物体，用乙醇或甲醇或氯仿和甲醇混合溶剂提取，所得提取物反复用硅胶和Sephedex LH-20柱层析分离，得割舌树内酰胺A(Walsuralactam A)。

3.用于治疗和预防肿瘤的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的式(I)化合物及载体。

4.权利要求1所述的式(I)化合物在制备治疗和预防肿瘤的药物中的应用。