CN102266373A - 一种治疗疤痕的皮肤外用基质及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种皮肤外用基质,特别是一种治疗疤痕的皮肤外用基质及其制备方法。该基质由按照重量百分比的第一混合物68.4%、第二混合物31%和瓜尔胶0.6%组成;其中:第一混合物是由仙人掌汁66.4%和三乙醇胺2%组成,第二混合物是由芝麻油20%、硬脂酸8%和单硬脂酸甘油酯3%组成。本发明提供的皮肤外用基质可以抑制疤痕成纤维细胞增殖、抑制和消除疤痕增生。
Description
技术领域
本发明涉及一种皮肤外用基质,特别是一种治疗疤痕的皮肤外用基质及其制备方法,用于抑制成纤维增生、抑制和消除疤痕增生。
背景技术
创伤愈合(Wound healing)是指由于机体遭受外力作用,皮肤等组织出现离断或缺损后的愈复过程,为包括各种组织的再生和肉芽组织增生、疤痕组织形成的复杂组合,表现出各种过程的协同作用。创伤愈合本质上是机体对各种有害因素作用所致的组织细胞损伤的一种固有的防御性适应性反应。
创伤愈合的基础是炎症细胞如巨噬细胞、中性粒细胞以及修复细胞如成纤维细胞、表皮细胞等的一系列生物学活动,同时,细胞基质也参与其中。创面愈合过程主要与损伤的深度有关,比较一致的观点认为,整个愈合过程可以分为以下三个既有区别,又互有联系、相互交叉重叠进行的时期:炎症期、修复期和成熟期。
疤痕形成始于修复期。大约从第3天开始从伤口底部及边缘长出肉芽组织,填平伤口。毛细血管大约以每日延长0.1~0.6mm的速度增长,其方向大都垂直于创面,并呈袢状弯曲。第5~6天起纤维母细胞产生胶原纤维,其后一周胶原纤维形成甚为活跃,以后逐渐缓慢下来。随着胶原纤维越来越多,出现瘢痕形成过程,大约在伤后一个月疤痕完全形成。
随着烧伤治愈率的提高,深度烧伤创面愈合后瘢痕遗留问题日益成为烧伤整形治疗的主要难题。瘢痕的基本病理学改变是细胞外基质大量堆积,主要是胶原蛋白的无序堆积和比例失衡,成纤维细胞是胶原合成和分泌的主要功能细胞,成纤维细胞的生长增殖、胶原合成活动与瘢痕形成密切相关。
目前,国内外对各种类型的疤痕治疗尚无特别有效的方法。目前国内外对于疤痕的治疗常见的有:硅凝胶治疗、加压治疗、类固醇皮质激素治疗、激光治疗、冷冻治疗、放射治疗、手术治疗、干扰素、中医药,以及重组人表皮生长因子、A型肉毒毒素、高压氧、基因治疗等等。
本发明人之一曾申请了中国发明专利-植物基质(ZL02120138.2),该专利详细描述了一种100%纯的可食用的植物原汁的基质,同时还涉及一种包括100%纯的可食用的植物原汁和食用油的基质。并提供了这种基质的应用领域-“利用这种基质可以制备成各种具有各种美容、皮肤护理、护发定型和治疗作用的产品。”但是,未发现它具有抑制疤痕增生的作用,及其药用用途。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗疤痕的皮肤外用基质及其制备方法,主要解决对上述现有技术所存在的技术问题,本发明提供的皮肤外用基质可以抑制疤痕成纤维细胞增殖、抑制和消除疤痕增生。
为实现上述目的,本发明是这样实现的。
一种治疗疤痕的皮肤外用基质,其特征在于:它由按照重量百分比的第一混合物68.4%、第二混合物31%和瓜尔胶0.6%组成;其中:第一混合物是由仙人掌汁66.4%和三乙醇胺2%组成,第二混合物是由芝麻油20%、硬脂酸8%和单硬脂酸甘油酯3%组成;该皮肤外用基质主要体现为抑制疤痕成纤维细胞增殖、抑制和消除疤痕增生的药用用途。
