CN102362637B - 利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法与应用 - Google Patents
利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102362637B CN102362637B CN2011103008393A CN201110300839A CN102362637B CN 102362637 B CN102362637 B CN 102362637B CN 2011103008393 A CN2011103008393 A CN 2011103008393A CN 201110300839 A CN201110300839 A CN 201110300839A CN 102362637 B CN102362637 B CN 102362637B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacteria suspension
- nest
- crude enzyme
- enzyme liquid
- bird
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开一种利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法与应用。该方法是将具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物制备的微生物活菌悬液或是将具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物制备的粗酶液中的一种或两种，与燕窝混合，振荡，洗涤燕窝，得到去除亚硝酸盐的燕窝。微生物活菌悬液为直接发酵得到或是使用活性干酵母悬浮于培养基得到；粗酶液为通过菌体破碎分离得到或是将粗酶干粉溶解于缓冲液得到。活性干酵母和粗酶干粉方便于贮存和使用，在食品的生产过程中与食用前均可使用。本发明采用具有食用安全的微生物及其粗酶液进行去除燕窝中亚硝酸盐，去除率可达99％以上。本发明安全、高效，可应用于去除其它腌制食中的亚硝酸盐。
Description
技术领域
本发明涉及一种去除燕窝中亚硝酸盐的方法，特别涉及一种利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法与应用，属于生物技术领域。
背景技术
燕窝是雨燕科(Apodidae)金丝燕属(Collocalia)的多种鸟类分泌出的唾液与绒羽、杂草等粘结而筑成的巢窝，经去除绒羽、杂草等杂质即为商品燕窝。现代研究表明，燕窝不仅可作为补充蛋白质、氨基酸的滋补品，而且含有一些活性蛋白，具有抑制血凝、促进细胞分裂、延缓脑组织衰老、提高免疫等功效。因此，燕窝是家喻户晓的药食两用高级滋补品，常用于补肺养阴、补中益气、润燥泽枯、化痰止咳，主治肺痨、咳嗽、咯血、虚损、痰喘等症。
在鸟类筑巢、毛燕窝除杂、商品燕窝贮存等过程中，难免与一些微生物接触，由于微生物对燕窝中蛋白质、氨基酸的分解代谢作用，会产生亚硝酸盐，以致燕窝含有一定量的亚硝酸盐。我国《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》(GB2760-2011)严格规定，亚硝酸盐的限量为30mg/kg，但是，在毛燕窝制作为商品燕窝的传统生产中，燕窝中的亚硝酸盐往往会超过国家标准。因此，在燕窝生产过程中或在燕窝食用前，需去除亚硝酸盐。
如果采用简单的浸泡或超声波清洗技术进行去除燕窝中亚硝酸盐，往往去除不彻底，去除率最多不超过50％；如果采用化学方法进行去除燕窝中亚硝酸盐，往往会有化学药品残留问题。
目前，未有生物法去除燕窝中亚硝酸盐的相关报道。
发明内容
本发明首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，使亚硝酸盐去除过程具有安全性与高效性。
本发明的另一目的在于提供所述的利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕 窝中亚硝酸盐的方法的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，是将具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物制备的微生物活菌悬液或是将具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物制备的粗酶液中的一种或两种，与燕窝混合，振荡处理，洗涤燕窝，得到去除亚硝酸盐的燕窝；
