CN110876760B - 具有促进伤口愈合和/或疤痕修复功效的皮肤外用组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种具有促进伤口愈合和/或疤痕修复功效的皮肤外用组合物,其包含(A)浓缩的桦树汁,和(B)地榆根提取物、黄连根提取物、紫草提取物、尿囊素、丹参提取物、黄芪提取物、珍珠粉和积雪草苷中的一种或多种,其中所述浓缩的桦树汁的浓缩倍数为约1.2‑6倍,优选约1.5‑5倍,更优选约1.5‑3倍。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有促进伤口愈合和/或疤痕修复功效的皮肤外用组合物,其包含(A)浓缩的桦树汁,和(B)地榆根提取物、黄连根提取物、紫草提取物、尿囊素、丹参提取物、黄芪提取物、珍珠粉和积雪草苷中的一种或多种,其中所述浓缩的桦树汁的浓缩倍数为约1.2-6倍,优选约1.5-5倍,更优选约1.5-3倍。
背景技术
皮肤烧、烫、外伤等引起的损伤是常见的危害人类健康和生命安全的皮肤病症之一。由此带来的皮肤伤口致使皮肤上皮出现完整性破损,并且可能伴有底层正常组织的结构和功能的破坏。伤口愈合的过程往往会出现患处疼痛、愈合慢、感染发炎、人体发高烧等状况,令患者苦不堪言。促进伤口愈合是一个复杂和昂贵的过程,研究促进伤口愈合的药物是现代生物医学科学正在发展的领域。目前一系列含有各种药物成分的具有伤口愈合以及抗菌潜力的药物包括软膏、乳膏、凝胶剂、喷雾剂已经在促进伤口愈合方面广泛应用。但是仍存在愈合率低、复发率高等问题。
疤痕是物理、生物、化学等因素的损害,尤其是烧伤、烫伤、外伤后,人体皮肤软组织出现的病变超过原来皮肤损伤范围、持续性表现为高出皮肤表面,质地硬韧和充血的结节状、条索状或片状肿块样组织。疤痕增生期的几年时间几乎让患者苦不堪言。而后的萎缩期又使患者面目全非,功能障碍,造成患者极大的身心双重障碍。目前疤痕的主要改善或治疗方法有基因治疗、瘢痕内药物注射、口服防瘢痕药物、冷冻治疗、压力疗法、激光治疗、硅凝胶膜类产品、放射治疗等,各种治疗方式的治疗效果也不尽相同。但是,均存在见效慢、周期长、不易根治、毒副作用大等缺点。
因此,在促进伤口愈合和/或疤痕修复领域,仍需要改进的方法和产品。
伤口愈合是一个复杂的动态过程,其细胞结构和受损组织的组织层被尽可能地恢复到正常状态,是多种细胞、细胞外基质及细胞因子等共同参与并高度协调、调控的复杂生物学过程。创面愈合大致可分为4个渐次发生而又相互重叠的过程,即止血、炎症反应、增殖和重塑。止血和炎症是炎性期的两种不同特性的阶段;增殖期包括上皮、血管生成和胶原沉积;在成熟期组织伤口的收缩过程中可能会出现瘢痕。减少炎症反应,促进成纤维细胞增殖、血管新生,将有助于创面伤口的快速愈合。增生性瘢痕的病理基础是以成纤维细胞为主的细胞成分的过度增殖和以胶原为主的细胞外基质的过度沉积,控制炎症反应、减少细胞外胶原的过度沉积可以在一定程度上减少和修复疤痕。
桦树汁是从桦木科植物中流出的汁液,富含人体需要的多糖、氨基酸、维生素、生物素、细胞分裂素、矿物质和微量元素等活性成分。在欧洲有使用桦树树汁治疗烧烫伤的记载。天然来源的桦树汁在促进伤口愈合和修复疤痕领域有巨大潜力。
因此,本发明人通过研究桦树汁在促进伤口愈合和/或疤痕修复中的功效完成了本发明。
附图说明
图1显示了各物质的细胞迁移率。
图2显示了各物质的创面愈合程度。
发明内容
一方面,本发明涉及一种浓缩的桦树汁在具有促进伤口愈合和/或疤痕修复功效的皮肤外用组合物中的用途,其中所述浓缩的桦树汁的浓缩倍数为约1.2-6倍,优选约1.5-5倍,更优选约1.5-3倍。
另一方面,本发明涉及一种具有促进伤口愈合和/或疤痕修复功效的皮肤外用组合物,其包含(A)浓缩的桦树汁,其中所述浓缩的桦树汁的浓缩倍数为约1.2-6倍,优选约1.5-5倍,更优选约1.5-3倍。
