CN102305824A - 一种准确测定血清钾的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种准确测定血清钾的方法。本发明提供了一种用电感耦合等离子体质谱法测量血清中钾浓度的方法。本发明所提供的用电感耦合等离子体质谱法测量血清中钾浓度的方法是以钴元素作为内标，用电感耦合等离子体质谱法测量血清中钾浓度。该方法同时具有检测速度快，高灵敏度、高准确度和样品无需定量分离及成本低的诸多优点，因此我们推荐其为血清钾测定的参考方法。

Description

一种准确测定血清钾的方法

技术领域

本发明涉及一种准确测定血清钾的方法。

背景技术

钾是细胞内主要阳离子，主要作用是保持机体的正常渗透压及酸碱平衡，参与糖及蛋白质代谢，保证神经肌肉的正常功能，因此血清钾的准确测定在临床诊断中具有重要意义。目前临床常用检测方法有火焰光度法、离子选择电极(ISE)法、酶动力学法等。随着对测量结果可比性认识的提高，生物和临床化学中的溯源研究在检验医学界受到越来越多的重视。国际上早已陆续建立起了血清钾测定的决定性方法和参考方法：1979年美国国家标准和技术研究机构(NIST)建立了同位素稀释热电离质谱法(ID-TIMS)测定血清钾的决定性方法(R.A.Velapoldi，R.C.Paule，R.Schaffer，et al.Nat.Bur.Stand.(U.S.)，Spec.Publ.，1979，260-63)，同年德国临床化学与检验医学学会(DGKL)建立了血清钾火焰原子发射光度(FAES)参考方法，1995年根特大学建立了离子色谱法(IC)测定血清钾的参考方法(Thienpont LM，Van Nuwenborg JE，StocklD.Ion chromatography as potential reference methodology for the determination of totalsodium and potassium in human serum.J Chromatogr A，1995，706：443-450)，2002年NIST又建立了同位素稀释电感耦合等离子质谱法(ID-ICP/MS)测定血清钾的参考方法(K.E.Murphy，S.E.Long，M.S.Rearick，et al.The accurate determination of potassiumand calcium using isotope dilution inductively coupled“cold”plasma mass spectrometry.JAnal At Spectrom，2002，17，469-477.)。ICP-MS的一个显著特点是能够进行元素同位素比值的分析，这种同位素比值的测量方法即同位素稀释法具有很高的测量准确度和精密度。具体操作方法为：在待分析样品中加入已知量的待测元素的某一同位素稀释剂，使之与样品成分同位素充分混匀，用ICP-MS测定混合后样品中该元素同位素丰度比，从而确定待测元素在样品中的浓度。同位素稀释剂作为内标的优势：与样品中待测物有相似的理化性质、质谱行为和响应特征。一旦稀释剂与待测样品建立平衡，同位素的丰度比即成定值。在此后的分离、浓缩过程中即使有样品丢失发生也不会引起丰度比的变化。内标元素的加入可用来校正质量歧视、信号的漂移。内标的选择要求与待测元素有相近的电离能和原子质量，确保其电离及质谱行为相似；不应受同质异位素和多源离子干扰或对待测元素产生干扰；应具有较好的测试灵敏度。Murphy等用⁴¹K浓缩同位素稀释剂作为钾的内标，建立了ICP-MS测定牡蛎组织及血清中K的参考方法。但由于⁴¹K稳定同位素来源有限，购货渠道难，且价格昂贵，这些因素限制了该方法的推广应用。

标准物质是测量准确性和溯源性的保证，用标准物质作工作曲线，为实际样品测定建立定量关系，此时应选用与被测样品基体相匹配即在组成或特性上相近似的系列标准物质，以消除基体效应与干扰成分引入的系统误差。目前应用于临床检验的标准物质按其基体组成分为不含基体的纯标物和含基体的分析标准物质两类。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用电感耦合等离子体质谱法测量血清中钾浓度的方法。

本发明所提供的用电感耦合等离子体质谱法测量血清中钾浓度的方法，包括如下步骤：

(1)向已知钾浓度的以血清为基体的标准物质中加入钴，得到溶液I；用所述溶液I配制钾浓度梯度溶液，作为钾浓度梯度标准工作液；所述钾浓度梯度标准工作液中钴的浓度相同；检测所述钾浓度梯度标准工作液的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比，记作³⁹K/⁵⁹Co，得到工作曲线；所述工作曲线为一元线性回归曲线，其自变量为所述钾浓度梯度标准工作液中钾的浓度值，因变量为所述钾浓度梯度标准工作液的³⁹K/⁵⁹Co；

