CN102302450B

CN102302450B - 疏水药物-白蛋白-葡聚糖纳米乳液及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102302450B
Application number: CN 201110261501
Authority: CN
Inventors: 姚萍; 戚佳宁
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Fudan University
Priority date: 2011-09-06
Filing date: 2011-09-06
Publication date: 2013-02-27
Anticipated expiration: 2031-09-06
Also published as: CN102302450A

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体为一种疏水药物-白蛋白-葡聚糖纳米乳液及其制备方法和应用。本发明的纳米乳液中乳滴的结构是以包含疏水药物的油相为内核，白蛋白为油水界面膜，葡聚糖位于油滴外部以保持油滴在水相中的稳定性。制备方法包括利用Maillard反应制备白蛋白-葡聚糖共价复合物，将白蛋白-葡聚糖复合物溶解在水溶液中，将疏水药物溶解或者分散在大豆油中；将两种溶液混合，通过高压均质方法制得水包油纳米乳液；再加热制得的水包油纳米乳液，形成稳定的白蛋白油水界面膜，从而得到稳定的载药纳米乳液。本发明纳米乳液中蛋白质油-水界面膜稳定，乳滴不易聚集，因而能满足注射制剂要求，可以作为疏水药物注射制剂予以应用。

Description

疏水药物-白蛋白-葡聚糖纳米乳液及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种水包油型纳米乳液及其制备方法，以及该乳液在制备疏水药物注射制剂中应用。

背景技术

大多数抗肿瘤药物在水中的溶解性很小。例如紫杉醇几乎不溶于水，目前临床常用的紫杉醇制剂是用聚氧乙烯蓖麻油（Cremophor）制成的紫杉醇制剂。虽然聚氧乙烯蓖麻油对紫杉醇有良好的增溶作用，但会引起过敏反应以及在稀释后容易形成沉淀（Constantinides, P.P., et al., Pharmaceutical Research, 2000. 17: p. 175-182.）。为了解决这些问题，很多学者制备了紫杉醇乳剂。如陈建明等人利用注射油和乳化剂（注射用大豆磷脂，卵磷脂，波洛沙姆188，或单油酸甘油酯中的一种或一种以上的混合物）等通过pH调节和高压均质方法制备了静脉注射用紫杉醇乳剂（中国专利号200410068134.3；200810100234.8）。由美国生命科学（American Bioscience）公司开发的白蛋白结合紫杉醇纳米粒注射混悬液（ABRAXANE），在转移性乳腺癌的临床治疗中有很好的疗效（Stinchcombe, T.E., Nanomedicine, 2007. 2: p. 415-423.）。研究表明，白蛋白可利用细胞膜上的白蛋白受体Gp60及细胞膜穴样内凹（caveolae），以及肿瘤组织中富含的半胱氨酸的酸性分泌蛋白（SPARC）的作用，促使药物进入肿瘤细胞内，增加化疗作用（Hawkins, M.J., et al., Advanced Drug Delivery Reviews, 2008. 60: p. 876-885.）。目前，疏水药物-白蛋白体系已有很多报道（专利号US 2006121119，WO 9814174， US 2001046961）。

在载药纳米粒子的表面修饰多糖，如茁霉多糖，壳聚糖，葡聚糖等可以增加纳米粒子在体内的循环时间，使得载药纳米粒子避免被巨噬细胞吞噬而成功地输送到靶向病灶（Liu, Z.G., et al., Journal of Biomedical Materials Research Part A, 2007. 83A: p. 806-812.; Couvreur, P., et al., European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 2004. 58: p. 327-341.; Labarre, D., et al., Pharmaceutical Research, 1998. 15: p. 1046-1050.）。除此而外，在载药纳米粒子的表面修饰多糖还可以增加纳米粒子在水溶液中的稳定性。