本发明中所涉及的桦树汁得自桦木科桦树属,其可来自白桦(Betula alba)、柔毛桦(Betula pubescens)、垂枝桦(Betula pendula)和亚洲白桦(Betula platyphylla)这四个品种。所述桦树汁为在解冻至早春发叶之间,人工在桦树的树干基部钻孔收集而得的无色透明、无沉淀、无杂物,具有桦树清香且营养丰富的汁液。所述桦树汁可商购获得并原样采用,例如可购自大兴安岭超越野生浆果开发有限责任公司。
本发明中的浓缩的桦树汁是将上述商购产品浓缩得到的。浓缩方法是本领域已知的,例如加热浓缩、低温真空浓缩、膜浓缩等。在本发明中,优选通过低温冷冻浓缩或膜浓缩工艺进行浓缩,例如,将商购的桦树汁原液输入低温干燥设备,降温至约-40℃至-70℃,抽真空至约0.1-30Pa而进行低温真空浓缩,从而得到不同浓缩倍数的浓缩的桦树汁。
所述(A)浓缩的桦树汁在所述皮肤外用组合物中的含量为约10-98%重量、优选约20-98%,更优选约30-97%,基于所述皮肤外用组合物的总重量。
进一步地,本发明人意料不到地发现,与单独使用浓缩的桦树汁或者地榆根提取物、黄连根提取物、紫草提取物、尿囊素、丹参提取物、黄芪提取物、珍珠粉、积雪草苷相比,浓缩的桦树汁与榆根提取物、黄连根提取物、紫草提取物、尿囊素、丹参提取物、黄芪提取物、珍珠粉和积雪草苷中的一种或多种的组合具有显著更好的促进伤口愈合和/或修复疤痕的功效,明显高于二者功能叠加效果,表现为更好地促进成纤维细胞迁移,促进皮肤缺损模型大鼠创面愈合率,同时抑制炎症相关的TNF-α和IL-6蛋白的含量,减少家兔瘢痕增生指数和瘢痕组织胶原的沉积以及人体瘢痕程度,这说明浓缩的桦树汁和上述物质之间发生了增效作用。
因此,又一方面,本发明涉及(A)浓缩的桦树汁与(B)地榆根提取物、黄连根提取物、紫草提取物、尿囊素、丹参提取物、黄芪提取物、珍珠粉和积雪草苷中的一种或多种的组合在具有促进伤口愈合和/或疤痕修复功效的皮肤外用组合物中的用途,其中所述浓缩的桦树汁的浓缩倍数为1.2-6倍,优选1.5-5倍,更优选1.5-3倍。
再一方面,本发明涉及一种具有促进伤口愈合和/或疤痕修复功效的皮肤外用组合物,其包含(A)浓缩的桦树汁,其中所述浓缩的桦树汁的浓缩倍数为约1.2-6倍,优选约1.5-5倍,更优选约1.5-3倍,和(B)地榆根提取物、黄连根提取物、紫草提取物、尿囊素、丹参提取物、黄芪提取物、珍珠粉和积雪草苷中的一种或多种。
所述组分(B)地榆根提取物、黄连根提取物、紫草提取物、尿囊素、丹参提取物、黄芪提取物、珍珠粉和积雪草苷是本领域已知的,它们均可以商购获得,原样用于本发明。
所述组分(B)在所述皮肤外用组合物中的总含量为约0.0005-30%,优选约0.001-10%,更优选约0.1-5%,最优选约0.5-3%,基于所述皮肤外用组合物的总重量。
所述皮肤外用组合物包括药物组合物和护肤化妆品组合物,其中药物组合物显示了显著的伤口愈合和疤痕修复功效,和护肤化妆品组合物显示了显著的疤痕修复功效。
所述皮肤外用组合物不包含任何外加的水,但不排除各组分中固有地包含的水分。
在优选的实施方案中,所述皮肤外用组合物不包含EDTA盐、多磷酸钠、偏磷酸钠、葡萄糖酸等螯合剂。
除了上述组分(A)和(B)外,所述皮肤外用组合物还可任选地包含组分(C)用于伤口愈合和/或疤痕修复组合物中常用的成分。所述组分(C)的实例包括但不限于媒介物、活性成分和辅料等。这些成分都是本领域已知的,本领域技术人员可根据需要选择组分(C)的类型和用量,例如,组分(C)的含量通常为约0-70%,基于所述皮肤外用组合物的总重量。
所述媒介物包括例如稀释剂、分散剂或载体等,其实例包括但不限于乙醇、双丙甘醇、丁二醇等。所述媒介物在所述皮肤外用组合物中的含量是本领域已知的,例如,其通常占组分(C)总重量的约0.5-20%。
所述活性成分包括抗菌剂、抗炎剂、收敛剂、保湿剂等。
