CN102276632B

CN102276632B - 一种吡喹酮衍生物及其制备和应用

Info

Publication number: CN102276632B
Application number: CN201110142538.2A
Authority: CN
Inventors: 夏超明; 乔春华; 仇思婕; 段文文; 赵越
Original assignee: Suzhou University
Current assignee: Suzhou University
Priority date: 2011-05-30
Filing date: 2011-05-30
Publication date: 2014-03-19
Anticipated expiration: 2031-05-30
Also published as: CN102276632A

Abstract

本发明属于抗血吸虫药物，涉及一种可用作抗血吸虫的吡喹酮衍生物，所述吡喹酮衍生物的结构式为：或

Figure 2011101425382100004DEST_PATH_IMAGE002

；式中，n=0~4，X为O或NH。所述吡喹酮衍生物可以用作抗血吸虫病的药物，并且对血吸虫的童虫、成虫均有杀灭作用，而吡喹酮仅对成虫有效，对童虫基本无效。

Description

一种吡喹酮衍生物及其制备和应用

技术领域

本发明属于抗血吸虫药物，涉及一种可用作抗血吸虫的吡喹酮衍生物。

背景技术

血吸虫病是由于人或哺乳动物感染了血吸虫所引起的一种疾病，严重危害人类健康。血吸虫每年造成2亿人感染血吸虫病，7.79亿人有感染危险，28万人死亡和超过两千万的发病率。尽管全球动用了很多的资源控制血吸虫病的发生，血吸虫病还是不断的传播到新的地区。据建国初期统计，我国的血吸虫病分布在江苏、浙江、上海、安徽等12个省（市），共有钉螺面积148亿平方米，累计感染者达1160万例，受威胁人口在1亿以上。经过60多年的有效防治，我国的血吸虫病已得到有效控制，但近年来由于生物、自然、政策保障等因素变化较大，一些地方已达血吸虫病传播控制和传播阻断的地区重新出现疫情回升，各地输入性血吸虫病病例增加，引起了政府的高度关注。国家已于2004年将其列为乙类传染病，与传染性非典型肺炎、艾滋病处于同等重要的防治位置。

1975年，Seubert等人合成了吡喹酮，德国E-Merck和Bayer两药厂成功开发出该药品，其结构式如下所示：

。吡喹酮对血吸虫、吸虫和绦虫都有杀灭作用，具有抗虫谱广、疗效高、毒性低、疗程短及使用方便等优点，是治疗血吸虫病的首选药物，也是目前治疗日本血吸虫病的唯一特效药，虽然从上世纪70年代开始使用，但其确切的作用机制一直不是很清晰。

目前，化疗仍然是控制血吸虫病的主要手段。吡喹酮的长期、大量使用可能导致血吸虫对该药的敏感性下降，甚至于出现抗药性。特别值得注意的是九十年代实验室成功地诱导出曼氏血吸虫产生吡喹酮抗性后，在非洲和南美洲一些曼氏血吸虫病流行区陆续出现了对吡喹酮不敏感地理株、吡喹酮疗效差或治疗无效的现象。而且，吡喹酮治疗其他吸虫疗效降低的现象也有报道，尽管尚无足够的证据表明这些流行区的地理株对吡喹酮产生了抗性，但已向人们敲响警钟，尤其是吡喹酮是治疗日本血吸虫的唯一特效药，过分依赖吡喹酮单一药物治疗日本血吸虫病显然存在产生抗性的潜在危险，有必要寻找交替或替代使用的药物。因此，积极研究新的高效、低毒能替代吡喹酮的新型抗血吸虫药物对血防工作具有十分重要的意义。

有研究表明中药青蒿素及其衍生物蒿甲醚、青蒿琥酯对童虫期的血吸虫有杀灭作用，因此具有较好的预防效果。将蒿甲醚或青蒿琥酯与吡喹酮两种药物合用抗血吸虫的效果比单一用药的效果更好，这种治疗方法已经在动物实验和临床实验中被证实。研究发现，青蒿素及其衍生物的抗血吸虫主要是分子中的氧-氧桥结构单元为药效团，宿主内的铁红素将过氧键断裂，青蒿素类化合物与血红素生成共价加成产物，从而起到抗血吸虫的作用。