利用蛋白质-多糖接枝复合物制备乳液已经有很多研究。由于蛋白质具有两亲性质，在乳化过程中分布在油水界面，稳定水包油乳滴，位于乳滴外部的亲水多糖使得乳滴在水溶液中均匀分散。但是到目前为止，还没有一个蛋白质-多糖乳液体系能够满足注射制剂的要求。一个主要问题是多糖的接枝效率不高，在制备蛋白质-多糖复合物的反应中，多糖的质量必须大大高于蛋白质的质量才能使一定数目的多糖接枝到蛋白质表面，达到乳化以后稳定乳液的目的（专利号 WO 2006/090110 A1, K.K. Xu., et al., Langmuir, 2009. 25: p. 9714-9720.）。因此，所报道的蛋白质-多糖复合物乳液中自由多糖含量很高，只适合于食品工业的应用（McClements, D.J. et al., Advances in Colloid and Interface Science, 2010. 159: p. 213-228.），不适合于疏水药物注射制剂的应用。另一个主要问题是所形成的蛋白质油-水界面膜不稳定，乳滴会发生融合，尺寸逐渐增加，从而导致乳液分层和油水分离。还有一个主要问题是乳滴的粒径过大，不能通过滤膜除菌，而加热除菌会导致乳滴聚集，因此不能满足注射制剂的要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蛋白质油-水界面膜稳定，乳滴不易聚集，因而能满足注射制剂要求的水包油型纳米乳液及其制备方法，以及该乳液在制备疏水药物注射制剂中应用。

本发明提供的水包油型纳米乳液，是一种疏水药物-白蛋白-葡聚糖纳米乳液。该纳米乳液中乳滴的结构是以包含疏水药物的油相为内核，白蛋白为油水界面膜，葡聚糖位于油滴外部以保持油滴在水相中的稳定性。

本发明中，所述的白蛋白是人血清白蛋白、牛血清白蛋白或其他动物血清白蛋白。

本发明中，所述的葡聚糖的分子量在2000-70000之间。

本发明中，所述的药物是可以溶解在油相中的疏水药物。包括：紫杉醇、阿霉素、喜树碱等等，但不限于这些。

本发明提供的水包油型纳米乳液（疏水药物-白蛋白-多糖纳米乳液）的制备方法，是利用Maillard反应制备白蛋白-葡聚糖共价复合物；再将白蛋白-葡聚糖复合物溶解在水溶液中，将疏水药物溶解或者分散在大豆油中；将上述制备的水性溶液和油性溶液混合，通过高压均质方法制得水包油纳米乳液；再加热制得的水包油纳米乳液，形成稳定的白蛋白油水界面膜，从而得到稳定的载药纳米乳液。

其中，制备条件是：

（1）白蛋白与葡聚糖的质量比在1:0.4到1:2之间，通过Maillard反应制备白蛋白-葡聚糖共价接枝复合物；

（2）白蛋白-葡聚糖复合物溶解在水中，其中白蛋白浓度为1-50 mg/ml，调节溶液pH在3.0-8.0区间；

（3）将疏水药物溶解于大豆油中，浓度为1-500 mg/ml；

（4）混合白蛋白-葡聚糖复合物水溶液和疏水药物油溶液，油溶液与水溶液的体积比在1: 2到1:15之间；

（5）通过高压均质制备纳米乳液，其中高压均质的压力大于500 bar，高压均质时间大于2分钟；

（6）加热制得的水包油纳米乳液，温度在 80℃以上，加热时间至少30分钟。

本发明中，所述Maillard反应制备白蛋白-葡聚糖共价复合物，具体可参见中国专利：200710040028。

本发明中，所述高压均质是高效制备纳米乳液的方法，可参见Donsi, F., et al., Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2010. 58: p. 10653-10660.。在高压下所产生的强烈剪切，撞击和空穴作用，使液态物质得到超细微化。两亲性的白蛋白在高压均质的过程中发生二硫键交换、氢键重排及疏水相互作用使得白蛋白在乳滴表面形成油水界面膜，从而将油滴固定并同时实现了疏水药物的高效负载。连接在白蛋白上的葡聚糖由于其亲水性而在乳滴表面伸展，避免乳滴聚集。

