CN102318556A - 一种地黄多倍体诱导方法 - Google Patents
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Abstract
一种地黄多倍体诱导方法，(1)将怀地黄试管苗切除叶片后的带芽茎段在快繁培养基MS+NAA 0.01～0.05mg/L+6-BA 0.05～0.5mg/L中培养4～5d，(2)然后放入浓度为0％、0.02％、0.05％、0.08％、0.1％的秋水仙素溶液中，浸泡时间为24h、48h、72h，浸泡后用无菌水冲洗干净后接种到MS培养基上，12h·d-1光照下培养，培养温度均为(28±2)℃，(3)将形态明显变异的试管苗带芽茎段接种到MS+NAA 0.01～0.05mg/L+6-BA0.05～0.5mg/L培养基上继代培养2～3次后，即可得到地黄多倍体试管苗。本发明与现有技术比较多倍体诱导的地黄的品质优良且抗耐性较强。
Description
技术领域：
本发明涉及一种植物选育方法，特别是一种地黄多倍体诱导方法。
背景技术：
地黄，特别是怀地黄，具有很好的药用价值。由于多种病虫害，导致其产量降低，品质退化。因而，优良品种的选育已成为怀地黄生产亟待解决的问题。多倍体的巨大型效应，不仅使植株具有巨大的营养器官，更高的营养成分含量，同时它对逆境的抗耐性也增强。对于药用植物来说，多倍体植株由于染色体的加倍，药用成分的含量也会有所增加，其中活性成分的含量也会相应增加。同时染色体加倍还增强了多倍体植株的生态适应性及对逆境的抗耐性。本实验以怀地黄试管苗为材料，研究不同秋水仙素浓度及处理时间对怀地黄多倍体诱导的影响，并从细胞学方面对其进行鉴定，寻找怀地黄多倍体诱导的有效方法，为怀地黄优良品种的选育提供新的途径。
发明内容：
本发明的目的是提供一种品质优和抗耐性强的一种地黄多倍体诱导方法。实现本发明目的的技术方案是，一种地黄多倍体诱导方法，其特征在于有以下步骤：(1)将怀地黄试管苗切除叶片后的带芽茎段在快繁培养基MS+NAA 0.01～0.05mg/L+6-BA 0.05～0.5mg/L中培养4～5d，(2)然后放入浓度为0％、0.02％、0.05％、0.08％、0.1％的秋水仙素溶液中，浸泡时间为24h、48h、72h，浸泡后用无菌水冲洗干净后接种到MS培养基上，12h·d-1光照下培养，培养温度均为(28±2)℃，(3)将形态明显变异的试管苗带芽茎段接种到MS+NAA 0.01～0.05mg/L+6-BA 0.05～0.5mg/L培养基上继代培养2～3次后，即可得到地黄多倍体试管苗。本发明与现有技术比较多倍体诱导的地黄的品质优良且抗耐性较强的显著优点。
具体实施方式：
结合下述实施例对本发明作进一步说明：
(1)怀地黄多倍体的诱导
将怀地黄试管苗切除叶片后的带芽茎段在快繁培养基MS+NAA0.01～0.05mg/L+6-BA 0.05～0.5mg/L中培养4～5d。然后放入浓度为0％、0.02％、0.05％、0.08％、0.1％的秋水仙素溶液中，浸泡时间为24h、48h、72h。浸泡后用无菌水冲洗干净后接种到MS培养基上，12h·d-1光照下培养，培养温度均为(28±2)℃。将形态明显变异的试管苗带芽茎段接种到MS+NAA 0.01～0.05mg/L+6-BA 0.05～0.5mg/L培养基上继代培养2～3次，20d后进行初步的形态学观察，初步确定秋水仙素浓度为0.1％处理时间为24h时，诱导效果最好，存活率达29.0％，诱导率44.44％。
(2)多倍体的形态鉴定
变异株与对照相比，其叶片宽而大，边缘有缺刻，叶色浓绿，根短而粗壮，并出现轻微木质化，根据这些表型特征对变异材料进行初选。
(3)多倍体的气孔鉴定
撕取植株基部向上第2～3叶片的下表皮制片，在OLYMPUS显微镜下观察并测量气孔大小，随机分别测定50个对照和变异株气孔的长径和短径，计算其平均值，发现变异植株的气孔显著增大。
(4)多倍体的染色体鉴定
取气孔显著增大的变异植株30株，每株随机取白色根尖作试材进行染色体观察。采用改良苯酚品红染色法制片，在显微镜下观察并摄像。结果发现，对照植株染色体数目是2n＝56，变异植株的染色体数目是2n＝112，这说明通过试验获得了四倍体。
Claims (1)
1.一种地黄多倍体诱导方法，其特征在于有以下步骤：(1)将怀地黄试管苗切除叶片后的带芽茎段在快繁培养基MS+NAA 0.01～0.05mg/L+6-BA 0.05～0.5mg/L中培养4～5d，(2)然后放入浓度为0％、0.02％、0.05％、0.08％、0.1％的秋水仙素溶液中，浸泡时间为24h、48h、72h，浸泡后用无菌水冲洗干净后接种到MS培养基上，12h·d-1光照下培养，培养温度均为(28±2)℃，(3)将形态明显变异的试管苗带芽茎段接种到MS+NAA0.01～0.05mg/L+6-BA 0.05～0.5mg/L培养基上继代培养2～3次后，即可得到地黄多倍体试管苗。
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| CN 201110209574 CN102318556A (zh) | 2011-07-19 | 2011-07-19 | 一种地黄多倍体诱导方法 |
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| CN 201110209574 CN102318556A (zh) | 2011-07-19 | 2011-07-19 | 一种地黄多倍体诱导方法 |
Publications (1)
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Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102318556A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102657090A (zh) * | 2012-05-17 | 2012-09-12 | 福建农林大学 | 一种地黄组培快繁方法 |
-
2011
- 2011-07-19 CN CN 201110209574 patent/CN102318556A/zh active Pending
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 《中草药生物技术》 20050630 唐克轩主编 应用组织培养技术进行多倍体育种 复旦大学出版社 212-221 1 , * |
| 《河南农业科学》 20110531 陈明霞等 怀地黄脱毒试管苗培养条件的优化 128-132 1 第40卷, 第5期 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102657090A (zh) * | 2012-05-17 | 2012-09-12 | 福建农林大学 | 一种地黄组培快繁方法 |
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