CN102337042A

CN102337042A - 甘草色素的制备方法

Info

Publication number: CN102337042A
Application number: CN2011102100655A
Authority: CN
Inventors: 杨永安; 季浩; 陈月红; 钟慧; 金显友; 易铭
Original assignee: Jiangsu Tiansheng Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Tiansheng Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2011-07-26
Filing date: 2011-07-26
Publication date: 2012-02-01

Abstract

本发明提供了一种甘草色素及其制备方法，本制备方法以中药甘草为原料，经提取、碱化反应除杂、萃取、浓缩干燥等一系列步骤组成。制得的甘草色素含量高、脂溶性好。以甘草色素为原料，可以进一步将本品制成药物制剂、功能性食品添加剂等，具有抗菌消炎、抗病毒的功效。本发明提供的甘草色素制备方法的工艺新颖，稳定性好，适合工业化生产，具有很强的实用性。

Description

甘草色素的制备方法

技术领域

本发明涉及一种甘草色素的制备方法，属于医药领域范畴。

背景技术

甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草G.inflata Bat.、或光果甘草G.glabra L.的根及根茎，主产于内蒙古、新疆、甘肃等地。甘草入药已有悠久历史，《神农本草经》就将其列为药之上乘，古代医学家尊称其为“国老”。由于其资源珍贵，被国家列入国家二级保护野生药材。甘草化学成分种类较多，主要含三萜类皂苷类、黄酮类、色素类、生物碱、多糖等成分。以甘草入药开发的制剂很多，临床上得到了较广泛的应用，主要用于肝病、呼吸道疾病、胃病等方面的治疗。近年来，随着中药分离纯化水平的提高，甘草酸、甘草黄酮、甘草多糖等成分的相继被开发出来并得到了广泛的应用。

甘草色素是一种由甘草中部分多酚类、黄酮类及少量皂苷类成分组成的天然色素，为黄色至棕黄色粉末，味甜。具有良好的着色性。发明人经过大量研究表明，甘草色素除了具有良好的着色、调味的功能之外，还具有显著的抗菌、消炎抗病毒的功效。同时，由于甘草色素是天然色素类成分，具有安全、毒副作用极小的优点。因此，运用现代中药技术，开发生产出甘草色素，在医药保健方面将会具有良好的应用前景。

本发明目的在于运用中药现代化分离纯化技术，从甘草中制备生产出具有显著药理活性的甘草色素，并广泛应用于医药、食品等行业，拥有很好的应用前景，具有很强的实用性。

在已经公开的文献与专利中，还没有与本发明相关或类似的报道。

发明内容

本发明采用中药现代化提取分离技术及合成技术，从中药甘草中制备生产出具有良好抗菌消炎功效的甘草色素，将原本作为废弃物的甘草色素类成分开发成具有很好应用前景的新产品，提高了甘草的综合利用价值，扩大了甘草的应用范围。

根据本发明的比较优选的实施方案，从甘草中生产制备甘草色素的方法包括如下步骤：

(1)取甘草药材，粉碎成粗粉，加入有机溶剂适量，加热或浸泡提取数次，合并提取液，将提取液浓缩至一定体积，得到浓缩液；

(2)将浓缩液加热至一定温度，在搅拌状态下，加入一定浓度的碱性水溶液，保温反应一定时间，停止搅拌。

(3)反应液放冷至室温，分层后，分取有机溶剂层。有机溶剂层中加入一定体积的水继续萃取几次，分取有机溶剂层。

(4)取有机溶剂层，浓缩，干燥，即得甘草色素。

上述步骤(1)中所述的“有机溶剂”是指乙酸乙酯、正丁醇、异丙醚等有机溶剂。由于甘草色素是一类小极性成分，易溶于有机溶剂，难溶于水，因此选择适当的有机溶剂可以将甘草色素充分提取出来；提取溶剂的用量是甘草重量的4～10倍量，优选为8倍量；提取次数为1到3次，优选为2次；提取时间为每次提取1～3小时，优选为2小时；提取方法可以采用加热回流提取或浸泡提取两种方式，优选浸泡提取，提取温度为30～80℃，优选为60℃。

步骤(2)中反应液的温度为35～60℃，优选为50℃；所加入碱性水溶液是指氨水溶液、氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、碳酸钠水溶液、碳酸钾水溶液，优选为氨水溶液；溶液中碱的浓度为0.1％～5％，优选为0.5％。由于在步骤(1)的有机溶剂提取过程中，不但可以将甘草色素充分提取出来，而且可以将部分甘草酸类成分提取出来，因此本步骤通过加入一定的浓度的碱性溶液将溶液中的甘草酸反应生成甘草酸盐类成分，不但可以将甘草酸类等成分单独分离出来，而且同时也是对甘草色素类成分进行纯化。根据甘草酸的性质，对其反应成盐的温度时间及温度进行了考察研究，结果表明适合的反应温度为为35～60℃，最佳的反应温度为50℃；反应时间为0.5～4小时，优选1.5小时。

