CN102276713A - 全氟辛酸人工完全抗原的制备方法 - Google Patents

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魏国华
孙艳灵
杜宇国
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Abstract

本发明涉及一种全氟辛酸(Perfluorooctanoic acid，PFOA)人工完全抗原的制备方法，属于有机化学及免疫学技术范畴。利用全氟辛酸的羧酸基团，将全氟辛酸直接或者通过适当长度的连接臂链接到载体蛋白上，制备全氟辛酸的完全抗原。载体蛋白可以是牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白(OVA)，血兰蛋白(KLH)或人血清蛋白(HSA)。MALDI-TOF-MS质谱确定载体蛋白上全氟辛酸的数量。本方法操作简单，无需特别的仪器设备，成本低廉，为以后筛选出它的特异性抗体和建立免疫分析方法提供了基础。

Description

全氟辛酸人工完全抗原的制备方法
技术领域
本发明涉及一种全氟辛酸(Perfluorooctanoic acid，PFOA)人工完全抗原的制备方法，属于有机化学及免疫学技术范畴。 
背景技术
全氟辛酸(PFOA)是一种重要的含氟表面活性剂，主要用于聚合物添加剂、润滑剂、灭火剂、杀虫剂等。由于全氟辛酸的化学惰性及其广泛的生产和使用，已造成严重的环境累积和污染，成为继有机氯农药、二恶英之后日益引起重视的新型持久性有机污染物。研究表明，全氟辛酸是具有中等毒性的肝致癌物，可增加人类患癌症的风险，此外，全氟辛酸还具有胚胎毒性和潜在的神经毒性，而且生物蓄积性强，具有引起生物体脂肪代谢紊乱、能量代谢障碍、诱导过氧化产物作用及胚胎毒性等多种毒性。调查表明，职业性PFOA暴露人群、一般人群和野生动物体内以及环境中，均广泛存在着以PFOA为主的PFCs污染。因此，对于环境中全氟辛酸的检测是非常重要的。目前国内的研究多集中于利用了固相萃取与高效液相色谱.质谱(HPLCMS)联用的方法同时检测生物体内和水中的PFOA。但样品预处理烦琐，操作复杂，仪器昂贵，很难达到快速、简便的现场检测要求。如果能够采用金标免疫或酶联免疫的方法，则可达到快速、灵敏并能现场检测PFOA的需要。为了建立其免疫分析的方法，首先必须得到全氟辛酸的抗体。全氟辛酸分子结构简单，分子量小，属于半抗原，不能直接免疫制取抗体，必须首先将其与载体蛋白偶联制备出它的完全抗原，才能诱发动物产生抗体。 
发明内容
本发明的目的在于寻求适当的试剂，用简单、实用的方法合成出全氟辛酸的完全抗原，为以后筛选出它的特异性抗体和建立免疫分析方法提供基础。 
发明内容 
本发明涉及一种全氟辛酸(Perfluorooctanoic acid，PFOA)人工完全抗原的制备方法，属于有机化学及免疫学技术范畴。利用全氟辛酸的羧酸基团，可以将全氟辛酸直接或者通过适当长度的连接臂链接到载体蛋白上；连接臂的类型或者长度的选择取决于由此抗原产生的抗体的活性，制备全氟辛酸的完全抗原。载体蛋白可以是牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白(OVA)，血兰蛋白(KLH)，人血清蛋白(HSA)或其他蛋白以及蛋白的衍生物。MALDI-TOF-MS质谱确定载体蛋白上全氟辛酸的数量。本方法操作简单，无需特别的仪器设备，成本低廉，为以后筛选出它的特异性抗体和建立免疫分析方法提供了基础。 
具体实施方式
实施例1： 
Figure BSA00000159366700021
将全氟辛酸(10mg)，NHS(14mg)，EDC(40mg)溶解在DMF(3ml)中，氮气保护下，室温反应10小时；然后将上述反应混合物离心，取上清液慢慢滴加到BSA(40mg)的PBS缓冲溶液中(20ml)。室温下反应5小时，然后离心，将上清液装入分子量1万的透析膜制备的透析袋中，透析袋悬于2000ml烧杯的PBS缓冲液中，4℃下透析7天，然后将透析袋中的液体冷冻干燥即为合成的全氟辛酸的完全抗原。MALDI-TOF-MS质谱确定抗原的分子量为：72593. 
实施例2： 
Figure BSA00000159366700022
将全氟辛酸(100mg)，化合物A(40mg)，化合物B(0.05ml)溶解在NMM(3ml)中，氮气保护下，-20℃下反应5小时，常规有机反应处理，柱色谱分离后得到化合物C纯品。将化合物C(200mg)，化合物D(230mg)溶解在吡啶中，0℃下加入DMAP(250mg)，反应5小时，常规有机反应处理，柱色谱分离后得到化合物E纯品。化合物E(40mg)溶解在DMF(2ml)中，然后慢慢滴加到BSA(140mg)的PBS缓冲溶液中(20ml)。室温下反应5小时，然后离心，将上清液装入分子量1万的透析膜制备的透析袋中，透析袋悬于2000ml烧杯的PBS缓冲液中，4℃下透析7天，然后将透析袋中的液体冷冻干燥即为合成的全氟辛酸的完全抗原。MALDI-TOF-MS质谱确定抗原的分子量为：69129. 
实施例3： 
Figure BSA00000159366700031
将全氟辛酸(100mg)，化合物A(40mg)，化合物B(0.05ml)溶解在NMM(3ml)中，氮气保护下，-20℃下反应5小时，常规有机反应处理，柱色谱分离后得到化合物C纯品。将化合物C(200mg)，化合物D(230mg)溶解在DCM中，0℃下加入DMAP(250mg)，反应5小时，常规有机反应处理，柱色谱分离后得到化合物E纯品。化合物E(40mg)溶解在DMF(2ml)中，然后慢慢滴加到BSA(140mg)的PBS缓冲溶液中(20ml)。室温下反应5小时，然后离心，将上清液装入分子量1万的透析膜制备的透析袋中，透析袋悬于2000ml烧杯的PBS缓冲液中，4℃下透析7天，然后将透析袋中的液体冷冻干燥即为合成的全氟辛酸的完全抗原。MALDI-TOF-MS质谱确定抗原的分子量为：70128. 