加热可以使蛋白质变性，形成分子间疏水聚集和二硫键交联。对蛋白质乳液进行加热，位于油水界面的蛋白质会进一步发生分子间相互作用，从而形成高度交联的蛋白质膜，达到乳液长期稳定和将疏水药物固定在油相中的目的。加热还可以达到灭菌的目的。

通过动态光散射分析，可以得到纳米乳液的粒径和多分散系数。本发明的载药纳米乳液的粒径为200 nm左右。乳液可以通过450 nm滤膜达到除菌的目的。透射电镜实验表明（附图1）乳滴的粒径较为均一。ζ-电位分析（附图2）表明多糖位于乳滴的表面。

本发明制备的水包油型纳米乳液可作为疏水药物注射制剂加以应用。

例如，通过本发明方法制备的紫杉醇纳米乳液在pH 7.4生理条件下长期稳定，说明乳滴表面的葡聚糖很好地阻止了乳滴的聚集。体外细胞实验表明，空白乳液几乎没有毒副作用，而紫杉醇乳液与自由紫杉醇的药效相同。荷肿瘤小鼠实验结果表明，与目前临床上使用的商品紫杉醇注射液相比，本发明制备的紫杉醇乳液具有更好的肿瘤抑制和生命延长效果。

附图说明

图1. 紫杉醇-白蛋白–葡聚糖乳液的透射电子显微镜照片。

图2. 白蛋白（BSA）和紫杉醇-白蛋白-葡聚糖乳液在不同pH条件下的ζ-电位。

图3. 不同浓度的紫杉醇（PTX）DMSO溶液和紫杉醇-白蛋白-葡聚糖乳液对KB细胞存活率的影响。

图4. KB细胞与紫杉醇（PTX）DMSO溶液和紫杉醇-白蛋白-葡聚糖乳液保存不同时间后的存活率。

具体实施方式

实施例1. 将牛血清白蛋白（BSA）和葡聚糖（62 kDa）用去离子水溶解，其质量投料比1:0.93（BSA:葡聚糖），待溶解混合均匀后调节溶液pH值到8.0，然后将溶液冷冻干燥。将冻干后的固体放入烧杯中，置于装有KBr饱和溶液的密闭容器中（容器内相对湿度为79%），在60℃下进行Maillard反应48小时后得到白蛋白-葡聚糖共价复合物。将白蛋白-葡聚糖共价复合物用去离子水溶解，浓度为19.3 mg/ml。然后将复合物水溶液与注射用大豆油混合，油水体积比为1:4，混合溶液经高速均质（10000转）1分钟后，再经高压400~1200 bar均质1~5分钟, 然后将乳液在90℃加热1小时，即可得到白蛋白-葡聚糖空白纳米乳液。

表1的结果显示在800 bar条件下，当高压均质时间超过3分钟时，即可得到粒径较小并且分散均一的乳液。表2的结果显示在均质时间为4分钟的条件下，高压均质压力越高，所得到的乳滴粒径越小。加热对乳滴粒径没有影响，表明乳滴表面的葡聚糖阻止了乳滴在加热过程中的聚集。

表1. 在固定高压均质压力800 bar条件下，不同高压均质时间对乳滴粒径的影响。

均质时间（分）	D_h （nm）	PDI
			1	295±6	0.14±0.03
2	257±9	0.16±0.03
			3	244±9	0.10±0.02
4	224±8	0.11±0.02
			5	233±17	0.09±0.03