所述钾浓度梯度标准工作液中钾的浓度值为钾的质量与钾浓度梯度标准工作液质量的比；

(2)向待测血清中加入钴，得到溶液II；用所述溶液II配制待测血清溶液；所述待测血清溶液中钴的浓度与所述钾浓度梯度标准工作液中钴的浓度相同；检测所述待测血清溶液的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比，记作A_X；在所述步骤(1)得到的标准曲线上取两个点，分别记作A点和B点，将所述A点的钾浓度值记作S₁，将所述A点的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比记作A_S1，将所述B点的的钾浓度值记作S₂，将所述A点的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比记作A_S2，且A_S1＜A_X＜A_S2；

(3)根据公式I得到所述待测血清溶液中钾浓度值，记作C；所述待测血清溶液中钾浓度值为所述待测血清溶液中钾的质量与所述待测血清溶液质量的比值。

$C=S_1+\frac{(A_x-A_{s_1})}{(A_{s_2}-A_{s_1})}(S_2-S_1)---\left(I\right)$

所述钾浓度梯度标准工作液中钾的浓度分别为0.0μg/g、1.5μg/g、2.5μg/g、3.5μg/g、4.5μg/g和5.5μg/g。

所述方法在得到所述待测血清溶液中钾浓度值之后，还包括将所述待测血清溶液中钾浓度值换算成钾浓度的标准值的步骤；所述钾浓度的标准值为所述待测血清溶液中钾的物质的量与所述待测血清溶液的体积的比值。

所述用所述溶液I配制钾浓度梯度溶液的方法，包括如下步骤：通过称量质量的方法得到所需质量的溶液I和所需质量的稀释液，将所需质量的溶液I和所需质量的稀释液混匀，即得到所述钾浓度梯度标准工作液。

所述用所述溶液II配制待测血清溶液的方法，包括如下步骤：通过称量质量的方法得到所需质量的溶液II和所需质量的稀释液，将所需质量的溶液II和所需质量的稀释液混匀，即得到所述待测血清溶液。

所述稀释液为硝酸水溶液；

所述硝酸水溶液的体积百分比浓度为0.5％-2.0％，具体为1％。

所述已知钾浓度的以血清为基体的标准物质为离体血清，其中钾浓度为5.976±0.051mmol/L；

所述已知钾浓度的以血清为基体的标准物质为美国国家标准技术研究所的产品名称为SRM956c的血清标准物质，密度为1.0229g/mL±0.0001g/mL；

所述血清标准物质SRM956c购自美国国家标准技术研究所。

所述钴通过钴单元素标准溶液的形式加入；

所述钴单元素标准溶液由以下成分组成：

钴元素、硝酸和水；

以上各成分在所述钴单元素标准溶液中的浓度分别为：

钴元素1000ug/mL和硝酸的体积百分比浓度为1％；

所述钴单元素标准溶液购自国家计量科学院标准物质研究中心，产品编号为GBW08613。

所述钾浓度梯度标准工作液中钴的浓度为使所述钾浓度梯度标准工作液的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比为0.1-3；

所述待测血清溶液中钴的浓度为使所述待测血清溶液的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比为0.1-3。

所述丰度比是用电感耦合等离子体质谱法进行测定得到；所述用电感耦合等离子体质谱法测量是在如下条件下进行：1)对同一钾浓度的钾标准工作液而言，每次检测得到的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比的变异系数小于0.5％；2)所述工作曲线的相关系数的平方大于0.9995。

本发明使用原子质量数与³⁹K相近的⁵⁹Co元素作为内标，这种物质廉价易得，利于本发明方法的推广。内标的加入方法采用将未经稀释的血清样品和内标溶液直接加入到样品瓶中混合均匀后再稀释，此法的优势是，一旦样品与内标均匀混合，只要不发生污染，在其后的样品稀释和分析过程中分析物与内标的同位素比值将不会因挥发、损失等因素改变，避免了样品单独稀释过程中引入的不确定因素。

本发明对血清样品的前处理采用直接稀释法，考虑到过高浓度的样品易过多消耗仪器检测器并造成信号漂移，而过低浓度样品受环境污染较大，将待测血清稀释倍数定为1∶100，浓度约为1.6ug/g。

为保证测量的准确度，本发明所有溶液和待测血清均采用重量法稀释，实验中保持所有容器的洁净，保证操作环境无污染。

本发明所提供的以钴作为内标用电感耦合等离子体质谱法测定血清钾的方法，同时具有检测速度快，高灵敏度、高准确度和样品无需定量分离及成本低的诸多优点，因此我们推荐其为血清钾测定的参考方法。