所述抗菌剂包括但不限于熊果酸、白花蛇舌草黄酮、忍冬花提取物、茶树精油、甲壳素、桂枝提取物、珊瑚姜挥发油、丁香提取物、蘑菇提取物、芦荟提取物、艾叶提取物、1-十五醇及其衍生物、雪松烯、石竹烯、长叶烯等中的一种或多种。所述抗菌剂在所述皮肤外用组合物中的含量是本领域已知的,例如,其通常占组分(C)总重量的约0.01-30%。
所述抗炎剂包括但不限于红花黄色素、甘草酸二钾、蒲花粉提取物、矢藤提取物、黄瓜提取物、大蒜提取物、牛蒡提取物、白藜芦醇、苦参提取液、厚朴提取物等中的一种或多种。所述抗炎剂在所述皮肤外用组合物中的含量是本领域已知的,例如,其通常占组分(C)总重量的约0.01-50%。
所述收敛剂包括但不限于绿茶多酚、金缕梅提取物、维生素A、薄荷醇乳酸酯、海藻萃取物、青黛、硫磺、生地黄、当归、乳酸、酒石酸、琥珀酸、柠檬酸等中的一种或多种。所述收敛剂在所述皮肤外用组合物中的含量是本领域已知的,例如,其通常占组分(C)总重量的约0.01-30%。
所述保湿剂的实例包括但不限于甘油、双甘油、丁二醇、丙二醇、1,3-丙二醇、双丙甘醇、1,2-戊二醇、聚乙二醇-8、聚乙二醇-32、甲基葡糖醇聚醚-10、甲基葡糖醇聚醚-20、PEG/PPG-17/6共聚物、甘油聚醚-7、甘油聚醚-26、甘油葡糖苷、PPG-10甲基葡糖醚、PPG-20甲基葡糖醚、PEG/PPG/聚丁二醇-8/5/3甘油、蔗糖、海藻糖、鼠李糖、甘露糖、棉子糖、甜菜碱、赤藓醇、木糖醇、尿素、甘油聚醚-5乳酸酯、透明质酸钠、水解透明质酸钠、乙酰化透明质酸钠、聚谷氨酸钠、水解小核菌胶、出芽短梗酶多糖、银耳多糖、酸豆籽多糖等中的一种或多种。所述保湿剂在所述皮肤外用组合物中的含量是本领域已知的,例如,其通常占组分(C)总重量的约0.01-30%。
所述辅料是本领域已知的,包括例如表面活性剂、乳化剂、增稠剂、防腐剂、香料等。
所述表面活性剂的实例包括但不限于椰油酰胺丙基甜菜碱、月桂醇聚醚硫酸酯钠、PEG-150二硬脂酸酯、乙二醇二硬脂酸酯、月桂基聚氧乙烯醚硫酸铵、十二烷基醇醚硫酸钠、棕榈酰胺丙基甜菜碱、椰油酰胺二乙醇胺、十二烷基醚硫酸盐、十二烷基硫酸铵(K12A)、脂肪醇聚乙烯醚硫酸钠(AES)、脂肪醇聚乙烯醚硫酸铵(AESA)、月桂醇醚硫酸铵、月桂醇硫酸铵、月桂醇硫酸钠、十二烷基聚醚硫酸铵、十二烷基醇硫酸铵、椰油基单乙醇酰胺、N-脂肪酰基氨基酸盐、月桂酰胺丙基甜菜碱、椰油酰两性基乙酸钠、月桂酰两性基乙酸钠、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、十二烷基硫酸钠、烷基糖苷、十二烷基二甲基甜菜碱、咪唑啉两性二醋酸二钠、椰油基两性醋酸钠、聚季铵盐-7、聚季铵盐-10、聚季铵盐-37、羟丙基瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵、羟丙基三甲基氯化铵瓜尔胶、菩提子提取物等中的一种或多种。所述表面活性剂在所述皮肤外用组合物中的含量是本领域已知的,例如,其通常占组分(C)总重量的约0.1-50%。
所述乳化剂的实例包括但不限于鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、山梨坦橄榄油酸酯、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-80、甲基葡糖倍半硬脂酸酯、PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、PEG-40氢化蓖麻油、PPG-26-丁醇聚醚-26、PEG-4聚甘油-2硬脂酸酯、PEG-60氢化蓖麻油、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-21、PPG-13-癸基十四醇聚醚-24、鲸蜡硬脂基葡糖苷、PEG-100硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯SE、椰油基葡糖苷、鲸蜡硬脂醇聚醚-25、PEG-40硬脂酸酯、聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯柠檬酸酯、聚甘油-10硬脂酸酯、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-10二油酸酯、聚甘油-10月桂酸酯、聚甘油-10异硬脂酸酯、聚甘油-10油酸酯、聚甘油-10二异硬脂酸酯、聚甘油-6月桂酸酯、聚甘油-6肉豆蔻酸酯、蔗糖硬脂酸酯、蔗糖多硬脂酸酯等中的一种或多种。所述乳化剂在所述皮肤外用组合物中的含量是本领域已知的,例如,其通常占组分(C)总重量的约0.05-30%。
所述增稠剂的实例包括但不限于卡波姆类、丙烯酸(酯)类及其衍生物、黄原胶、阿拉伯胶、聚乙二醇-14M、聚乙二醇-90M、琥珀酰聚糖、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等高分子聚合物中的一种或多种。所述增稠剂在所述皮肤外用组合物中的含量是本领域已知的,例如,其通常占组分(C)总重量的约0.1-30%。
所述防腐剂的实例包括但不限于羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、苯氧乙醇、苯甲醇、苯乙醇、双(羟甲基)咪唑烷基脲、山梨酸钾、苯甲酸钠、氯苯甘醚、脱氢乙酸钠等中的一种或多种。所述防腐剂在所述皮肤外用组合物中的含量是本领域已知的,例如,其通常占组分(C)总重量的约0.01-30%。
本发明的皮肤外用组合物可以通过本领域已知的任何合适的方法制备。例如,使用化妆品领域中常用的溶解槽、乳化锅、分散器、输送泵等设备制备。制备时先将水溶性物质投入水相溶解釜,将油溶性物质投入油相溶解釜,将两个釜的温度加热至约80℃,其中对于易结块的原料,可先用分散器将其预分散。待溶解完成后将油相和水相输送至乳化锅中,均质乳化约5-15分钟。乳化完成后将料体温度降至常温,加入任选的香精、防腐剂等,并视需要调节产物的pH。相关检测指标都合格后方可灌装出货。以上制备方法可根据剂型要求进行删减或调整。
可根据需要制备液体、乳液、膏、霜或凝胶等各种剂型的药物组合物或者护肤化妆品组合物,其中所述护肤化妆品组合物可以是化妆水、喷雾、乳液、精华水或精华乳、霜等各种形式。
实施例
以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。但是,应当理解为,这些实施例、对比例仅仅是用于更详细地说明本发明,而不应理解为用于以任何形式限制本发明所附权利要求书的范围。
实施例1:细胞活力测定
本次测试所用细胞为人源性成纤维细胞,由广东博溪生物科技有限公司通过原代、传代获得。
1.1试剂
细胞培养基(Gibco)、新生牛血清(四季青)、PBS(博士德)、MTT(Sigma)、DMSO(Sigma)。
1.2主要设备
CO2培养箱(Thermo)、超净工作台(苏净安泰)、倒置显微镜(Olympus)、微量振荡器(其林贝尔)、酶标仪(BioTek)、恒温箱(泰斯特)。
1.3测试样品
将购自大兴安岭超越野生浆果开发有限责任公司的新鲜白桦树汁原液输入低温干燥设备,降温至-65℃,抽真空至0.1Pa,分别浓缩至1.2倍、2倍、3倍、5倍。
1.4细胞活力检测
(1)细胞接种:按1E4个/孔的接种密度接种细胞至96孔板,培养箱(37℃、5%CO2、95%RH)中孵育过夜。
(2)实验分组:实验设置空白对照组、阳性对照组与样品组。待96孔板中细胞铺板率达到40-60%时,将预先配制好的加有待测样品的培养液进行分组给药,每孔给药量为200μL,每组设3个复孔。阳性对照组每孔加入200μL含硫酸皮肤素(5μM)的培养液;样品组每孔加入200μL含有相应浓度受试物的培养液;调零孔无细胞接种,仅加入200μL细胞培养液。给药完成后将96孔板放置在培养箱(37℃、5%CO2、95%RH)中培养。