所述的具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物优选为粘红酵母或深红酵母中的一种或两种；
所述的粘红酵母优选为粘红酵母CICC31229(中国工业微生物菌种保藏中心)；
所述的深红酵母优选为深红酵母CICC32918(中国工业微生物菌种保藏中心)；
所述的微生物活菌悬液为对微生物直接培养得到的微生物活菌悬液或是将冻干保存的微生物悬浮于培养基中得到的微生物活菌悬液；
所述的粗酶液优选通过如下步骤制备得到：将具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物进行超声波破碎细胞，低温离心，去除菌体，得到上清液即为粗酶液；由于具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物含有能降解亚硝酸盐的酶，低温离心，能有效保存能降解亚硝酸盐的酶的活性，因此，将此粗酶液与燕窝混合，经振荡处理，可有效去除燕窝中的亚硝酸盐；
所述的超声波破碎的条件优选为功率200～250w、超声10s、间歇10s、超声60～120次；
所述的振荡处理的条件优选为28～32℃、150～250r/min振荡1～9h；
所述的利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，更优选包含以下步骤：
(1)培养基的制备：将麦芽汁的pH值调节为4.0～4.5，灭菌，得到培养基；
(2)制备活菌悬液：活菌悬液为通过直接培养制备得到活菌悬液或是采用活性干酵母制备得到活菌悬液；
直接培养制备得到活菌悬液的步骤如下：将具有去除亚硝酸能力的粘红酵母或深红酵母接入步骤(1)制备的培养基中，培养至对数期，得到活菌悬液；
采用活性干酵母制备得到活菌悬液的步骤如下：将直接培养所得的活菌悬液进行低温离心分离菌体，收集湿菌体，加入冻干保护剂，真空冷冻干燥，获得活性干酵母；使用时，将活性干酵母投入步骤(1)所得的培养基中，得到活 菌悬液；
(3)制备粗酶液：粗酶液为破碎菌体制备得到粗酶液或是将粗酶干粉投入缓冲液制备得到粗酶液；
破碎菌体制备得到粗酶液的步骤如下：将步骤(2)制备的活菌悬液进行低温离心分离菌体，收集湿菌体，加入0.05～0.1mol/L、pH3.5～4.0磷酸盐缓冲溶液，重新配制成活菌悬液，置于冰水浴中，超声波破碎细胞，破碎后进行低温离心分离菌体碎片，收集上清液，得到粗酶液；
将粗酶干粉投入缓冲液制备得到粗酶液的步骤如下：在破碎菌体制备得到的粗酶液中加入饱和度100％的氯化钠溶液，得到40％～70％饱和度的氯化钠溶液，静置，收集盐析沉淀物，加入冻干保护剂，真空冷冻干燥，获得粗酶干粉；使用时，将粗酶干粉投入0.05～0.1mol/L的pH3.5～4.0磷酸盐缓冲溶液中，配制粗酶液；
(4)燕窝中亚硝酸盐的去除：将燕窝投入步骤(2)制备的活菌悬液或步骤(3)制备的粗酶液中，置于28～32℃、150～250r/min下进行振荡处理1～9h，然后取出燕窝，用纯净水漂洗，风干，即得亚硝酸盐不超标的燕窝。
步骤(1)中所述的麦芽汁优选为10°～12°Brix的麦芽汁；
步骤(1)中所述的灭菌的条件优选为121～125℃灭菌10～20min；
步骤(2)中所述的具有去除亚硝酸能力的粘红酵母优选CICC31229(中国工业微生物菌种保藏中心)、深红酵母优选CICC32918(中国工业微生物菌种保藏中心)；
步骤(2)中所述的活菌悬液优选为活酵母数达1.0×107个/mL以上的活菌悬液；
步骤(2)中所述的直接培养的步骤优选如下：将具有去除亚硝酸能力的粘红酵母或深红酵母接入步骤(1)制备的培养基，采用好氧培养方式于28～32℃培养20～24h，使培养液中活酵母数达1.0×107个/mL以上，得到活菌悬液；
所述的具有去除亚硝酸能力的粘红酵母或深红酵母接入步骤(1)制备的培养基的操作优选为：在摇瓶培养基接入斜面菌种，接种量为1～2环/100mL，培养至对数期，得到摇瓶种子液；在进行发酵培养时，在发酵罐培养基中接入摇瓶种子液，接种量为体积百分比1％～10％；
所述的好氧培养可以是摇瓶振荡培养，条件为装液量为体积百分比20％，转速为150～250r/min；也可以是发酵罐通气培养，条件为搅拌转速为100～400r/min，通气比为1∶0.2～1.5；
步骤(2)和(3)中所述的低温离心分离菌体的条件优选为4℃、6000～8000r/min离心20～30min；
步骤(2)中所述的冻干保护剂优选山梨醇单硬脂酸酯、蔗糖硬脂酸二酯等，其用量按质量百分比计，为湿菌体的5～20％；更优选为5～15％