现有技术中没有关于将青蒿素中的过氧桥药效团与吡喹酮通过共价键构建在一个有机分子的报道；而且，即使将青蒿素中的过氧桥药效团与吡喹酮构建在一个有机分子后所得化合物也不一定具有抗血吸虫作用。

发明内容

本发明的发明目的是提供一种吡喹酮衍生物，将青蒿素中的过氧桥药效团与吡喹酮构建在一个有机分子中，使所得吡喹酮衍生物对血吸虫的童虫和成虫同时具有杀灭作用。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：一种吡喹酮衍生物，所述吡喹酮衍生物的结构式为：

或

；

式中，n=0～4，X为O或NH。

优选的技术方案中，所述吡喹酮衍生物为

或

；最优选的技术方案中，所述吡喹酮衍生物为。

上述技术方案中，所述吡喹酮衍生物的制备方法为：将青蒿素衍生物中的一种和10-羟基吡喹酮或10-氨基吡喹酮中的一种通过缩合脱水反应制备得到吡喹酮衍生物，其中，所述青蒿素衍生物为：

或；其中，

可以通过商品化的青蒿琥酯

根据现有技术中羧酸碳链延长的方法制备得到。

上述吡喹酮衍生物的制备方法中，所述缩合脱水反应中，具体是青蒿素衍生物的羧基基团中的羟基和10-羟基吡喹酮或10-氨基吡喹酮中的羟基或氨基反应。

上述吡喹酮衍生物的制备方法具体包括以下步骤：

(1)将青蒿素衍生物中的一种、10-羟基吡喹酮或10-氨基吡喹酮中的一种，碳二亚胺EDC、 1-羟基苯并三唑HOBt 、三乙胺Et₃N溶解在N,N-二甲基甲酰胺DMF中，混合物在室温下搅拌4-8小时；

(2)用乙酸乙酯EtOAc稀释，有机相用水H₂O洗涤后, 用硫酸镁MgSO₄ 干燥；旋蒸除去EtOAc，粗产物用硅胶柱（体积比，石油醚∶乙酸乙酯=1∶2）纯化，得浅黄色固体，即所述吡喹酮衍生物。

上述技术方案中，步骤(1)中，青蒿素衍生物、碳二亚胺EDC、 1-羟基苯并三唑HOBt 、10-羟基吡喹酮或10-氨基吡喹酮的摩尔比为3∶3～5∶3～6∶3～5，三乙胺Et₃N的用量为5～10倍当量（是指青蒿素衍生物的物质的量的5～10倍）；

所述10-羟基吡喹酮为

，所述10-氨基吡喹酮为

。

上述技术方案中，所述青蒿素衍生物

则是通过对商品化的蒿甲醚进行羧基官能团衍生化制备而得，其制备方法可参考：文献Bioorg.Med.Chem.,2009,17(3), 1325-1338。

上述技术方案中，制备化合物10-氨基吡喹酮的方法可参见Bioorg.Med.Chem.Lett., 2007, 17, 4154-4157；然后将10-氨基吡喹酮中的氨基通过重氮化水解形成酚羟基，制得10-羟基吡喹酮，例如：将10-氨基吡喹酮溶于体积分数1-6%的稀H₂SO₄中，然后在5℃以下滴加亚硝酸钠水溶液，搅拌1-2.5小时，进行重氮化反应；然后将混合物倒入沸腾的体积分数1-6%的稀H₂SO₄中，再回流搅拌1-2小时，进行水解反应；最后冷却反应体系到室温，用碳酸氢钠溶液中和至中性，然后经萃取、干燥、除去有机溶剂、柱层析分离得到10-羟基吡喹酮。苯环上的氨基通过重氮化水解得到酚羟基为本领域技术人员公知技术，因此，本领域技术人员应该知晓，其中的酸不局限于稀硫酸。