一种治疗疤痕的皮肤外用基质的制备方法,其特征在于:它采用如上所述的组分和比例形成基质,具体采用如下步骤:(1)选采摘新鲜仙人掌,去刺后清洗3次,切碎,然后将切碎后的仙人掌用胶体磨研磨,得到仙人掌悬液,用离心机转速为1000rpm离心,再用150-250目滤网过滤除去固体物,收集于容器中,将滤液置于自然沉降分层,得仙人掌组织及上清液;该仙人掌组织及上清液与三乙醇胺放入水相罐,80rpm搅拌,同时加热到95°C,保温消毒60分钟,得第二混合物;(2)将的芝麻油、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯放入油相罐,80rpm搅拌,同时加热到88°C±2°C,保温消毒40分钟,得第一混合物;(3)将得到的第一和第二混合物与瓜尔胶在真空乳化机中混合,搅拌速度为120prm;待充分混合后,在温度为90°C下,将搅拌速度控制为80rpm,启动均质器4分钟,待温度降到30°C±2°C时,转速控制在10rpm,打入无菌空气后,即可得到用于治疗的基质。
本发明中,发明人第一次在体外试验中证实:一定浓度含量的仙人掌提取液对于真皮和疤痕成纤维细胞的体外增殖有明显的抑制作用。进而,在实际应用中发现含有该提取物的基质可以显著抑制疤痕增生,并具有相应的药用用途。本发明是对发明专利ZL02120138.2在用途方面的进一步拓展。
本发明与现有技术相比的优点在于,它同时具备了如下功能和用途:1、本发明产品使用后,可抑制成纤维细胞增生,降低胶原蛋白合成,促进表皮细胞增殖。从而调整了正在形成的疤痕和已形成疤痕的皮肤组织结构和营养供给,抑制和消除了疤痕增生,实现预防和消除疤痕的目的。2、本发明产品使用后,可唤醒激活皮肤潜能再生细胞的形成,原位再生皮肤组织器官,更新疤痕皮肤。3、本发明产品使用后,可增强皮肤油脂保护层,提高皮肤保湿和防御能力。4、本发明产品使用后,可促进皮肤新陈代谢,增加皮肤柔软度和柔韧性。
本发明是皮肤原位再生复原技术形成的新型产品,主要成分包括:食用芝麻油、蜂蜡、仙人掌汁等,产品含有功能性脂肪酸、黄酮内酯、生物碱、植物甾醇、维生素E、芝麻素、氨基酸等。
通过特殊技术萃取的仙人掌液中富含酪氨、微量元素、维生素、氨基酸、多糖、植物胶原、黄酮等多种营养功效成分,能提供皮肤所需的有效营养成分,可促进肌肤细胞新陈代谢,有利于维护皮肤生理平衡。蜂蜡在本专利技术中构成网状框架结构,溶含有多种营养促进组织恢复正常结构与功能的再生物质形成的剂型,具有与组织高黏着性、通透性、乳化性、光滑性等特点。
作为组分之一的芝麻油,其特殊成分-芝麻素有着多重生理功效,具有较强的抗氧化活性,有消除有机自由基、过氧化物及羟自由基的作用。对皮肤来说,它起到保护及抗衰老的作用。同时,本发明的提取物中富含黄酮内酯、生物碱等功效成分,一方面黄酮有改善血液循环、促进疤痕局部的新陈代谢,具有活血化瘀的作用;另一方面这些成分能够激活皮肤组织中潜能再生细胞,有序增殖分化,促进表皮细胞增殖、促进毛囊、皮脂腺的再生,抑制成纤维细胞无序过度生长,恢复皮肤正常组织结构和生理功能。
在本发明之前,在针对皮肤疤痕增生的治疗领域,在中国发明专利申请中也曾有一些案例。其中
1.“一种具有抑制皮肤纤维增生功能的药用化妆品(申请号:201010029006.3)”,该发明涉及一种具有抑制皮肤纤维增生功能的药用化妆品。该产品是将积雪草、洋葱、仙人掌药材进行提取,精制,将提取液浓缩后与尿囊素、辅料混合,制成适合临床使用的剂型。
2.“用于刺激前胶原蛋白或胶原蛋白和透明质酸合成的方法200880114867.2”,本发明涉及用于改善皮肤外观、肌理和/或水分的方法。该发明方法包括给予皮肤包含野鼠尾草籽油、梨果仙人掌提取物或二者的组合,以在皮肤中刺激胶原蛋白或透明质酸合成或降低白介素-1b合成。
