CN102283119B - 一种制备组培用无菌玫瑰枝条的方法 - Google Patents

一种制备组培用无菌玫瑰枝条的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及玫瑰组织培养技术，旨在提供一种组培用无菌玫瑰枝条的制备方法。该方法，包括：将玫瑰枝条修剪清洗后浸泡在25％(v/v)的PTC水溶液，然后用蒸馏水冲洗；将玫瑰枝条正向竖直装入经高压蒸汽灭菌的组培瓶中并盖好瓶盖，然后置于37℃恒温箱中放置24h，然后转至4℃冰箱中放置48h，重复该步骤1次；在无菌条件下将玫瑰枝条切成带腋芽的小段，用70％酒精浸泡并摇动杀菌后取出，用无菌水冲洗，再以升汞浸泡9min后取出用无菌水冲洗，即获得组培用无菌玫瑰枝条。本发明提供了PTC水溶液及采用37℃和4℃这两种温度交替处理，与现有常规方法相比，具有无菌化效果好、发芽率高、操作简便、省时省力、成本低、生产应用性强等优点。

Description

一种制备组培用无菌玫瑰枝条的方法
技术领域
本发明涉及玫瑰组织培养技术，特别涉及组培用无菌玫瑰枝条的制备方法。
背景技术
玫瑰(Rosa rugosa)为蔷薇科、蔷薇属植物，其花形美色鲜、芳香浓郁，具有食用、药用、保健、美容、观赏等多种用途，是我国十大名花之一，也是世界四大切花之一。玫瑰还是水土保持和城市园林建设的优势树种。当前，玫瑰繁育仍以扦插或嫁接等传统方式为主，长期存在繁殖系数低、新品种选育难、病菌感染严重、产量和品质难以提高等一系列急需解决的问题。利用组织培养技术可以实现玫瑰优良品种的快速繁育、结合诱发突变等其它技术选育新品种、脱除现有品种中的内生病菌等，进而从种质资源创新这一农业与生物产业的基点出发，极大推进当前玫瑰产业的发展[科技情报开发与经济，2008，l8(28)：124～125；北方园艺，2009，6：48～50]。
制得无菌外植体既是开展植物组织培养的基础，更是决定植物组织培养能否成功的关键。国内外已有研究表明，玫瑰枝条是用于组培快繁的较理想外植体。但因玫瑰体内往往存有种类与数量均较多的真菌和细菌，且难以利用一般的脱毒方法完全去除、获得组培所需用的无菌外植体，而使组培无法继续并最终导致失败。这是目前玫瑰组培快繁中存在的最大难题[科技情报开发与经济，2008，l8(28)：124～125；中国园艺文摘，2009，12：31～32；北方园艺，2009，6：48～50]。为此，迫切需要建立一套行之有效、高效、经济的组培用无菌玫瑰枝条制备技术。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，克服现有技术中的不足，提供一种制备组培用无菌玫瑰枝条的方法。
本发明提供了一种制备组培用无菌玫瑰枝条的技术方法，包括以下步骤：
(1)取长有饱满腋芽的健壮玫瑰枝条，修去刺、叶柄和叶片后清洗干净；
(2)将玫瑰枝条在25％(v/v)的PTC水溶液中浸泡5min，然后用蒸馏水冲洗；
(3)在1000ml具盖组培瓶底部垫入10层滤纸、加入10ml蒸馏水淋湿后盖好瓶盖，放入高压蒸汽灭菌锅中于121℃灭菌20min，待瓶子冷却后将玫瑰枝条正向竖直装入其中并盖好瓶盖；
(4)将装有玫瑰枝条的组培瓶置于37℃恒温箱中放置24h，然后转至4℃冰箱中放置48h，重复该步骤1次；
(5)在无菌条件下将玫瑰枝条切成2cm的带腋芽的小段，用70％酒精浸泡并摇动杀菌1min后取出，用无菌水冲洗5次，再以0.2％升汞(氯化汞)浸泡9min后取出，用无菌水冲洗10次，即获得组培用无菌玫瑰枝条；
所述PTC水溶液的配制方法为：将15g十二烷基磺酸钠(SDS)、2.5g多菌灵(又名棉萎灵、苯井咪唑44号，一种广谱性杀菌剂)、6ml吐温-20(聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯)和4ml Triton-X100(聚乙二醇辛基苯基醚)依次溶于水，并以水定容至100ml。
本发明步骤(1)中，清洗玫瑰枝条时：先用流水冲洗1h，再用试管刷蘸PTC水溶液洗刷干净，然后用蒸馏水冲洗2次。
本发明步骤(1)中，修理玫瑰枝条时，将其切成约10cm长的小段。
本发明的有益效果在于：
本发明所建立的组培用无菌玫瑰枝条制备方法，其主要特点在于提供了PTC水溶液及采用37℃和4℃这两种温度交替处理，与现有常规方法相比，具有无菌化效果好、发芽率高、操作简便、省时省力、成本低、生产应用性强等优点。
具体实施方式
本发明的技术方案可以通过以下步骤实现。
选用样本材料：为公知的紫枝玫瑰(Rosa rugosa Purple Branch)和大马士革玫瑰(Rosa damascena Mill)，这两个玫瑰品种在我国各地都有广泛栽培，在发明人所在的浙江九九红玫瑰科技有限公司也有大量栽培，可随时提供样本。
试剂和仪器：本发明中所用的SDS(十二烷基磺酸钠)、吐温-20和Triton-X100均为美国安发码西亚公司产品，其它试剂均为国产分析纯。无菌操作台由江苏苏净集团有限公司生产，型号为SW-CJ-1BU。
实施例1：
本发明制备组培用无菌玫瑰枝条的方法的主要步骤如下：
(1)将15g SDS、2.5g多菌灵、6ml吐温-20、4ml Triton-X100依次溶于水并定容至100ml配成PTC水溶液；25％的PTC水溶液由25ml的PTC水溶液和75ml的水配制成，保存于4℃冰箱待用。
(2)取长有饱满腋芽的健壮玫瑰枝条，修去刺及叶柄和叶片并切成约10cm长的小段。
(3)流水冲洗1h后，用试管刷蘸PTC水溶液洗刷干净并用蒸馏水冲洗2次，再在25％的PTC水溶液中浸泡5min并用蒸馏水冲洗5次。
(4)在1000ml具盖组培瓶底部垫入10层滤纸、加入10ml蒸馏水淋湿后盖好瓶盖，放入高压蒸汽灭菌锅中于121℃灭菌20min，尔后取出并自然冷却；
(5)将枝条竖直装入步骤(4)准备好的组培瓶中并盖好瓶盖，于37℃恒温箱中放置24h，再转至4℃冰箱中放置48h；再转入37℃恒温箱中放置24h，再转至4℃冰箱中放置48h。
(5)在无菌操作台内用手术刀将枝条切成约2cm带腋芽的小段，用70％酒精浸泡摇动杀菌1min后取出，用无菌水冲洗5次。
(6)用0.2％升汞浸泡9min后取出，用无菌水冲洗10次。
(7)用无菌滤纸吸干，接种于MS+6-BA(0.5mg/L)+NAA(0.2mg/L)+Vc(0.2g/L)，PH5.5的无菌培养基中，每瓶接1小段。
(8)观察并统计外植体的生长和污染等情况。
作为实例，我们分别选取浙江九九红玫瑰科技有限公司浙江衢州基地及山东平阴玫瑰研究所平阴基地的紫枝玫瑰(Rosa rugosa Purple Branch)和大马士革玫瑰(Rosadamascena Mill)为试验材料，利用本发明的方法对两地、两品种四个玫瑰样本各制备了200个枝条小段，结果显示，无菌率和发芽率均达到100％。

