CN102260274A

CN102260274A - 一种抗癌化合物的制备方法与应用

Info

Publication number: CN102260274A
Application number: CN2011101581836A
Authority: CN
Inventors: 林恋竹; 赵谋明; 崔春
Original assignee: South China University of Technology SCUT
Current assignee: South China University of Technology SCUT
Priority date: 2011-06-14
Filing date: 2011-06-14
Publication date: 2011-11-30
Anticipated expiration: 2031-06-14
Also published as: CN102260274B

Abstract

本发明涉及一种抗癌化合物的制备方法与应用。制备方法是：溪黄草干叶与2-4倍重量的乙醇加热至沸腾，回流提取，过滤得上清液，减压浓缩至原体积的50-70%，得浓缩液，冻干得粉末；将粉末溶于水中，过D101大孔树脂柱，采用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，得粉末A；将粉末A溶于水中，过HP-20大孔树脂柱，采用70-90%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，得粉末B；将样品B溶于甲醇中使其浓度达到5-50mg/mL，采用反相C18柱进行梯度洗脱，收集40%水，60%甲醇洗脱出来的化合物峰。所述化合物应用于治疗肿瘤药物的制备中，具有人肝癌细胞株，人白血病细胞株和人乳腺癌细胞株毒性。

Description

一种抗癌化合物的制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种化合物的制备方法，具体涉及抗癌化合物的制备方法与应用。

背景技术

肿瘤是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的新生物。一般认为，肿瘤细胞是单克隆性的，即一个肿瘤中的所有瘤细胞均是一个突变的细胞的后代。一般将肿瘤分为良性和恶性两大类。所有的恶性肿瘤总称为癌症。目前，恶性肿瘤引发的死亡是仅次于心血管疾病的人类第二大死因。

肿瘤的治疗方法有手术治疗、放射治疗和药物治疗（即化疗）等，其中化学治疗为目前主要的治疗手段。化学治疗能治愈一部分肿瘤患者或延长患者的生命，在肿瘤治疗中占有越来越重要地位。但是，传统的抗肿瘤药物对癌症细胞的杀灭率较低或需要较高的浓度，因此产生了许多严重的毒副反应。随着生活水平的提高，人们对于癌症的治疗预期显著提高，希望在治愈癌症的时候身体健康不受到很大的影响，因此，发现新的、高效抗肿瘤化合物显得尤为迫切。

溪黄草俗称熊胆草、血风草、黄汁草、溪沟草、香茶菜、土黄连等，属于唇形科香茶属植物，主产于长江以南的湖南、四川、云南、江西、广东、广西等省区，是一种多年生草本植物。溪黄草具有清热利湿、退黄祛湿、凉血散瘀的功效，用于治疗急性黄疸型肝炎、急性胆囊炎、痢疾、肠炎、跌打瘀痛等病症。本发明专利首次从溪黄草中分离、纯化、鉴定出一种具有抗癌作用的化合物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗癌化合物的制备方法与应用。所制得的化合物具体涉及具有人肝癌细胞株，人白血病细胞株和人乳腺癌细胞株毒性的新的抗肿瘤化合物。

一种抗癌化合物的制备方法，包括如下步骤：

（1）溪黄草干叶与2-4倍重量的50-60%乙醇（v/v）加热至沸腾，回流提取1-2 h，过滤得上清液，上清液减压浓缩至原体积的50-70%，得浓缩液，冻干得粉末；

（2）将粉末溶于水中使其浓度达到5-30 mg/mL，过D101 大孔树脂柱，采用70-90%（v/v）乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，得粉末A；

（3）将粉末A溶于水中使其浓度达到5-30 mg/mL，过HP-20大孔树脂柱，采用70-90%（v/v）乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，得粉末B；

（4）将样品B溶于甲醇中使其浓度达到5-50 mg/mL，采用反相C18柱进行梯度洗脱，紫外检测器的检测波长为240-260nm，收集40% 水，60% 甲醇洗脱出来的化合物峰。

梯度洗脱的方法如下：1-2个柱体积采用95% 水，5% 甲醇；3-4 个柱体积采用95% -50% 水，5%-50% 甲醇洗脱；5-6个柱体积采用50%-40% 水，50%-60% 甲醇洗脱；7-8个柱体积采用40% 水，60% 甲醇；8-10 个柱体积采用40%-0% 水，60% -100% 甲醇洗脱。

上述的抗癌化合物，其化学式为

。

所制得的化合物具体涉及具有人肝癌细胞株，人白血病细胞株和人乳腺癌细胞株毒性，可以用于制备治疗肿瘤的药物。

本发明具有如下优点和效果：本发明首次从溪黄草中分离、纯化、鉴定出一种具有抗癌作用的化合物。该化合物对肿瘤细胞的毒性明显优于现有抗肿瘤药物顺铂。

附图说明

图1为化合物的¹H NMR图谱。

图2为化合物的¹³ C NMR图谱。

图3为化合物的异核性单量子图谱。

图4为化合物的HMBC图谱。

具体实施方案

下面结合附图和实施例对本发明的具体实施作进一步说明。

实施例1

（1）溪黄草干叶与1倍重量的50%乙醇（v/v）加热至沸腾，回流提取1 h，过滤得上清液，上清液减压浓缩至原体积的50%，得浓缩液，冻干得粉末；

（2）将粉末溶于水中使其浓度达到5 mg/mL，过D101 大孔树脂柱，采用70%（v/v）乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，得粉末A；

（3）将粉末A溶于水中使其浓度达到5 mg/mL，过HP-20大孔树脂柱，采用70%（v/v）乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，得粉末B；

（4）将样品B溶于甲醇中使其浓度达到5 mg/mL，采用反相C18柱进行梯度洗脱，紫外检测器的检测波长为240nm，收集40% 水，60% 甲醇洗脱出来的化合物峰。

梯度洗脱的方法如下：1-2个柱体积采用95% 水，5% 甲醇；3-4 个柱体积采用90% 水，10% 甲醇洗脱；5-6个柱体积采用50% 水，50% 甲醇洗脱；7-8个柱体积采用40% 水，60% 甲醇；8-10 个柱体积采用0% 水，100% 甲醇洗脱。

图1为化合物的¹H NMR图谱，图2为化合物的¹³ C NMR图谱，图3为化合物的异核性单量子图谱，图4为化合物的HMBC图谱。

实施例2

（1）溪黄草干叶与4倍重量的60%乙醇（v/v）加热至沸腾，回流提取2 h，过滤得上清液，上清液减压浓缩至原体积的70%，得浓缩液，冻干得粉末；

（2）将粉末溶于水中使其浓度达到30 mg/mL，过D101 大孔树脂柱，采用90%（v/v）乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，得粉末A；

（3）将粉末A溶于水中使其浓度达到30 mg/mL，过HP-20大孔树脂柱，采用90%（v/v）乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，得粉末B；

（4）将样品B溶于甲醇中使其浓度达到50 mg/mL，采用反相C18柱进行梯度洗脱，紫外检测器的检测波长为260nm，收集40% 水，60% 甲醇洗脱出来的化合物峰。

梯度洗脱的方法如下：1-2个洗脱柱体积采用95% 水，5% 甲醇；3-4 个柱体积采用60% 水，40% 甲醇洗脱；5-6个柱体积采用45% 水，55% 甲醇洗脱；7-8个柱体积采用40% 水，60% 甲醇；8-10 个柱体积采用0% 水，100% 甲醇洗脱。

应用实例：

人肝癌细胞株HepG2，人白血病细胞株HL-60,人乳腺癌细胞株MCF-7，人口底癌细胞株KB及人肺癌细胞株A549由中山大学肿瘤防治中心实验研究部提供。

以MTT法进行细胞毒性评价, 将细胞以适当浓度接种于96孔板, 每孔总体积为192 μL, 培养24 h后, 加入不同浓度的化合物8 μL, 同时设立溶剂对照组,药物作用72 h, 倾去含有药物的培养液，并以PBS洗涤孔板一次，再重新加入培养液100 μL MTT溶液, 继续培养4 h后, 去除培养液, 加入二甲基亚砜,待完全溶解显色后,用酶联仪以540 /655 nm双波长测定吸收度值,计算细胞存活率。以Bliss法分别计算IC50值。每次实验均设立顺铂为阳性药物对照，结果见表1。

表1

从表1可见，该化合物具有广谱的细胞毒性作用，在肝癌细胞，乳腺癌细胞，白血病细胞中均显示出较低的IC50值，即较强的细胞毒性作用。并且具有与临床用药顺铂相同或更高的癌细胞毒性，在体外实验中显示出较强的抗癌作用，可以作为新的抗癌药物进行利用。

Claims

1.一种抗癌化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（4）将样品B溶于甲醇中使其浓度达到5-50 mg/mL，采用反相C18柱进行梯度洗脱，收集40% 水，60% 甲醇洗脱出来的化合物峰。

2.根据权利要求中所述的制备方法，其特征在于所述梯度洗脱的方法具体是：1-2个柱体积采用95% 水，5% 甲醇；3-4 个柱体积采用95% -50% 水，5%-50% 甲醇洗脱；5-6个柱体积采用50%-40% 水，50%-60% 甲醇洗脱；7-8 个柱体积采用40% 水，60% 甲醇；8-10 个柱体积采用40%-0% 水，60% -100% 甲醇洗脱。

3.根据权利要求中所述的制备方法，其特征在于步骤（4）采用反相C18柱进行梯度洗脱，紫外检测器的检测波长为240-260nm。

4.权利要求1所述的抗癌化合物在制备治疗肿瘤的药物中的应用。