3.“治疗烧伤的无疤痕中药制剂201010132067.2”,该发明提供了一种治疗烧伤的无疤痕中药制剂。由下列重量份的组分配比制成:虎杖190份,地榆 160份,大黄135份,蜂胶145份,降龙草85份,仙人掌90份,麻风树皮30份,牛膝85份,三七60份,满江红55份,紫珠35份,血竭30份,黄柏30份,槐角28份,蝉衣15份,麝香0.7份,冰片7.5份,95%医用酒精4500份。本发明具有止血收敛、止痛止痒、抗菌效果好、伤口愈合快、不留疤痕等特点。使用该发明治疗烧伤,简便、快捷,不需要严格的无菌操作,只需将创面简单清理后敷药即可。它能让创面上皮组织与胶原组织成比例生长,使创面的修复较完全,明显地减少了色素沉积和疤痕的产生。
4.“用于治疗伤口的基于TGF-b单体的药物和蛋白质200780016269.7”,该发明提供了单体TGF-b或其片段或其衍生物作为药物的用途。这些药物优选地包括单体TGF-b3或其片段或其衍生物。提供的药物可用于加速伤口愈合和/或抑制瘢痕形成、促进上皮再生、或预防和/或治疗纤维化疾病。
5.“祛除疤痕的药物及其制备方法 - 200710193044.0”,该发明涉及一种祛除因各种原因而留下的疤痕的药物及其制备方法,由下列各原料按重量份数制备而成:桃仁100-500份、鸦胆子50-300份、冰片 5-50份、樟脑5-50份、石碱30-300份、甘油200-600份、凡士林100-500份、十八醇5-50份、单硬脂酸甘油酯5-50份,具有使用方便、不受疤痕形成时间的限制、不受形成原因限制的优点。
6.“一种促进伤口愈合、减少瘢痕形成的外用中药及制备方法200710017859.3”,该发明公开了一种促进伤口愈合、减少瘢痕形成的外用中药及其制备方法,制得该药物的原料药为白及、当归、降香的复方配伍,其组方还有五倍子,以三类不同的溶剂分别提取的有效成分作为药效成分、辅以可以接受的药用辅料制成便于临床使用的多种外用制剂。本发明的制备方法包括有效成分的提取和配制:分别以水、乙醇和植物油为溶剂,提取组方的有效成分(简称水提物、醇提物和油提物),辅以保湿剂、成膜剂、抑菌剂、乳化剂、增稠剂及凝胶、膜剂、涂膜剂及软膏等的基质和适宜容器制成可供临床选择应用的外用制剂。本发明的药物,以水提物、醇提物和油提物作为药效成分,均具有显着的促进创伤愈合、减少瘢痕形成的功效。
上述专利申请,在剂型、制备方法等方面同本发明有很多不同点。本发明最大的区别在于在最优选方案中,本发明选择最简便、有效的成分组合,积极促进疤痕局部的新陈代谢,能够激活皮肤组织中潜能再生细胞,促进表皮细胞增殖,促进毛囊、皮脂腺的再生,有效抑制成纤维细胞的无序过度生长,恢复皮肤正常组织结构和生理功能。
另外,在治疗烧烫伤的现有技术方面,具有远期抑制疤痕增生的发明专利有如下几个案例。
1.“治疗烧烫伤的外用膏剂及制备方法200910219313.5”,该发明公开了一种治疗烧烫伤的外用膏剂及制备方法,按重量百分比,包括下述组分:仙人掌30-40%,一枝蒿提取物5-15%,獾油50-60%。其制备方法为,首先将仙人掌剥皮捣碎阴干备用,再将一枝蒿提取物经80℃烘干备用;然后将獾油加热至80℃,倒入容器中,将备用一枝蒿提取物缓慢加入獾油中,边加入边搅拌,再加入备用仙人掌搅拌成糊状,保温搅拌均匀后,冷却即制得治疗烧、烫伤的外用膏剂。