步骤(2)和步骤(3)中所述的真空冷冻干燥的条件优选为：预冻温度为-40℃～-30℃，真空条件为1.3～13Pa，干燥过程温度为-40℃～30℃，干燥时间为24～36h；
步骤(3)中所述的活菌悬液优选为活酵母数达1.0×107个/mL以上的活菌悬液；
步骤(3)中所述的静置的条件优选为4～6℃静置2～4h；
步骤(3)中所述的收集盐析沉淀物的方式优选为离心；
所述的离心的转速优选为8000r/min；
步骤(3)中所述的超声波破碎细胞的优选条件为功率200～250w、超声10s、间歇10s、超声60～120次；
步骤(3)中所述的将粗酶干粉投入缓冲液制备得到粗酶液的步骤优选如下：在破碎菌体制备得到的粗酶液中加入饱和度100％的氯化钠溶液，得到40％～70％饱和度的氯化钠溶液，静置，收集盐析沉淀物，加入相当于盐析沉淀物质量5％～15％的冻干保护剂，真空冷冻干燥，获得粗酶干粉；使用时，将粗酶干粉投入0.05～0.1mol/L的pH3.5～4.0磷酸盐缓冲溶液中，配制30～50g/L的粗酶液；
所述的冻干保护剂优选山梨醇单硬脂酸酯、蔗糖硬脂酸二酯等；
步骤(4)中所述的活菌悬液或粗酶液的量优选为不超过50g/L(燕窝/活菌悬液或粗酶液)；
步骤(4)中所述的纯净水漂洗的用水量为活菌悬液或粗酶液的1～3倍体积；
步骤(4)中所述的风干的温度优选为40℃以下的温度。
所述的利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法可应用于去除腌制食品中的亚硝酸盐。
从食品安全性考虑，本发明采用了具有食用安全的微生物及其粗酶液进行去除燕窝中亚硝酸盐，去除率可达99％以上。由于本发明所涉及的亚硝酸盐去除技术具有安全性、高效性，不但可应用于燕窝，而且可以推广应用于其它腌制食品。
本发明相对于现有技术具有如下的优点：
(1)本发明采用微生物活菌悬液与粗酶液去除燕窝中的亚硝酸盐，具有安 全性与高效性，取得了非常显著的效果，可推广应用于去除其它腌制食品中的亚硝酸盐。
(2)本发明所制备的活性干酵母与粗酶干粉，方便于贮存和使用，在食品的生产过程中与食用前均可使用。
附图说明
图1是为本发明的亚硝酸盐去除流程示意图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
采用微生物活菌悬液去除燕窝中的亚硝酸盐，其过程如图1所示：
(1)培养基的制备
将200mL麦芽汁(10°Brix)调节pH4.5，装入1000mL三角瓶，纱布包扎瓶口，经125℃灭菌10min，冷却后备用。
(2)直接培养制备活菌悬液
将粘红酵母CICC31229(购于中国工业微生物菌种保藏中心)斜面菌种接入培养基，接种量为2环(接种环直径0.6mm)，置于28℃、150r/min培养24h，得酵母数为2.57×107个/mL的活菌悬液。
(3)燕窝中亚硝酸盐的去除
将2g燕窝(市售，原产马来西亚，采用酸水解处理样品、氨基酸自动分析仪测得燕窝的水解氨基酸含量为48.4％(质量百分比)，采用盐酸N-(1-萘)-乙二胺光度法测得燕窝的亚硝酸盐含量为72μg/g)投入步骤(2)制备的活菌悬液200mL，置于28℃、150r/min振荡1h，取出燕窝，用200mL纯净水漂洗10min，于35℃下风干，测得燕窝的水解氨基酸含量为48.4％(质量百分比)，亚硝酸盐含量为0.5μg/g，亚硝酸盐去除率达99.3％，经处理后的燕窝中亚硝酸盐含量小于国家限量标准。
实施例2
采用微生物活菌悬液去除燕窝中的亚硝酸盐，其过程如图1所示：
(1)培养基的制备
将200mL麦芽汁(12°Brix)调节pH4.0，装入1000mL三角瓶，纱布包扎 瓶口，经125℃灭菌20min，冷却后备用。
(2)直接培养制备活菌悬液
将深红酵母CICC32918(购于中国工业微生物菌种保藏中心)斜面菌种接入培养基，接种量为4环(接种环直径0.6mm)，置于28℃、150r/min培养24h，得酵母数为1.97×107个/mL的活菌悬液。
(3)燕窝中亚硝酸盐的去除
将10g燕窝(市售，原产马来西亚，采用酸水解处理样品、氨基酸自动分析仪测得燕窝的水解氨基酸含量为48％(质量百分比)，采用盐酸N-(1-萘)-乙二胺光度法测得燕窝的亚硝酸盐含量为124μg/g)投入200mL活菌悬液，置于32℃、250r/min振荡2h，取出燕窝，用200mL纯净水漂洗10min，于38℃下风干，测得燕窝的水解氨基酸含量为47.6％(质量百分比)，亚硝酸盐含量为0.6μg/g，亚硝酸盐去除率达99.5％，经处理后的燕窝中亚硝酸盐含量小于国家限量标准。
实施例3