本发明同时要求保护一种组合物，所述组合物包括上述吡喹酮衍生物中的一种或两种以上（包括两种）的混合物。

上述吡喹酮衍生物对血吸虫的童虫和成虫都具有杀灭作用，因此，本发明同时要求保护上述吡喹酮衍生物制备抗血吸虫药物的应用。

本发明同时要求保护一种抗血吸虫药物，所述抗血吸虫药物的主要活性成分为上述吡喹酮衍生物中的一种或两种以上（包括两种）的组合物；所述抗血吸虫药物还可包括医学可接受的药物载体或添加成分。

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：

本发明所述吡喹酮衍生物可以用作抗血吸虫病的药物，并且对血吸虫的童虫、成虫均有杀灭作用，而吡喹酮仅对成虫有效，对童虫基本无效。

附图说明

图1是实施例四中正常对照组中血吸虫童虫的存活情况光镜图片；

图2是实施例四中吡喹酮组中血吸虫童虫的存活情况光镜图片；

图3是实施例四中化合物5对中血吸虫童虫的杀灭情况光镜图片；

图4是实施例五中正常对照组中血吸虫童虫的存活情况光镜图片；

图5是实施例五中化合物5对血吸虫童虫的杀灭情况光镜图片。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：

实施例一：

；

合成步骤：化合物 9的合成：将苯甲酰氯（1.85 mL, 16 mmol）在0 ℃下加入含有双氢青蒿素（2.8 g, 10 mmol）和吡啶（0.1 mL）的二氯甲烷中。混合物在室温下搅拌9小时后在5%柠檬酸水溶液和乙酸乙酯中分配。有机相再次用水洗涤，硫酸镁干燥，减压除去有机溶剂。产物用硅胶柱纯化（石油醚：乙酸乙酯 40：1）。得到产物9为白色固体，产率80%。图谱表征：¹H NMR(400MHz，CDCl₃) δ 8.12 (dd, 2H, J= 8.4Hz), 7.56-7.60 (m, 1H), 7.43-7.48 (m, 2H) , 6.02 (d, 1H, J=13.5, 3.9Hz) , 5.54 (s, 1H), 2.72-2.80 (m, 1H) , 2.39 (dt, 1H, J=6.9Hz) , 2.02-2.08 (m, 1H) , 1.88-1.95 (m, 1H), 1.67-1.85 (m, 3H) , 1.45 -1.56 (m, 2H), 1.43 (s, 3H), 1.31-1.40 (m, 2H), 1.00-1.10 (m, 1H), 0.98(t, 3H, J=6.0 Hz), 0.92(d, 3H, J=7.1 Hz)；鉴定数据表明所得化合物确为目的化合物。

化合物10的合成：上述化合物9（1.8 g, 10 mmol）溶于1，2二氯乙烷（30 mL）中，在℃度，氮气保护下滴加到乙烯基三甲基硅烷(3.3 mL, 24 mmol)和ZnCl₂(0.82 g, 12 mmol)的1，2二氯乙烷(10 mL)中。混合物在0 ℃搅拌10-20小时。然后用乙酸乙酯稀释，5%柠檬酸水溶液洗涤。有机相用MgSO4干燥，减压除去有机溶剂。产物用硅胶柱纯化（石油醚：乙酸乙酯 200：1）。得到产物10为白色固体，产率85%。图谱表征¹H NMR(400MHz，CDCl₃) δ 5.87-5.97 (m, 1H) , 5.33 (s, 1H), 5.04-5.14 (m, 2H), 4.27-4.32 (m, 1H), 2.69 (dd, 1H, J=13.4Hz), 2.18-2.44 (m, 3H), 2.00-2.06 (m, 1H), 1.87-1.95 (m, 1H), 1.75-1.85 (m, 1H), 1.60-1.66 (m, 2H), 1.45-1.53 (m, 1H), 1.42 (s, 3H), 1.11-1.38 (m, 4H), 0.96 (d, 3H, J=5.8Hz), 0.88 (d, 3H, J=7.5Hz) ；鉴定数据表明所得化合物确为目的化合物。

