CN102283377A - 清除人体羟自由基的活性肽水解液的制法及活性肽口服液 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其特征在于，它以海洋鱼鳞为原料，经烘干、酸碱脱盐处理后，加入木瓜蛋白酶与胃蛋白酶，然后在45-50℃、pH5.5-6.5水解1.8-2.2小时，得酶解液；再对酶解液进行灭活处理，然后进行离心，去除沉淀物，得活性肽水解液。本发明还公开了一种清除人体羟自由基的活性肽保健口服液，它以浓缩活性肽水解液、蜂蜜、白砂糖和柠檬酸为原料。本发明水解过程简单，提取过程有效地利用了海产品加工下脚料鱼鳞，制备过程节能环保。且其除腥和口服液的配方具有简单实用、成本低廉的优点，容易在工业生产上推广应用。

Description

清除人体羟自由基的活性肽水解液的制法及活性肽口服液

技术领域

本发明涉及一种活性肽水解液的制备方法；特别是一种清除人体羟自由基的活性肽水解液的制备方法；本发明还涉及用前述活性肽水解液制成的活性肽口服液。

背景技术

近年来，随着养殖规模的日益扩大和养殖技术的不断完善，养殖鱼类的产量提高很快。中国的水产品产量一直保持着高速增长势头，水产品产量2005 年已经达到约4900万t，占世界水产品产量35%，位居世界第一位。随着我国水产业的发展，水产加工也越来越受到人们的重视，加工的同时产生出大量下脚料，占鱼体总重的30％～50％，其中约5％是鱼鳞。然而，这些鱼鳞没有被充分利用，大部分作为废弃物丢弃了。据统计，我国每年废弃的鱼鳞达到30万t以上。

鱼鳞含有丰富的蛋白质和多种矿物质，主要由胶原蛋白和羟基磷灰石组成。其中有机物占 41%～55%，鱼鳞的有机组成中除生胶质外，大部分为鱼类特有的鱼鳞硬蛋白及少量角质蛋白、脂肪、色素和粘液质等。鱼鳞灰分含量较高，约占30%，主要成分是羟基磷灰石，绝大部分集中在骨质层，脂质含量少，相对于目前生产胶原蛋白的主要原料皮和骨而言，这更有利于胶原的提取和纯化。

经常食用含胶原蛋白丰富的食品，能有效地增加皮肤组织细胞的储水能力，增强和维持肌肤良好的弹性，强化肌肤的韧性，延缓肌体的衰老。同时，胶原蛋白可以作为补钙成分用于保健食品，因为血浆中来自胶原蛋白的羟基脯氨酸是将血浆中的钙运输到骨细胞的运载工具，骨细胞中的骨胶原则是羟基磷灰石的黏合剂，它与羟基磷灰石共同构成了骨骼的主体。此外，胶原蛋白还能降低血甘油三酯和胆固醇，用于制作减肥降血脂食品。

蛋白肽由二个或二个以上氨基酸组成。人体的吸收是以肽的方式进行，食用蛋白肽的吸收利用率可达100%。肽的分子量、氨基酸排列顺序不同所表现的功能就不同。

胶原蛋白肽是胶原或明胶经蛋白酶降解处理后制成的，具有较高的消化吸收性，分子量大约在3000道尔顿，胶原蛋白肽可促进骨的形成，增强低钙水平下的骨胶原结构，从而提高了骨强度，即达到了预防骨质疏松症的作用；另外胶原蛋白肽还具有其它许多特殊的生理功能：如保护胃粘膜和抗溃疡作用，抗过敏作用等，特别需要提出的是，胶原蛋白在美容方面的功效，因为，皮肤中胶原蛋白占72%，真皮中80%是胶原蛋白，胶原蛋白在皮肤中构成了一张细密的弹力网，锁住水分,支撑着皮肤。胶原蛋白的流失，导致支撑皮肤的弹力网断裂，皮肤组织萎缩、塌陷，肌肤就会显现干燥、粗糙、松弛、皱纹、毛孔粗大、暗淡、色斑等衰老现象”。因此，及时补充胶原蛋白，对于改善肌肤问题，延缓衰老，有非常好的功效。

