CN102276711A - 全氟辛磺酸人工完全抗原的制备方法 - Google Patents

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魏国华
孙艳灵
杜宇国
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Abstract

本发明涉及一种全氟辛磺酸(Perfluorooctane sulfonates，PFOS)人工完全抗原的制备方法，属于有机化学及免疫学技术范畴。利用全氟辛磺酸的羧酸基团，将全氟辛磺酸直接或者通过适当长度的连接臂链接到载体蛋白上，制备全氟辛磺酸的完全抗原。载体蛋白可以是牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白(OVA)，血兰蛋白(KLH)或人血清蛋白(HSA)。MALDI-TOF-MS质谱确定载体蛋白上全氟辛磺酸的数量。本方法操作简单，无需特别的仪器设备，成本低廉，为以后筛选出它的特异性抗体和建立免疫分析方法提供了基础。

Description

全氟辛磺酸人工完全抗原的制备方法
技术领域
本发明涉及一种全氟辛磺酸(Perfluorooctane sulfonates，PFOS)人工完全抗原的制备方法，属于有机化学及免疫学技术范畴。 
背景技术
全氟辛磺酸(PFOS)是一种重要的含氟表面活性剂，主要用于聚合物添加剂、润滑剂、灭火剂、杀虫剂等。由于全氟辛磺酸的化学惰性及其广泛的生产和使用，已造成严重的环境累积和污染，成为继有机氯农药、二恶英之后日益引起重视的新型持久性有机污染物。研究表明，全氟辛磺酸是具有中等毒性的肝致癌物，可增加人类患癌症的风险，此外，全氟辛磺酸还具有胚胎毒性和潜在的神经毒性，而且生物蓄积性强，具有引起生物体脂肪代谢紊乱、能量代谢障碍、诱导过氧化产物作用及胚胎毒性等多种毒性。调查表明，职业性PFOS暴露人群、一般人群和野生动物体内以及环境中，均广泛存在着以PFOS为主的PFCs污染。因此，对于环境中全氟辛磺酸的检测是非常重要的。目前国内的研究多集中于利用了固相萃取与高效液相色谱.质谱(HPLCMS)联用的方法同时检测生物体内和水中的PFOS。但样品预处理烦琐，操作复杂，仪器昂贵，很难达到快速、简便的现场检测要求。如果能够采用金标免疫或酶联免疫的方法，则可达到快速、灵敏并能现场检测PFOS的需要。为了建立其免疫分析的方法，首先必须得到全氟辛磺酸的抗体。全氟辛磺酸分子结构简单，分子量小，属于半抗原，不能直接免疫制取抗体，必须首先将其与载体蛋白偶联制备出它的完全抗原，才能诱发动物产生抗体。 
发明内容
本发明的目的在于寻求适当的试剂，用简单、实用的方法合成出全氟辛磺酸的完全抗原，为以后筛选出它的特异性抗体和建立免疫分析方法提供基础。 
发明内容 
本发明涉及一种全氟辛磺酸(Perfluorooctane sulfonates，PFOS)人工完全抗原的制备方法，属于有机化学及免疫学技术范畴。利用全氟辛磺酸的羧酸基团，可以将全氟辛磺酸直接或者通过适当长度的连接臂链接到载体蛋白上；连接臂的类型或者长度的选择取决于由此抗原产生的抗体的活性，制备全氟辛磺酸的完全抗原。载体蛋白可以是牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白(OVA)，血兰蛋白(KLH)，人血清蛋白(HSA)或其他蛋白以及蛋白的衍生物。MALDI-TOF-MS质谱确定载体蛋白上全氟辛磺酸的数量。本方法操作简单，无需特别的仪器设备，成本低廉，为以后筛选出它的特异性抗体和建立免疫分析方法提供了基础。 
具体实施方式
实施例1： 
Figure BSA00000159728000021
将全氟辛磺酸1(10mg)，化合物2(14mg)溶解在DCM(3ml)中，氮气保护下，加入酸性树脂至pH＝2，室温反应10小时；然后将上述反应混合物离心，取上清液慢慢滴加到BSA(40mg)的PBS缓冲溶液中(20ml)。室温下反应5小时，然后离心，将上清液装入分子量1万的透析膜制备的透析袋中，透析袋悬于2000ml烧杯的PBS缓冲液中，4℃下透析7天，然后将透析袋中的液体冷冻干燥即为合成的全氟辛磺酸的完全抗原。MALDI-TOF-MS质谱确定抗原的分子量为：70131. 
实施例2： 
Figure BSA00000159728000022
将化合物3(100mg)，化合物5(40mg)溶解在MeOH∶H2O＝1∶1(10ml)中，氮气保护下，室温下反应5小时，常规有机反应处理，柱色谱分离后得到化合物6纯品。将化合物6(200mg)，化合物7(230mg)溶解在吡啶中，0℃下反应5小时，常规有机反应处理，柱色谱分离后得到化合物8纯品。化合物8(40mg)溶解在DMF(2ml)中，然后慢慢滴加到BSA(140mg)的PBS缓冲溶液中(20ml)。室温下反应5小时，然后离心，将上清液装入分子量1万的透析膜制备的透析袋中，透析袋悬于2000ml烧杯的PBS缓冲液中，4℃下透析7天，然后将透析袋中的液体冷冻干燥即为合成的全氟辛磺酸的完全抗原9。MALDI-TOF-MS质谱确定抗原的分子量为：70023。

Claims (7)

1.本发明涉及一种全氟辛磺酸(Perfluorooctane sulfonates，PFOS)人工完全抗原的制备方法，属于有机化学及免疫学技术范畴。利用全氟辛磺酸的羧酸基团，将全氟辛磺酸直接或者通过适当长度的连接臂链接到载体蛋白上，制备全氟辛磺酸的完全抗原。载体蛋白可以是牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白(OVA)，血兰蛋白(KLH)，人血清蛋白(HSA)或其他蛋白以及蛋白的衍生物。MALDI-TOF-MS质谱确定载体蛋白上全氟辛磺酸的数量。本方法操作简单，无需特别的仪器设备，成本低廉，为以后筛选出它的特异性抗体和建立免疫分析方法提供了基础。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，载体蛋白可以是牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白(OVA)，血兰蛋白(KLH)，人血清蛋白(HSA)或其他蛋白以及蛋白的衍生物。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，可以将全氟辛磺酸直接或者通过适当长度的连接臂链接到载体蛋白上；连接臂的类型或者长度的选择取决于由此抗原产生的抗体的活性。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，能够将全氟辛磺酸链接到载体蛋白上的方法和试剂。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反应温度在-100℃-100℃之间。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反应时间在1分钟-200小时之间。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，全氟辛磺酸的用量为载体蛋白的0.001-2000摩尔当量。
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PB01 Publication
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