CN102318730A

CN102318730A - 二次生料发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法

Info

Publication number: CN102318730A
Application number: CN201110223061A
Authority: CN
Inventors: 王力生; 方飞; 章孝荣; 程茂基; 程建波; 丁建平; 蔡海莹; 刘洪瑜; 周韬; 张子军; 丁小玲
Original assignee: Anhui Agricultural University AHAU
Current assignee: Anhui Agricultural University AHAU
Priority date: 2011-08-04
Filing date: 2011-08-04
Publication date: 2012-01-18

Abstract

本发明公开了二次生料发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法，包括以下步骤：(1)先将产朊假丝酵母ANY01(Candida utilis ANY01)和植物乳酸菌ANCLA01(Lactobacillus plantarum ANCLA01)分别通过斜面固体培养，连续活化2次，再摇瓶液体培养，连续活化2次，扩培，分别制备好发酵种子液；(2)再将豆粕粉碎，过筛，添加麸皮、磷盐、钾盐、镁盐和去离子水，接种产朊假丝酵母ANY01，调节pH、控温、发酵后，再添加麸皮、磷盐、钾盐、镁盐、氯化钠、微量元素锰、植物油脂和去离子水，接种植物乳酸菌ANCLA01，调节pH、控温发酵。本发明采用二次生料发酵方法制备富含共轭亚油酸豆粕饲料，经二次发酵后豆粕饲料的总蛋白含量提高约3个百分点左右，并且具有浓厚的酒酸香味，适口性好，对畜禽有明显的诱食性。

Description

二次生料发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法

[技术领域]

本发明涉及动物营养与饲料生物技术领域，尤其涉及一种二次生料发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法。

[背景技术]

共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid，CLA)由亚油酸衍生的一组亚油酸异构体，是普遍存在于人和动物体内的营养物质，具有抑制脂肪沉积、改善肉品质和抗氧化、防止动脉硬化和抗癌、提高机体免疫力、促进动物生长等积极功能。大量的研究试验已证明，共轭亚油酸既无毒也无任何副作用，CLA已成为当前天然保健品和饲料添加剂等的研究热点。天然共轭亚油酸主要存在于反刍动物，如牛、羊的乳脂及肉制品中，但量较少，饲料添加剂用的CLA主要是人工合成。人工合成CLA是以亚油酸或富含亚油酸的植物油为底物，通过碱催化的异构化反应获得CLA。人们主要是在动物日粮中直接添加CLA来提高动物CLA摄入量。由于在饲料中直接添加CLA成本过高，在实际生产中操作不便，因此动物营养学专家们企图通过生物发酵技术技术来提高饲料原料中的CLA。

中国专利申请号200710019656.8公布了一种植物乳杆菌发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法，其将植物乳杆菌ANCLA01应用于豆粕发酵，生产出富含共轭亚油酸的功能性发酵豆粕饲料。其不足之处在于，由于采用的是熟料发酵，生产成本较高，且不具有酵母菌发酵特有的酒酸香味，所生产的发酵豆粕饲料香味和口感较差，因此在饲料中的添加量受到限制。

[发明内容]

本发明要解决的技术问题是提供一种采用二次生料发酵方法制备富含共轭亚油酸豆粕饲料，旨在解决上述直接在饲料中添加CLA的不足，以提高动物日粮中的CLA含量。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，一种二次生料发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法，包括以下步骤：

(1)先将产朊假丝酵母ANY01和在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏、编号为CGMCCNo.1906的植物乳酸菌Lactobacillus plantarumANCLA01分别通过斜面固体培养，连续活化2次，再摇瓶液体培养，连续活化2次，扩培，分别制备好发酵种子液；

(2)再将豆粕粉碎，过筛，添加麸皮、磷盐、钾盐、镁盐和去离子水，接种产朊假丝酵母ANY01，调节pH、控温、搅拌均匀后进行第一次发酵24h，再次添加麸皮、磷盐、钾盐、镁盐、氯化钠、微量元素锰、植物油脂和水，接种植物乳酸菌ANCLA01，调节pH，控温，搅拌均匀后进行第二次发酵发酵60h。

作为优选，上述步骤(2)所述的在产朊假丝酵母ANY01一次发酵阶段，豆粕与麸皮、磷盐、钾盐、镁盐和水的混合重量比为1∶0.01∶0.005∶0.01∶0.0001∶0.9；在植物乳酸菌ANCLA01二次发酵阶段，再次添加的麸皮、磷盐、钾盐、镁盐、钠盐、锰盐、植物油脂和水与豆粕的混合重量比为0.01∶0.01∶0.02∶0.0001∶0.001∶0.00005∶0.03～0.06∶0.2∶1。