步骤(3)中加入水的量为有机溶剂体积的0.2～2倍量，优选为1倍量，萃取次数为1～3次，优选2次。本步骤是运用萃取的原理，将有机层中的甘草酸盐等大极性水溶性成分充分萃取分离，达到对甘草色素进一步的纯化目的。

步骤(4)中，浓缩的方式可以是减压浓缩或常压浓缩，优选为减压浓缩；干燥的方式可以是减压干燥、喷雾干燥或沸腾干燥，优选为沸腾干燥。

根据上述技术方案，采用科学可行的方法将中药甘草经提取、反应除杂、萃取吸附除杂、干燥等一系列步骤，制成了脂溶性好、纯度高的甘草色素，含量范围为75％～95％。以本发明所制备的甘草色素为原料，可以进一步加入适当的辅料，将本品制成各种适合于临床应用的制剂，包括片剂、胶囊、滴丸、软胶囊，也可以用于保健食品或食品添加剂等。

本发明提供的技术方案经多批工业化生产验证，工艺稳定性、重复性好，质量可控，具有很强的实用性。

以下通过本发明提供的甘草色素的在抗菌、消炎、抗病毒等方面的药理作用研究，来进一步说明本发明的实用性：

1、甘草色素对肺炎双球菌感染小鼠死亡的保护作用。

取18-22g ICR种小鼠120只随机分组，每组只，♀♂兼用。(1)正常对照组：等量0.5％CMC-Na 20ml/kg(2)模型对照组：等量0.5％CMC-Na 20ml/kg。(3)甘草色素I组：0.0625g/kg。(4)甘草色素II组0.125g/kg。(5)甘草色素III组0.25g/kg。以上各组小鼠均灌胃给药，给药容量20ml/kg，1次/天×5天，第3天给药1小时后，腹腔注射肺炎双球菌培养液0.5ml/只鼠(除正常对照组)，继续给药2天，观察各组动物7日内死亡情况结果见表1

表1甘草色素对肺炎双球菌感染小数死亡的保护作用

与模型组比较*P＜0.05

实验结果所示：甘草色素对肺炎双球菌感染小鼠可延长感染小鼠的存活天数，可减少肺炎双球菌感染小鼠的死亡数，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05)。

2、甘草色素对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用

(1)血凝试验

取36孔微孔板，每孔加入生理盐水0.25ml。第一孔加入10^-1病毒尿囊液0.25ml，混匀后，依次取0.25ml置第二孔，稀释至第9孔。第十孔不加病毒尿囊液，作对照。每孔加入0.5％鸡红细胞0.25ml，轻轻摇匀后于室温放置2小时观察结果，记录结果，血凝试验(HA)为640。

(2)甲型流感病毒感染小鼠半数致死量(LD₅₀)滴定。

取ICR小鼠48只，体重13-15g，雌雄兼用，随机分6组，每组8只，取增毒4次的病毒尿囊液，以10倍稀释，每组滴一个病毒浓度，各组小鼠在乙醚浅麻醉下以病毒尿囊液30u1滴鼻，观察14天内死亡数，按Reed-Muench法计算，结果LD₅₀为10^1.81

(3)甘草色素对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用

取ICR小鼠126只，体重13-16g，雌雄各半，随机分7组，每组18只(1)正常对照组：等量0.5％CMC-Na 10ml/kg(2)模型对照组：等量0.5％CMC-Na 10ml/kg(3)利巴韦林组：0.75g/kg(4)甘草色素I组：0.0625g/kg(5)甘草色素II组：0.125g/kg(6)甘草色素III组：0.25g/kg，以上各组小鼠均灌胃给药，给药容量10ml/kg，1次/天×5天，给药1h后，在乙醚浅麻醉下，以血凝试验640以上的尿囊液，给小鼠滴鼻感染，每鼠30ul，(20个LD₅₀致死量)，观察动物感染后发病及死亡情况，结果见表2。

表2.甘草色素对甲型流感病毒感染小鼠死亡的保护作用

与病毒对照组比较^*p＜0.05 ^**p＜0.01

实验结果所示：甘草色素0.0625g/kg、0.125g/kg和0.25g/kg剂量组均可明显延长甲型流感病毒感染小鼠的存活天数，(P＜0.05，P＜0.01)，0.125g/kg和0.25g/kg剂量组可显著降低甲型流感病毒感染小鼠死亡数，与模型对照组比较具显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)提示：甘草色素对甲型流感病毒感染小鼠具有明显的保护作用。

3甘草色素对甲型流感病毒感染小鼠肺指数的影响

取ICR小鼠84只，体重13-16g，♂♀兼用。随机分7组，每组12只。(1)正常对照组：等量0.5％CMC-Na 10ml/kg(2)模型对照组：等量0.5％CMC-Na 10ml/kg(3)利巴韦林组：0.75g/kg(4)甘草色素I组：0.0625g/kg(5)甘草色素II组：0.125g/kg(6)甘草色素III组：0.25g/kg，以上各组小鼠均灌胃给药，给药容量10ml/kg 1次/天×5天，于给药第1天各组小鼠(除正常对照组外)，在乙醚浅麻醉下以病毒尿囊液滴鼻感染小鼠，每鼠30ul(15个LD₅₀攻击量)。继续给药4天，实验前禁食不禁水，实验当日各组小鼠称重，脱颈处死，解剖，观察肺部病变，取全肺称重，计算各鼠肺指数值，肺指数抑制率，比较各组间差异，并取肺用10％甲醛固定，作病理组织学检查，结果见表3