表2. 在固定高压均质时间4分钟的条件下，不同高压均质压力对乳滴粒径的影响。

实施例 2. 将BSA和葡聚糖用去离子水溶解，葡聚糖的分子量为10~62 kDa，BSA与葡聚糖的质量投料比从1:0.52到1:1.05。待溶解混合均匀后调节其pH值到8.0，然后将溶液冷冻干燥。将冻干后的固体放入烧杯中，置于装有KBr饱和溶液的密闭容器中（容器内相对湿度为79%），在60℃下进行Maillard反应48小时后得到白蛋白-葡聚糖共价复合物。将白蛋白-葡聚糖共价复合物用去离子水溶解，其中白蛋白浓度为10 mg/ml。然后将复合物水溶液与注射用大豆油混合，油水体积比为1:4，混合溶液经高速均质（10000转）1分钟后，再经800 bar高压均质4分钟，最后将乳液在90℃加热1小时，即可得到白蛋白-葡聚糖空白纳米乳液。乳滴粒径在表3显示。

表3所示，葡聚糖分子量在10~62 kDa范围内都可以制备纳米乳液。在葡聚糖分子量10 kDa的条件下，白蛋白与葡聚糖的质量比在1:0.75~1:1.05范围内可以在加热以后得到乳滴粒径较小的稳定乳液。

表3. 不同葡聚糖分子量、不同白蛋白与葡聚糖质量比对乳滴粒径的影响。

实施例3. 将白蛋白-葡聚糖共价复合物（表3中的BD6-10K）用去离子水溶解后，将复合物溶液pH调节到pH 3.0~8.0，溶液中白蛋白浓度为10 mg/ml。然后将复合物水溶液与注射用大豆油混合，油水体积比为1:4，混合溶液经高速均质（10000转）1分钟后，再经800 bar高压均质4分钟，最后将乳液在90℃加热1小时，得到白蛋白-葡聚糖空白纳米乳液。乳滴粒径在表4显示。结果表明，在pH 3.0~8.0乳化条件下，粒径变化并不大，但在pH 5.0条件下乳化后加热，由于pH接近BSA的等电点（pH 4.8），乳液有明显聚集。在其他pH条件下乳化后加热，乳液粒径基本不变。

表4. 不同乳化pH对乳滴粒径的影响。

实施例4. 将在pH 8乳化然后加热得到的乳液分别在下列条件下观察其稳定性：加入0.15 mol/l NaCl，分别调节pH值到7.4和5.0，在pH 7.4条件下保存3个月。表5的结果表明，纯BSA制备的乳液在上述条件下不稳定，有分层现象发生。而BSA-葡聚糖复合物制备的乳液很稳定。

表5. 乳液在不同介质中的稳定性。

实施例5. 将不同质量的紫杉醇溶解在注射用大豆油中，紫杉醇浓度为10~50 mg/ml；将白蛋白-葡聚糖复合物BD6-10K或者BD1-62K加入去离子水中分散溶解，其中白蛋白浓度为10 mg/ml。然后将复合物水溶液与紫杉醇油溶液混合，油水体积比为1:4，混合溶液经高速均质（10000转）1分钟后，再经800 bar高压均质4分钟，最后将乳液在90℃加热1小时，即可得到紫杉醇-白蛋白-葡聚糖纳米乳液（BD6-10K-PTX或者BD1-62K-PTX）。紫杉醇在乳液中的浓度为2~10 mg/ml。

在紫杉醇-白蛋白-葡聚糖纳米乳液中用氯仿萃取未包埋的紫杉醇，利用HPLC在240 nm处检测萃取液中紫杉醇含量，通过以下公式计算紫杉醇在乳液中的包埋效率（LE）和包埋量（LA）：

分析结果在表6列出。结果表明紫杉醇几乎完全被包埋在乳液当中，而且紫杉醇的加入对乳滴粒径和稳定性没有影响，长时间储存以后紫杉醇也不会泄漏出来，说明白蛋白在乳滴表面形成了稳定的油水界面膜，将油滴固定的同时实现了紫杉醇的高效负载。