2.“一种治疗烧烫伤的凝胶膏剂200810084916.4”,该发明涉及一种治疗烧烫伤的凝胶膏剂,其特征在于用羧甲基纤维素钠与其它凝胶复合成膏剂基质,药物载有烧伤灵渗漉液及其余渣灼焙而成的炭粉。该发明的有益效果是:膏剂本身具有止血功能;膏剂本身具有抑制菌类生长的功能;能够延长释放药物的时间;膏剂产生生物粘附性,牢牢地粘附于患处;膏剂对烧烫伤后产生的组织液有吸附作用;有抑制纤维细胞生长,减少疤痕的作用;膏剂在体温作用与自然条件下,在患处形成膜状;不粘连皮肤,揭取容易,不会造成二次出血和伤害;使制剂更加稳定;使用方便。
3.“一种治疗烫伤、烧伤的外用中药制剂及其制备方法200910071186.9”,该发明涉及用于治疗烫伤、烧伤的外用中药制剂及其制备方法,它是由龟板、马桑根皮、大黄、硼砂、芝麻壳、栗树叶组成,其重量组成为龟板1-50份,马桑根皮1-20份,大黄0.3-5份,黄柏0.1-3份,硼砂0.05-2份,芝麻壳0.1-2份,栗树叶1-30份。该发明的外用中药制剂(膏剂或糊剂)与同类药相比见效快,疗效短,无毒副作用。对于轻度烫伤、烧伤的患者无须换药,有抗感染的作用,治愈后不留疤痕,可促进新皮肤的生长,有去腐生肌的功效。
上述三个专利主要针对烧烫伤的早期创面处理,在制备和临床应用及后期治疗效果上与本发明专利有着明显区别。
附图说明
图1是仙人掌提取液对真皮和疤痕成纤维细胞增殖的影响(**p<0.01)。
具体实施方式
实施例1:仙人掌固态提取物的制备。
(1)实验选用墨西哥仙人掌(Opuntia Milpa Alta)。
(2)仙人掌提取物的制备过程为:一定量新鲜的仙人掌,去刺、洗净、切碎后用高速组织捣碎机匀浆成糊状,加2倍95%的乙醇充分震荡、搅拌,浸提3小时,取上清液,置冰箱中保存;渣中再加入等量乙醇,充分震荡、搅拌,再浸提3小时,取上清液与第一次清液合并,抽滤,减压浓缩,回收1乙醇,将浓缩液进行冷冻干燥,得到新鲜仙人掌乙醇提取物。
实施例2:正常真皮及疤痕组织中成纤维细胞的分离与培养。
(1)消化:将外科手术遗弃的正常皮肤剪成碎块,用0.1%的胶原酶在37℃消化2小时,经150目不锈钢滤网过滤,以1000r/min离心5分钟,弃去上清,加入无钙镁PBS清洗3次。加入含10%胎牛血清的DMEM培养液10ml,混匀,台盼蓝染色计数。
(2)原代培养:计数后制成单细胞悬液,按1-2×106/75cm2密度接种培养,含10%胎牛血清的DMEM培养液,在37℃,5%CO2,100%相对湿度的培养箱中培养,培养液3天换一次。
(3)传代培养:当细胞融合到60%-75%密度时,用10ml无钙镁PBS冲洗,经0.25%胰酶37℃消化5分钟,加入含10%胎牛血清的DMEM培养液终止消化,移入离心管中,1000r/min离心5分钟。弃去上清液,加入含10%胎牛血清的DMEM培养液10ml,混匀,计数,按1:3的比例传代培养。2-3日换一次培养液,直到细胞融合至60%-75%密度时,再传代培养。
(4)同法分离培养疤痕成纤维细胞。
实施例3:仙人掌提取物对真皮和疤痕成纤维细胞增殖的影响。
a.实验方法:
(1)实验选用培养第3代的真皮来源的成纤维细胞(Dermal Fibroblast,DF)和疤痕来源的成纤维细胞(Scar Fibroblast,SF)。
(2)每孔4000个细胞接种到96孔板中,37°C、5% CO2,在含有10%胎牛血清的DMEM培养液中培养12小时。
(3)12小时后,每孔更换培养液,重新加入含有仙人掌提取物的培养液(含10%胎牛血清的DMEM),仙人掌提取物的在培养液中的最终浓度分别为10,50,200mg/mL。继续孵育48小时。
(4)48小时后,每孔加入20ml MTS,再继续孵育2小时。