化合物 11的合成: 将化合物10 (595 mg, 1.5 mmol)加入含有过碘酸钠（1.6 g, 7.6 mmol）和氯化铷（8 mg, 0.03 mmol）的CCl₄ (3 mL), CH₃CN (3 mL)溶液中,室温下搅拌1小时，混合物用硅藻土过滤，乙酸乙酯稀释，无水MgSO₄干燥，减压除去有机溶剂。产物用硅胶柱纯化（石油醚：乙酸乙酯 5：1）。得到产物11为白色固体，产率60%。图谱表征¹H NMR(400MHz，CDCl₃) δ 5.34 (s, 1H), 4.80-4.85 (m, 1H), 2.63-2.75 (m, 2H), 2.49 (dd, 1H, J= 3.5, 15.5Hz), 2.27-2.35 (dt, 1H, J=3.9, 14.1 Hz), 1.96-2.05 (m, 2H), 1.86-1.95 (m, 2H), 1.76-1.81 (m, 1H), 1.64-1.68 (m, 3H), 1.42-1.48 (m, 2H), 1.40 (s, 3H), 1.25-1.29 (m, 2H), 1.23-1.25 (m, 1H), 0.96-1.02 (m, 1H), 0.95 (d, 3H, J=5.8 Hz), 0.86 (d, 3H, J=7.5 Hz). ¹³C NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 176.78, 102.81, 88.64, 80.35, 70.88, 51.66, 43.53, 36.88, 35.96, 35.26, 33.89, 29.17, 25.29, 24.20, 24.11, 20.35, 19.65, 12.43 . LCMS (ESI) m/z: 327.1805 (M+H⁺) ，(calcd for C₁₇H₂₇O₆, 327.1808) ；鉴定数据表明所得化合物确为目的化合物。

实施例二：

；

参见已有文献报道（Bioorg.Med.Chem.Lett., 2007, 17, 4154-4157），制备化合物2，具体包括：

化合物1的合成：将吡喹酮 (3.00 g, 9.60 mmol) 溶解在冷却到0 ℃的硫酸（ 9.42 g, 5.14 mL, 96 mmol, 10 eq）中。然后小心的加入浓硝酸（3.03 g, 2.12 mL, 48 mmol, 5 eq ）。反应混合物在室温下搅拌24小时后用冰冷却，碳酸钠中和反应到pH 8。反应混合物用EtOAc (150 mL)萃取3次。合并的有机相用MgSO₄)干燥，减压除去有机溶剂，产物用硅胶柱纯化（石油醚：乙酸乙酯 5：1）。得到产物1为黄色固体1.34 g,，产率39%。R _F (EtOAc:Pet, 3:1) 0.23; m.p. 88 – 90 ℃; ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃): 1.44 (m, 10H), 2.47 (t, 1H, J = 8.0), 2.95 (m, 4H), 4.08 & 4.50 (ABq, 2H, J = 17.1), 4.87 (d, 2H, J = 10.0), 5.26 (br d, 1H, J = 12.3), 7.36 (d, 1H, J = 7.9), 8.11 (d, 1H, J = 8.2), 8.19 (s, 1H); ¹³C NMR (50 MHz, CDCl₃): 25.74, 28.78, 29.06, 29.27, 39.17, 40.82, 45.18, 49.06, 55.00, 125.32, 127.02, 127.47, 129.31, 132.81, 134.78, 164.53, 174.86; IR (NaCl): 1655, 1524, 1450, 1416, 1346 cm^-1; MS (ESI) m/z 358.18 (100, MH⁺); Anal. (C₁₉H₂₃N₃O₄) C: calcd, 63.85; found, 61.24. H: calcd, 6.49: found, 6.39. N: calcd, 11.76: found, 11.12；鉴定数据表明所得化合物确为目的化合物。

化合物2的合成：将SnCl₂.2H₂O (875 mg, 3.9 mmol)滴加到含有化合物1 的甲醇溶液中。反应混合物回流，直到TLC板显示起始原料完全转化为产物点。减压除去甲醇，残渣用水溶解，10% NaHCO₃ 中和到pH 8。水相用乙酸乙酯萃取(2 × 30 mL)。合并的有机相用Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，产物用硅胶柱纯化（乙酸乙酯）。得到产物2为黄色固体1.34 g,，产率94%。