表6. 不同浓度紫杉醇对乳滴粒径的影响以及紫杉醇的包埋效率（LE）和包埋量（LA）。

实施例 6. 将紫杉醇乳液（表6中BD1-62K-PTX、紫杉醇浓度2 mg/ml样品）与小牛血清或者小鼠全血以1:1体积比混合以后，在37℃摇床上摇动24小时，然后用氯仿萃取所释放的紫杉醇。HPLC-MS分析结果表明在血清和全血中没有紫杉醇被检测出来，证明了紫杉醇乳液在血液中也很稳定，没有破乳现象发生。

实施例 7. 将人血清白蛋白（HSA）和葡聚糖（62 kDa, 35 kDa, 10 kDa）用去离子水溶解，白蛋白与葡聚糖的质量比为1:0.15~1:0.93。待溶解混合均匀后调节pH值至8.0，然后将溶液冷冻干燥。将冻干后的固体放入烧杯中，置于装有KBr饱和溶液的密闭容器中（容器内相对湿度为79%），在60℃下进行Maillard反应48小时后得到人血清白蛋白-葡聚糖共价复合物。将得到的人血清白蛋白-葡聚糖共价复合物用去离子水溶解，其中白蛋白浓度为10 mg/ml。然后将复合物水溶液与注射用大豆油混合，油水体积比为1:4，混合溶液经高速均质（10000转）1分钟后，再经800 bar高压均质4分钟，最后将乳液在90℃加热1小时，即可得到人血清白蛋白-葡聚糖空白纳米乳液。

紫杉醇乳液的制备：将50 mg紫杉醇分散溶解在5 ml注射用大豆油中，加入人血清白蛋白-葡聚糖复合物水溶液20 ml （人血清白蛋白浓度10 mg/ml）, 混合溶液经高速均质（10000转）1分钟后，再经800 bar高压均质4分钟，最后将乳液在90℃加热1小时，即可得到紫杉醇-人血清白蛋白-葡聚糖纳米乳液，紫杉醇在乳液中的浓度为2 mg/ml。

表7的结果显示，与牛血清白蛋白一样，人血清白蛋白也可以与葡聚糖制备复合物和稳定的紫杉醇乳液。

表7. 不同葡聚糖分子量、不同人血清白蛋白与葡聚糖质量比对乳滴粒径的影响。

实施例8. 将10 mg喜树碱分散溶解在5 ml注射用大豆油中，将牛血清白蛋白-葡聚糖复合物BD6-10K加入20 ml去离子水中溶解或者分散，白蛋白浓度为10 mg/ml。然后将复合物水溶液与喜树碱油溶液混合，混合溶液经高速均质（10000转）1分钟后，再经800 bar高压均质4分钟，最后将乳液在90℃加热1小时，即可得到喜树碱-白蛋白-葡聚糖纳米乳液。喜树碱在乳液中的浓度为0.4 mg/ml。该纳米乳液的粒径为196 nm，多分散系数为0.11。

实施例9. 将10 mg盐酸阿霉素加入到5 ml注射用大豆油中，加入7 μl三乙胺脱去阿霉素中的盐酸，超声使阿霉素分散溶解。减压除去未反应的三乙胺后加入20 ml BD6-10K水溶液，其中白蛋白浓度为10 mg/ml。混合溶液经高速均质（10000转）1分钟后，再经800 bar高压均质4分钟，最后将乳液在90℃加热1小时，即可得到阿霉素-白蛋白-葡聚糖纳米乳液。阿霉素在乳液中的浓度为0.4 mg/ml。该纳米乳液的粒径为214 nm，多分散系数为0.24。

实施例 10. 通过MTS法测定实施例2和实施例5中空白乳液和紫杉醇乳液的细胞毒性。细胞株为人口腔表皮样癌细胞KB，细胞培养液中紫杉醇浓度分别为0.0001，0.001，0.01，0.1，1μg/ml，与细胞的保存时间为72小时。由附图3可知，空白乳液对KB细胞在当量浓度下几乎没有毒副作用，而紫杉醇乳液则具有与紫杉醇自由药物（紫杉醇DMSO溶液）相当的细胞杀伤力。