1.5检测
细胞孵育培养24小时后,弃掉上清,加入MTT工作液(0.5mg/mL,现配现用),37℃避光孵育4小时,孵育结束后,弃掉上清,每孔加150μL DMSO,在490nm处读取OD值。
测试结果如下表所示。
样品 | 成纤维细胞增殖率 |
桦树汁溶液(80%桦树汁原液+20%水) | 2%±1% |
桦树汁原液 | 4%±2% |
1.2倍浓缩的桦树汁 | 14%±1%* |
2倍浓缩的桦树汁 | 21%±3%** |
3倍浓缩的桦树汁 | 16%±3%** |
5倍浓缩的桦树汁 | 12%±2%* |
注:与未经处理的细胞比较,*表示P<0.05;**表示P<0.01。
上述实验结果表明,与含水的桦树汁溶液以及桦树汁原液相比,浓缩倍数为1.2-5倍的桦树汁显著提高了成纤维细胞的增殖活力,尤其是当浓缩倍数为2-3倍时,成纤维细胞活力得到了更高程度的促进。
实施例2:细胞迁移实验
2.1细胞来源
本次测试所用细胞为人源性成纤维细胞,由广东博溪生物科技有限公司通过原代、传代获得。
2.2试剂
细胞培养基(Gibco)、新生牛血清(四季青)、PBS(博士德)、60mm培养皿(Coring)、纤连蛋白(Sigma)。
2.3主要设备
相差显微镜(Olympus)
2.4实验样品
将购自大兴安岭超越野生浆果开发有限责任公司的新鲜白桦树汁原液输入低温干燥设备,降温至-65℃,抽真空至0.1Pa,浓缩至3倍。
添加样品时,单一原料上样量为一整份原料;复配原料为半份桦树汁原料加半份0.1%的其它活性原料。其中所测试的样品包括:3倍浓缩桦树汁,地榆根提取物、黄连根提取物、3倍浓缩桦树汁+地榆根提取物,和3倍浓缩桦树汁+黄连根提取物。
2.3实验步骤
(1)用纤连蛋白将60mm培养皿包被起来。
(2)将包被过夜的培养皿用PBS清洗三次,以便除去多于的纤连蛋白。
(3)将生长到对数期的细胞消化并进行计数,然后将2E6个细胞接种到包被好的培养皿,生长48小时待细胞在底部铺满后,用200μL枪头在培养皿底部迅速划出一道笔直划痕。将多于的培养基吸走,用PBS洗去多余的细胞。重新加入细胞培养基进行培养,并加入不同浓度的待测样品进行给药刺激。
(4)将细胞放回37℃培养箱培养,每12小时用相差显微镜记录并测量一次细胞运动的距离。
(5)数据处理:每个时间点细胞整体迁移距离=0时的距离长度-每个时间点的距离长。
实验结果如附图1所示。其中的结果表明,与单独使用3倍浓缩桦树汁、地榆根提取物、黄连根提取物相比,3倍浓缩桦树汁与地榆根提取物或黄连根提取物组合使用具有更显著的促进成纤维细胞迁移效果。
实施例3:大鼠全层皮肤缺损创面模型
3.1实验动物
购买6-7周龄雄性SD大鼠,雌雄各半,连续饲养1周,待大鼠适应实验环境。
3.2实验样品
将购自大兴安岭超越野生浆果开发有限责任公司的新鲜白桦树汁原液输入低温干燥设备,降温至-65℃,抽真空至0.1Pa,浓缩至1.5倍。
添加样品时,单一原料上样量为一整份原料;复配原料为半份桦树汁原料加半份0.1%的其它活性原料。其中所测试的样品包括:1.5倍浓缩桦树汁,紫草提取物、尿囊素、1.5倍浓缩桦树汁+紫草根提取物,和1.5倍浓缩桦树汁+尿囊素。
3.3造模方法
(1)将SD大鼠按每组6只随机分为空白对照组和不同样品处理的实验组。大鼠给予异氟醚吸入麻醉,待其出现全身无力、肌肉松弛、角膜反射及疼痛反应消失等现象时进行实验;
(2)用剌须刀将大鼠背部的毛发刺掉,漏出背部,采用记号笔在背部需要制造伤口处进行划线。
(3)沿着预先做好的标记,采用手术刀片和镊子,在大鼠背部制造表面积大约500mm2的切除伤口,深度约为2mm。