采用微生物活菌悬液去除燕窝中的亚硝酸盐，其过程如图1所示：
(1)培养基的制备
将2970mL麦芽汁(12°Brix)调节pH4.0，装入5L发酵罐，经121℃灭菌15min，冷却后备用。
(2)活性干酵母制备活菌悬液
摇瓶种子培养：将100mL麦芽汁(12°Brix)调节pH4.0，装入500mL三角瓶，纱布包扎，125℃灭菌10min，冷却后，接入1环(接种环直径0.6mm)粘红酵母CICC31229(购于中国工业微生物菌种保藏中心)斜面菌种，置于30℃、200r/min培养20h，即得粘红酵母摇瓶种子液。
发酵罐培养：将30mL粘红酵母种子液接入发酵罐培养基中，培养温度控制30℃，搅拌转速控制100～400r/min，通气比控制1∶0.2～1.5，发酵20h，得到酵母数为7.5×107个/mL的活菌悬液。
活性干酵母的制备：将上述活菌悬液于4℃、6000r/min离心分离菌体，得到湿菌体60g，加入山梨醇单硬脂酸酯12g，拌匀，置于-30℃预冻2h，于1.3～13Pa、-30℃～30℃干燥24h，得到活性干酵母67.2g，备用。
活菌悬液的制备：称取粘红酵母的活性干酵母50g，投入到200mL麦芽汁(12°Brix，pH4.0，经121℃灭菌15min)中，配制成酵母数为8.35×108个/mL的活菌悬液。
(3)燕窝中亚硝酸盐的去除
将8g燕窝(市售，原产马来西亚，水解氨基酸含量为47.6％(质量百分比)，亚硝酸盐含量为1253μg/g)投入200mL活菌悬液，置于30℃、250r/min振荡9h，取出燕窝，用600mL纯净水漂洗10min，于30℃下风干，测得燕窝的水解氨基酸含量为46.4％(质量百分比)，亚硝酸盐含量为7.2μg/g，亚硝酸盐去除率达99.4％，经处理后的燕窝中亚硝酸盐含量小于国家限量标准。
实施例4
采用粗酶液去除燕窝中的亚硝酸盐，其过程如图1所示：
(1)培养基的制备
将2000mL麦芽汁(11°Brix)调节pH4.0，分装入10个1000mL三角瓶中，每瓶装液量200mL，纱布包扎瓶口，经121℃灭菌20min，冷却后备用。
(2)直接制备粗酶液
摇瓶培养：将深红酵母CICC32918(购于中国工业微生物菌种保藏中心)斜面菌种接入培养基，每瓶接2环(接种环直径0.6mm)，置于30℃、200r/min培养24h，然后将10瓶培养液混合，得到酵母数为5.28×107个/mL的活菌悬液。
粗酶液的制备：将上述活菌悬液于4℃、8000r/min离心分离菌体，得到26.5g湿菌体，加入0.05mol/L的pH4.0磷酸盐缓冲溶液200mL，重新配制成5.11×108个/mL的活菌悬液，置于冰水浴中，采用超声波进行细胞破碎，超声波频率为20KHz，超声波功率为200w，超声10s、间歇10s、超声60次，然后置于4℃、6000r/min离心分离菌体碎片，收集上清液，得到粗酶液180mL。
(3)燕窝中亚硝酸盐的去除
将9g燕窝(市售，原产马来西亚，采用酸水解处理样品、氨基酸自动分析仪测得燕窝的水解氨基酸含量为48.2％(质量百分比)，采用盐酸N-(1-萘)-乙二胺光度法测得燕窝的亚硝酸盐含量为94μg/g)投入180mL粗酶液中，置于30℃、200r/min培养2h，取出燕窝，用360mL纯净水漂洗10min，于25℃下风干，测得燕窝的水解氨基酸含量为48.1％(质量百分比)，亚硝酸盐含量为0.5μg/g，亚硝酸盐去除率达99.5％，经处理后的燕窝中亚硝酸盐含量小于国家限量标准。
实施例5
采用粗酶液去除燕窝中的亚硝酸盐，其过程如图1所示：
(1)培养基的制备
将5400mL麦芽汁(12°Brix)调节pH4.0，装入10L发酵罐，经125℃灭菌15min，冷却后备用。
(2)粗酶干粉制备粗酶液
摇瓶种子培养：将600mL麦芽汁(12°Brix)调节pH4.0，分装入三个1000mL三角瓶，纱布包扎，121℃灭菌20min，冷却后，每瓶接入1环(接种环直径0.6mm)粘红酵母CICC31229(购于中国工业微生物菌种保藏中心)斜面菌种，置于30℃、200r/min培养24h，即得粘红酵母摇瓶种子液。
发酵罐培养：将600mL粘红酵母种子液接入发酵罐培养基中，培养温度控制30℃，搅拌转速控制100～400r/min，通气比控制1∶0.2～1.5，发酵24h，得到酵母数为7.21×107个/mL的活菌悬液。