生物活性肽生产制备方法和途径有三条：一是从自然界生物体中提取其本身固有各种天然活性肽类。二是通过蛋白质降解途径可获得具有各种生理功能活性肽。三是合成方法制备生物活性肽, 包括化学合成法、酶合成法和重组技术合成法。从天然生物体提取生物活性肽, 生物体含量很低, 加工成本却很高, 且大量提取会造成物种资源萎缩。另外, 提取生物活性肽残存有机溶剂又会带来毒性问题。化学合成法常用于合成高营养价值、中等长度的医药用肽，但采用这种方法制取活性肽反应底物和反应剂价格高, 反应过程中能产生有害物质。酶合成法相对有很多优点, 如反应温和, 酶催化位置有方向性等, 但反应副产物多, 最适酶缺乏及产率过低等因素都制约着其发展。

目前最基本方法是使用蛋白酶进行简单水解, 此种方法不仅可制取具有功能性食品蛋白且不会损坏其营养价值。除可释放出各种为人类所需要生物活性肽之外, 将食物降解为不同链长的肽还可使其更易消化。但这种酶解法不利方面是产品其它功能如粘性、乳化力和吸水性会受到影响, 需要通过调整水解参数改善产品特殊性能和去除不良味觉成分。在实际生产中, 对一些特殊肽类生产需要对反应底物、酶、反应条件作特殊要求。

目前，它成为全世界研究的热点、大量的国内外研究结果表明：生物活性肽是涉及生物体内多种细胞功能的生物活性物质，在生物体内已发现几百种，不同的生物肽具有不同的结构和生理功能，如抗病毒、抗癌、抗血栓、抗高血压、免疫调节、激素调节、抑菌、降胆固醇等作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的、水解过程简单、可以酶解鱼鳞胶原蛋白来生产活性肽水解液的方法，所制备的活性肽水解液具有较高的清除羟自由基的的能力。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供了一种以上述方法制得的活性肽水解液制成的活性肽口服液。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其特点是，其步骤如下：

(1)清洗烘干：取海洋鱼鳞，清洗到无杂物和血污，将清洗后的鱼鳞在55-65℃烘干至含水量为10%以下；

(2)酸碱脱盐处理：分别用2N的盐酸和质量百分比浓度为10%的NaOH溶液进行脱盐处理后，水洗至pH为5.5-6.5，得水与鱼鳞的混合物，且鱼鳞占混合物的重量百分比为5-7%（底物浓度）；

(3)酶水解：向水与鱼鳞的混合物中加入木瓜蛋白酶与胃蛋白酶的混合酶，混合酶中木瓜蛋白酶占其总重量的60-70%，所加入的混合酶占水与鱼鳞的混合物重量的4.5-5.5%（加酶量）；然后在45-50℃、pH5.5-6.5水解1.8-2.2小时，得酶解液；

(4)灭酶和离心：在90-100℃下对酶解液进行灭活处理，然后进行离心，去除沉淀物，离心液即为活性肽水解液。

以上所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法的步骤(2)酸碱脱盐处理中，优选的技术方案是：水洗至pH为6.0，得水与鱼鳞的混合物，且鱼鳞占混合物的重量百分比为6%。

以上所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法的步骤(3)酶水解中，优选的技术方案是：混合酶中木瓜蛋白酶占其总重量的65%，所加入的混合酶占水与鱼鳞的混合物重量的5.0%；然后在48℃、pH6.0水解2.0小时，得酶解液。

以上所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法的步骤(4)灭酶和离心中，优选的技术方案是：在95℃下对酶解液进行灭活处理。

以上任何一项技术方案所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法中，进一步优选的技术方案是：向活性肽水解液中加入重量浓度为2%的活性炭进行脱腥处理50min，处理温度为60℃，得脱腥活性肽水解液，浓缩至脱腥活性肽水解液中的活性肽重量含量为3-5%，得浓缩活性肽水解液。

本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。本发明还提供了一种清除人体羟自由基的活性肽保健口服液，其特点是，它是由以下重量配比的原料制成：