作为优选，添加的植物油脂为葵花籽油或大豆油。

作为优选，第一次发酵时产朊假丝酵母ANY01的接种量为豆粕重量的6％，浓度为2.40×10⁸cfu/mL；第二次发酵时植物乳酸菌ANCLA01的接种量为豆粕重量的3％，浓度为2.00×10⁸cfu/mL。

本发明的有益效果是：

采用二次生料发酵方法制备富含共轭亚油酸豆粕饲料，相比发酵前豆粕总蛋白含量提高约3个百分点左右；同时经二次发酵的豆粕有浓厚的酒酸香味，适口性好，对畜禽有明显的诱食性。

[具体实施方式]

1.制备种子液：将产朊假丝酵母ANY01(Candida utilis ANY01)接种到PDA固体斜面培养基(组分如表1所示)，置于30℃恒温培养箱进行培养，将植物乳酸菌ANCLA01(Lactobacillus plantarum ANCLA01)接种到MRS固体斜面培养基(组分如表2所示)，置于37℃恒温培养箱进行培养，连续活化培养2次，分别接种于PDA和MRS液体培养基，置于30℃和37℃的恒温箱培养，制备好一级种子液，再均以10％的接种量分别接种于PDA和MRS液体培养基，置于30℃和37℃的恒温箱培养，制备二级种子液。产朊假丝酵母ANY01的二级种子液浓度≥2.40×10⁸cfu/mL，植物乳酸菌ANCLA01的二级种子液浓度2.00×10⁸cfu/mL。

表1：PDA培养基的组成成分

土豆	200g
		葡萄糖	20g
蒸馏水	1000ml

表2：MRS培养基的组成成分

蛋白胨	10.0g
		吐温80	1.0ml
牛肉膏	10.0g
		柠檬酸氢二铵	2.0g
葡萄糖	20.0g
		无水乙酸钠	5.0g
酵母浸出膏	5.0g
		硫酸镁(7水)	0.5g
硫酸锰(1水)	0.05g
		K2HPO4	2.0g
蒸馏水	1000ml

2.二次发酵豆粕：将1t豆粕粉碎，过50目筛，与10kg麸皮、5kg磷酸二氢钾、0.1kg硫酸镁和900kg水、60kg产朊假丝酵母ANY01二级种子液，搅拌混匀，调节pH为7.0～7.2、温度29℃～31℃、发酵24h后，再次添加10kg麸皮、10kg磷酸氢二钾、0.1kg硫酸镁、1kg氯化钠、0.05kg硫酸锰、30kg葵花籽油(或60kg大豆油)、200kg水，30kg植物乳酸菌ANCLA01二级种子液，搅拌混匀后，调节pH为6.2～6.8，控制温度35℃～38℃，进行厌氧发酵60h。

3.CLA测定：1g豆粕(取样要有代表性)+4ml水+4ml正己烷振荡萃取，静止10min，5000转离心10min，取正己烷相1ml，加4ml正己烷稀释，振动混合后，在233nm处测定OD值，以未发酵的豆粕为参比。根据标准曲线，计算CLA含量(Pariza等，1999)。添加30kg葵花籽油的发酵豆粕CLA含量平均值为：354.50ug/g；添加60kg大豆油的CLA的发酵豆粕CLA含量平均值为：346.60ug/g。

4.粗蛋白含量：发酵前豆粕的平均含量为45.46％(干基)，二次发酵后豆粕蛋白含量平均值为48.32％(干基)。(参照GB/T6432-94《饲料中粗蛋白测定方法》)

5.二次发酵后的豆粕具有明显的酒酸香味。

Claims

1.一种二次生料发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)先将产朊假丝酵母ANY01和在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏、编号为CGMCCNo.1906的植物乳酸菌Lactobacillusplantarum ANCLA01分别通过斜面固体培养，连续活化2次，再摇瓶液体培养，连续活化2次，扩培，分别制备好发酵种子液；

2.根据权利要求1所述的二次生料发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法，其特征在于，步骤(2)所述的在产朊假丝酵母ANY01一次发酵阶段，豆粕与麸皮、磷盐、钾盐、镁盐和水的混合重量比为1∶0.01∶0.005∶0.01∶0.0001∶0.9；在植物乳酸菌ANCLA01二次发酵阶段，再次添加的麸皮、磷盐、钾盐、镁盐、钠盐、锰盐、植物油脂和水与豆粕的混合重量比为0.01∶0.01∶0.02∶0.0001∶0.001∶0.00005∶0.03～0.06∶0.2∶1。

3.根据权利要求1所述二次生料发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法，其特征在于，添加的植物油脂为葵花籽油或大豆油。

4.根据权利要求1所述二次生料发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法，其特征在于，第一次发酵时产朊假丝酵母ANY01的接种量为豆粕重量的6％，浓度为2.40×10⁸cfu/mL；第二次发酵时植物乳酸菌ANCLA01的接种量为豆粕重量的3％，浓度为2.00×10⁸cfu/mL。