粗酶干粉的制备：将上述活菌悬液于4℃、8000r/min离心分离菌体，得到湿菌体112g，加入0.1mol/L的pH3.5的磷酸盐缓冲溶液400mL，重新配制成7.02×109个/mL的活菌悬液；将活菌悬液置于冰水浴中，采用超声波进行细胞破碎，超声波频率为20KHz，超声波功率为250w，超声10s、间歇10s、超声120次，然后置于4℃、6000r/min离心分离菌体碎片，收集上清液，得到粗酶液300mL；将700mL饱和度100％的氯化钠溶液加入300mL粗酶液中，混合均匀，在4℃下静置2h，然后置于8000r/min下离心分离，得到盐析沉淀物60g；将60g盐析沉淀物与9g蔗糖硬脂酸二酯混合均匀，置于-40℃预冻2h，于1.3～13Pa、-40℃～30℃干燥36h，得到粗酶干粉28g，备用。
粗酶液的制备：称取10g粗酶干粉，投入到200mL的0.05mol/L的pH3.5磷酸盐缓冲溶液中，配制成浓度为50g/L的粗酶液，备用。
(3)燕窝中亚硝酸盐的去除
将10g燕窝(市售，原产马来西亚，采用酸水解处理样品、氨基酸自动分析仪测得燕窝的水解氨基酸含量为46.5％(质量百分比)，采用盐酸N-(1-萘)-乙二胺光度法测得燕窝的亚硝酸盐含量为420μg/g)投入200mL粗酶液中，置于30℃、200r/min振荡6h，取出燕窝，用600mL纯净水漂洗10min，于30℃下风干，测得燕窝的水解氨基酸含量为46.4％(质量百分比)，亚硝酸盐含量为0.3μg/g，亚硝酸盐去除率达99.9％，经处理后的燕窝中亚硝酸盐含量小于国家限量标准。
实施例6
采用粗酶液去除燕窝中的亚硝酸盐，其过程如图1所示：
(1)培养基的制备
将2850mL麦芽汁(12°Brix)调节pH4.5，装入5L发酵罐，经121℃灭菌15min，冷却后备用。
(2)粗酶干粉制备粗酶液
摇瓶种子培养：将150mL麦芽汁(12°Brix)调节pH4.5，装入1000mL三角瓶，纱布包扎，121℃灭菌20min，冷却后，每瓶接入1环(接种环直径0.6mm)深红酵母CICC32918(购于中国工业微生物菌种保藏中心)斜面菌种，置于30℃、200r/min培养24h，即得深红酵母摇瓶种子液。
发酵罐培养：将150mL深红酵母种子液接入发酵罐培养基中，培养温度控制30℃，搅拌转速控制100～400r/min，通气比控制1∶0.2～1.5，发酵20h，得到酵母数为7.08×107个/mL的活菌悬液。
粗酶干粉的制备：将上述活菌悬液于4℃、6000r/min离心分离菌体，得到湿菌体56g，加入0.05mol/L的pH4.0磷酸盐缓冲溶液300mL，重新配制成7.05×108个/mL的活菌悬液；将活菌悬液置于冰水浴中，采用超声波进行细胞破碎，超声波频率为20KHz，超声波功率为200w，超声10s、间歇10s、超声90次，然后置于4℃、4000r/min离心分离菌体碎片，收集上清液，得到粗酶液240mL；将160mL饱和度100％的氯化钠溶液加入240mL粗酶液中，混合均匀，在6℃下静置4h，然后置于8000r/min下离心分离，得到盐析沉淀物26g；将26g盐析沉淀物与3g蔗糖硬脂酸二酯混合均匀，置于-40℃预冻2h，于1.3～13Pa、-40℃～30℃干燥36h，得到粗酶干粉11.2g，备用。
粗酶液的制备：称取6g粗酶干粉，投入到200mL的0.1mol/L的pH4.0磷酸盐缓冲溶液中，配制成浓度为30g/L的粗酶液，备用。
(3)燕窝中亚硝酸盐的去除
将5g燕窝(市售，原产马来西亚，采用酸水解处理样品、氨基酸自动分析仪测得燕窝的水解氨基酸含量为47.4％(质量百分比)，采用盐酸N-(1-萘)-乙二胺光度法测得燕窝的亚硝酸盐含量为64μg/g)投入200mL粗酶液中，置于30℃、200r/min振荡2h，取出燕窝，用400mL纯净水漂洗10min，于35℃下风干，测得燕窝的水解氨基酸含量为47.3％(质量百分比)，亚硝酸盐含量为0.6μg/g，亚硝酸盐去除率达99.1％，经处理后的燕窝中亚硝酸盐含量小于国家限量标准。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，其特征在于：是将具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物制备的微生物活菌悬液或是将具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物制备的粗酶液中的一种或两种，与燕窝混合，振荡处理，洗涤燕窝，得到去除亚硝酸盐的燕窝；
所述的具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物为粘红酵母或深红酵母中的一种或两种；
所述的粘红酵母为粘红酵母CICC31229；
所述的深红酵母为深红酵母CICC32918。