如以上任何一项技术方案中所述的浓缩活性肽水解液    85-90；

蜂蜜  4-6     白砂糖   7-9；  柠檬酸   0.08-0.12 。

其中，各原料的优选重量配比为：

浓缩活性肽水解液    86.9；

蜂蜜  5     白砂糖8；  柠檬酸0.10  。

本发明所述的活性肽保健口服液可以按现有技术中口服液的常规制备方法制成，制备时可以将各原料进行混合，装瓶后再进行杀菌处理即可。

以下对本发明技术方案及相关技术参数进行进一步的阐述。

以下各条件研究实验中所涉及的清除羟自由基试验的方法如下：样品对羟自由基的清除活性采用甲基紫褪色法，用分析天平分别称取甲基紫0.088g，七水硫酸亚铁0.026g，均定容至100mL，用移液管吸取30%双氧水1 mL，定容到100 mL，用HCl调水的pH至3.5。按一定的方法加上述离心液，使总体积为10mL。然后在580 nm波长下比色，测得吸光度值，按下式计算清除率：

清除率=(A-A₀)/(A₁-A₀)×100%。

清除羟自由基实验加样表见表1。

表1 清除羟自由基实验加样表

	A1(mL)	A0(mL)	A(mL)
				样品	—	—	1
甲基紫溶液	0.2	0.2	0.2
				硫酸亚铁溶液	—	5	5
双氧水	—	1	1
				pH 3.5水溶液	9.8	3.8	2. 8

一、鱼鳞水解制作活性肽水解液的条件研究及活性肽水解液清除自由基能力研究实验。

1 水解条件对羟自由基清除率的影响

1.1  底物浓度对清除自由基的影响

准确称量干燥鱼鳞5，6，7，8，9g，在pH6.0，50℃，5%的混合酶条件下酶解2.0h。观察并记录鱼鳞水解液清除自由基的情况，结果见图1。

图1表明随着底物浓度的增加，酶解物清除自由基率是增加的，当底物浓度增加到一定程度时，清除自由基率略有下降后就基本上不再变化，造成这种趋势变化的原因可能是由于底物浓度过大，单位体积内分子过大，酶便不能更好地与其接触，选取合适的底物浓度既可以节省原料又可以避免酶的浪费。由于6%的底物浓度清除自由基率达到最大，底物浓度再增加对清除自由基率的影响略有下降，因此6%的底物浓度为适宜的条件。

1.2 加酶量对清除自由基的影响

分别准确称量干燥鱼鳞6.0 g，共5份，在pH6.0，50℃，5%的混合酶条件下分别加入3%，4%，5%，6%，7%酶，酶解2.0 h。观察并记录鱼鳞水解液清除自由基的情况，结果见图2。

图2表明随着酶量增加，清除自由基率是增加的，且增长幅度较大，但当达到5%酶量时清除自由基率的增加趋于平缓。由此我们可知清除自由基率并不是随着酶量的增加而增加，据此可推测其原因为底物浓度一定时，如果没有足够的底物与酶反应，清除自由基率增加便不会很明显，由图可知当酶量达到5%时，清除率已经很高，而后清除率增加趋势不明显，出于经济方面考虑，选择5%作为最适酶量。

1.3 酶解温度对清除自由基的影响

准确称量干燥鱼鳞6.0 g，共5份，在pH6.0，5%的混合酶，分别在40，45，50，55，60℃条件下酶解2.0 h。观察并记录鱼鳞水解液清除自由基的情况，结果见图3。

图3表明，清除自由基率随着温度的增加而增加，当温度超过50℃时清除自由基能力明显下降，这是因为随着温度的增加，达到酶的最适温度时，酶的水解能力最大，超过酶的最适温度，酶受高温影响，酶的结构被破坏，导致水解得到抗自由基多肽的改变，从而影响自由基的清除。从图中可以看出50℃时，清除自由基能力最高，选择50℃为酶解温度。

1.4 酶解时间对清除自由基的影响

分别准确称量干燥鱼鳞6.0 g，共5份，在pH6.0，50℃，5%的混合酶条件下分别酶解1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 h。观察并记录鱼鳞水解液清除自由基的情况，结果见图4。

图4表明，随着时间延长清除自由基能力增加，随着时间进一步延长，到达2小时后清除自由基能力明显下降。这是因为随着时间的增加，酶把鱼鳞胶原蛋白酶解为小分子的能清除自由基的多肽，时间延长使多肽进一步被水解，进一步被水解的多肽清除自由基的能力下降。由图可以看出酶解2h时清除自由基能力最大。