R _F (EtOAc) 0.31; m.p. 91-93℃; ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃): 1.55 (m, 10H), 2.54 (m, 1H), 2.81 (m, 4H), 3.65 (br s, 2H), 4.05 & 4.44 (ABq, 2H, J = 17.7), 4.72 (m, 2H), 5.07 (dd, 1H, J = 11.7), 6.58 (m, 2H), 6.95 (d, 1H, J = 8.9 Hz); ¹³C NMR (50 MHz, CDCl₃): 25.79, 27.94, 29.07, 40.85, 45.34, 49.09, 55.06, 111.57, 114.81, 124.43, 130.15, 133.54, 145.37, 164.42, 174.81; IR: 3449, 3352, 3237, 1643, 1512, 1423. IR (NaCl): 3458, 1647, 1512, 1421. MS (ESI) m/z 328.13 (100, MH⁺), 218.13 (34%, MH⁺-cyclohexanecarbonyl). Anal. (C₁₉H₂₅N₃O₂) C: calcd, 69.70; found, 68.79. H: calcd, 7.70; found, 7.99. N: calcd, 12.83: found, 11.96；鉴定数据表明所得化合物确为目的化合物。

步骤c：将化合物2(2.0 g, 6.1 mmol)溶于6%(体积百分数) H₂SO₄（200-400 mL）中，在0℃滴加亚硝酸钠(421.5 mg, 5.1mmol)的水溶液(100.0 mL)。搅拌3小时后，混合物倒入到沸腾的6% H₂SO₄中。再回流搅拌3小时。反应液冷却到室温后用饱和的NaHCO₃中和至中性，使用EtOAc (150 mL)萃取5次，收集有机相，干燥后，旋转蒸发除去有机溶剂，得到粗产品，使用硅胶柱层析纯化粗产品，得黄色固体，即为化合物3（10-羟基吡喹酮）。

对化合物3进行分析，数据如下：

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.03 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.78 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 13.3, 3.0 Hz, 1H), 4.77 (dt, J = 16.7, 9.5 Hz, 2H), 4.46 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 2.95 – 2.84 (m, 3H), 2.71 (dd, J = 17.2, 7.5 Hz, 1H), 2.48 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 1.76 (m, 10H). ¹³C NMR (400 MHz, DMSO) δ 173.8, 164.8, 155.9, 133.9, 129.9, 125.2, 114.5, 112.2, 54.9, 54.1, 48.3, 45.7, 44.6, 29.3, 29.13, 28.8, 27.44, 25.7, 25.1. LCMS: [M+H⁺]:实验值329.1856, 理论值329.1865。误差: 2.7 ppm；

以上数据证明，所得化合物即为吡喹酮衍生物（命名为10-OH-PZQ）,结构式为10-羟基吡喹酮。

实施例三：

；

参照上述反应式：将青蒿琥酯（117.3 mg, 0.31mmol）， EDC (76.7mg, 0.4 mmol)，HOBt (54.1mg, 0.4 mmol) 和10-羟基吡喹酮（163.7 mg, 0.5mmol），Et₃N溶解在8.0 毫升干燥的DMF中，混合物在室温下搅拌14小时后用EtOAc稀释。有机相用饱和的NH₄Cl，NaHCO₃，H₂O洗涤后用MgSO₄ 干燥。旋蒸后，粗产物用硅胶柱（石油醚：乙酸乙酯=1：2）纯化，得浅黄色固体，命名为化合物5。