附图说明

图1为血清钾标准工作曲线。

图2为用发明的方法测定血清钾的线性范围。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、以钴元素作为内标测定血清中钾含量

一、仪器与试剂

1、仪器

(1)PerkinElmer Elan DRC II型电感耦合等离子体质谱仪(美国)。定期进行仪器维护保养。

(2)Mettler AE240万分之一(Max＝200g，d＝10^-4g)天平(Mettler，德国)，用于校准溶液、内标溶液的配制，以及校准溶液、标准物质和血清样品中内标的准确加入。

(3)Milli-Q净化水装置(Millipore，法国)用于实验用超纯去离子水的制备。北京市计量局每年校对检测一次。

(4)Eppendorf Reference移液器：北京市计量局每年校对检测一次。

2、试剂

(1)血清电解质标准物质：SRM956c水平I、II、III，SRM909b水平I、II，购自美国国家标准技术研究所(NIST)。

(2)钴单元素标准溶液：购自国家计量科学院标准物质研究中心，产品编号为GBW08613；

所述钴单元素标准溶液由以下成分组成：

钴元素、硝酸和水；

以上各成分在所述钴单元素标准溶液中的浓度分别为：

钴元素1000ug/mL和硝酸的体积百分比浓度为1％。

(3)浓硝酸(69％)：购自北京化学试剂研究所。

(4)超纯去离子水：电阻率≥18MΩ。

(5)血清样品：来自北京朝阳医院检验科。收集体检后的剩余血清，年龄20～70岁，所有血清标本除外HIV阳性，梅毒阳性，肝炎阳性的标本，血清应澄清透明，除外溶血，黄疸，乳糜等异常标本。所有血清标本的收集均经过受采者的同意。

血清样品的收集：完全遵照ISO指南34(ISO Guide 34，General requirements for thecompetence of reference material producers.)及WHO关于制备标准物质血清原料的收集指南，将收集好的样本立即放入-80℃冰箱保存。使用前从-80℃冰箱取出，室温下自然融化，当天使用，仅冻融一次。以下编号的待测血清：091051、091052、091053、091056和091058均按上述方法收集，只是批号不同。

二、玻璃器皿

所有的玻璃器皿：如移液管、容量瓶等均符合国家A级标准。所有与试剂、水、稀释液或样本接触的玻璃或塑料表面做如下清洗：

(1)使用常规清洗程序(含去污剂的热水浸泡，自来水冲洗)。

(2)在30％硝酸中浸泡过夜。

(3)去离子水冲洗5～6min。

(4)无尘环境中倒置自然干燥。

三、标准溶液和内标溶液及稀释液的选择和配制

采用重量法配制标准溶液和内标溶液。室内条件控制在温度20℃～25℃，湿度20％-50％。

1、标准溶液：为避免基质效应引起测量偏差，选用与待测血清基质相一致的NIST血清标准物质SRM956c作为标准溶液。SRM956c分高(I)(密度为1.0229g/mL±0.0001g/mL)、中(II)、低(III)三个水平，其中血清钾认定值分别为5.976±0.051mmol/L、3.977±0.034mmol/L和1.982±0.017mmol/L(参考文献：Long，S.E；Murphy，K.E.；Compilation of Higher-Order Methods for the Determination of Electrolytes in ClinicalMaterials；NIST Special Publication 260-162，Government Printing Office：Washington，DC(2006))。

2、内标溶液：选择血清中含量极低的钴(⁵⁹Co)作为内标。配制方法如下：取一只干燥洁净的聚丙乙烯塑料小瓶(容量30ml)，至于天平上调零，加入1000ug/mL的Co单元素标准溶液，称量至0.251g，然后加入超纯去离子水稀释至25.080g，颠倒混匀10次，实际浓度为10ug/mL。

3、稀释液：69％的浓硝酸按体积比稀释成1％的稀硝酸水溶液作为稀释液。

四、钾工作标准液与血清样品的制备

1、钾工作标准液的制备

由NIST的血清标准物质SRM956cI(浓度为228.3703ug/g)、1％硝酸溶液及10ug/mL钴内标液配制钾浓度为0ug/g、1.5ug/g、2.5ug/g、3.5ug/g、4.5ug/g和5.5ug/g，钴浓度均为0.1ug/mL的标准溶液。配制方法如下：