1.2  响应面优化实验分析

1.2.1  响应面因素水平的选取

响应面是指响应变量η与一组输入变量（ζ1,ζ2,ζ3...ζk）之间的函数关系式：η=f(ζ1,ζ2,ζ3...ζk)。依据响应面法建立的双螺杆挤压机的统计模型可用于挤压过程的控制和挤压结果的预测。 　　

试验设计与优化方法，都未能给出直观的图形，因而也不能凭直觉观察其最优化点，虽然能找出最优值，但难以直观地判别优化区域。为此响应面分析法（也称响应曲面法）应运而生。响应面分析也是一种最优化方法，它是将体系的响应（如萃取化学中的萃取率）作为一个或多个因素（如萃取剂浓度、酸度等）的函数，运用图形技术将这种函数关系显示出来，以供我们凭借直觉的观察来选择试验设计中的最优化条件。

显然，要构造这样的响应面并进行分析以确定最优条件或寻找最优区域，首先必须通过大量的量测试验数据建立一个合适的数学模型（建模），然后再用此数学模型作图。

表2 清除自由基工艺条件响应面分析试验的因素与水平

使用Design Expert8.0.2软件，结合上述单因素影响试验结果，对影响效果的加酶量、酶解温度、酶解时间三个单因素进行响应面设计，进行优化实验，如表2。根据试验设计原理，设计了3因素3水平共17个实验点的响应分析实验，实验设计和结果见表3。

1.2.2  响应面分析方案及结果

鱼鳞酶解物清除自由基的响应曲面分析试验设计方案与试验结果见表3。

表3 清除自由基的试验设计与试验结果

条件优化后得到的二次多项回归方程为：自由基清除率=+96.321+0.37A-4.68B+1.14C－0.92AB－0.74BC－0.72 A²－6.53B²－1.11C²。线性相关系数R²是99.65%，失拟项的F值为1.98，P值为0.2617，远大于0.05，所以对结果的影响不显著。该模型拟合程度较好。

1.2.3 最佳提取条件的预测和验证

通过Design Expert 8.0.2软件对经手动优化后，酶解鱼鳞得到自由基清除率最大时的条件为在实验的因素水平范围内预测的最佳条件：时间1.99h，加酶量4.53%，温度47.93℃，自由基清除率为96.6096%。将此条件下得到的酶解液灭酶，离心后进行验证试验。经三次验证测得的自由基清除率平均值为96.32%，与理论值接近。

1.2.4 活性肽水解液中活性肽分子量的测定

用蓝色葡聚糖2000测得Vo为14.98mL，柱床体积为47.50mL，由各标准物的保留时间计算出相应的Ve，进而计算出有效分配系数Kav,制作标准曲线，结果参见图5、图6。

二、本发明中多肽酶解液的除腥方法

1、活性炭除腥方法

① 活性炭加入量的影响

表4  活性炭加入量的结果

活性炭加入量（%）	1	2	3	4	5
						腥味	腥味较浓	腥味较淡	基本无腥味	基本无腥味	完全无腥味
多糖保留率（%）	94.5	88.6	79.54	74.7	73.6

活性炭加入量结果见表4，由表4可知，活性炭加入量为2%时，处理后的多肽水解液腥味已较淡，而多肽保留率为88.6%，而当活性炭加入量达到4%及5%时，虽然除腥效果有了明显的提高，但同时多糖保留率却过低，选择2%作为活性炭最佳加入量。

② 处理时间的影响

表5 处理时间的结果

处理时间（min）	20	30	40	50	60
						腥味	腥味较浓	腥味较浓	腥味较淡	基本无腥味	基本无腥味
多糖保留率（%）	98.3	94.8	87.1	84.6	78.5

处理时间对腥味及多糖含量的影响见表5，如表5所示，当处理时间为40min时多肽水解液腥味较淡且多肽保留率为87.1%，当处理时间为50min时，多肽保留率为85.8%，与处理40min的多肽保留率相比并未大幅下降，但腥味已经接近基本无腥味的程度，但当处理时间为60min时，多糖保留率下降较多，而除腥效果并无明显提高，故选择最佳处理时间为50min。

③ 处理温度的影响

表6  处理温度的结果

处理温度（℃）	40	50	60	70	80
						腥味	腥味较浓	腥味较淡	基本无腥味	基本无腥味	完全无腥味
多糖保留率（%）	95.1	87.5	85.6	82.8	71.4