(5)用自动酶标仪测定每孔的吸光度(Absorbance)。
b.实验结果:
各组吸光度值见图1。从结果中可以看出,提取液10,50mg/mL组对真皮和疤痕成纤维细胞的增殖没有明显影响,200mg/mL组的仙人掌提取液对于真皮和疤痕成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用(p<0.01)。
实施例4:仙人掌汁的制备。
选采摘新鲜仙人掌100kg,去刺后清洗3次,切碎。将切碎后的仙人掌用胶体磨研磨,得到仙人掌悬液。用离心机转速为1000rpm离心,再用150-250目滤网过滤除去固体物,收集于容器中。将滤液置于自然沉降分层,得仙人掌组织及上清液约480kg。将66.4kg得到的仙人掌组织上清液、2kg三乙醇胺放入水相罐,80rpm搅拌,同时加热到95°C,保温消毒60分钟,得第二混合物。
实施例5:含仙人掌汁的疤痕基质的制备。
将20kg的芝麻油、8kg硬脂酸、3kg单硬脂酸甘油酯放入油相罐,80rpm搅拌,同时加热到88°C±2°C,保温消毒40分钟,得第一混合物。
将得到的第一和第二混合物与0.6kg的瓜尔胶在真空乳化机中混合,搅拌速度为120prm;待充分混合后,在温度为90°C下,将搅拌速度控制为80rpm,启动均质器4分钟。
待温度降到30°C±2°C时,转速控制在10rpm,打入无菌空气后,即可得到用于治疗的基质。
实施例6:将实施例4、5的产品用于疤痕增生的临床治疗。
患者,李××,女,21岁,额部外伤性疤痕1年半。使用发明人制备的疤痕制剂外用,每天3-4次,连续使用4周。从对患者的随访可以看出,治疗后疤痕颜色变浅,局部变软、变平、弹性增加,患者自感痛痒消失。
综上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并非用来限定本发明的实施范围。即凡依本发明申请专利范围的内容所作的等效变化与修饰,都应为本发明的技术范畴。
Claims (2)
1.一种治疗疤痕的皮肤外用基质,其特征在于:它由按照重量百分比的第一混合物68.4%、第二混合物31%和瓜尔胶0.6%组成;其中:第一混合物是由仙人掌汁66.4%和三乙醇胺2%组成,第二混合物是由芝麻油20%、硬脂酸8%和单硬脂酸甘油酯3%组成;该皮肤外用基质主要体现为抑制疤痕成纤维细胞增殖、抑制和消除疤痕增生的药用用途。
2.一种治疗疤痕的皮肤外用基质的制备方法,其特征在于:它采用如权利要求1所述的组分和比例形成基质,具体采用如下步骤:(1)选采摘新鲜仙人掌,去刺后清洗3次,切碎,然后将切碎后的仙人掌用胶体磨研磨,得到仙人掌悬液,用离心机转速为1000rpm离心,再用150-250目滤网过滤除去固体物,收集于容器中,将滤液置于自然沉降分层,得仙人掌组织及上清液;该仙人掌组织及上清液与三乙醇胺放入水相罐,80rpm搅拌,同时加热到95°C,保温消毒60分钟,得第二混合物;(2)将的芝麻油、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯放入油相罐,80rpm搅拌,同时加热到88°C±2°C,保温消毒40分钟,得第一混合物;(3)将得到的第一和第二混合物与瓜尔胶在真空乳化机中混合,搅拌速度为120prm;待充分混合后,在温度为90°C下,将搅拌速度控制为80rpm,启动均质器4分钟,待温度降到30°C±2°C时,转速控制在10rpm,打入无菌空气后,即可得到用于治疗的基质。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20111207 |