将干燥洁净聚丙乙烯小瓶置于天平上调零，加入钴内标溶液，称量并记录实际值，然后加入NIST的血清标准物质SRM956cI(浓度为228.3703ug/g)，称量后计算出其加入量，再加入1％稀硝酸水溶液，称量并记录实际值，颠倒混匀后，计算实际钾标准液的浓度。具体称量值见表1。

表1钾工作标准液中各成分的加入量及浓度

2、血清样品的制备

冰冻血清样品置于室温溶解平衡30min后，准确称量0.1600g待检血清，加入0.1600g浓度为10ug/mL的钴内标溶液，然后加入1％稀硝酸至16.00g，颠倒混匀后为待检血清样品。

五、电感耦合等离子体质谱分析

1、通过一段时间实验测定确定和优化了仪器工作条件，仪器最优化参数见表2。

表2PE ICP-MS仪器操作参数和条件

本专利以氨气作为反应气体，采用动态反应池(DRC)技术，提高测量的准确性。

2、通过连续测定标准溶液的³⁹K/⁵⁹Co的丰度比(即³⁹K/⁵⁹Co比值)，观察仪器的长期稳定性。连续10次测定标准液³⁹K/⁵⁹Co比值，CV值为0.128％，重复性良好。结果见表3。

表3电感耦合等离子体质谱法测定标准溶液³⁹K/⁵⁹Co比值精密度

3、测量程序

按ICP-MS操作规程打开机器点燃等离子炬，预热至少30分钟，等待仪器处于稳定状态，准备好空白、标准液，在选定的条件下由低到高依次测定其³⁹K/⁵⁹Co比值，建立工作曲线。选择1.5ug/g的钾低值校准溶液(S₁)和2.5ug/g的高值校准溶液(S₂)。以S₁、待测血清、S₂的顺序进行测定，按上述步骤重复测定3次，取其均值作为待测血清测定结果。具体计算方法采用内插法。

根据以下公式计算每个有效测量的浓度，用ug/g表示。

$C=S_1+\frac{(A_x-A_{s_1})}{(A_{s_2}-A_{s_1})}(S_2-S_1)$

C：血清样品分析溶液浓度，用ug/g表示。

S₁：低值校准溶液浓度，ug/g。

S₂：高值校准溶液浓度，ug/g。

A_X：为样品中³⁹K/⁵⁹Co比值(测定值)。

A_S1：为低值校准溶液中³⁹K/⁵⁹Co比值(测定值)。

A_S2：为高值校准溶液中³⁹K/⁵⁹Co比值(测定值)。

根据测量的血清密度与稀释倍数，将血清钾浓度由ug/g单位换算为法定计量单位mmol/L，换算公式如下：

C_血清＝(C×100/39.0983)/(1/ρ)＝C×2.558×ρ(mmol/L)

C_血清：血清样品浓度，用mmol/L表示。

C：血清样品分析溶液浓度，用ug/g表示。同上。

100：血清样品的稀释倍数。

39.0983：钾元素的原子量。

ρ：血清样品密度。

血清样品的密度测定：

操作过程中注意血清容器的密闭，尽量避免蒸发。

(1)容量瓶体积的校正：控制室温为20℃～22℃，湿度20％-50％。根据JJG196-1990中华人民共和国国家计量检定规程校准容量瓶。将1只待校准的10ml清洁、干燥的容量瓶恒重，称重(M1)；测量去离子水的温度(将去离子水置实验室1小时以上，实验室室温即为水的温度)将去离子水注入容量瓶标线处，液面凹陷底部与容量瓶刻线相平齐，称重(M2)；根据去离子水的温度，查出该温度下水的密度(ρ水)，计算该温度下该容量瓶实际体积为(M2-M1)/ρ水。重复上述步骤20次，计算该容量瓶实际体积均值(V)与相对标准不确定度。该容量瓶的实际体积为9.964ml，相对标准不确定度为0.034％。

(2)血清溶液样品的密度的计算：将经过体积校正的10ml容量瓶称重为M1；将血清溶液样品小心转移至容量瓶，液面凹陷底部与容量瓶刻线相平齐，称重为M2。血清溶液样品密度(ρ血清溶液样品)为：(M2-M1)/V。重复上述步骤20次，计算ρ血清溶液样品的均值与标准差。

测量血清溶液样品的密度的总不确定度是由如下不确定度构成的合成不确定度：容量瓶体积的相对标准不确定度(0.034％)、重复操作引起的不确定度、称量引起的不确定度。测量血清溶液样品的密度的相对合成标准不确定度为0.05％。