表3：甘草色素对甲型流感病毒感染小鼠肺指数的影响

与病毒对照组比较^*p＜0.05 ^**p＜0.01

实验结果所示：甘草色素0.125g/kg和0.25g/kg剂量组均可明显降低甲型流感病毒感染小鼠的肺指数值，肺指数抑制率为30.7％和37.9％，提示：甘草色素具有减轻甲型流感病毒感染小鼠肺部病变的作用。

结论：药理研究提示，甘草色素具有显著的抗菌、抗病毒作用。

具体实施方式

以下实施例中所用的甘草药材购于新疆喀什，符合《中国药典》2010年版的规定；试验所用的水为纯化水。

以下实施内容是为了对权利要求的技术特征给予说明，并进一步说明本发明的实用性，不应理解为对本发明的原料来源或对本发明权利要求的限制。

实施例1

(1)取甘草药材50kg，粉碎成粗粉，加入乙酸乙酯300L，加热至50℃提取2次，合并提取液，将提取液浓缩至50L，得到浓缩液；

(2)将浓缩液加热至45℃，在搅拌状态下，加入浓度为0.2％的氨水溶液50L，保温反应1小时，停止搅拌。

(3)反应液放冷至室温，分层后，分取乙酸乙酯层，分别加入50L的水继续萃取2次，分取乙酸乙酯层。

(4)取乙酸乙酯层，减压浓缩，喷雾干燥，得甘草色素1.3kg。

实施例2

(1)取甘草药材100kg，粉碎成粗粉，加入正丁醇650L，加热至60℃提取2次，合并提取液，将提取液浓缩至120L，得到浓缩液；

(2)将浓缩液加热至50℃，在搅拌状态下，加入浓度为0.1％的氢氧化钠水溶液60L，保温反应1.5小时，停止搅拌。

(3)反应液放冷至室温，分层后，分取正丁醇层，加入60L的水萃取1次，分取正丁醇层。

(4)取正丁醇层，减压浓缩，沸腾干燥，得甘草色素2.9kg。

实施例3

(1)取甘草药材100kg，粉碎成粗粉，加入正丁醇异丙醚400L，于40℃浸泡提取2次，合并提取液，将提取液浓缩至60L，得到浓缩液；

(2)将浓缩液加热至40℃，在搅拌状态下，加入浓度为0.1％的氢氧化钾水溶液60L，保温反应1.0小时，停止搅拌。

(3)反应液放冷至室温，分层后，分取异丙醚层，加入40L的水继续萃取1次，分取异丙醚层。

(4)取异丙醚层，减压浓缩，沸腾干燥，得甘草色素1.9kg。

实施例4(甘草色素胶囊的制备)

取实施例3中的甘草色素100g，淀粉50g，羟丙基β-环糊精123g，微粉硅胶2g，混匀，制粒，过40目筛，干燥后装成1000粒胶囊，即得。用法用量为：口服，每次1粒，每日3次。

Claims

1.一种甘草色素的制备方法，由以下几步组成：

(1)取甘草药材，粉碎成粗粉，加入有机溶剂适量，加热或浸泡提取数次，合并提取液，将提取液浓缩至一定体积，得到浓缩液。

(4)取有机溶剂层，浓缩，干燥，即得甘草色素。

2.根据权利要求1所述的甘草色素的制备方法，其特征在于步骤(1)中“有机溶剂”是指乙酸乙酯、正丁醇、异丙醚等有机溶剂。提取溶剂的用量是甘草重量的4～10倍量，优选为8倍量；提取次数为1到3次，优选为2次；提取时间为每次提取1～3小时，优选为2小时；提取方法可以采用加热回流提取或浸泡提取两种方式，优选浸泡提取，提取温度为30～80℃，优选为60℃。

3.根据权利要求1所述的甘草色素的制备方法，其特征在于步骤(2)反应的温度为35～60℃，优选为50℃；反应时间为0.5～4小时，优选1.5小时。所加入碱性水溶液是指氨水溶液、氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、碳酸钠水溶液、碳酸钾水溶液，优选为氨水溶液；碱溶液的浓度为0.1％～5％，优选为0.5％。

4.根据权利要求1所述的甘草色素的制备方法，其特征在于步骤(3)中加入水的量为有机溶剂体积的0.2～2倍量，优选为1倍量，萃取次数为1～3次，优选2次。

5.根据权利要求1所述的甘草色素的制备方法，其特征在于步骤(4)浓缩的方式可以是减压浓缩或常压浓缩，优选为减压浓缩；干燥的方式可以是减压干燥、喷雾干燥或沸腾干燥，优选为沸腾干燥。

6.根据权利要求1所述的制备方法，所制备得到的甘草色素可以加入适当的辅料或食品中，应用于药品和食品行业，具有抗菌、消炎、抗病毒的作用。