处理温度对除腥效果的影响见表6，由表6中可以看出，处理温度60℃与70℃相比，除腥效果差别不大，但70℃的多肽保留率下降了3.8%，考虑到温度的升高会影响多肽酶解液中其它生物活性物质和营养物质的稳定性，同时温度较高也可能导致某些物质分解产生有毒有害物质，所以确定60℃为最佳处理温度。

三、口服液的配料及工艺条件。

鱼鳞氨基酸水解液有鱼特有的鲜味,但味道比较单一,口感稍差,因此需要添加一定量的甜味剂、酸味剂对口感进行调配。本实验选取蜂蜜、白砂糖作为甜味剂，柠檬酸作为酸味剂分别选取了三个水平进行3因素3水平的正交试验。

表7 正交试验设计

水平	蜂蜜A（克）	白砂糖B（克）	柠檬酸C（克）
				1	4	6	0.10
2	5	7	0.15
				3	6	8	0.20

正交试验结果参见表8。

表8 正交试验及结果

由表8可得知，对于不同的指标而言，因素影响的主次顺序是不一样的，综合考虑各因素对产品口感影响的主次顺序为A＞C＞B。最佳配比组合为A₂B₃C₁。即多肽水解液86.9克、蜂蜜5克、白砂糖8克、柠檬酸0.10克，按该重量配比可以实现最佳的口感。

本发明方法通过鱼鳞酶解制备的活性肽水解液能清除人体的羟自由基，其水解过程简单，提取过程有效地利用了海产品加工下脚料鱼鳞，制备过程节能环保。且其除腥和口服液的配方具有简单实用、成本低廉的优点，容易在工业生产上推广应用。

附图说明

图1 为底物浓度对清除自由基的影响图；

图2 为加酶量对清除自由基的影响图；

图3 为温度对清除自由基的影响图；

图4 为时间对清除自由基的影响图；

图5为用Sephadex G-15凝胶层析测定分子量标准曲线图；

图6为本发明活性肽水解液中活性肽分子量分布曲线图。

具体实施方式

以下进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。

实施例1，一种清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其步骤如下：

(1)清洗烘干：取海洋鱼鳞，清洗到无杂物和血污，将清洗后的鱼鳞在55℃烘干至含水量为10%；

(2)酸碱脱盐处理：分别用2N的盐酸和质量百分比浓度为10%的NaOH溶液进行脱盐处理后，水洗至pH为5.5，得水与鱼鳞的混合物，且鱼鳞占混合物的重量百分比为5%；

(3)酶水解：向水与鱼鳞的混合物中加入木瓜蛋白酶与胃蛋白酶的混合酶，混合酶中木瓜蛋白酶占其总重量的60%，所加入的混合酶占水与鱼鳞的混合物重量的4.5%；然后在45℃、pH5.5水解1.8小时，得酶解液；

(4)灭酶和离心：在90-℃下对酶解液进行灭活处理，然后进行离心，去除沉淀物，离心液即为活性肽水解液。

实施例2，一种清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其步骤如下：

(1)清洗烘干：取海洋鱼鳞，清洗到无杂物和血污，将清洗后的鱼鳞在65℃烘干至含水量为5%；

(2)酸碱脱盐处理：分别用2N的盐酸和质量百分比浓度为10%的NaOH溶液进行脱盐处理后，水洗至pH为6.5，得水与鱼鳞的混合物，且鱼鳞占混合物的重量百分比为7%；

(3)酶水解：向水与鱼鳞的混合物中加入木瓜蛋白酶与胃蛋白酶的混合酶，混合酶中木瓜蛋白酶占其总重量的70%，所加入的混合酶占水与鱼鳞的混合物重量的5.5%；然后在50℃、pH6.5水解2.2小时，得酶解液；

(4)灭酶和离心：在100℃下对酶解液进行灭活处理，然后进行离心，去除沉淀物，离心液即为活性肽水解液。

实施例3，一种清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其步骤如下：

(1)清洗烘干：取海洋鱼鳞，清洗到无杂物和血污，将清洗后的鱼鳞在60℃烘干至含水量为8%；

(2)酸碱脱盐处理：分别用2N的盐酸和质量百分比浓度为10%的NaOH溶液进行脱盐处理后，水洗至pH为6.0，得水与鱼鳞的混合物，且鱼鳞占混合物的重量百分比为6%；