测得5个血清溶液样品的密度(ρ)均为1.024±0.001(g/ml)，本发明将以此密度值对钾标准物质中血清钾浓度标准值及绝对合成扩展不确定度值进行浓度单位换

六、结果

(一)标准工作曲线

使用上述配制好的钾工作标准液(S0(空白)-S5)，钾浓度分别为：0ug/g、1.5μg/g、2.5μg/g、3.5μg/g、4.5μg/g和5.5μg/g。测定其³⁹K/⁵⁹Co比值，以³⁹K/⁵⁹Co比值为纵坐标，对应的³⁹K浓度为横坐标，得到标准曲线(图1)。标准曲线方程为：y＝0.4289x+0.0024(R²＝0.9999)。

(二)方法学考察与验证

1.精密度验证

为了考察精密度，将分装好的两瓶不同浓度的血清样品分别测定3批，091056血清每批平行测定3次，091058血清每批平行测定6次，计算批内、批间与总CV。实验结果见表4、表5。

表4091056血清钾精密度实验结果

表5091058血清钾精密度实验结果

测定两浓度血清钾浓度均值分别4.300mmol/L～4.678mmol/L，批内、批间和总变异系数分别为0.09％～0.12％、0.04％～0.04％和0.09％～0.14％，结果见表6。

表6电感耦合等离子体质谱法测定血清钾精密度

2.回收率验证

三份血清样品091051、091052、091053中分别加入0.040mmol/L、0.026mmol/L、0.040mmol/L的血清标准物质SRM956c，用本法分别测定三份血清样品加入钾前后的血清钾浓度，以考察方法的回收率。回收率分别为99.88％、99.79％、99.67％。结果见表7。

表7电感耦合等离子体质谱法测定血清钾的回收率

3.标准物质SRM909b准确度实验

3.1血清标准物质SRM909b复溶

选用NIST的血清标准物质SRM909b水平I、II(冻干血清、4℃保存)评价本研究方法的准确性。SRM909b中的血清钾认定值分别为3.424±0.025mmol/L、6.278±0.052mmol/L。分析时按说明书要求放置平衡至室温，轻敲样品瓶，确保所有冻干物都位于安瓿的底部。小心移去金属封口和橡胶塞，置于天平上调零，用称量法准确加入去离子水，按室内温度去离子水的密度×10.0(ml)称量后旋动样品瓶3次，静置10min。轻轻旋动混匀内容物，静置30min，再次旋动，静置10min，最后颠倒10次样品瓶。

3.2血清标准物质的测定

用本法分析了NIST血清标准物质SRM909b-I、II、SRM956c-II各一瓶。SRM909b-I每瓶重复测定3批，每批平行测定6次，SRM909b-II、SRM956c-II每瓶重复测定3批，每批平行测定4次，结果总结于表8。SRM909b-I、II钾浓度均值分别为3.431mmol/L和6.277mmol/L，其批内CV分别为0.33％、0.31％，批间CV分别为0.17％和0.15％，总CV分别为0.36％和0.34％，与认定值相对偏差分别为+0.20％和-0.02％。SRM956c-II钾浓度为3.988mmol/L，批内CV为0.37％，批间CV为0.08％，总CV为0.33％，与认定值相对偏差为+0.28％.

表8电感耦合等离子体质谱法测定标准参考物质SRM909b和SRM956c结果

4.方法检出限的测定

测量空白溶液11次的³⁹K/⁵⁹Co比值标准偏差的3倍所对应的样品浓度为检出限(International Union of Pure and Applied Chemistry(IUPAC))。本实验检出限C＝3SD空白/S＝3×0.0000188/0.4289＝0.000013(ug/g)。

公式中S_D-空白溶液³⁹K/⁵⁹Co比值的标准偏差。

S-仪器灵敏度，即校正曲线的斜率。

5.线性考察

本实验根据CLSI线性判定指南EP6-A文件进行线性考察(EP6-A：Evaluation of theLinearity of Quantitative Measurement Procedures：A Statistical Approach；ApprovedGuideline.NCCLS，Volume 23，Number 16.)。将SRM956c-I、1％硝酸水溶液及10ug/mL钴内标液按上述方法配制8个不同浓度的标准液，见表9配制，8号高值浓度达到7.0352μg/g，以理论稀释值为横坐标(X)，实际测定值为(Y)做图，见图2，可观察到该方法在7.0352μg/g内的线性良好。

表9线性范围评价的标液配置及测定结果

6.测量不确定度分析(以091056血清为例)