2.根据权利要求1所述利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，其特征在于：所述的粗酶液通过如下步骤制备得到：将具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物进行超声波破碎细胞，低温离心，去除菌体，得到上清液即为粗酶液。
3.根据权利要求2所述利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，其特征在于：所述的超声波破碎的条件为功率200~250w、超声10s、间歇10 s、超声60~120次；
所述的振荡处理的条件为28~32℃、150~250r/min振荡1~9h。
4.根据权利要求1所述利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，其特征在于：所述的利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，包含以下步骤：
（1）培养基的制备：将麦芽汁的pH值调节为4.0~4.5，灭菌，得到培养基；
（2）制备活菌悬液：活菌悬液为通过直接培养制备得到活菌悬液或是采用活性干酵母制备得到活菌悬液；
直接培养制备得到活菌悬液的步骤如下：将具有去除亚硝酸能力的粘红酵母或深红酵母接入步骤（1）制备的培养基中，培养至对数期，得到活菌悬液；
采用活性干酵母制备得到活菌悬液的步骤如下：将直接培养所得的活菌悬液进行低温离心分离菌体，收集湿菌体，加入冻干保护剂，真空冷冻干燥，获得活性干酵母；使用时，将活性干酵母投入步骤（1）所得的培养基中，得到活菌悬液；
（3）制备粗酶液：粗酶液为破碎菌体制备得到粗酶液或是将粗酶干粉投入缓冲液制备得到粗酶液；
破碎菌体制备得到粗酶液的步骤如下：将步骤（2）制备的活菌悬液进行低温离心分离菌体，收集湿菌体，加入0.05~0.1mol/L、pH3.5~4.0磷酸盐缓冲溶液，重新配制成活菌悬液，置于冰水浴中，超声波破碎细胞，破碎后进行低温离心分离菌体碎片，收集上清液，得到粗酶液；
将粗酶干粉投入缓冲液制备得到粗酶液的步骤如下：在破碎菌体制备得到的粗酶液中加入饱和度100%的氯化钠溶液，得到40%~70%饱和度的氯化钠溶液，静置，收集盐析沉淀物，加入冻干保护剂，真空冷冻干燥，获得粗酶干粉；使用时，将粗酶干粉投入0.05~0.1mol/L的pH3.5~4.0磷酸盐缓冲溶液中，得到粗酶液；
（4）燕窝中亚硝酸盐的去除：将燕窝投入步骤（2）制备的活菌悬液或步骤（3）制备的粗酶液中，置于28~32℃、150~250r/min下进行振荡处理1~9h，然后取出燕窝，用纯净水漂洗，风干，即得亚硝酸盐不超标的燕窝。
5.根据权利要求4所述利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的将粗酶干粉投入缓冲液制备得到粗酶液的步骤如下：在破碎菌体制备得到的粗酶液中加入饱和度100%的氯化钠溶液，得到40%~70%饱和度的氯化钠溶液，静置，收集盐析沉淀物，加入相当于盐析沉淀物质量5%~15%的冻干保护剂，真空冷冻干燥，获得粗酶干粉；使用时，将粗酶干粉投入0.05~0.1mol/L的pH3.5~4.0磷酸盐缓冲溶液中，配制30~50g/L的粗酶液。
6.根据权利要求4所述利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的麦芽汁为10°~12°Brix的麦芽汁；
步骤（1）中所述的灭菌的条件为121~125℃灭菌10~20min；
步骤（2）中所述的活菌悬液为活酵母数达1.0×107个/mL以上的活菌悬液；
步骤（2）中所述的直接培养的步骤如下：将具有去除亚硝酸能力的粘红酵母或深红酵母接入步骤（1）制备的培养基，采用好氧培养方式于28~32℃培养20~24h，使培养液中活酵母数达1.0×107个/mL以上，得到活菌悬液；
步骤（2）和（3）中所述的低温离心分离菌体的条件为4℃、6000~8000 r/min离心20~30min；
步骤（2）和（3）中所述的冻干保护剂为山梨醇单硬脂酸酯或蔗糖硬脂酸二酯；
步骤（2）和步骤（3）中所述的真空冷冻干燥的条件为：预冻温度为-40℃~ -30℃，真空条件为1.3~13Pa，干燥过程温度为-40℃~30℃，干燥时间为24~36h；
步骤（3）中所述的活菌悬液为活酵母数达1.0×107个/mL以上的活菌悬液；
步骤（3）中所述的静置的条件为4~6℃静置2~4h；
步骤（3）中所述的收集盐析沉淀物的方式为离心；
步骤（3）中所述的超声波破碎细胞的条件为功率200~250w、超声10s、间歇10 s、超声60~120次；
步骤（4）中所述的风干的温度为40℃以下的温度。