其表征数据为：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.17 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.82 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.45 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 4.03 – 4.12(m, 1H), 2.98 – 2.74 – 2.27 (m, 11H), 1.71 – 1.86 (m, 8H), 1.45 – 1.63 (m, 5H), 1.41 (s, 3H), 1.24 – 1.35 (m, 6H), 0.96 (d, J = 5.9 Hz, 3H), 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3H). ¹³C NMR (300 MHz, CDCl₃) δ174.27, 169.90, 163.33, 154.62, 148.37, 132.54, 129.91, 129.29, 127.83, 127.79, 124.71, 114.30, 110.93, 103.48, 91.41, 90.53, 79.13, 70.80, 53.87, 50.55, 48.03, 44.22, 39.84, 38.62, 35.21, 33.08, 30.8, 29.90, 28.68, 28.16, 26.71, 24.90,24.66, 23.57, 20.98, 19.19, 18.14, 11.08. LCMS: [M+NH₄ ⁺]: Found m/z 711.3718 Error: 1.78 ppm；

以上数据表明所得化合物为

。

参照上述步骤制备其他三种化合物，分别进行表征，得表征数据如下：

化合物6的表征数据：¹H NMR (400 MHz, CCl₃) δ 8.56 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 29.2 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 20.8 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 5.73 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.40 (s, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.40 (d, J = 16.9 Hz, 1H), 4.04-4.11 (m, 1H), 2.94-2.26 (m, 11H), 1.98 – 1.84 (m, 8H), 1.94-1.40 (m, 5H), 1.35 (s, 3H), 1.21 (t, J = 17.8 Hz, 6H), 0.96-0.92 (m, 3H), 0.80 (d, J = 6.2 Hz, 3H). ¹³C NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 174.87 , 171.90 , 170.34 , 164.73 , 137.51 , 133.24 , 130.55 , 129.93 , 119.49 , 116.77 , 104.66 , 92.44 , 91.67 , 80.34 , 77.70 , 77.06 , 54.93 , 51.63 , 49.13 , 45.30 , 40.13, 39.45, 37.33 , 36.36 , 34.19 , 31.69 , 31.11 , 29.38, 28.66,28.28, 25.78, 24.71, 22.08, 20.37 , 14.36 , 12.20 . LCMS: [M+NH₄ ⁺]: Found m/z 710.3302 Error: 3.44 ppm；

以上数据表明所得化合物为

。

化合物8的表征数据：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.13 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.02 (s, 1H), 7.01 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.07 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 4.91 – 4.74(m, 4H), 4.41 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 4.10 – 3.98 (m, 1H), 2.93 – 2.79 (m, 4H), 2.75 – 2.64 (m, 3H), 2.42 (t, J = 10.6 Hz, 1H), 1.89 – 1.63 (m, 10H), 1.54 – 1.39 (m, 5H), 1.32 (s, 3H), 1.28 – 1.20 (m, 6H), 0.93 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 7.5 Hz, 3H). ¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 174.62, 170.44, 164.41, 149.63, 133.93, 132.18, 130.15, 128.63, 121.32, 118.72, 103.12, 89.41, 80.86, 71.10, 54.73, 53.49 , 52.11, 49.00, 44.91, 44.05,40.70,39.70, 37.47, 36.50, 34.39, 29.78, 29.66,29.21, 28.97, 28.22, 25.87, 25.64, 24.69, 20.08, 12.90. LCMS: [M+H⁺]: Found m/z 636.3411 Error: 0.09 ppm；

以上数据表明所得化合物为。

化合物9的表征数据：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.82 (s, 1H), 7.59 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.00 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 4.89 – 4.67 (m, 4H), 4.45 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 4.11 (m, 2H), 2.94 – 2.78 (m, 4H), 2.73 (d, J = 13.4 Hz, 2H), 2.46 (t, J = 18.2 Hz, 1H), 1.76 (m, 10H), 1.54 (m, 5H), 1.30 (s, 3H), 1.26 (m, 6H), 0.99 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.93 – 0.86 (m, 3H). ¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 176.78, 170.30, 166.68,164.70, 159.85, 132.97, 132.77, 128.42, 127.94, 125.60, 115.06, 112.15, 102.84, 88.70, 80.41, 70.92 , 51.29, 50.22 , 44.78, 44.38, 41.68, 40.57,39.57, 36.14, 34.68, 34.38, 24.65, 24.41, 23.52, 21.10, 19.75, 16.49, 9.60 . LCMS: [M-H⁺]: Found m/z 636.3523 Error: 1.2 ppm；