Claims (1)

1.一种制备组培用无菌玫瑰枝条的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将15 g 十二烷基磺酸钠SDS、2.5 g多菌灵、6 ml吐温-20、4 ml Triton-X100依次溶于水并定容至100 ml配成PTC水溶液；25%的PTC水溶液由25 ml的PTC水溶液和75 ml的水配制成，保存于4℃冰箱待用；
（2）取长有饱满腋芽的健壮玫瑰枝条，修去刺、叶柄和叶片后清洗干净，清洗玫瑰枝条时：先用流水冲洗1 h，再用试管刷蘸PTC水溶液洗刷干净，然后用蒸馏水冲洗2次；
（3）将玫瑰枝条在25% v/v的PTC水溶液中浸泡5min，然后用蒸馏水冲洗；
（4）在1000 ml具盖组培瓶底部垫入10层滤纸、加入10 ml蒸馏水淋湿后盖好瓶盖，放入高压蒸汽灭菌锅中于121℃灭菌20 min，待瓶子冷却后将玫瑰枝条正向竖直装入其中并盖好瓶盖；
（5）将装有玫瑰枝条的组培瓶置于37℃恒温箱中放置24 h，然后转至4℃冰箱中放置48 h，重复该步骤1次；
（6）在无菌条件下将玫瑰枝条切成2 cm的带芽的小段，用70%酒精浸泡并摇动杀菌1 min后取出，用无菌水冲洗5次，再以0.2%升汞浸泡9min后取出，用无菌水冲洗10次，即获得组培用无菌玫瑰枝条；
所用的十二烷基磺酸钠、吐温-20和Triton-X100均为美国安发码西亚公司产品，其它试剂均为国产分析纯。 
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1481673A (zh) * 2002-09-10 2004-03-17 凌义华 植物克隆技术
CN101147469A (zh) * 2007-11-15 2008-03-26 上海交通大学 诱导山苍子丛生芽的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
于福科.关于玫瑰组培快繁关键技术的研究.《中国中国优秀硕士学位论文全文数据库(硕士) 农业科技辑》.2004,(第1期),第14页第2.2.2.1-2.2.2.3部分，第19页第3.1.2.1部分，第21-22页的第3.1.3部分. *
于福科等.玫瑰组织培养污染控制技术措施.《陕西农业科学》.2002,(第11期),第47～48页. *
邓小梅等.植物组织培养过程中污染现象的研究进展.《江西林业科学》.2004,(第6期),第34页右栏第10-15行，第34页倒数第1段. *

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