(4)采用酒精进行消毒后对照组使用PBS或林格氏液,用3M透明薄膜覆盖创面;样品组喷用不同浓度的测试样。伤口用药的频率为每天一次。
(5)采用相机进行拍照记录伤口愈合情况,并从切割伤愈合模型开始算为第0天,并在之后的第7天,14天,21天进行拍照记录,根据创面愈合率=(原始创面面积-各时间点未愈合面积)/原始未愈合面积,计算创面愈合率。
(6)在第20天拍照记录过后,将大鼠处死,取创面及创周2mm的正常组织。按照1:9的比例加PBS,电动研磨器于室温匀浆后制备成匀浆液。4℃,10000rpm离心10分钟,取上清液分装于1.5mL离心管中,-70℃保存备用,30天内,用ELISA的方法检测创面组织中TNF-α、IL-6的浓度。
实验结果如下。
1.创面愈合程度:结果如请参见附图2所示。
2.TNF-α、IL-6浓度
样品 | TNF-α | IL-6 |
正常组 | 1839±32 | 3567±29 |
模型组 | 2103±45 | 6654±43 |
1.5倍浓缩的桦树汁 | 1987±16* | 5054±44* |
紫草提取物 | 2043±22 | 5275±28* |
尿囊素 | 2011±31 | 5702±41 |
1.5倍浓缩的桦树汁+紫草提取物 | 1941±18* | 3987±38** |
1.5倍浓缩的桦树汁+尿囊素 | 1898±27** | 4442±22** |
注:与模型组比较,*表示P<0.05;**表示P<0.01。
从创面愈合结果和TNF-α、IL-6含量结果来看,与单独使用1.5倍桦树汁、紫草提取物、尿囊素相比,同样总用量的1.5倍浓缩桦树汁与紫草提取物或尿囊素组合使用具有更显著的促进组织新生、减少炎症、加速伤口愈合功效。
实施例4:疤痕模型
4.1实验动物
普通级白色家兔,雌雄各半,体重2.5-3.0kg,遵照《中华民族共和国实验动物管理条例》饲养家兔,每天自由饮水和摄食,饲养间的温度保持在25℃±1℃,湿度保持在60-70%,每天光照/暗时间为12/12小时循环。家兔适应环境喂养1周。
4.2主要仪器
数显测厚仪,多功能酶标仪,高通量组织研磨仪,切片机,组织脱水机,组织包埋机,显微镜。
4.3实验样品
将购自大兴安岭超越野生浆果开发有限责任公司的新鲜白桦树汁原液输入低温干燥设备,降温至-65℃,抽真空至0.1Pa,浓缩至1.5倍。
添加样品时,单一原料上样量为一整份原料;复配原料为半份桦树汁原料加半份0.1%的其它活性原料。其中所测试的样品包括:1.5倍浓缩桦树汁,丹参提取物、黄芪提取物、1.5倍浓缩桦树汁+丹参提取物,和1.5倍浓缩的桦树汁+黄芪提取物。
4.4兔耳增生性瘢痕模型的制作
将动物适应性饲养1周后,用30g/L戊巴比妥钠1.0mL/kg(30mg/kg)作耳缘静脉麻醉,兔耳腹侧面皮肤碘伏、乙醇消毒,在兔耳腹侧中段沿长轴避开可见血管,用角膜环轻轻钻出1cm×1cm大小创面,创面间隔1cm以上,去掉兔耳全层皮肤并用刮勺彻底刮除软骨膜,无菌棉球压迫止血,每耳4处,术后创面暴露,手术后连续2d肌内注射青霉素,给药剂量4万单位/kg,正常饲养待创面自行愈合。
4.5分组与给药
手术造模21d后,创面结痂脱落,瘢痕形成,造模动物分组,每组6只:模型组正常饲养,不做处理;处理组中包含模型组(PBS组)、不同样品处理组,采用局部涂抹给药,每日1次,每处瘢痕涂抹0.1mL。
4.6检测指标
(1)测量瘢痕增生指数
给药30天,在兔耳瘢痕中央与周围组织取材,将切片行苏木精和伊红染色封片,于显微镜下拍照、测量并计算瘢痕增生指数。瘢痕增生指数=瘢痕最高点至耳软骨表面的垂直距离/周围正常皮肤厚度。
(2)瘢痕组织胶原(羟脯氨酸HPr)含量
给药30天,取下兔耳瘢痕组织,常规制备10%组织匀浆,采用试剂盒测定羟脯氨酸含量,考察胶原沉积和纤维化程度。另外,自模型组另一侧未造模耳,在相对应位置,剖取同样大小的皮肤及皮下组织,同法制备组织匀浆,测定羟脯氨酸含量,作为正常对照组。