7.根据权利要求5所述利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的好氧培养为摇瓶振荡培养或是发酵罐通气培养；摇瓶振荡培养的条件为装液量为体积百分比20%，转速为150~250r/min；发酵罐通气培养的条件为搅拌转速为100~400 r/min，通气比为1:0.2~1.5。
8.权利要求1～7任一项所述利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法的应用，其特征在于：将所述利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法用于去除腌制食品中亚硝酸盐。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011103008393A CN102362637B (zh) | 2011-09-30 | 2011-09-30 | 利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011103008393A CN102362637B (zh) | 2011-09-30 | 2011-09-30 | 利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102362637A CN102362637A (zh) | 2012-02-29 |
| CN102362637B true CN102362637B (zh) | 2013-03-13 |
Family
ID=45689256
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2011103008393A Active CN102362637B (zh) | 2011-09-30 | 2011-09-30 | 利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102362637B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107405365A (zh) * | 2015-02-03 | 2017-11-28 | 森田敦子 | 以金丝燕燕窝为原料制作的材料、组分及材料的制作方法 |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103815210B (zh) * | 2012-11-16 | 2016-12-21 | 香港科技大学 | 抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的方法 |
| SG10201601905RA (en) | 2016-03-11 | 2017-10-30 | Kah Meng Lim | Extract And Method of Extraction |
| CN106213504A (zh) * | 2016-07-08 | 2016-12-14 | 青岛正典生物科技有限公司 | 一种多阶段低温灭菌即食燕窝生产方法 |
| CN108175093A (zh) * | 2018-01-18 | 2018-06-19 | 浙江燕宝丽堂电子商务有限公司 | 一种燕窝阿胶糕 |
| CN108175092A (zh) * | 2018-01-18 | 2018-06-19 | 浙江燕宝丽堂电子商务有限公司 | 一种燕窝阿胶块 |
| CN108391739A (zh) * | 2018-01-19 | 2018-08-14 | 浙江燕宝丽堂电子商务有限公司 | 一种燕窝白咖啡 |
| CN109549203A (zh) * | 2018-12-03 | 2019-04-02 | 沈华伟 | 一种脱除燕窝中亚硝酸盐的方法 |
| CN109549202A (zh) * | 2018-12-03 | 2019-04-02 | 沈华伟 | 一种低亚硝酸盐含量的绿色安全燕窝 |
| CN109549201A (zh) * | 2018-12-03 | 2019-04-02 | 沈华伟 | 用于降低燕窝亚硝酸盐含量的活化液 |
| CN111693687B (zh) * | 2020-05-28 | 2021-09-17 | 长沙都正生物科技股份有限公司 | 一种生物阴性样本、生物标准品的制备方法及tmao检测方法 |