以上数据表明所得化合物为

。

实施例四：体外杀虫活性研究

采用门静脉灌注法分别于日本血吸虫尾蚴感染小鼠，童虫期（感染后第16～18天）和成虫期（感染后第6周）收集童虫和成虫，体外培养观察所合成化合物5和8抗血吸虫童虫、成虫作用。结果如下：

(1) 对血吸虫童虫的杀灭作用

化合物对血吸虫童虫作用后24h的最低杀灭浓度达到10μM，光镜下观察发现血吸虫童虫痉挛性收缩后死亡（参见图1、2、3）。空白对照组及吡喹酮对照组虫体正常，无死亡。青蒿琥脂（19.60 μg/ml）能杀死93%的童虫。结果见下表1。

表1. 化合物5,8对童虫的杀灭作用

(2) 对血吸虫成虫的杀灭作用

化合物对血吸虫成虫的最低杀灭浓度达到10μM，光镜下发现化合物可使血吸虫成虫抽搐萎缩后死亡。空白对照组成虫雌雄合抱，活力正常。结果见下表2：

表2. 化合物5,6,8,9对成虫的杀灭作用

总之，体外试验发现，目标化合物对成虫、童虫都表现出一定的杀灭活性。尤其化合物5对童虫有杀灭作用，而吡喹酮仅对成虫有效，对童虫基本无效。化合物5对成虫的杀灭活性在体外高于吡喹酮。

实施例五：

体内抗血吸虫成虫作用

每组10只小鼠，将每只小鼠感染60条尾蚴第28天，口服给药化合物5（浓度为200mg/kg），连续5天，用药后第21天剖杀小鼠，无菌灌注肝门静脉，取虫计数。结果见图4、5，可见：化合物5的减虫率为55.3％与吡喹酮对照组（100mg/kg，口服，连续给药5天，减虫率50.3％）基本相当。

Claims

1.一种吡喹酮衍生物，其特征在于，所述吡喹酮衍生物的结构式为：

Figure 2011101425382100001DEST_PATH_IMAGE001

或

Figure 2011101425382100001DEST_PATH_IMAGE002

；

式中，n=0~4，X为O或NH。

2.根据权利要求1所述吡喹酮衍生物，其特征在于，所述吡喹酮衍生物为

Figure 2011101425382100001DEST_PATH_IMAGE003

。

3.一种组合物，所述组合物包括权利要求1所述吡喹酮衍生物中的一种或两种以上的混合物。

4.权利要求1所述吡喹酮衍生物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：将青蒿素衍生物中的一种和10-羟基吡喹酮或10-氨基吡喹酮中的一种通过缩合脱水反应制备得到吡喹酮衍生物，其中，所述青蒿素衍生物为：

Figure 2011101425382100001DEST_PATH_IMAGE004

或

，其中，n=0～4。

5.根据权利要求4所述吡喹酮衍生物的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)将青蒿素衍生物中的一种，10-羟基吡喹酮或10-氨基吡喹酮中的一种，EDC， 1-羟基苯并三氮唑，三乙胺溶解在N,N-二甲基甲酰胺中，混合物在室温下搅拌4-8小时；

(2)用乙酸乙酯稀释，有机相用水洗涤后，用硫酸镁干燥；旋蒸除去EtOAc，粗产物用硅胶柱纯化，得浅黄色固体，即所述吡喹酮衍生物。

6.根据权利要求5所述吡喹酮衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，青蒿素衍生物、EDC、 1-羟基苯并三唑、10-羟基吡喹酮或10-氨基吡喹酮的摩尔比为3∶3～5∶3～6∶3～5，三乙胺的用量为青蒿素衍生物的5～10倍当量。

7.权利要求1所述吡喹酮衍生物制备抗血吸虫药物的应用。

8.一种抗血吸虫药物，其特征在于，所述抗血吸虫药物的主要活性成分为权利要求1或2所述吡喹酮衍生物中的一种或两种以上的组合物。