实施例 11. 通过MTS法测定实施例2和实施例5中空白乳液和紫杉醇乳液的细胞毒性。细胞株为人口腔表皮样癌细胞KB，细胞培养液中紫杉醇的浓度为0.01μg/ml，与细胞的保存时间分别为16，24，48，70小时。附图4所示，BD6-10K-PTX乳液有更好的细胞杀伤效果。

实施例 12. 取生长良好的小鼠肝癌H22腹水，用生理盐水以1:4稀释（腹水:生理盐水），细胞浓度约1~2×10⁷个/ml，每只雄性小鼠右腋皮下接种0.2 ml。随机分组，每组10只，设生理盐水对照组、BD6-10K空白乳液组、BD6-10K-PTX载药乳液10 mg/kg组和16 mg/kg组、BD1-62K-PTX载药乳液10 mg/kg组和16 mg/kg组、紫杉醇注射液（哈药集团生物工程有限公司）10 mg/kg组和16 mg/kg组。

所有的乳液经过450纳米滤膜过滤除菌，接种后第3日开始尾静脉注射给药。每次给药前称量体重，按实际体重给药，共给药6次。接种后第12日称体重后脱臼处死小鼠，解剖取瘤块，称瘤重，计算各组平均瘤重。实体瘤的疗效评价以瘤重抑制百分率（inhibition rate, IR）表示，将给药组的平均瘤重与对照组的平均瘤重按下列公式计算抑瘤率：

抑瘤率IR (%) = (1-WT/WC)× 100%

其中WT为给药组的平均瘤重，WC为生理盐水对照组的平均瘤重。按公式计算求出肿瘤抑制率并进行t检验。经统计学检验P < 0.05为有效。

表8结果显示，相对于紫杉醇注射液，BSA-短链葡聚糖载药乳液，即BD6-10K-PTX乳液在相同的剂量下有着更好的抑瘤效率。当紫杉醇的浓度为16 mg/kg时，由于毒副作用太大，紫杉醇注射液组有2只老鼠死亡，而BD6-10K-PTX载药乳液到实验结束时10只老鼠仍然全部存活，说明白蛋白-短链葡聚糖载药乳液在抑制肿瘤生长的同时也降低了紫杉醇的毒副作用。

表8. 紫杉醇-白蛋白-葡聚糖乳液对荷H22瘤小鼠的肿瘤抑制效果。

与生理盐水组比较：6个给药组除BD1-62K-PTX 10 mg/kg组外，P < 0.001。

与生理盐水组比较：BD1-62K-PTX 10mg/kg组P < 0.005。

实施例 13. 取生长良好的小鼠肝癌H22腹水，用生理盐水以4:1稀释（腹水:生理盐水），每只雄性小鼠腹腔接种0.2 ml，随机分组，每组10只，设生理盐水对照组、BD6-10K空白载体组、BD6-10K-PTX载药乳液10 mg/kg组和16 mg/kg组、BD1-62K-PTX载药乳液10 mg/kg组和16 mg/kg组、紫杉醇注射液（哈药集团生物工程有限公司）10 mg/kg组和16 mg/kg组。

所有的乳液经过450纳米滤膜过滤除菌，接种后第3日开始尾静脉注射给药，每隔1周给药1次，共3次。每次给药前称量体重，按实际体重给药。试验期间逐日记录动物的死亡情况。对照组动物通常在2～3周内全部死亡，个别存活时间太长需剔除。如治疗期间对照组动物7天内死亡 ≥ 20％，表示试验失败。如对照组内动物存活4周以上，试验亦应作废。分别记录对照组和治疗组的平均生存时间，按下列公式计算生命延长率：

生命延长率（%）=（给药组平均存活天数/对照组平均存活天数－1）×100%

如表9所示，相对于紫杉醇注射液，BD6-10K-PTX，即BSA-短链葡聚糖载药乳液对小鼠生命延长的效果更为明显。

表9. 紫杉醇-白蛋白-葡聚糖乳液对荷H22瘤小鼠的生命延长效果。

组别	平均存活天数	生命延长率 (%)
			生理盐水对照组	15.4 ±2.8	－
BD6-10K空白乳液组	15.3 ±2.9	－
			BD6-10K-PTX 10 mg/kg组	22.8 ±1.3	48.1
BD6-10K-PTX 16 mg/kg组	23.6±2.1	53.2
			紫杉醇注射液10 mg/kg组	21.9 ± 2.3	42.2
紫杉醇注射液16 mg/kg组	23.2 ± 1.8	50.6
			BD1-62K-PTX 10 mg/kg组	21.6 ±1.8	40.3
BD1-62K-PTX 16 mg/kg组	21.9 ±1.5	42.2

与生理盐水组和BD6-10K空白乳液组比较：各给药组P < 0.01。

实施例14. 取生长良好的小鼠肝癌H22腹水，用生理盐水以4:1稀释（腹水：生理盐水），每只小鼠腹腔接种0.2 ml，随机分组，每组10只，设生理盐水对照组、BD1-62K空白载体组、BD1-62K-PTX载药乳液（乳液不经过加热）10 mg/kg组和12 mg/kg组、BD1-62K-PTX载药乳液（乳液在90℃加热1小时）12 mg/kg组、紫杉醇注射液（哈药集团生物工程有限公司）8 mg/kg组和10 mg/kg组和12 mg/kg组。

如表10所示，经过加热过程的乳液对荷瘤小鼠的生命延长效果明显好于没有加热过的乳液。此外，对于没有经过加热的乳液，在小鼠接受注射以后有急性死亡现象发生；而经过90℃加热的乳液在小鼠实验中（实施例12~14）没有出现急性死亡。这些结果表明了乳液的加热过程是一个必需的过程。

表10. 紫杉醇-白蛋白-葡聚糖乳液对荷H22瘤小鼠的生命延长效果。

与生理盐水组和BD1-62K空白乳液组比较：各给药组P < 0.01。

Claims

1. 一种疏水药物-白蛋白-葡萄糖纳米乳液的制备方法，其特征在于利用Maillard反应制备白蛋白-葡聚糖共价复合物；将白蛋白-葡聚糖复合物溶解在水溶液中，将疏水药物溶解或者分散在大豆油中；将上述制备的水性溶液和油性溶液混合，通过高压均质方法制得水包油纳米乳液；再加热制得的水包油纳米乳液，形成稳定的白蛋白油水界面膜，从而得到稳定的载药纳米乳液；其中：

（1）白蛋白与葡聚糖的质量比在1:0.4到1:2之间；

（3）将疏水药物溶解于大豆油中，浓度为1-500 mg/ml；

（4）混合白蛋白-葡聚糖复合物水溶液和疏水药物油溶液，油溶液与水溶液的体积比在1:2到1:15之间；

（6）加热制得的水包油纳米乳液，温度在80℃以上，加热时间至少30分钟；

（7）所述的葡聚糖的分子量在2000-70000之间。

2. 根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述白蛋白是人血清白蛋白、牛血清白蛋白或其他动物血清白蛋白。

3. 根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述的疏水药物为紫杉醇、阿霉素或喜树碱。

4. 一种如权利要求1-3之一所述方法制备得到的疏水药物-白蛋白-葡聚糖纳米乳液，其特征在于该纳米乳液中乳滴的结构是以包含疏水药物的油相为内核，白蛋白为油水界面膜，葡聚糖位于油滴外部以保持油滴在水相中的稳定性。

5. 如权利要求4所述的疏水药物-白蛋白-葡聚糖纳米乳液在制备疏水药物注射制剂中的应用。