实验结果如下:
组别 | 瘢痕增生指数 | HPr含量(μg/mg) |
模型组 | 3.06±0.19 | 5.88±0.79 |
1.5倍浓缩桦树汁 | 2.53±0.16* | 4.21±0.53* |
丹参提取物 | 2.98±0.09 | 4.36±0.49* |
黄芪提取物 | 2.77±0.12* | 4.65±0.61* |
1.5倍浓缩桦树汁+丹参提取物 | 1.55±0.14** | 3.35±0.55** |
1.5倍浓缩的桦树汁+黄芪提取物 | 1.51±0.16** | 3.84±0.37** |
注:与模型组比较,*表示P<0.05;**表示P<0.01。
从瘢痕增生指数和羟脯氨酸含量结果来看,与单独使用1.5倍桦树汁、丹参提取物、黄芪提取物相比,同样总用量的1.5倍浓缩的桦树汁与丹参提取物或黄芪提取物组合使用具有更显著的抑制瘢痕增生、减少瘢痕胶原沉积的作用。
实施例5:人体疗效观察
瘢痕评分采用温哥华瘢痕量表(VSS),从色泽、厚度、血管分布和柔软度4个方面综合评估。总分为15分,评分越高表示瘢痕越严重。应用SPSS统计软件进行统计学分析,计量资料以x±s表示,治疗前后组内比较采用配对t检验,组间比较采用成组t检验。计数资料组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学。
注:与同组治疗前比较,*P<0.05,**P<0.01。
从人体测试结果来看,与单独使用2倍桦树汁、珍珠粉、积雪草苷相比,同样总用量的2倍浓缩的桦树汁与珍珠粉或积雪草苷组合使用具有更显著的改善瘢痕的作用。
实施例6:皮肤外用疤痕软膏
所述皮肤外用疤痕软膏的配方如下表所示:
编号 | 原料 | 重量g |
1 | 2倍浓缩桦树汁 | 300 |
2 | 丹参提取物 | 15 |
3 | 羟丙基-β-环糊精 | 125 |
4 | 硬脂酸 | 160 |
5 | 单硬脂酸甘油酯 | 100 |
6 | 十六醇 | 35 |
7 | 十八醇 | 35 |
8 | 白凡士林 | 80 |
9 | 羊毛脂 | 40 |
10 | 甘油 | 75 |
11 | 三乙醇胺 | 12 |
12 | 吐温-80 | 7 |
13 | 尼泊金甲酯 | 2 |
14 | 尼泊金乙酯 | 2 |
15 | 冰片 | 12 |
上述皮肤外用疤痕软膏的制备方法如下:
(1)称取15g的丹参提取物于干净的烧杯中,加入150g 2倍浓缩桦树汁,搅拌使其溶解;
(2)向步骤(1)的烧杯中称取125g的羟丙基-β-环糊精,搅拌均匀,使其溶解;
(3)步骤(2)所得溶液放入冰箱中静置90分钟,抽滤,将滤液倒入培养皿中,用打好孔的保鲜膜盖上,放入-80℃冰箱中冷冻,24小时后取出放入真空冷冻干燥机中干燥,混合物成白色蓬松的块状物时,取出备用;
(4)称取硬脂酸160g、单硬脂酸甘油酯100g、十六醇35g、十八醇35g、白凡士林80g、羊毛脂40g,混合加热融化,保持温度80℃;
(5)另取甘油75g、三乙醇胺12g、吐温-80 7g、尼泊金甲酯2g、尼泊金乙酯2g、冰片12g,加2倍浓缩桦树汁150g,加热溶解,保持温度80℃,在搅拌下缓缓加入到步骤(4)的油相中,继续搅拌乳化形成基质;最后再加入步骤(3)的产物,搅拌均匀至室温即可。
40名受试者使用上述配方的疤痕软膏3个月后,对使用情况进行主观评估。结果有30受试者反映,使用该软膏第一个月里伤口的愈合明显加快;有34人反映使用该软膏的后两个月中,皮肤疤痕显著变软并缩小,疤痕色度逐渐减弱,疤痕状况得到明显改善。
实施例7:护肤修复乳液
所述护肤修复乳液的配方如下表所示:
编号 | 原料 | 份数 |
1 | 2倍浓缩桦树汁 | 42 |
2 | 珍珠粉 | 10 |
3 | 芦荟提取物 | 20 |
4 | 蜂蜜 | 8 |