Claims (7)

1.本发明涉及一种全氟辛酸(Perfluorooctanoic acid，PFOA)人工完全抗原的制备方法，属于有机化学及免疫学技术范畴。利用全氟辛酸的羧酸基团，将全氟辛酸直接或者通过适当长度的连接臂链接到载体蛋白上，制备全氟辛酸的完全抗原。载体蛋白可以是牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白(OVA)，血兰蛋白(KLH)，人血清蛋白(HSA)或其他蛋白以及蛋白的衍生物。MALDI-TOF-MS质谱确定载体蛋白上全氟辛酸的数量。本方法操作简单，无需特别的仪器设备，成本低廉，为以后筛选出它的特异性抗体和建立免疫分析方法提供了基础。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，载体蛋白可以是牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白(OVA)，血兰蛋白(KLH)，人血清蛋白(HSA)或其他蛋白以及蛋白的衍生物。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，可以将全氟辛酸直接或者通过适当长度的连接臂链接到载体蛋白上；连接臂的类型或者长度的选择取决于由此抗原产生的抗体的活性。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，能够将全氟辛酸链接到载体蛋白上的方法和试剂。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反应温度在-100℃-100℃之间。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反应时间在1分钟-200小时之间。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，全氟辛酸的用量为载体蛋白的0.001-2000摩尔当量。
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CN106187981A (zh) * 2016-07-11 2016-12-07 中国科学院生态环境研究中心 一种荧光标记的全氟烷基酸探针及其应用

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN106187981A (zh) * 2016-07-11 2016-12-07 中国科学院生态环境研究中心 一种荧光标记的全氟烷基酸探针及其应用
CN106187981B (zh) * 2016-07-11 2018-04-03 中国科学院生态环境研究中心 一种荧光标记的全氟烷基酸探针及其应用

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PB01 Publication
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