| US20230046446A1 (en) * | 2021-07-28 | 2023-02-16 | Quan Hong Bui | Microbial composition and microorganism-based method of manufacturing and treating of animal farms using of the same |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101333499B (zh) * | 2008-05-13 | 2010-06-09 | 昆山工研院华科生物高分子材料研究所有限公司 | 复合型活菌生物净水剂及其制备方法 |
| CN101597598A (zh) * | 2009-07-21 | 2009-12-09 | 上海应用技术学院 | 亚硝酸盐还原酶的制备方法及其酶制品 |
| CN101692880A (zh) * | 2009-10-09 | 2010-04-14 | 江苏大学 | 一种脱除燕窝中亚硝酸盐的方法 |
-
2011
- 2011-09-30 CN CN2011103008393A patent/CN102362637B/zh active Active
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107405365A (zh) * | 2015-02-03 | 2017-11-28 | 森田敦子 | 以金丝燕燕窝为原料制作的材料、组分及材料的制作方法 |
| CN107405365B (zh) * | 2015-02-03 | 2021-06-01 | 森田敦子 | 以金丝燕燕窝为原料制作的材料、组分及材料的制作方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102362637A (zh) | 2012-02-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102362637B (zh) | 利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法与应用 | |
| CN103689644B (zh) | 一种清凉型发酵香肠及其制备方法 | |
| CN102028091B (zh) | 一种纳豆菌发酵法制备低分子鱼肽的方法 | |
| CN105053940B (zh) | 一种糟辣椒及其制备方法 | |
| CN104431090A (zh) | 一种红茶菌的生产方法及其产品 | |
| CN105558897A (zh) | 一种臭鳜鱼的制作方法 | |
| CN109832617A (zh) | 一种橘皮发酵制品及其制备方法 | |
| CN105614614B (zh) | 一种活性乳酸菌发酵饮料及其制备方法 | |
| CN113151040B (zh) | 一种增香型直投式发酵剂及其制备方法与应用 | |
| CN105054124B (zh) | 一种发酵型半干红糟鱼及其加工方法与应用 | |
| CN104522798B (zh) | 一种发酵磷虾饮料及其制作方法 | |
| CN103952266B (zh) | 一种龙眼烧酒的制备方法 | |
| CN109528932A (zh) | 一种益生菌石斛花的加工方法 | |
| CN109234199A (zh) | 一种含有白酒发酵过程原料的己酸菌培养基及其应用 | |
| CN105199928A (zh) | 一种利用毕赤氏酵母生产调香液的方法 | |
| CN113151023A (zh) | 一种增香型直投式发酵剂及其制备方法与应用 | |
| CN105543141B (zh) | 一种降胆固醇菌制剂及其制备方法和用途 | |
| CN104450398B (zh) | 一种高γ‑氨基丁酸梨酒的酿造方法 | |
| CN105670950A (zh) | 葡萄酒直投式发酵剂、其制备方法及葡萄酒的发酵方法 | |
| CN107916194A (zh) | 一种以黑糖和羊奶果制备羊奶果发酵酒的方法 | |
| CN113397144B (zh) | 蚝汁及其制备方法 | |
| CN106381274B (zh) | 一种巴氏葡萄球菌及其制备的发酵酱卤猪蹄和制备方法 | |
| CN103005488A (zh) | 动物血腐乳的制备 | |
| CN109393079A (zh) | 一种金花茶的散茶发花工艺 | |
| CN105166746B (zh) | 一种短梗五加营养果粒的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |