CN102295692B - 水稻金属耐受蛋白OsMTP1及其编码基因和其RNA干涉片段 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种水稻金属耐受蛋白OsMPT1及其编码基因和其RNA干涉片段。所述水稻金属耐受蛋白OsMTP1,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,其编码基因OsMTP1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,该基因是应答镉胁迫的关键基因,这对于全面理解植物中金属离子转运蛋白的生物学功能具有重要的意义。所述的针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段,其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,利用表达载体将其在水稻中表达后,能够降低水稻整体植株中的OsMTP1基因表达量,伴随着OsMTP1基因表达量的降低,水稻种子对重金属镉的富集量也有降低。本发明针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段可应用于水稻的基因工程遗传育种,培育低吸收富集镉的水稻品种,减轻重金属镉对粮食作物带来的食品安全危害。
Description
技术领域:
本发明属于生物基因工程领域,具体涉及水稻金属耐受蛋白OsMTP1及其编码基因和其RNA干涉片段。
背景技术:
水稻是世界上最重要的粮食作物之一,是我国第一大粮食作物。工业“三废”的排放造成巨大的环境污染,特别是重金属污染问题日益加剧,已成为危害人类社会的重要问题之一。在我国重金属污染较严重的地区,如珠三角、长三角等工业化程度高的地区以及采矿业发达的我国中部部分地区(如湖南的郴州、衡阳、永州、常德、株州等地),都是以水稻为主要的粮食作物,这些地区生产的稻米经常会出现重金属超标的情况。过量的重金属在水稻的体内大量积累,不仅影响水稻产量、品质及整个农田生态系统,而且可通过食物链危及动物和人类的健康。研究水稻对重金属吸收转运的分子机制不仅对农业生产具有指导作用,而且对环境治理,为无公害稻米的生产技术创新提供科学依据。
MTP(Metal Tolerance Protein)是一类锌指蛋白,属于CDF(Cation Diffusion Facilitator)蛋白家族成员。CDF蛋白在细菌、真菌、植物、动物中广泛存在,这类蛋白的特征是均含有4-6个跨膜结构域,可能以二聚体或者多聚体的形式发挥作用;N末端有一标记性的氨基酸序列,而C末端则属于离子流结构域,用于结合并转运金属离子( P et al.Phylogenetic relationships within cation transporter families of Arabidopsis.Plant Physiol.2001.126(4):1646-67)。其N末端和C末端都朝向细胞质一面,部分成员在其中两个跨膜区之间的细胞质面有组氨酸富含区域,该区域可能与金属离子的特异性结合有关。第一和第二跨膜区之间 有一典型的SX(ASG)(LIVMT)2(SAT)(DA)(SGAL)(LIVFYA)(HDN)X3DX2(AS)结构(Paulsen IT et al.A novel family of ubiquitous heavy metal ion transport proteins.J.Membr.Biol.1997.156,99-103)。已有研究表明,CDF蛋白参与跨细胞质膜转运多种金属离子,包括Zn,Mn,Fe,Co,Ni,Cd等(Gaither,LA et al.Eukaryotic zinc transporters and their regulation.Biometals.2001.14,251-270)。在植物中,由于植物中CDF蛋白大多与植物对重金属的耐受性相关,因此也称为金属耐受蛋白(Metal Tolerance Protein,MTP)。
植物中最先分离鉴定的MTP是拟南芥AtMTP1(van der Zaal,BJ et al.Overexpression of a novel Arabidopsis gene related to putative zinc-transporter genes from animals can lead to enhanced zinc resistance and accumulation.Plant Physiol.1999.119,1047-1055),由于该蛋白与拟南芥的Zn离子转运相关,且与人的Zn离子转运蛋白ZnT-1高度同源,因此最初命名为ZAT (zinc transporter of A.thaliana)。拟南芥中超表达AtMTP1基因能够提高拟南芥在合适的Zn浓度培养基上的生长量,并且在转基因株系的根中富集Zn。MTP蛋白定位于细胞囊泡膜上,通过将Zn转运于囊泡中,能够解除环境中富余的Zn对植物的毒害。拟南芥AtMTP1的T-DNA插入突变体对Zn超敏感(Kobae Y et al.Zinc transporter of Arabidopsis thaliana AtMTP1 is localized to vacuolar membranes and implicated in zinc homeostasis.Plant Cell Physiol.2004,45(12):1749-1758),这更进一步证明AtMTP1在转运和应答Zn过程中发挥重要的作用。
除拟南芥之外,在其他植物中也克隆了MTP基因。Arabidopsis halleri是一种生长于矿区的植物,能吸收和富集大量的Zn和Cd,其中Zn在其叶片上的富集量可以达到干重的1%以上。研究发现,Arabidopsis halleri基因组中含有2个拷贝的MTP1基因,且该基因在Arabidopsis halleri体内组成型高表达,尤其在叶片中表达量较高。而Arabidopsis halleri的近源种 Arabidopsis lyrata和Arabidopsis thaliana均不能耐受和富集重金属,这两种植物的基因组内只含有一个拷贝的MTP1基因,其表达量也较低( DB et al.Two genes encoding Arabidopsis halleri MTP1 metal transport proteins co-segregate with zinc tolerance and account for high MTP1 transcript levels.Plant J.2004.39(3):425-39)。这表明MTP1基因的高表达与Arabidopsis halleri能够耐受高浓度的Zn、Cd和高度富集Zn、Cd有关。采用GFP融合蛋白实验分析表明,Arabidopsis halleri中MTP蛋白定位于叶肉细胞的囊泡膜上,通过跨膜转运富集重金属离子(Küpper H et al.Cellular compartmentation of cadmium and zinc in relation to other elements in the hyperaccumulator Arabidopsis halleri.Planta.2000.212(1):75-84)。遏蓝菜属植物(Thlaspi goesingense)也是一种能够耐受重金属的植物,能够富集Ni,Cd,Zn等金属。从Thlaspi goesingense分离了三个MTP基因,分别命名为TgMTP1、TgMTP1t1和TgMTP1t2。这三个基因与酵母Zn转运基因COT1和ZRC1高度同源,转化入COT1/ZRT1酵母缺陷株中,能够互补COT1/ZRT1基因的功能,使转化酵母能够耐受高浓度的Cd,Co,Zn和Ni(Persans MW et al.Functional activity and role of cation-efflux family members in Ni hyperaccumulation in Thlaspi goesingense.PANS.2001.98(17):9995-10000.Kim D et al.The plant CDF family member TgMTP1 from the Ni/Zn hyperaccumulator Thlaspi goesingense acts to enhance efflux of Zn at the plasma membrane when expressed in Saccharomyces cerevisiae.Plant J.2004.39(2):237-251)。加勒比柱花草(Stylosanthes hamata L)是草业种植中一种常用草,它能够耐受高浓度的Mn并富集Mn。从这种植物中克隆的ShMTP1基因通过在拟南芥中超表达,使拟南芥耐受Mn。表明该基因与Stylosanthes hamata能够耐受Mn相关(Delhaize E et al.Genes encoding proteins of the cation diffusion facilitator family that confer manganese tolerance.Plant Cell.2003.15(5):1131-1142)。从杨树(Populus trichocarpa)中也克隆了PtMTP1基因。通过在酵母中异源表达表明,该基因能够提高酵母菌对Zn的耐受性,而与Cd、Co、Mn、Ni等金属离子的耐受性无关。在拟南芥中超表达能够提高拟南芥对Zn的耐受性,并提高拟南芥在富Zn培养基上生长的生物量(Blaudez D et al.Poplar metal tolerance protein 1 confers zinc tolerance and is an oligomeric vacuolar zinc transporter with an essential leucine zipper motif.Plant Cell.2003.15(12):2911-2928)。芥菜(Brassica juncea)中也鉴定了金属耐受蛋白BjMTP1基因,它的表达受到Ni,Cd和Zn的诱导,其启动子的活性也受这几种金属离子的激活。推测该基因与金属离子转运和植物耐受金属相关(Muthukumar B et al.Transcriptional activation and localization of expression of Brassica juncea putative metal transport protein BjMTP1.BMC Plant Biol.2007.18,7:32)。
金属耐受蛋白主要负责细胞内二价金属阳离子的传输。目前的研究表明,在植物体内,该类蛋白大多与植物体应答和耐受多种重金属胁迫相关。
发明内容:
本发明的第一个目的是提供一种水稻金属耐受蛋白OsMTP1及其编码基因OsMTP1。
本发明的水稻金属耐受蛋白OsMTP1,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,其编码基因OsMTP1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。应当理解,考虑到密码子的简并性,在不改变氨基酸序列的前提下,对上述编码基因的核苷酸序列进行修改,也属于本发明的保护范围内。
本发明的第二个目的是提供一种针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段,其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。利用此RNA干涉片段能够显著的降低转基因种子中的重金属镉的含量。
本发明的第三个目的是提供一种RNA干涉片段的表达载体,该表达载体克隆有上述针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段。
所述的表达载体优选是将上述针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段分别正反向插入表达载体pTCK303的酶切位点Sac I与Spe I之间,和酶切位点Kpn I与BamH I之间,由此而形成表达载体。
本发明的第四个目的是提供水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1在调控重金属镉的吸收和转运方面的应用。
本发明的第五个目的是提供所述的针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段在培育低积累重金属镉的转基因植物中的应用。
本发明以水稻幼苗叶片为材料,提取其总RNA,再将mRNA反转录成cDNA,以该逆转录产物为模板设计引物进行PCR扩增,获得约1.3kb的片段。采用琼脂糖凝胶电泳回收片段,连接于pGEM T载体上,再转入大肠杆菌DH5α中,挑取阳性白色克隆,提取质粒,测序分析,该序列包含一个开放阅读框,为1257个碱基,其序列如SEQ ID NO.1所示,将此基因命名为OsMTP1,其编码蛋白具有418个氨基酸残基,其序列如SEQ ID NO.2所示,将该蛋白命名为OsMTP1。蛋白OsMTP1属于CDF家族蛋白,含有6个跨膜区,其第四和第五跨膜区之间含有一个组氨酸富含区域,该区域与离子的特异性结合和转运有关。
以OsMTP1基因为基础,设计引物:pMTP1RIL:5’-CGGGATCCGAGCTCATGGACAGCCATAACTCAGC-3’和pMTP1RIR:5’-GGGGTACCACTAGTGCTGAGCAGCAAACAT GAG-3;以OsMTP1基因为模板,扩增出500bp的片段,其序列如SEQ ID NO.3所示,所选用的RNA干涉的表达载体为pTCK303,将该片段连接于pGEM T-Vector上,经限制性酶切处理, 分别正反向连接于表达载体pTCK303的酶切位点Sac I与Spe I之间,和酶切位点KpnI与BamH I之间,由此而构建干涉载体。采用农杆菌EHA105介导的遗传转化方法,将干涉载体导入正常粳稻品种中花11。将GUS染色检测为蓝色,再经RT-PCR鉴定OsMTP1基因的转录受到抑制之后植株为阳性植株,将其播种于大田,获得纯合株系。将野生型水稻和基因Os MTP1 RNA干涉的水稻经一定浓度的重金属胁迫处理,完成一个生长周期之后,采用原子吸收光谱的方法测量水稻种子中的重金属含量。结果发现,基因OsMTP1 RNA干涉的水稻种子中的重金属镉含量明显低于野生型对照的种子,表明对OsMTP1基因的RNA干涉能够降低水稻种子对重金属镉的富集量,从而证实本发明的OsMTP1基因是应答镉胁迫的关键基因,是一种金属耐受蛋白基因,该基因的表达能够调控水稻对重金属镉的积累方式。
本发明的有益效果如下:
1、本发明首次从水稻中克隆出来水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1,该基因是应答镉胁迫的关键基因,这对于全面理解植物中金属离子转运蛋白的生物学功能具有重要的意义。重金属污染严重的影响了水稻的生长和稻米的品质,OsMTP1基因的克隆和生物学功能的验证,对于其他农作物的吸收和积累重金属镉的研究具有重要的参考意义。
2、本发明提供的针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段,利用表达载体将其在水稻中表达后,能够降低水稻整体植株中的OsMTP1基因表达量,伴随着OsMTP1基因表达量的降低,水稻种子对重金属镉的富集量也有降低。因此本发明的针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段可应用于水稻的基因工程遗传育种,培育低吸收富集镉的水稻品种,减轻重金属镉对粮食作物带来的食品安全危害。
附图说明:
图1是OsMTP1基因克隆PCR电泳图,M表示DL2000的Marker,从上至下分别为2kb,1kb,750bp,500bp,250bp,100bp,扩增得到的含有OsMTP1基因阅读框的DNA片段约为1.3kb;
图2是OsMTP1基因的RNA干涉片段的PCR电泳图,M表示DL2000的Marker,扩增得到的含有OsMTP1基因的干涉片段为500bp;
图3是水稻RNA干涉载体pTCK303的载体图谱;
图4是RNA干涉水稻转基因植株的GUS检测;
图5是RNA干涉水稻转基因植株的RT-PCR检测;
图6是RNA干涉水稻转基因植株和野生型水稻种子中镉含量的比较,对照表示的是在培养液中培养,而0.05mM镉表示是在含有0.05mM镉的培养液中培养,野生型对照表示野生型的水稻,OsMTP1 RNA干涉表示OsMTP1基因被干涉而降低表达的水稻。
具体实施方式:
以下实施例是对本发明的进一步说明,而不是对本发明的限制。下列实施例中未注明具体实验条件和方法,所采用的技术手段通常为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1:OsMTP1基因的克隆
取水稻日本晴(种子购于广东省农科院)的幼苗叶片部位,用TriZol Reagent(Invitrogen公司,其货号为:15596026)提取叶片总RNA,采用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测总RNA的纯度及量,取1μg的总RNA做起始逆转录反应,所采用的逆转录酶为MMLV(Pr omega公司,其货号为:M1701),逆转录反应的步骤参考该逆转录酶的使用说明。以逆转录产物为模板,采用引物:
5’-CTCATCCCCAAGATGGACAGCC-3’;
5’-ACTACCTACCTGTCTCAAGCGGTCA-3’进行常规PCR扩增;
PCR反应体系为:逆转录产物1μl,10xBuffer 5μl,dNTP(each 2.5mM)4μl,正、方向引物(10μM)各1μl,Taq酶(5U/μl)1μl,ddH2O 37μl。在冰上加样后混匀。PCR反应条件为:94℃5min;94℃30sec,55℃30sec,72℃90sec,30个循环;72℃10min。PCR扩增获得约1.3kb的片段(电泳如图1所示)。采用琼脂糖凝胶电泳回收该片段后,连接于pGEM T载体(Promega公司,其货号为:A1360)上,连接反应:PCR产物7μl,pGEM T载体1μl,3U T4 ligase 1μl,10×buffer 1μl,总10μl体积,22℃连接1h。取5μl连接产物,用氯化钙冻融法转到大肠杆菌DH5α中,加800ml LB,复苏1h,涂于氨苄抗生素的LB平板(已经涂布X-gal/IPTG),37℃过夜。挑取白色克隆,在含有氨苄抗生素的液体LB培养基中扩增培养,送交测序。经测序分析表明,该序列含有一个开放阅读框,为1257个碱基,其序列如SEQ ID NO.1所示,将此基因命名为OsMTP1,其编码蛋白具有418个氨基酸残基,其序列如SEQ ID NO.2所示,将该蛋白命名为OsMTP1。
实施例2:OsMTP1基因的RNA干涉载体的构建和遗传转化
本发明所用的干涉载体是pTCK303(A Practical Vector for Efficient Knockdown of Ge ne Expression in Rice(Oryza sativa L.).Wang Zhen,Chen Changbin,Xu Yunyuan,Jiang Rongxi,Han Ye,Xu Zhihong,Chong Kang.Plant Molecualr Biology Reporter.2004.22:409-417),并在此基础上构建OsMTP1的干涉载体pTCK303-M1RI-F1-F2。该载体的构建步骤如下:常规方法提取实施例1的转有含有OsMTP1基因的pGEM T载体的大肠杆菌DH5α的质粒,以该质粒为模板,以pMTP1RIL:5’-CGGGATCCGAGCTCATGGACAGCCATAACTCA GC-3’(带有BamHI和SacI酶切位点)和pMTP1RIR:5’-GGGGTACCACTAGTGCTGAGCAGCAAACATGAG-3’(带有KpnI和SpeI酶切位点)作为引物,进行PCR反应。反应体系为:质粒1μl(50ng/μl),10xBuffer 5μl,dNTP(each 2.5mM)4μl,引物pMTP1RIL和pMTP1RIR(10μM)各1μl,Taq酶(5U/μl)1μl,ddH2O 37μl。在冰上加样后混匀。PCR反应条件为:94℃5min;94℃30sec,55℃30sec,72℃40sec,30个循环;72℃10min。PCR扩增获得约500bp的片段(电泳如图2所示)。采用琼脂糖凝胶电泳回收该片段后,将该片段连接于pGEM T-Vector上形成pGEM T-M1RI。经测序分析,插入500bp的序列如SEQ ID NO.3所示,序列正确。用SacI和SpeI双酶切pGEM T-M1RI,回收500bp片段F1,同时用SacI和SpeI双酶切载体pTCK303(见图3所示),将回收后的F1片段与经SacI和SpeI双酶切处理后的pTCK303载体连接,形成pTCK303-M1RI-F1,经测序正确后,用BamHI和KpnI双酶切处理pTCK303-M1RI-F1载体。同时用BamHI和KpnI双酶切pGEM T-M1RI并回收500bp片段F2,然后将F2片段与BamHI和KpnI双酶切处理pTCK303-M1RI-F1载体连接,经测序鉴定正确后,形成pTCK303-M1RI-F1-F2转基因干涉载体。该转基因干涉载体是将如SEQ ID NO.3所示的序列,分别正反向插入表达载体pTCK303的酶切位点Sac I与Spe I之间,和酶切位点KpnI与BamH I之间,在宿主细胞中,该转基因干涉载体在Mai ze Ubil pro启动子的启动下,正、反向插入序列转录,并互补形成dsRNA,而对OsMTP1基因进行干扰。
采用农杆菌EHA105介导的遗传转化方法(Hiei等,Efficient transformation of rice(Oryzasativa L.)mediated by Agrobacterium and sequence analysis of the boundaries of the T-DNA,1994,Plant Journal 6:271-282)将转基因干涉载体pTCK303-M1RI-F1-F2导入正常粳稻中花 11水稻品种,通过GUS染色检测,染色为蓝色的则为转入了转基因干涉载体pTCK303-M1RI-F1-F2的阳性植株(如图4),由此获得转基因株系5株,再经RT-PCR鉴定,确定OsMTP1基因被干涉而降低表达的株系有3株,经田间播种后,获得纯合株系。
RT-PCR鉴定OsMTP1基因被干涉而降低表达的程序如下:取经过GUS检测为阳性的水稻苗生长至1个月左右,取叶片进行总RNA的提取,采用的试剂为TriZol Reagent(Invitrog en公司,其货号为:15596026),根据该试剂的说明书的步骤进行,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测总RNA的纯度及量,取1μg的总RNA做起始逆转录反应,所采用的逆转录酶为MMLV(Promega公司,其货号为:M1701),逆转录反应的步骤参考该逆转录酶的使用说明。以逆转录产物为模板,采用引物M1RIDF和M1RIDR引物对检测OsMTP1基因的表达情况,采用水稻持家基因OsActin7基因的A7F和A7R引物对检测OsActin7基因的表达作为内参,电泳结果见图5。引物序列如下:
M1RIDF:5’-GGTCCTGATGGAGAGCACGC-3’
M1RIDR:5’-CTACTCGCGCTCAATCTGAA-3’
A7F:5’-CGTGACCTTACCGACAACCT-3’
A7R:5’-GCACCTGAACCTTTCTGCTC-3’
如图5所示,一个野生型(WT)和两个RNA干涉的水稻株系(RI1和RI3)进行OsMTP1基因的检测,OsActin7基因的表达作为对照。结果表明,在持家基因OsActin7基因在三个检测水稻株系的植株中表达一致的情况下,OsMTP1基因的表达在第27个循环即可检测到有表达,在30个循环时检测表达结果更明显,而两个干涉株系(RI1和RI3)的表达在27和30个循环时均未能检测到OsMTP1有表达,这表明在这两个干涉株系(RI1和RI3)中OsMTP1基 因的表达被明显降低了。
实施例3:采用原子吸收光谱法测定RNA干涉转基因水稻种子中的重金属含量
将上述纯合株系的种子播种到直径9em培养皿中37℃萌发,7d后将幼苗分别移至营养液(对照)和附加0.05mM的Cd的营养液中栽培生长。营养液组成为:母液1:91.4g NH4NO3,32.4g MgSO4·7H2O,加水定容至1L;母液2:88.6g CaCl2,加水定容至1L;母液3:40.3g NaH2PO4,71.4g K2SO4,加水定容至1L;母液4:0.943g H3BO4,1.5g MnCl2·4H2O,0.074g(NH4)6Mo7O24·4H2O,0.031g CuSO4·5H2O,0.035g ZnSO4·7H2O,加水定容至1L;母液5:6.9g FeSO4·7H2O,9.3g Na2EDTA·2H2O,加水定容至0.5L。使用时,每4L营养液加1-5号母液各5mL,余量为水。为使水稻生长健壮,可另加偏硅酸钠50-100ppm,调节pH至5-5.1。待水稻生长至完熟期后,将水稻从营养液中移出,用流水洗净根部营养液后再用蒸馏水冲洗两次。水稻根、茎叶和种子分别收获,115℃高温杀青15min,65℃烘箱中烘至恒重。万能粉碎机将种子磨碎,储存。称取约0.3g水稻种子材料于玻璃瓶中,HNO3∶H2O2=4∶1(体积比)的溶液浸泡过夜,密封玻璃瓶,80℃水浴加热至消解液澄清,打开玻璃瓶盖,100℃挥酸,再用原子吸收分光光度计(型号:GBC932AA)测定不同样本中重金属Cd离子的含量。以未转转基因干涉载体pTCK303-M1RI-F1-F2的野生型水稻作为对照。
结果如图6显示,从图6中可以看出OsMTP1基因RNA干涉转基因株系种子中重金属Cd含量低于水稻野生型植株。由此说明,本发明的OsMTP1基因是应答镉胁迫的关键基因,是一种金属耐受蛋白基因。并且表明,本发明的针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段能够成功的对OsMTP1基因实行干涉,调控水稻对重金属镉的吸收和分布,伴随基因OsMTP1表达量的降低,水稻种子对重金属镉的富集量也有降低。
Claims (5)
1.一种针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段,其特征在于,其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.一种RNA干涉片段的表达载体,其特征在于,该表达载体克隆有权利要求1所述的针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段。
3.根据权利要求2所述的RNA干涉片段的表达载体,其特征在于,所述的表达载体是将针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段分别正反向插入表达载体pTCK303的酶切位点SacⅠ与SpeⅠ之间,和酶切位点KpnⅠ与BamHⅠ之间,由此而形成的。
4.核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1在调控水稻重金属镉的吸收和转运方面的应用。
5.权利要求1所述的针对水稻金属耐受蛋白基因OsMTP1的RNA干涉片段在培育低积累重金属镉的转基因水稻中的应用。
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CN101507400A (zh) * | 2009-03-26 | 2009-08-19 | 中国水稻研究所 | 一种控制水稻重金属镉积累的方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
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Functional analysis of metal tolerance proteins isolated from Zn/Cd hyperaccumulating ecotype and non-hyperaccumulating ecotype of Sedum alfredii Hance;Zhang M等;《FEBS Letters》;20110720;第585卷;2604-2609 * |
GenBank:AK100735.1;Kikuchi S等;《GenBank》;20081204 * |
Kikuchi S等.GenBank:AK100735.1.《GenBank》.2008, |
Zhang M等.Functional analysis of metal tolerance proteins isolated from Zn/Cd hyperaccumulating ecotype and non-hyperaccumulating ecotype of Sedum alfredii Hance.《FEBS Letters》.2011,第585卷2604-2609. |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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CN102295692A (zh) | 2011-12-28 |
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