(3)酶水解：向水与鱼鳞的混合物中加入木瓜蛋白酶与胃蛋白酶的混合酶，混合酶中木瓜蛋白酶占其总重量的65%，所加入的混合酶占水与鱼鳞的混合物重量的5.0%；然后在48℃、pH6.0水解2.0小时，得酶解液；

(4)灭酶和离心：在95℃下对酶解液进行灭活处理，然后进行离心，去除沉淀物，离心液即为活性肽水解液。

实施例4，实施例1-3任何一项所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法中：向活性肽水解液中加入重量浓度为2%的活性炭进行脱腥处理50min，处理温度为60℃，得脱腥活性肽水解液，浓缩至脱腥活性肽水解液中的活性肽重量含量为3%，得浓缩活性肽水解液。

实施例5，实施例1-3任何一项所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法中：向活性肽水解液中加入重量浓度为2%的活性炭进行脱腥处理50min，处理温度为60℃，得脱腥活性肽水解液，浓缩至脱腥活性肽水解液中的活性肽重量含量为5%，得浓缩活性肽水解液。

实施例6，一种清除人体羟自由基的活性肽保健口服液，它是由以下重量配比的原料制成：

如实施例4或5所述的浓缩活性肽水解液    85；

蜂蜜  4     白砂糖   7；  柠檬酸   0.08。

实施例7，一种清除人体羟自由基的活性肽保健口服液，它是由以下重量配比的原料制成：

如实施例4或5所述的浓缩活性肽水解液   90；

蜂蜜  6     白砂糖   9；  柠檬酸   0.12 。

实施例8，一种清除人体羟自由基的活性肽保健口服液，它是由以下重量配比的原料制成：

如实施例4或5所述的浓缩活性肽水解液   86.9；

蜂蜜  5     白砂糖8；  柠檬酸0.10  。

Claims (7)

1.一种清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其特征在于，其步骤如下：

(1)清洗烘干：取海洋鱼鳞，清洗到无杂物和血污，将清洗后的鱼鳞在55-65℃烘干至含水量为10%以下；

(2)酸碱脱盐处理：分别用2N的盐酸和质量百分比浓度为10%的NaOH溶液进行脱盐处理后，水洗至pH为5.5-6.5，得水与鱼鳞的混合物，且鱼鳞占混合物的重量百分比为5-7%；

(3)酶水解：向水与鱼鳞的混合物中加入木瓜蛋白酶与胃蛋白酶的混合酶，混合酶中木瓜蛋白酶占其总重量的60-70%，所加入的混合酶占水与鱼鳞的混合物重量的4.5-5.5%；然后在45-50℃、pH5.5-6.5水解1.8-2.2小时，得酶解液；

(4)灭酶和离心：在90-100℃下对酶解液进行灭活处理，然后进行离心，去除沉淀物，离心液即为活性肽水解液。

2.根据权利要求1所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)的酸碱脱盐处理中：水洗至pH为6.0，得水与鱼鳞的混合物，且鱼鳞占混合物的重量百分比为6%。

3.根据权利要求1所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其特征在于，步骤(3)的酶水解中：混合酶中木瓜蛋白酶占其总重量的65%，所加入的混合酶占水与鱼鳞的混合物重量的5.0%；然后在48℃、pH6.0水解2.0小时，得酶解液。

4.根据权利要求1所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其特征在于，步骤(4)灭酶和离心中：在95℃下对酶解液进行灭活处理。

5.根据权利要求1-4任何一项所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其特征在于：向活性肽水解液中加入重量浓度为2%的活性炭进行脱腥处理50min，处理温度为60℃，得脱腥活性肽水解液，浓缩至脱腥活性肽水解液中的活性肽重量含量为3-5%，得浓缩活性肽水解液。

6.一种清除人体羟自由基的活性肽保健口服液，其特征在于，它是由以下重量配比的原料制成：

如权利要求5所述的浓缩活性肽水解液    85-90；

蜂蜜  4-6     白砂糖   7-9；  柠檬酸   0.08-0.12 。

7.根据权利要求6所述的一种清除人体羟自由基的活性肽口服液，其特征在于，各原料的重量配比为：

如权利要求5所述的浓缩活性肽水解液    86.9；

蜂蜜  5     白砂糖8；  柠檬酸0.10  。

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