主要包括重复测量引起的不确定度(Guideline to Expression of Uncertainty inMeasurement.ISO/TAG 4/WG3，June1993.)，该不确定度为0.09％。标准溶液引起的不确定度，SRM956c钾的不确定度为0.022％。称量引起的不确定度，称量不确定度为0.0056％。

计算合成不确定度：Uc²(y)＝(u1)²+(u2)²...+(un)²＝(0.09％)²+(0.022％)²+(0.0056％)²；

转换为绝对标准不确定度：c×Uc(y)＝4.300×0.09％＝0.0039(mmol/L)；

扩展不确定度：U_95％＝2×c×Uc(y)＝0.0078(mmol/L)。

Claims (10)

1.一种用电感耦合等离子体质谱法测量血清中钾浓度的方法，包括如下步骤：

(1)向已知钾浓度的以血清为基体的标准物质中加入钴，得到溶液I；用所述溶液I配制钾浓度梯度溶液，作为钾浓度梯度标准工作液；所述钾浓度梯度标准工作液中钴的浓度相同；检测所述钾浓度梯度标准工作液的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比，记作 ³⁹K/⁵⁹Co，得到工作曲线；所述工作曲线为一元线性回归曲线，其自变量为所述钾浓度梯度标准工作液中钾的浓度值，因变量为所述钾浓度梯度标准工作液的³⁹K/⁵⁹Co；

所述钾浓度梯度标准工作液中钾的浓度值为钾的质量与钾浓度梯度标准工作液质量的比；

(2)向待测血清中加入钴，得到溶液II；用所述溶液II配制待测血清溶液；所述待测血清溶液中钴的浓度与所述钾浓度梯度标准工作液中钴的浓度相同；检测所述待测血清溶液的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比，记作A_X；在所述步骤(1)得到的标准曲线上取两个点，分别记作A点和B点，将所述A点的钾浓度值记作S₁，将所述A点的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比记作A_S1，将所述B点的的钾浓度值记作S₂，将所述A点的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比记作A_S2，且A_S1＜A_X＜A_S2；

(3)根据公式I得到所述待测血清溶液中钾浓度值，记作C；所述待测血清溶液中钾浓度值为所述待测血清溶液中钾的质量与所述待测血清溶液质量的比值。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述钾浓度梯度标准工作液中钾的浓度分别为0.0μg/g、1.5μg/g、2.5μg/g、3.5μg/g、4.5μg/g和5.5μg/g。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述方法在得到所述待测血清溶液中钾浓度值之后，还包括将所述待测血清溶液中钾浓度值换算成钾浓度的标准值的步骤；所述钾浓度的标准值为所述待测血清溶液中钾的物质的量与所述待测血清溶液的体积的比值。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

所述用所述溶液I配制钾浓度梯度溶液的方法，包括如下步骤：通过称量质量的方法得到所需质量的溶液I和所需质量的稀释液，将所需质量的溶液I和所需质量的稀释液混匀，即得到所述钾浓度梯度标准工作液。 

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

所述用所述溶液II配制待测血清溶液的方法，包括如下步骤：通过称量质量的方法得到所需质量的溶液II和所需质量的稀释液，将所需质量的溶液II和所需质量的稀释液混匀，即得到所述待测血清溶液。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：

所述稀释液为硝酸水溶液；

所述硝酸水溶液的体积百分比浓度为0.5％-2.0％或1％。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：

所述已知钾浓度的以血清为基体的标准物质为离体血清，其中钾浓度为5.976±0.051mmol/L。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：

所述钴通过钴单元素标准溶液的形式加入；

所述钴单元素标准溶液由以下成分组成：

钴元素、硝酸和水；

以上各成分在所述钴单元素标准溶液中的浓度分别为：

钴元素1000ug/mL和硝酸的体积百分比浓度为1％。

9.根据权利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于：

所述钾浓度梯度标准工作液中钴的浓度为使所述钾浓度梯度标准工作液的³⁹K与 ⁵⁹Co的丰度比为0.1-3；

所述待测血清溶液中钴的浓度为使所述待测血清溶液的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比为0.1-3。

10.根据权利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于：

所述丰度比是用电感耦合等离子体质谱法进行测定得到；所述用电感耦合等离子体质谱法测量是在如下条件下进行：1)对同一钾浓度的钾标准工作液而言，每次检测得到的³⁹K与⁵⁹Co的丰度比的变异系数小于0.5％；2)所述工作曲线的相关系数的平方大于0。