5 | 牛奶粉 | 10 |
6 | 柠檬提取物 | 5.8 |
7 | 十六烷基葡糖苷 | 1 |
8 | 双(羟甲基)咪唑烷基脲 | 0.6 |
9 | 卡波姆 | 0.2 |
10 | 抗氧剂 | 1.2 |
11 | 乳化剂 | 1.2 |
上述护肤修复乳液的制备方法如下:
(1)将芦荟提取物、蜂蜜和十六烷基葡糖苷加入反应器,和加入一半的2倍浓缩桦树汁,加热至75℃后,搅拌30分钟溶解,得到A液;
(2)将珍珠粉、牛奶粉和柠檬提取物加入容器,和加入另外一半的2倍浓缩桦树汁,搅拌均匀,升温至75℃,搅拌溶解10分钟,得到B液;
(3)将B液缓慢加入A液中,5000转/分钟均质3分钟,当温度降至70℃时,加入双(羟甲基)咪唑烷基脲、卡波姆、抗氧剂和乳化剂,200转/分钟搅拌1小时后,降至室温,装袋,得到所述护肤修复乳液。
20名受试者使用上述护肤修复乳液2个月后,对使用情况进行主观评估。结果有18名受试者反映,使用该乳液后疤痕表面肌肤弹力增加,疤痕色素减弱,疤痕面积缩小,疤痕修复效果明显。
以上所述实施例的技术方案是本发明优选实施方式,在不脱离本发明原理的前提下还可以进行若干改进和变换,这些改进和变化也应视为在本发明的保护范围内。
Claims (16)
1.(A)浓缩的桦树汁与(B)黄连根提取物、紫草提取物、尿囊素、丹参提取物、黄芪提取物和积雪草苷中的一种或多种的组合在制备具有促进伤口愈合和/或疤痕修复功效的皮肤外用组合物中的用途,其中所述浓缩的桦树汁的浓缩倍数为1.5-5倍,和其中所述皮肤外用组合物不包含任何外加的水,但不排除各组分中固有地包含的水分。
2.权利要求1所述的用途,其中所述浓缩的桦树汁的浓缩倍数为1.5-3倍。
3.权利要求1或2所述的用途,其中所述组分(A)在所述皮肤外用组合物中的含量为10-98%重量,基于所述皮肤外用组合物的总重量。
4.权利要求1或2所述的用途,其中所述组分(B)在所述皮肤外用组合物中的总含量为0.0005-30%,基于所述皮肤外用组合物的总重量。
5.权利要求4所述的用途,其中所述组分(B)在所述皮肤外用组合物中的总含量为0.001-10%。
6.权利要求5所述的用途,其中所述组分(B)在所述皮肤外用组合物中的总含量为0.1-5%。
7.权利要求6所述的用途,其中所述组分(B)在所述皮肤外用组合物中的总含量为0.5-3%。
8.权利要求1或2所述的用途,其中所述皮肤外用组合物包括药物组合物和护肤化妆品组合物。
9.一种具有促进伤口愈合和/或疤痕修复功效的皮肤外用组合物,其包含(A)浓缩的桦树汁,其中所述浓缩的桦树汁的浓缩倍数为1.5-5倍,和(B)黄连根提取物、紫草提取物、尿囊素、丹参提取物、黄芪提取物和积雪草苷中的一种或多种,其中所述皮肤外用组合物不包含任何外加的水,但不排除各组分中固有地包含的水分。
10.权利要求9所述的皮肤外用组合物,其中所述浓缩的桦树汁的浓缩倍数为1.5-3倍。
11.权利要求9或10所述的皮肤外用组合物,其中所述组分(B)在所述皮肤外用组合物中的总含量为0.0005-30%,基于所述皮肤外用组合物的总重量。
12.权利要求11所述的皮肤外用组合物,其中所述组分(B)在所述皮肤外用组合物中的总含量为0.001-10%。
13.权利要求12所述的皮肤外用组合物,其中所述组分(B)在所述皮肤外用组合物中的总含量为0.1-5%。
14.权利要求13所述的皮肤外用组合物,其中所述组分(B)在所述皮肤外用组合物中的总含量为0.5-3%。
15.权利要求9或10所述的皮肤外用组合物,其中所述组分(A)浓缩的桦树汁在所述皮肤外用组合物中的含量为10-98%重量。
16.权利要求9或10所述的皮肤外用组合物,其中所述皮肤外用组合物包括药物组合物和护肤化妆品组合物。
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